Жизнеспособные яйца гельминтов что это такое

Существует группа паразитов, которая выбирает для себя средой обитания кишечник человека. Обнаружить заражение можно по характерным симптомам, таким как затянувшийся запор или понос и зуд заднего прохода. Сами яйца глистов обнаружить без медицинского оборудования очень сложно. Свидетельством откладывания их гельминтами может служить лишь покраснение вокруг анального отверстия, ведь этот процесс вызывает раздражение на коже.

Что такое яйца гельминтов

Яйца гельминтов подстерегают человека практически везде, будь-то почва, вода, продукты питания, общественный транспорт или домашние животные. Глисты – плодовитые паразиты, если посмотреть хотя бы на аскариду, которая откладывает до 240 тыс. яиц каждый день. Все гельминты откладывают их для дальнейшего размножения. Процесс откладывания происходит как минимум 1 раз за сутки, а у некоторых видов глистов даже до 6 раз. Будущие личинки защищены несколькими слоями прочной оболочки: внутренний из липидов, средний из хитина, а наружный из белка.

Даже одно яйцо может стать причиной развития в организме нескольких тысяч взрослых особей. Оно сохраняет способность к жизни около 1-2 месяцев в посеве, а в земле, сточной или пресной воде – намного выше. Максимальный срок жизнеспособности яиц гельминтов – несколько лет, если средой обитания выступают фекалии, удобрения или ил. Такие внушительные сроки обеспечиваются устойчивостью яичной скорлупы к внешним воздействиям.

Взгляд человека может обнаруживать только взрослых глистов, например, аскарид или остриц в кале. Это состоявшиеся особи, которые видны при выходе наружу из кишечника. Сами яйца гельминтов имеют настолько малые, даже микроскопические размеры, что увидеть их представляется возможным только с помощью специального лабораторного оборудования. При этом есть внешние признаки, по которым определяется тот или иной вид глистов.

Характерным отличием остриц является то, что они не откладывают яйца в кал, а делают это в области анального отверстия. Сами черви имеют белую окраску и заостренный один конец. Чаще длина составляет 3-4 мм, но может достигать и 12 мм. Жизненный цикл остриц можно разделить на несколько этапов:

Оплодотворение там, где острицы паразитируют, т.е. в толстом кишечнике. Мужская особь при этом гибнет, а женская спускается вниз к заднему проходу для откладывания яиц.
Откладывание яиц. Самка делает это в области анального отверстия, промежностях и кожных складках ягодиц. Этот процесс и заставляет человека ощущать зуд. Если рассмотреть яйца остриц на фото, то можно увидеть мелкие крупинки белого цвета. Форма их чуть вытянута.
Дозревание личинок. При нормальной температуре человека личинки внутри яиц доходят до зрелого состояния. На это нужно около 4-6 часов.
Повторное заражение. Человек вынужден почесать места откладывания яиц, что приводит к распространению паразитов на постельное белье, под ногти, а затем и на посуду. Так происходит повторное заражение глистами. Болезнь называется энтеробиозом.

Яйца аскарид имеют тоже очень маленькие размеры, до 50-70 мкм. Они способны переживать сильные морозы и сохраняться долгие года. Человек заражается при проглатывании яиц с грязной едой или водой, через загрязненные предметы обихода. Яичная скорлупа этих глистов имеет еще больше слоев – до 5. Они имеют круглую форму с заметным разделением оболочек и внутренней части, где развивается личинка.

Самих аскарид можно обнаружить в кале – они выглядят как черви круглого сечения, заостренные по краям. Оттенок глистов при этом изменяется от желтого до розового, а длина достигает 40 см. Отличие аскарид – они развиваются без промежуточного хозяина около 16-17 дней. Только после этого они становятся опасными для человека. При попадании внутрь оболочка яйца растворяется, а глист выходит в благоприятную для него среду. Заболевание при этих гельминтах называется аскаридозом.

Виды гельминтов

Гельминты у человека для удобства и скорости идентификации, классифицируют по внешнему виду, в группы плоские, круглые и ленточные черви, а также по характеру их развития — биогельминты и геогельминты. Биогельминты требуют для полноценного развития двух хозяев — в одном развиваются личинки, а во втором взрослые особи, пути заражения гельминтами могут быть различными. Геогельминты не требуют смены хозяев, их жизненный цикл походит в одном и том же носителе. На сегодняшний день науке известно более трехсот видов био и геогельминтов, что могут паразитировать в человека, они также могут классифицироваться по месту своей локализации:

тканьевые глисты – черви внедряются непосредственно в ткань и подкожную клетчатку человека (эхинококкоз и трихинеллез);
просветные паразиты — черви размножаются и ведут свой жизненный цикл в кишечнике или других внутренних органах (энтеробиоз, описторхоз).

У людей чаще всего диагностируют, таких паразитов, как:

Аскариды — паразитируют в тонком кишечнике, но личинки паразита могут встречаться в мышцах, легких и даже в печении. Попав в организм, аскариды активно перемещаются по кровеносным сосудам и питаются эритроцитами. Личинки, что паразитируют в легких, продвигаются по бронхам и могут доходить до полости рта. Заражение глистами этого типа в год составляет 100 миллионов случаев. Паразит очень быстро распространяется и проявляет высокую стойкость к воздействию внешней среды.

Половозрелая самка может откладывать за один раз больше 200 000 яиц. Попав в почву с испражнениями человека, яйца гельминтов могут сохранять свою жизнеспособность несколько лет, и активизироваться при обнаружении оптимальных условий.

Острицы – обитают в толстой кишке, больше распространены такие паразиты у детей. Особенностью этого гельминта есть то, что откладывать яйца половозрелые самки выходят наружу анального отверстия. За одну вылазку откладывается больше 15000 яйцеглист. Становятся заразными они уже спустя 6 часов. Распространяются, попав на постельное белье, под ногти переносчика, и на другие предметы обихода. Сохраняют свою жизнеспособность за пределами хозяина на протяжении полугода.

Интересно будет узнать, что этот гельминтоз симптомы может иметь скрытые, и человек будет болеть десятилетиями, даже не подозревая о своем носительстве. Массовое заражение гельминтами-острицами, принято называть энтеробиоз, подхватить его очень просто, ведь острицам не нужен промежуточный хозяин.

Эхинококки – определяют в головном мозгу человека, в легких и печени. Что такое эхинококк, знают немногие, поэтому большинство себе представляет этого паразита в форме червя, но это не так. Он являет собой совокупность мелких пузырьков, что прорастают в тканях своего хозяина. Полость этих пузырьков заполнена жидкостью вязкой консистенции. Половозрелая форма паразита имеет несколько присосок, которыми цепляется к стенкам кишечника. Переносчиком этого паразита являются собаки. Он, как правило, попадает в почву с фекалиями собак, овец, свиней и кошек. Попав с током крови, в какой-то орган, паразит формирует вокруг себя капсулу – кисту, которая быстро увеличивается в размерах и нарушает нормальную функциональность органа. Со временем, вследствие заражения гельминтами, ткани органа деформируются и отмирают.

Бычий цепень – паразитирует в тонком кишечнике, в период своей половой зрелости, может достигать в длину до 6 метров. Исходя из названия, не трудно догадаться, что источником заражения выступает крупный рогатый скот. Причины заражения этим паразитом, заключаются в употреблении мяса больного животного, что не прошло соответствующую термическую обработку. Личинки бычьего цепня способны самостоятельно передвигаться они распространяются по кровеносным сосудам и способны их закупоривать их, взвывая воспаление в сосудах, ведущее к эпилепсии, повышенное внутричерепное давление, гидроцефалию, и огромное количество психических расстройств.

В медицине есть сведения, что блуждающие по организму личинки и яйца глистов этого паразита, могут провоцировать холангит и аппендицит.

Токсокары – желудочно-кишечные черви, главным переносчиком их являются собаки. Практически 80% всех собак в Европе, заражено этим паразитом. По внешнему виду очень напоминает аскарид, глист достигает длины 30 см. Человек является тупиковой ветвью развития гельминта, попав в организм, паразит может нарушать функции многих органов, но, даже отложив миллион яиц, не способен их распространить. Заражение человека — это некая ошибка адресом, что губительна для паразита, так как он, спустя 3 месяца отмирает. Причина появления глистов у человека этого типа скрывается в прямом контакте с фекалиями собаки и употреблении их мяса, что не редкость в странах Азии.

Пути заражения глистами

От чего глисты появляются в организме человека, рассказывают деткам еще в садике, чтобы они, боясь столкнуться с червями, мыли ручки после туалета и перед едой. Главным фактором, что влияет на степень распространения гельминтоза, есть социальное развитие населения в конкретной территории и санитарно-эпидемиологические условия. Симптомы гельминтозов у человека могут появиться после контакта с почвой, с человеком зараженным глистами, а также инфицированным животным. Самыми опасными считаются фекалии питомцев, с которыми человек контактирует, очищая лоток и мясо диких животных, что не редко употребляет на охоте, на природе, и отдыхая в экзотических странах.

Иногда, паразиты попадают на бытовые приборы и продукты питания. Если человек употребляет немытые фрукты или использует постельное белье, одно с зараженным человеком, то инфицирования не избежать. Недостаточная личная гигиена и сниженный иммунитет, способствуют быстрому распространению паразита с током крови и развитию паразитарной инвазии.

Интересно будет узнать, что причины глистов в организме могут быть банальными. К примеру, вода, а конкретней искусственные водоемы имеют в своей толще огромное количество паразитов, купание в незнакомом озере и неосторожное проглатывание жидкости, может стать основным фактором в заражении. Переносчиками яиц паразита могут быть мухи и насекомые, к примеру с укусом овода, вы можете получить подкожного паразита.

Симптомы гельминтоза

Признаки гельминтоза будут отличаться, в зависимости от того, какой именно орган поражен паразитом. К примеру, при трихинеллезе отекает лицо и конечности. При заражении организма аскаридами, отмечается кашель, боли в животе и желтуха. При токсокарозе инфицируются глаза и головной мозг, возможны нарушения со стороны нервной системы. Часто проявляется такое осложнение, как слепота. При описторхозе наблюдается лихорадка, повышенное потоотделение и другие признаки, что напоминают пневмонию, это зачастую и затрудняет диагностику. Клинические проявления при паразитарных инвазиях, могут носить острый и хронический характер. При остром гельминтозе — симптоматика ярко выраженная, а при хроническом течении болезни — слабая.

Есть ряд ситуаций, при которых у человека симптомы внезапно пропадают, пациент уже радуется, что выздоровел, как они появляются опять, еще с большей силой. Эта ситуация свидетельствует о перерождении колонии. Жизненный цикл паразитов не всегда продолжительный, отложив яйца, как правило, половозрелые особи погибают. Пока из яиц не вылупились новые гельминты, человек отмечает улучшение.

Среди общих симптомов человека зараженного глистами отмечают:

головокружение;
потер аппетита;
тошноту, рвоту;
резкое снижение массы тела;
нарушение функции выделительной системы;
запор или понос;
бледность кожных покровов;
круги под глазами;
судороги в ночное время;
тремор в руках;
повышенное слюноотделение;
необоснованные скачки температуры.

Иногда все вышеперечисленные симптомы, люди списывают на переутомление, но это не всегда так. Лучше обратиться к доктору за консультацией, и убедится в своем полноценном здоровье, чем потом бороться с запущенной формой паразитарной инвазии.

Заниматься самодиагностикой и самолечением категорически запрещено, что это такое — паразит или обычный упадок сил, должен решать только квалифицированный врач-инфекционист. Вы можете сколько угодно раздумывать над тем, от чего могут быть глисты у вас, но только на пути в поликлинику.

Выбор антимикробных препаратов

В зависимости от того, в каких органах могут обитать глисты, разрабатываться схема лечения гельминтоза. Зачастую помимо противопаразитарных лекарств, доктор назначает поддерживающую терапию для органа, что пострадал от продуктов жизнедеятельности глистов. Лечение гельминтозов приводят, как правило, такими таблетками:

Пирантел;
Пиперазин;
Мебендазол;
Альбендазол;
Вермокс;
Немозол;
Карбендацим;
Левамизол.

Большинство из этих препаратов токсичны, и имеют обширный список противопоказаний. Именно по этому, лечение гельминтозов должен проводить только квалифицированный специалист, который умеет правильно рассчитать безопасную дозу. Для купирования дополнительных симптомов, таких как зуд и жжение в области анального отверстия, что не редко проявляются при острицах, врачи рекомендуют употребление таблеток антигистаминного типа.

Обязательно нужно проводить терапию, что восстанавливает нормальную работу печени, желудочно-кишечного тракта, и возобновлять нормальную микрофлору в этих органах. Токсические продукты жизнедеятельности выводят энтеросорбентами и таблетками, что обладают слабительным действием. Обязательно употреблять иммуностимулирующие лекарства, организм с высокими защитными свойствами быстрее идет на поправку, и лучшее противостоит паразитарным инфекциям.

Важно отметить, что какие препараты при гельминтозе вы бы не использовали, они не дадут результата, если терапию не пройдут и ваши близкие люди. Паразиты очень быстро распространяются между членами одной семьи или круга обитания. Если лечиться кто-то один, а переносчиками является его знакомые, заражение будет повторяться, и вывести паразита, так и не получиться.

Лечение гельминтоза у взрослых может носить длительный характер, все зависит от того, на какой стадии развития глистов, вы обратитесь, и как тщательно будете выполнять указания врача. Очень важно, не прекращать терапию при исчезновении первых симптомов. Если вы выведете взрослых паразитов, яйца все равно останутся, и чтобы не дать им полноценно развиться, курс лечения противопаразитарным средством, повторяют спустя какое-то время.

Профилактика гельминтозов

Гельминтозы и их профилактика — это очень актуальная тема для обсуждения в современном мире. Сегодня медицина, конечно, находиться на высоком уровне и знает, как лечить гельминтоз у взрослых и детей, но гораздо разумней, и вовсе избежать заражения. Для этого вам достаточно соблюдать правила личной гигиены, не употреблять в пищу грязные фрукты и овощи. Необходимо следить за чистотой лотка домашних животных и при их очистке пользоваться специальными перчатками, средствами бытовой химии. Агрессивные компоненты, что содержаться в ней убивают и бактерии, и паразиты.

Регулярно проводите уборку ванной комнаты и меняйте постельное белье раз в 10 дней. Особенно хорошо убивает паразитов высокая температура, поэтому рекомендовано проглаживать постельные принадлежности и свое нижнее белье. Детям, нужно коротко подстригать ногти, чтобы не давать скапливаться яйцам паразитов, а также приучать мыть руки после игр в песочнице и с домашними питомцами. Такие простые рекомендации, помогут вам обезопасить себя и своих близких не только от глистов, но и от множества заболеваний вирусного и бактериального типа.

Бесплатная горячая линия юридической помощи

Главная
"МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.796-99" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.12.99)

7.7. Методы определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтов

Жизнеспособность яиц гельминтов определяют по внешнему виду, путем окрашивания витальными красками, культивированием в оптимальных условиях и постановкой биологической пробы.

Яйца гельминтов микроскопируют вначале при малом, затем при большом увеличении. У деформированных и мертвых яиц гельминтов оболочка разорвана или прогнута внутрь, плазма мутная, разрыхлена. У сегментированных яиц шары дробления (бластомеры) неравного размера, неправильной формы, часто сдвинуты к одному полюсу. Иногда встречаются аномальные яйца, которые, имея внешние уродства, развиваются нормально. У живых личинок аскарид мелкая зернистость имеется только в средней части тела, по мере их гибели она распространяется по всему телу, появляются крупные блестящие гиалиновые вакуоли, так называемые "нитки жемчуга".

Для определения жизнеспособности зрелых яиц аскарид, власоглавов, остриц следует вызывать активные движения личинок легким подогреванием препарата (до температуры не выше 37 °С). Жизнеспособность личинок аскарид и власоглавов удобнее наблюдать после их выделения из скорлупы яйца надавливанием на покровное стекло препарата препаровальной иглой или пинцетом.

У инвазионных личинок аскарид часто замечается чехлик, отслоившийся на головном конце, а у закончивших развитие в яйце личинок власоглавов на этом месте при большом увеличении обнаруживается стилет. У погибших личинок гельминтов независимо от их места нахождения (в яйце или вне его) замечают распад тела. При этом внутренняя структура личинки становится глыбчатой или зернистой, а тело мутным и непрозрачным. В теле обнаруживаются вакуоли, а на кутикуле - разрывы.

Жизнеспособность онкосфер тениид (бычьего, свиного цепней и др.) определяют по движению зародышей при воздействии на них пищеварительных ферментов. Яйца помещают на часовое стекло с желудочным соком собаки или искусственным дуоденальным соком. Состав последнего: панкреатина - 0,5 г, натрия бикарбоната - 0,09 г, дистиллированной воды - 5 мл. Часовые стекла с яйцами ставят в термостат при 36 - 38 °С на 4 часа. При этом живые зародыши освобождаются от оболочек. Оболочки живых онкосфер также растворяются в подкисленном пепсине и в щелочном растворе трипсина через 6 - 8 часов в термостате при 38 °С.

Если поместить яйца тениид в 1%-ный раствор натрия сульфида или 20%-ный раствор натрия гипохлорида, или же в 1%-ный раствор хлорной воды при 36 - 38 °С, зрелые и живые зародыши освобождаются от оболочек и не изменяются в течение 1 суток. Незрелые и мертвые онкосферы сморщиваются или набухают и резко увеличиваются, а затем "растворяются" в течение 10 минут - 2 часов. Живые зародыши тениид также активно двигаются в смеси 1%-ного раствора натрия хлорида, 0,5%-ного раствора натрия гидрокарбоната и желчи при 36 - 38 °С.

Жизнеспособность адолескариев фасциол, собранных на растениях и других объектах водоемов, проверяют исследованием их на предметном стекле в физиологическом растворе под микроскопом с нагревательным столиком. При подогревании личинки трематоды, находящиеся в цисте, начинают двигаться.

Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня наиболее проста методика Иониной Н.С.: у живых яиц медианная пара эмбриональных крючьев или параллельна латеральным, или последние образуют с медианной угол у основания меньше 45°. У мертвых яиц латеральные пары образуют у основания угол с медианной парой больше 45° или же крючья беспорядочно разбросаны (утрачивается их парное расположение); иногда наблюдается сморщивание зародыша, образование зернистости. Более точен метод, основанный на появлении движений онкосферы при резкой смене температур: от 5 - 10° до 38 - 40 °С.

Определение жизнеспособности незрелых яиц нематод следует изучать во влажной камере (чашках Петри), помещая яйца аскарид в 3%-ный раствор формалина, приготовленный на изотоническом растворе натрия хлорида при температуре 24 - 30 °С, яйца власоглавов в 3%-ном растворе соляной кислоты при температуре 30 - 35 °С; яйца остриц в изотоническом растворе натрия хлорида при температуре 37 °С. Чашки Петри следует открывать 1 - 2 раза в неделю для лучшей аэрации и снова увлажнять фильтровальную бумагу чистой водой.

Наблюдения за развитием яиц гельминтов ведут не реже 2 раз в неделю. Отсутствие признаков развития в течение 2 - 3 месяцев свидетельствует о их нежизнеспособности. Признаками развития яиц гельминтов являются сначала стадии дробления, деление содержимого яйца на отдельные бластомеры. В течение первых дней развивается до 16 бластомер, которые переходят во вторую стадию - морулу и т.д.

Яйца анкилостомид культивируют в стеклянном цилиндре (высотой 50 см и диаметром 7 см), закрытом пробкой. Смесь из равных объемов стерильного песка, древесного угля и испражнений с яйцами анкилостомид, разведенную водой до полужидкой консистенции, наливают осторожно на дно цилиндра при помощи стеклянной трубки. В течение 1 - 2-суточного отстаивания в темноте при температуре 25 - 30 °С из яиц вылупляются рабдитовидные личинки, а через 5 - 7 суток они становятся уже филяриевидными: личинки выползают вверх по стенкам цилиндра, где видны даже невооруженным глазом.

Яйца трематод, естественно развивающиеся в воде, например описторхисов, дифиллоботриид, фасциол и других, помещают на часовое стекло, чашку Петри или в другой сосуд, наливают небольшой слой обычной воды. При культивировании яиц фасциол следует учесть, что они развиваются быстрее в темноте, при этом в живых яйцах при температуре 22 - 24 °С через 9 - 12 суток формируется мирацидий. При микроскопировании развивающихся яиц трематод хорошо заметны движения мирацидия. Мирацидий фасциолы из оболочек яйца выходит только на свету.

Метод Фюллеборна. Личинки анкилостомид и стронгилид культивируют на агаре в чашке Петри с животным углем. После выдерживания в термостате при температуре 25 - 30 °С в течение 5 - 6 часов личинки расползаются по агару, оставляя за собой дорожку из бактерий.

Метод Харада и Мори. В пробирки, помещенные в штатив, добавляют 7 мл дистиллированной воды. Деревянной палочкой берут 0,5 г испражнений и делают мазок на фильтровальной бумаге (15 х 150 мм) в 5 см от левого края (эту операцию проводят на листе бумаги, чтобы защитить поверхность лабораторного стола). Затем полоску с мазком вставляют в пробирку так, чтобы свободный от мазка левый конец достигал дна пробирки. Накрывают верхний конец куском целлофана и плотно обхватывают резинкой. На пробирке пишут номер, фамилию обследуемого. В таком состоянии пробирки хранят 8 - 10 суток при температуре 28 °С. Для изучения личинок снимают и удаляют целлофановую крышку и извлекают пинцетом полоску фильтровальной бумаги. При этом следует проявлять осторожность, так как небольшое количество инвазионных личинок может передвигаться к верхнему концу фильтровальной бумаги или к стенке пробирки и проникать под поверхность целлофана.

Пробирки помещают в горячую водяную баню при температуре 50 °С на 15 минут, после чего содержимое их встряхивают и быстро переливают в 15-миллилитровую пробирку для осаждения личинок. После центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют под малым увеличением.

Для дифференциального диагноза филяриевидных личинок необходимо пользоваться данными таблицы 3.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ФИЛЯРИЕВИДНЫХ ЛИЧИНОК A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, trICHOStrONGYLUS SP.

Личинки	Размеры	Характерные признаки
A. duodenale	Длина тела около 660 мкм, чехлика - 720 нм	Исчерченность чехлика менее выражена, ротовой выступ менее заметен, передний конец тела (но не чехлика) тупой, диаметр кишечной трубки меньше, чем бульбус пищевода, хвостовой конец тупой
N. americanus	Длина тела около 590 мкм, чехлика - 660 нм	Чехлик заметно исчерчен, особенно в хвостовой части тела, ротовой выступ кажется темным, передний конец тела (но не чехлика) закруглен подобно узкому концу куриного яйца, передняя часть кишечной трубки такого диаметра, как бульбус пищевода, хвостовой конец резко заострен
S. stercoralis	Длина тела около 500 мкм	Личинка без чехлика, пищевод составляет около половины длины тела, хвост тупой или разветвленный
Trichostrongylus sp.	Длина тела около 750 мкм	Просвет кишечника не прямой, а зигзагообразный, хвостовой конец закруглен и имеет форму кнопки

Мертвые ткани в большинстве случаев воспринимают краски быстрее, чем живые. Эти особенности используют в гельминтологии для определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтов. Однако в отдельных случаях некоторые краски лучше воспринимаются живыми тканями, чем мертвыми.

Для дифференциального определения живых и мертвых яиц и личинок применяют следующие краски и способы.

Для окраски живых и мертвых тканей часто используют лейкобазу метиленового синего. Живая клетка или ткань редуцирует метиленовый синий в бесцветную лейкобазу, мертвая ткань не обладает такой способностью, поэтому приобретает окраску.

Критерием состояния яйца является окрашивание зародыша, но не оболочки. Такая его способность связана с условиями гибели яйца. В тех случаях, когда волокнистая оболочка в мертвом яйце не теряет свойств полупроницаемости, она не будет пропускать красители, следовательно, мертвый зародыш не будет окрашиваться. Окрашенный зародыш всегда свидетельствует о гибели яйца.

Для окраски яиц аскарид можно использовать метиленовый синий в растворе молочной кислоты с едкой щелочью (метиленового синего 0,05 г, едкого натра 0,5 г, молочной кислоты - 15 мл). Живые яйца окраску не воспринимают; окрашиваются в синий цвет зародыши мертвых яиц. Окрашивание личинок аскарид основным раствором краски бриллианткрезилового синего в концентрации 1:10000 осуществляют следующим образом: на предметное стекло наносят каплю жидкости с яйцами аскарид и каплю основного раствора краски. Препарат накрывают покровным стеклом, которое плотно прижимают к предметному стеклу при легком постукивании препаровальной иглой. Под микроскопом наблюдают количество вышедших личинок и степень их окрашиваемости; после чего этот же препарат просматривают повторно через 2 - 3 часа. Живыми считаются только недеформированные личинки, не окрасившиеся в течение 2 часов. Мертвые личинки или не выходят из яиц, или окрашиваются при разрыве скорлупы (частично или полностью).

При определении жизнеспособности яиц аскаридий птиц возможна окраска препаратов 5%-ным спиртовым раствором йода. При его нанесении на препарат зародыши мертвых яиц аскаридий в течение 1 - 3 сек. окрашиваются в оранжевый цвет.

Мертвые яйца описторхисов и онкосферы бычьего цепня окрашиваются раствором толуидинового синего (1:1000), а мертвые онкосферы бычьего цепня - раствором бриллианткрезилового синего (1:10000). При этом приобретают цвет зародыши и оболочки как мертвых, так и живых яиц. Поэтому после окраски яйца и онкосферы отмывают в чистой воде и дополнительно окрашивают их сафранином (в разведении 1:10000 спирта 10 °С). Спирт удаляет краску с оболочек, а сафранин окрашивает в красный цвет. В результате живые яйца окрашиваются в красный цвет; яйца с мертвыми зародышами - в синий, а оболочка остается красной. Мертвые зародыши онкосфер бычьего цепня быстро, в течение нескольких минут, окрашиваются в ярко-красный или розовый цвет сафранином или в синий цвет бриллианткрезиловым синим в разведении 1:4000, или индигокармином в разведении 1:1000 - 1:2000. Живые зародыши не изменяются под влиянием этих красок даже спустя 2 - 7 часов.

Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня рекомендуется использовать следующие краски:

1. Бриллианткреазиловый синий (1:8000) - через 1 час у мертвых яиц особенно ярко окрашивается онкосфера, которая резко выделяется на бледном или бесцветном фоне остальной части яйца.

2. Сафранин (1:8000 при воздействии в течение 2 часов и 1:5000 - в течение 3 - 5 часов).

3. 50%-ный раствор пирогалловой кислоты в разведении 1:2 - при воздействии в течение 1 часа при температуре 29 - 30 °С (чем ниже температура, тем продолжительнее процесс окрашивания).

Люминесцентная микроскопия дает возможность дифференцировать живые и мертвые объекты без повреждения яйца. Для флюоресценции используются не ультрафиолетовые лучи, а сине-фиолетовая часть видимого света, с обычным микроскопом и предметными стеклами; к осветителю ОИ-18 добавляют специальный набор цветных фильтров.

Живые и мертвые яйца аскарид, остриц, карликовых цепней, бычьего цепня, широкого лентеца и других гельминтов люминесцируют неодинаково. Это явление наблюдается как при первичной люминесценции без применения красителей, так и при окраске флюорохромами (акридиновый оранжевый, корифосфин, примулин, ауролин, сульфат берлерина, трипафлавин, риванол, акрихин и др.).

Неокрашенные, живые несегментированные яйца аскарид светятся ярко-зеленым светом с желтоватым оттенком; у мертвых яиц оболочка излучает зеленый свет значительно ярче, чем темно-зеленая зародышевая часть; у яиц аскарид с личинкой проявляется только оболочка, а у мертвых - и оболочка, и личинка ярко-желтого цвета.

Непигментированные и несегментированные живые яйца остриц и карликовых цепней излучают зеленовато-желтый свет, у мертвых яиц интенсивно люминесцирует оболочка на фоне темно-зеленой зародышевой массы.

При вторичной люминесценции (при окраске акридин оранжевым в разведении 1:10000 и 1:50000 от 30 минут до 2 часов) оболочка живых и мертвых нематод, трематод и цестод люминесцирует неодинаково.

Скорлупа живых и мертвых яиц аскарид, токсокар, остриц, карликовых цепней, крысиных цепней, бычьего цепня, лентецов окрашивается в оранжево-красный цвет. Зародыши живых яиц аскарид, токсаскарисов, крысиного цепня, широкого лентеца и онкосферы бычьего цепня люминесцируют тусклым темно-зеленым или серо-зеленым цветом. Мертвые зародыши яиц этих гельминтов излучают "горящий" оранжево-красный цвет. Живые личинки остриц и токсокар (освобожденные от скорлупы яйца) излучают тусклый серо-зеленый свет, при их гибели цвет изменяется от головного конца в "горящий" светло-зеленый, затем желтый, оранжевый и, наконец, в ярко-оранжевый.

При окраске флюорохромами - корифосфилом, примулином у мертвых яиц аскарид и власоглавов наблюдается свечение от лилово-желтого до медно-красного цвета. Жизнеспособные яйца не люминесцируют, а окрашиваются в темно-зеленый цвет.

Живые яйца трематод (парагонимусов и клонорхисов) не люминесцируют после окраски акридиновым оранжевым, а от мертвых яиц исходит желтовато-зеленый цвет.

Метод люминесценции может быть применен и для определения жизнеспособности личинок гельминтов. Так, флюорохромированные раствором акридинового оранжевого (1:2000) личинки стронгилят, рабдитат светятся: живые - зеленым (с оттенком), мертвые - ярко-оранжевым светом.

Живые мирацидии, вышедшие из оболочки, излучают тусклый голубоватый свет с еле заметным светло-желтым венчиком ресничек, но спустя 10 - 15 минут после гибели проявляются ярким "горящим" светло-зеленым, а затем - оранжево-красным светом.

Биологическая проба - определение жизнеспособности инвазионных яиц гельминтов посредством их скармливания лабораторным животным. Это наиболее точный метод. Личинками гельминта заражают соответствующего промежуточного или окончательного хозяина, можно использовать также лабораторных животных, которым скармливают зрелые яйца или личинки паразитов.

Например, для определения жизнеспособности яиц аскаридат (аскариды свиные, человека, токсокары, токсаскарис и др.) на одно животное (морские свинки, мыши) необходимо не менее 100 - 300 яиц с развившейся личинкой. Яйца аскаридат в изотоническом растворе натрия хлорида вводят пипеткой через рот мыши или морской свинки. Через 6 - 7 суток животное забивают, вскрывают и исследуют его печень и легкие в отдельности на наличие личинок аскаридат. Для этого печень и легкие измельчают ножницами на мелкие кусочки и исследуют их по методу Бермана или Супряги (раздел 6.1.2).

Если животных заражали живыми инвазионными яйцами, то при вскрытии в печени и легких обнаруживают мигрирующие личинки аскаридат.

Для определения жизнеспособности адолескариев фасциол, собранных на растениях в биотопах малого прудовика - промежуточного хозяина паразита, используют мышей, морских свинок или кроликов, которым скармливают эти личинки или вводят их пипеткой через рот.

В случае заражения яйца фасциол в фекалиях лабораторных животных можно обнаружить у кроликов через 2 месяца, у морских свинок - через 50 суток, у мышей - через 35 - 40 суток.

Для более быстрого получения ответа лабораторных животных вскрывают через 20 - 30 суток и исследуют печень на наличие молодых фасциол.

Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня также рекомендуется их скармливание незараженным ими ранее белым мышам с последующим вскрытием животных через 92 - 96 часов и выявлением цистицеркоидов в кишечных ворсинках или цестод в просвете кишечника.

Для определения жизнеспособности яиц описторхисов рекомендуется метод (Герман С.М., Бэер С.А., 1984), основанный на физико-химической активации железы вылупления мирацидия и стимуляции двигательной активности личинки, что приводит к открыванию крышечки яйца и активному выходу мирацидия в экспериментальных условиях.

Взвесь яиц описторхисов в воде предварительно охлаждают до 10 - 12 °С (все последующие операции осуществляют при комнатной температуре 19 - 20 °С). В центрифужную пробирку вносят 1 каплю взвеси, содержащую 100 - 150 яиц. Пробирку ставят в штатив на 5 - 10 минут. За это время все яйца успевают опуститься на дно. Затем полоской фильтровальной бумагой осторожно отсасывают излишек воды и в пробирку добавляют 2 капли специальной среды. Среду готовят на 0,005 М Трис-HCl буфере; в буфер добавляют 12 - 13%-ный раствор этанола и краситель (фуксин, сафранин, эозин, метиленовый синий и т.д.). Пробирку встряхивают, ее содержимое переносят пипеткой на предметное стекло и оставляют на 10 минут, слегка покачивая. Затем добавляют 2 капли указанной среды. Препарат готов для микроскопирования под обычным световым микроскопом при 20-кратном увеличении.

За это время у жизнеспособных личинок открывается крышечка, и мирацидий активно выходит в указанную среду. Благодаря наличию в ней этанола, они через 2 - 5 минут обездвиживаются и затем окрашиваются с помощью красителя. Их легко можно обнаружить и посчитать при микроскопировании.

Читайте также: