Наставление по диагностике туберкулеза животных от 18 11 2002 г распечатать

Туберкулез – широко распространенное инфекционное заболевание человека и жи-вотных, вызываемое микобактериями туберкулезного комплекса (Mycobacterium tubercu-losis complex – MTBC). От больных туберкулезом животных могут заражаться люди, для них наиболее опасны Mycobacterium bovis (микобактерии туберкулеза бычьего). От лю-дей, больных туберкулезом, микобактериями туберкулеза человека – Mycobacterium tu-berculosis может заражаться крупный рогатый скот. Диагноз на туберкулез у крупного ро-гатого скота ставят на основании результатов аллергических, патолого-анатомических, гистологических и бактериологических исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков.

Рис. 1. Схема комплексных исследований крупного рогатого скота на туберкулез

Прижизненная диагностика туберкулеза у крупного рогатого скота проводится аллергическим методом.
Аллергический метод – внутрикожная туберкулиновая проба с применением Пурифиед Протеин Дериватив – туберкулина (ППД-туберкулин) для млекопитающих. Туберкулин вводят крупному рогатому скоту в середину шеи (рис. 2). Учет и оценку реакции на введение туберкулина проводят через 72 часа. Животных считают положительно реагирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мм и более. Толщину кожной складки в месте введения туберкулина измеряют кутиметром, а полученный показатель сравнивают с толщиной кожной складки рядом с местом введения препарата [3, 4].

Рис. 2. Туберкулиновая проба у крупного рогатого скота [6]

Для дифференциации парааллергических реакций у крупного рогатого скота используется симультанная проба с одновременным применением двух туберкулинов – для млекопитающих и для птиц или туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ).

Симультанная проба проводится в том же порядке, что и туберкулиновая (рис. 3). Проба является групповой и дает возможность оценить ситуацию по туберкулезу лишь в целом по стаду или по группе (не менее 6 голов) обследуемых животных. Под достоверностью различия понимают такое различие в величине показателей интенсивности реакций на туберкулин и КАМ, которое дает возможность с уверенностью не менее чем на 95 % сделать заключение о состоянии по туберкулезу обследуемой группы животных [3].

Рис. 3. Симультанная аллергическая проба с использованием ППД-туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий [11]

Офтальмопроба на туберкулез (глазной метод туберкулинизации).
Туберкулин в количестве 3–5 капель наносится на конъюнктиву нижнего века или на поверхность роговицы глаза животного. Проводится офтальмопроба двукратно с 5–6-дневным интервалом [2, 4, 5]. Результаты офтальмопробы оценивают через 6, 9, 12 и 24 часа после первого и через 3, 6, 9 и 12 часов после повторного введения туберкулина. Реакция считается положительной, если образуется гнойный или слизисто-гнойный секрет, который накапливается в конъюнктивальном мешке или вытекает в виде шнура из внутреннего угла глаза. Кратковременная гиперемия слизистых оболочек глаза и слезотечение с образованием небольшого количества слизистого секрета рассматриваются как отрицательная реакция [3].

Факторы, обуславливающие проявление неспецифических реак-ций на туберкулин у КРС
В многочисленных исследованиях было показано, что проявления неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота обусловлены многочисленными факторами внешней среды и индивидуальными особенностями организма животного [2, 3, 5]. Неспецифические реакции подразделяются на две основные группы: парааллергические и псевдоаллергические (см. таблицу).

Причины возникновения неспецифических реакций у крупного рогатого скота на введение туберкулина

Неспецифическая реакция	Фактор, обуславливающий проявление неспецифической реакции	Особенности неспецифической реакции
Парааллергическая	Атипичные (нетуберкулезные) виды микобактерий и их ассоциации. Mycobacterium tuberculosis (микобактерии туберкулеза человека). Mycobacterium avium (микобактерии туберкулеза птичьего)	Непостоянство реакции на туберкулин. Сенсибилизация организма животного сохраняется от 1 до 3 месяцев после инфицирования [5]. Выявление наибольшего количества животных с выраженными реакциями на КАМ
Псевдоаллергическая	Наличие гельминтов (фасциол, дикроцелий, эхинококков). Актиномикоз. Микологические поражения легких. Гнойные или гнойно-некротические процессы во внутренних органах. Нарушения обмена веществ	В благополучных по туберкулезу стадах у отдельных животных регистрируется увеличение толщины кожной складки на месте введения туберкулина на 3–4 мм, признаки воспаления отсутствуют

Лабораторные методы диагностики туберкулеза КРС
К лабораторным методам диагностики туберкулеза относятся бакте-риологическое исследование, серологическое исследование и молеку-лярно-биологическое исследование.
Бактериологическое исследование проводится с целью выделения возбудителя туберкулеза (рис. 4).

Отбор проб биоматериалов для бактериологического исследования производят как от животных с клиническими признаками туберкулеза, так и от животных, вызывающих подозрение на туберкулез. Исследуют молоко, мокроту, мочу. От павших и убитых животных для исследования отбирают пораженные участки органов на границе со здоровой тканью и измененные лимфатические уз-лы.

Рис. 4. Культура Mycobacterium bovis. Среда роста Гельберга [10]

При наличии характерных для туберкулеза изменений исследуются портальные, предлопаточные, надвыменные, поверхностные паховые лимфатические узлы и фрагменты внутренних органов – легких, печени, почек.

Бактериологическое исследование биоматериалов на туберкулез за-нимает срок до 3 месяцев. Заболевание животных туберкулезом считается установленным в случаях выделения микобактерий туберкулеза бычьего или человеческого из материала от убитых животных [3, 4, 8].

Серологическое исследование на туберкулез проводится в реакции связывания комплемента (РСК).
РСК применяется в двух вариантах:
1) для обнаружения в сыворотке больного животного специфических антител к возбудителю туберкулеза;
2) для выявления и идентификации в исследуемом материале антигена возбудителя туберкулеза.

Молекулярно-биологическое исследование на туберкулез.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является одним из высокочувствительных и специфичных методов диагностики туберкулеза. Чувствительность метода ПЦР – от 10 до 100 микроорганизмов в пробе (чувствительность микроскопического метода – от 103 до 105 микроорганизмов). В основе метода лежит амплификация специфических участков ДНК возбудителя, которые содержатся в исследуемой пробе. В настоящее время в лабораторной практике применяются тест-системы как для выявления ДНК конкретного вида, так и для дифференцирования видов, входящих в Mycobacterium tuberculosis complex: микобактерий человеческого вида (M. tuberculosis), бычьего вида (M. bovis) и вакцинного штамма микобактерий бычьего вида (M. bovis BCG). Для проведения анализа используют следующие образцы биопроб от крупного рогатого скота: цельную кровь, молоко, фарингеальные смывы, мочу, фекалии, носовую слизь и биопсийные материалы, в том числе лимфатические узлы [3].

Молекулярно-биологическое исследование позволяет значительно ускорить раннюю диагностику туберкулеза, дифференцировать пара- и псевдоаллергические реакции на туберкулин, снизить количество подозреваемых в заражении туберкулезом и подвергаемых диагностическому убою животных [4, 5].

Патолого-анатомические исследования
Для убоя с диагностической целью отбирают животных по результатам вышеизложенных методов исследования.
Патолого-анатомические изменения в организме больного туберкулезом животного зависят как от его возраста, так и от стадии инфекционного процесса.
В начальных стадиях инфекционного процесса туберкулы имеют вид серых полупрозрачных узелков размером от булавочной головки до чечевичного зерна. Затем они становятся мутными, приобретают бело-желтый цвет, заполняются некротизированной сухой творожистой массой. В легких туберкулезные очаги поражения чаще выделяются над плеврой по тупому краю органа (рис. 5).

Рис. 5. Легкое крупного рогатого скота при туберкулезном поражении тканей [9]

Гистологические исследования проводят для дифференциации туберкулезных патолого-анатомических изменений от сходных изменений, наблюдаемых при других заболеваниях, например для дифференциации от гранулем паразитарного и микотического происхождения. В положительных случаях в гистологических препаратах, окрашенных по Цилю – Нильсену, находят гранулемы с некротизированным центром, окруженные зоной эпителоидных, отдельных гигантских лимфоидных клеток и соединительно-тканной капсулой.

Вместо заключения
Осуществление плановых профилактических диагностических иссле-дований на туберкулез способствует снижению риска инфицирования людей туберкулезом, ограничению распространения возбудителя из очагов инфекции, раннему выявлению неблагополучных по туберкулезу населенных пунктов.

Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е. ФГБОУ ВПО "Кубанский государственный аграрный университет", г. Краснодар

Проблема персистирования бактерий является в настоящее время одной из наиболее актуальных в инфекционной патологии животных.

Микробы, сохраняющие жизнеспособность в тканях макроорганизма, способствуют переходу заболевания в хроническую или латентную форму, затем, реверсируя в исходный бактериальный вид, они могут вызывать обострение инфекционного процесса. Феномен микробного персистирования опасен, как для самого носителя, так и для контактирующих с ним животных, так как может явиться источником распространения инфекции.

Как наиболее распространенные формы микробного персистирования многие исследователи рассматривают L-формы бактерий. Превращение в L-формы - свойство, присущее всем микроорганизмам. Способность различных микробов под влиянием антибиотиков и ряда других факторов образовывать в организме L-формы и близкие им варианты бактерий, длительное их персистирование в условиях макроорганизма и, особенно, возможность реверсии требует ревизии наших взглядов на роль различных форм существования возбудителя в инфекционной патологии. Наблюдения последних лет [1, 2, 3] показывают, что подобные формы могут возникать в организме под влиянием его защитных сил и других, еще не известных факторов, когда роль антимикробного агента ничтожно мала или практически сведена к нулю, так как он совсем не применялся. В этих условиях микроб оказывается способным достигать в макроорганизме полностью сбалансированного состояния, тогда он не пролиферирует, и не разрушается, а длительно персистирует, сохраняя потенциальную способность к реверсии в исходный бактериальный вид со всеми вытекающими отсюда последствиями. Это создает определенные трудности и для выявления инфицированных животных при плановой аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. Метод аллергического исследования основан на выявлении у больных животных гиперчувствительности замедленного типа к специфическому аллергену.

В настоящее время аллергическое исследование крупного рогатого скота на туберкулез включает постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет и оценку аллергической реакции [4]. Реагирующих животных подвергают дополнительным исследованиям офтальмопробой или внутривенной пробой с применением туберкулина.

Однако данный способ не позволяет выявить прижизненную латентную инфекцию. Чувствительность к туберкулину у животных со скрытым течением туберкулезной инфекции выражена слабее, а реакции на туберкулин подвержены колебаниям. В таком случае инфицированные возбудителем туберкулеза, но не выявленные при исследовании животные остаются в стаде и могут являться причиной заболевания в хозяйстве [1, 5].

Сопоставление этих положений с данными многочисленных наблюдений о выраженном полиморфизме возбудителя туберкулеза явилось предпосылкой для проведения настоящего исследования, цель которого заключалась в повышении точности диагностики туберкулеза, своевременном прижизненном выявлении крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции методом аллергической диагностики.

Материал и методы. В диагностируемом стаде из 200 голов крупного рогатого скота перед проведением аллергических исследований на туберкулез выбрали группу индикаторных животных (n=10). у которых произвели забор венозной крови по две пробы от каждого животного. Одна проба крови с антикоагулянтом гепарином, разведенным в изотоническом растворе натрия хлорида из расчета 25 ЕД/ мл для определения индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ). Вторая проба - без антикоагулянта для определения среднего цитохимического коэффициента (СЦК) миелопероксидазы. Определение ИЗФ и СЦК проводили по общепринятым методикам [6]. Затем проводили постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции. Исследования проведены дважды с интервалом 60 дней (опыт 1 и опыт 2).

Результаты и обсуждение. В период проведения 1-го опыта в группе индикаторных коров индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) в среднем составлял 0,9±0,03, а средний цитохимический коэффициент (СЦК) миелопероксидазы 1,88±0,1 ед. (табл. 1). Затем провели аллергическое исследование стада на туберкулез, включающее постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет и оценку аллергической реакции. В стаде выявили одно положительно реагирующее на ППД-туберкулин животное.

Таблица 1. Результаты определения индекса завершенности фагоцитоза и активности миелопероксидазы у индикаторных коров, n=10

СЦК миелопероксидазы, ед.

Количество реагирующих на ППД- туберкулин животных в стаде, голов

Через 60 дней после проведения 1-го опыта в том же стаде у индикаторных животных повторно произвели забор венозной крови по две пробы от каждого животного для определения ИЗФ и СЦК ми-елопероксидазы.

Установлено, что индекс завершенности фагоцитоза в этот период, в среднем по группе составлял 1, а средний цитохимический коэффициент миелопероксидазы - 2,15+0,06 ед. (табл. 1). Затем провели аллергическое исследование стада на туберкулез, включающее постановку внутрикожной пробы с ППД туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции. В стаде выявлено 4 реагируюших на ППД-туберкулин животных. От убитых с диагностической целью реагирующих животных выделен возбудитель туберкулеза.

Из полученных данных следует, что при средних показателях индекса завершенности фагоцитоза, равного 1, и среднего цитохимического коэффициента миелопероксидазы, равного 2,15+0,06 ед., организм животного дает более полноценный ответ на введение аллергена, что позволяет выявить крупный рогатый скот со скрытым течением туберкулезной инфекции.

Заключение. В результате проведенных исследований разработан и запатентован "Способ выявления крупного скота со скрытым течением туберкулезной инфекции" [7], включающий постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции. В отличие от традиционного метода аллергической диагностики разработанный способ предполагает пред-варительноеопределение в крови животных уровня фагоцитарной активности и цитохимическое исследование лейкоцитов на миелопе-роксидазу. После чего при средних показателях индекса завершенности фагоцитоза, равного 1, и среднего цитохимического коэффициента миелопероксидазы, равного 2,15±0,06 ед., проводят постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции.

Способ прост в применении, повышает точность диагностики, позволяет своевременно выявлять животных со скрытым течением туберкулезной инфекции. В результате сокращается срок нахождения в стаде инфицированных животных и снижается напряженность эпизоотической ситуации по туберкулезу. Использование данного метода позволяет определять и корректировать сроки проведения аллергических исследований крупного рогатого скота на туберкулез.

1. Макаров Ю.А. L-формы микобактерий туберкулеза: монография / Ю.А. Макаров. - Благовещенск, 1997. - 172 с.
2. Макаров Ю.А. Патоморфология экспериментального туберкулеза у лабораторных животных / Ю.А. Макаров, И.Ю. Макаров. - Благовещенск. Даль-ГАУ, 2008. - 120 с.
3. Макаров Ю.А. Персистирование L-форм микобактерий туберкулеза в организме лабораторных животных / Ю.А. Макаров, Н.Е. Горковенко // Труды Кубанского госуд. аграр. университета, 2014. - № 5 (50). - С. 148-151.
4. Наставление по диагностике туберкулеза животных (утв. Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 18 ноября 2002 г.) - М., 2002. - С. 8-25.
5. Найманов А.Х. Сравнительная оценка прижизненных методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / А.Х. Найманов // Ветеринария, 2009. - № 2. - С. 7-14.
6. Кисляк Н.С. Клетки крови у детей в норме и патологии / Н.С. Кисляк, Р.В. Ленская. - М. : Медицина, 1978. - 256 с.
7. Способ выявления крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции / Макаров Ю.А., Сорокина А.И., Кандыбина Т.В. и др. - Патент РФ № 2476877 (Заявка № 2010130277, приоритет от 19.07.2010, опубл. 27.02.2013. - Бюл. № 6).

Резюме. Микроорганизмы, сохраняющие жизнеспособность в тканях макроорганизма, способствуют переходу заболевания в хроническую или латентную форму. Этот феномен обозначается термином "персистенция". Чаще всего микроорганизмы персистируют в виде L-форм. Практически все микробы способны образовывать в макроорганизме L-формы и близкие им варианты бактерий, что дает им возможность длительно персистировать в усло-виях макроорганизма, при этом сохраняется возможность их реверсии в исходный бактериальный вид. Скрыто протекающая туберкулезная инфекция представляет серьезную опасность в эпизоотическом отношении, так как под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды латентная инфекция может переходить в прогрессирующий активный туберкулез. Кроме того, это создает определенные трудности и для выявления инфицированных животных при плановой аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. Цель исследования заключалась в повышении точности диагностики туберкулеза, своевременном прижизненном выявлении крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции методом аллергической диагностики. Перед проведением аллергической диагностики на туберкулез у индикаторной группы животных проводили исследование фагоцитарной активности крови и цитохимическое исследование лейкоцитов на миелопероксидазу. Проведенными исследованиями установлено, что при определенном уровне иммунного статуса (ИЗФ=1 и СЦК миелопероксидазы - 2,15+0,06 ед.) организм животного дает более полноценный ответ на введение аллергена, что позволяет выявить крупный рогатый скот со скрытым течением туберкулезной инфекции. Разработан и запатентован "Способ выявления крупного скота со скрытым течением туберкулезной инфекции", который повышает точность диагностики, позволяет своевременно выявлять животных со скрытым течением туберкулезной инфекции.

Ключевые слова: туберкулез, микобактерии, персистенция, L-формы, аллергическая диагностика, крупный рогатый скот, индикаторная группа, фагоцитоз, индекс завершенности фагоцитоза, миелопероксидаза, цитохимический коэффициент.

СБОРНИК основных инструкций и наставлений по борьбе с болезнями сельскохозяйственных животных - НАСТАВЛЕНИЕ по применению туберкулинов для диагностики туберкулеза у животных

***

НАСТАВЛЕНИЕ
по применению туберкулинов для диагностики туберкулеза у животных

(Утверждено Управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 22 ноября 1962 г. взамен наставления по применению туберкулина для диагноcтики туберкулеза у сельскохозяйственных животных и наставления по применению туберкулина для диагностики туберкулеза у птицы от 4 февраля 1958 г., временного наставления по применению сухого туберкулопротеина от 26 февраля 1958 г. и временного наставления по применению сухого очищенного туберкулина для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота от 25 апреля 1958 года)

1. Для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота, буйволов, свиней, коз, овец, лошадей, собак, обезьян и пушных зверей применяют обычный или сухой очищенный туберкулин (туберкулопротеин).

Для диагностики туберкулеза у птиц (кур, индеек, гусей, уток) применяют птичий туберкулин.

2. Обычный туберкулин представляет собой стерильный, выпаренный до 1/10 первоначального объема, фильтрат убитой туберкулезной культуры бычьего типа, имеющий вид прозрачной, темно-бурой жидкости вязкой консистенции, обладающий специфическим запахом.

Сухой очищенный туберкулин (туберкулопротеин) — аморфная масса желтоватого оттенка, состоящая из осажденных белков фильтрата туберкулезной культуры, выращенной на безбелковой синтетической среде.

Птичий туберкулин является аналогом туберкулина, но готовится из штаммов возбудителя птичьего туберкулеза. По внешнему виду это жидкость темно-коричневого цвета.

Срок годности бычьего и птичьего туберкулинов — 5 лет, туберкулопротеина — 2 года со дня выпуска биофабрикой при условии хранения в темном, прохладном, сухом помещении.

3. Туберкулопротеин непосредственно перед применением разводят специальным разбавителем, высылаемом биофабрикой. Ампулы с разбавителем и наставлением по применению туберкулопротеина вкладывают в каждую коробку.

Каждую ампулу с туберкулином и туберкулопротеином перед применением просматривают. При обнаружении в них каких-либо примесей, плесени, хлопьев, трещин стекла, отсутствии этикетки ампулы выбраковывают. Использование остатка туберкулина или туберкулопротеина из открытых ампул на следующий день не разрешается. Жидкие туберкулины, подвергавшиеся замораживанию, применять не разрешается.

4. Туберкулин вводят животным внутрикожно или на конъюнктиву глаза. Внутрикожным и глазным методом туберкулинизации исследуют крупный рогатый скот и буйволов. При одновременном исследовании этими методами достигается более полное выявление больных животных.

Лошадей исследуют методом глазной туберкулинизации; свиней — внутрикожным, но одновременно двумя туберкулинами — бычьим и птичьим; молодняк крупного рогатого скота, овец, коз, собак, обезьян, птицу и пушных зверей исследуют методом внутрикожной туберкулинизации.

5. Для внутрикожного введения туберкулина используют тонкие иглы № 32 и шприцы с бегунком, емкостью 1 или 2 мл. Для нанесения туберкулина на конъюнктиву глаза применяют обычные глазные пипетки.

Шприцы, иглы и пипетки стерилизуют кипячением в воде без добавления дезинфицирующих средств.

6. Исследование животных на туберкулез путем туберкулинизации проводят в порядке и сроки, предусмотренные инструкцией о мероприятиях по борьбе с туберкулезом животных.

ВНУТРИКОЖНЫЙ МЕТОД ТУБЕРКУЛИНИЗАЦИИ

7. Туберкулин или туберкулопротеин вводят: взрослому крупному рогатому скоту — в кожу средней трети шеи, телятам — в область лопатки, козам — в под-хвостовую складку, свиньям — в кожу тыльной поверхности каждого уха. ближе к его основанию, овцам, собакам и обезьянам — в кожу внутренней бесшерстной поверхности бедра или плеча и пушным зверям — в кожу верхнего века одного из глаз.

Курам туберкулин вводят в одну из бородок, индейкам — в подкрыльцевую складку или подчелюстную сережку, гусям и уткам — в одну из подчелюстных складок.

Вводить туберкулин в кожу, имеющую травматические повреждения (уплотнения или абсцессы, поражения грибками, клещами, гельминтами), запрещается.

Исследовать методом внутрикожной туберкулинизации истощенных коров, овец, коз, обезьян и собак, а также всех животных за один месяц до родов и 3 недель после родов и всех вакцинированных животных против какого-либо инфекционного заболевания до истечения 2 недель с момента прививки не разрешается.

8. Туберкулин и разведенный туберкулопротеин при меняется в дозе по 0,2 мл независимо от вида и возраста животных, а птице — в дозе по 0,.1 мл.

Повторно туберкулин (туберкулопротеин) вводят только тем животным, которые не реагировали на его первое введение.

9. У крупного рогатого скота и буйволов, больных туберкулезом, специфическая реакция на туберкулин обычно начинает проявляться через 18—20 часов после его введения и достигает максимума через 48—72 часа. Она проявляется на месте инъекции туберкулина в виде разлитого отека тестоватой консистенции, не имеющей, как правило, четких границ с окружающей тканью. Образование отека сопровождается повышением местной температуры, гиперемией и болезненностью воспаленного участка кожи. Интенсивность проявления указанных признаков зависит от давности и характера инфекционного процесса, а также от общего состояния животного. При плохой упитанности или генерализованном туберкулезном процессе реакция может быть слабо выражена или совсем отсутствовать.

Реакцию учитывают по наличию указанных признаков, а также по результатам измерения толщины кожной складки на месте введения туберкулина.

При наличии указанных признаков воспаления и утолщении кожной складки не менее чем на 7 мм при применении обычного туберкулина и не менее чем на 3 мм при применении туберкулопротеина реакция считается положительной.

При наличии тех же признаков воспаления, но выраженных менее отчетливо, и утолщении кожной складки менее 7 мм при применении обычного туберкулина и менее 3 мм при применении туберкулопротеина реакция считается сомнительной. При отсутствии отека или других воспалительных явлений на месте введения туберкулина или при образовании плотной, холодной ограниченной припухлости кожи реакцию признают отрицательной.

Учет и оценку реакции после первого введения туберкулина проводят через 48 часов. Положительно реагировавших животных признают больными и изолируют, а остальных повторно проверяют через 72 часа и реагировавших положительно также признают больными и изолируют.

Животным, у которых реакция была отрицательной или сомнительной, вводят туберкулин вторично через 72 часа после первого введения в тот же участок кожи и повторно учитывают реакцию. При отсутствии положительно и сомнительно реагирующих животных, при учете реакции через 48 часов после первого введения туберкулина, повторное введение туберкулина разрешается проводить через 48 часов, т. е. сразу же после первого учета реакции.

Учет и оценку реакции на повторное введение туберкулина проводят через 24 часа.

10. Животных, давших сомнительную реакцию и на вторичное введение туберкулина, изолируют и через 30—45 дней исследуют повторно методами двойной внутрикожной и двойной глазной туберкулинизации.
"Животных, давших положительную реакцию на один из указанных методов исследования, признают больными туберкулезом.

11. У коз и овец учет и оценку реакции после первого введения туберкулина проводят через 48—72 часа, а после повторного — через 24 часа. Образование на месте введения туберкулина разлитой, тестоватой отечности величиной не менее 3—5-копеечной монеты считается положительной реакцией. При наличии плотной, ограниченной, незначительной припухлости реакция считается сомнительной, а при отсутствии изменений на месте инъекции туберкулина — отрицательной.

12. У свиней реакцию учитывают через 48 и 72 часа. Положительная реакция характеризуется образованием на месте введения туберкулина отечной припухлости, величиной от двухкопеечной монеты и более, повышением местной температуры, появлением болезненности и гиперемии. У здоровых животных кожа на месте введения туберкулина не изменяется. Вторично туберкулин свиньям вводят через 72 часа.

У собак реакцию учитывают через 24 и 48 часов. Положительной реакцией считают образование болезненной, разлитой отечности. При отсутствии изменений на месте введения туберкулина собак признают по туберкулезу здоровыми.

14. Обезьянам туберкулин перед введением дополнительно разводят физиологическим раствором или дистиллированной водой в соотношении 1:1—1:2. Реакцию учитывают через 24—48 часов. При образовании на месте введения туберкулина разлитой болезненной отечности реакцию считают положительной.

15. У пушных зверей реакция проявляется через 24—48 часов после введения туберкулина и удерживается до 72—96 часов. Положительная реакция характеризуется отеком века и прикрытием глаза до 3/4, слезотечением, выделением гноя.

Реакцию учитывают через 24 и 48 часов. При слабо выраженном отеке, прикрытии глазного яблока на 1/4 реакцию считают сомнительной, а при отсутствии изменений — отрицательной. Звери, реагировавшие сомнительно, подлежат повторному исследованию через 1 месяц.

16. Все виды птицы исследуют птичьим туберкулином. Учет реакции проводят через 24 и 48 часов после первого введения туберкулина и через 24 часа после второго. Повторно туберкулин вводят через 96 часов.

Положительная реакция характеризуется заметным диффузноотечным опуханием бородки (подчелюстной складки, сережки), которая становится тестообразной, отвисающей и горячей на ощупь. При незначительном опухании бородки реакция считается сомнительной. У здоровой птицы никаких изменений на месте введения туберкулина не наблюдается.

ГЛАЗНОЙ МЕТОД ТУБЕРКУЛИНИЗАЦИИ

17. Методом глазной туберкулинизации исследуют на туберкулез крупный рогатый скот, буйволов и лошадей.

При наличии механического загрязнения или воспалительных процессов в конъюнктиве и оболочках глаза проводить исследование животных не разрешается.

Туберкулин или туберкулопротеин наносят пипеткой на слизистую оболочку нижнего века или на поверхность глаза при оттянутом нижнем веке в дозе по 3—5 капель.

18. У животных, больных туберкулезом, реакция на первое введение туберкулина проявляется через 3—6 и длится до 15—24 часов.

Учет реакции должен проводиться через 3, б, 9, 12 и 24 часа после введения туберкулина.

Положительная реакция характеризуется выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося вначале в конъюнктивальном мешке отдельными круглыми образованиями и нитями, а затем вытекающего в виде шнурка. Одновременно наблюдается обильное слезотечение, гиперемия и набухание конъюнктивы. При сильной реакции отекшая конъюнктива выступает над краем века и на склере глаза виден студенистый инфильтрат.

При первичном введении туберкулопротеина признаки реакции могут быть выражены слабее. Поэтому для правильного учета результатов туберкулинизации веки животного необходимо раскрыть и определить характер и интенсивность воспалительных реакций на конъюнктиве.

При образовании только слизистого секрета, слабо выраженной гиперемии и незначительного отека конъюнктивы реакция считается сомнительной.

Кратковременная гиперемия и слезотечение с образованием небольшого количества слизистого секрета, а равно отсутствие каких-либо изменений считается отрицательной реакцией.

19. Животных, положительно реагировавших на туберкулин, признают больными туберкулезом и изолируют, а всех реагировавших сомнительно и отрицательно исследуют тем же методом повторно через 5—6 дней. При этом туберкулин вводят в тот же глаз и в той же дозе. В результате сенсибилизации реакция у больных наступает раньше, сохраняется менее продолжительно и выражена обычно более резко. Учет результатов повторной туберкулинизации необходимо проводить через 3, б, 9 и 12 часов после введения туберкулина.

1. Пункт 8 наставления изложить, в следующей редакции:

«Туберкулин и разведенный туберкулопротеин применяется в дозе 0,2 мл независимо от вида и возраста животных, а птице и норкам — в дозе 0.1 мл.

2. Пункт 16 наставления изложить в следующей редакции:

«Все виды птиц исследуют птичьим туберкулином. Учет реакции проводят однократно через 30—36 часов после введения туберкулина.