Аденовирусный гидроперикардит у кур

Таймасуков А.А. ОАО "Компания Кубаньптицепром"

Аденовирусный гидроперикардит бройлеров - остропротекающее и высоко контагиозное вирусное заболевание преимущественно бройлеров 3-5-тинедельного возраста, характеризующееся накоплением в перикарде транссудата, гепатитом, асцитом и нефрозо-нефритом. Степень тяжести болезни в естественных условиях зависит от влияния некоторых иммунодепрессивных инфекций, таких как инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо), болезнь Марека и инфекционная анемия цыплят.

В настоящее время, во многих хозяйствах аденовирусный гидроперикардит начинает проявляться у 24-28 - дневных, а иногда у более молодых бройлеров, в свою очередь, провоцируя болезнь Гамборо или ухудшая формирование поствакцинального иммунитета против данного заболевания, а также Ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и других болезней. Источником инфекции является больная и переболевшая птица. Вирус передается аэрогенно, алиментарно и трансовариально. Возбудитель распространяется с воздухом, водой, кормом, предметами ухода, контактно, "с помощью" обслуживающего персонала. Переносчиками возбудителя инфекции могут быть дикие и синантропные птицы, насекомые и иксодовые клещи, а также простейшие микроорганизмы, в том числе кокцидии. Птицы родительского стада могут быть инфицированы аденовирусом перед началом или в процессе яйцекладки, что обуславливает интенсивную трансовариальную передачу возбудителя.

Аденовирусы птиц, по данным профессора В.А.Бакулина, условно дифференцированы на 3 группы. В первую группу входят 12 серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, например возбудители "CELO - инфекции", бронхита перепелов, панкреатита цесарок гепатита с включениями - гидроперикардита кур. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемаглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, в том числе аденовирус "Синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76)". В третью группу включены аденовирусы с группоспецифическим преципитирующим антигеном, отличающимся от таковых первых двух групп - аденовирусы геморрагического энтерита индеек и болезни "мраморной селезенки" фазанов. В промышленных птицеводческих хозяйствах аденовирусы распространены повсеместно. Любые из имеющихся 13 серотипов аденовирусов в различных сочетаниях могут циркулировать в одном хозяйстве, а также в организме одной внешне здоровой птицы [3].

Инкубационный период при заражении аденовирусом составляет 24-72 часа. Наиболее часто аденовирусный гидроперикардит бройлеров связан с застойными явлениями в сердце и с гидремией, приводящих к анемии. При экспериментальном заражении цыплята угнетены, взъерошены, "не держат крылья", возможна анемия, диарея с выделением фекалий с примесью уратов, отсутствие реакции на внешние раздражители. Максимальная смертность птиц на 2-4 день после заражения. Общая смертность цыплят-бройлеров может достигать до 75-85%. При хроническом или субклиническом течении клинические признаки незначительные или отсутствуют. Смертность составляет 1-7%.

При вскрытии трупов павших бройлеров обнаруживают желтоватое окрашивание подкожной клетчатки и внутреннего жира, очаговые кровоизлияния в мышцах, скопления в сердечной сорочке от 5 до 20 мл. серозного транссудата соломенно-желтого цвета водянистой или желеподобной консистенции. У экспериментально зараженных цыплят иногда наблюдается появление небольшого количества асцитной жидкости.

Сердце деформированное и дряблое, с точечными кровоизлияниями в миокарде, особенно на верхушке сердца и в ушках предсердий. Легкие уплотнены и отечны, в некоторых случаях с наличием серозной жидкости. Печень увеличена, с очагами некроза. Почки увеличены, с точечными кровоизлияниями, мозаичные, иногда с канальцами и мочеточниками заполненными уратами. Селезенка может быть увеличена, мраморная, отмечается атрофия фабрициевой бурсы.

Диагноз на аденовирусный гидроперикардит бройлеров ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатоми-ческих данных, результатов выделения вируса (из печени) на развивающихся эмбрионах кур, в культуре клеток печени, почек, фиброблас-тов эмбрионов кур, а также результатов заражения восприимчивых цыплят 10 дневного возраста [1]. Завершающим этапом в постановке диагноза является идентификация выделенного вируса в реакции нейтрализации, диффузиозной преципитации в агаровом геле (РДП), ПЦР. Ретроспективная диагностика проводится на основании выявления антител к возбудителю в РДП, РН и ИФА.

В настоящее время РНГА считается более предпочтительной, чем тест диффузной преципитации в агаровом геле, так как дает меньше неспецифических реакций.

Аденовирусный гидроперикардит бройлеров необходимо прежде всего дифференцировать от гидроперикардитов другой этиологии. Так, при пастереллезе, стафиллококкозе и стрептококкозе иногда возникает серозный перикардит. Решающим фактором при постановке диагноза служит выделение чистой культуры бактерий, вызывающих эти заболевания, путем посева материала из внутренних органов больных птиц на искусственные питательные среды. Аденовирусный гидроперикардит бройлеров от гидроперикардита, возникшего при острой форме болезни Марека, дифференцируют по наличию при болезни Марека в начальной стадии единичных, а позднее множественных опухолей в мышцах и во внутренних органах. Необходимо исключить инфекционную бурсальную болезнь (болезнь Гамборо), так как она часто сопутствует аденовирусной инфекции. При инфекционном бурсите поражения фабрициевой сумки постоянны и сопровождаются некрозом и псевдоэозинофильной инфильтрацией лимфоидных фолликулов. Для аденовирусной инфекции изменения фабрициевой сумки не характерны. Точечные кровоизлияния размером со спичечную головку по тонкому отделу кишечника, а особенно в двенадцатиперстной кишке необходимо дифференцировать от Ньюкаслской болезни [4].

Парвовирусную анемию цыплят и геморрагический синдром, обусловленные микотоксинами и применением сульфаниламидов также необходимо дифференцировать от аденовирусного гидроперикардита бройлеров. При парвовирусной анемии цыплят внутриядерные тельца-включения в гепатоцитах отсутствуют. При исключении геморрагического синдрома и апластической анемии принимают во внимание анамнестические сведения и результаты анализа кормов и гистологических исследований печени [2].

Для предотвращения возникновения эпизоотии по аденовирусному гидроперикардиту бройлеров необходимо использовать все доступные методы профилактики, в том числе и организационно-хозяйственного и социально-экономического характера. Они включают в себя раздельное кормление и содержание разновозрастных групп птиц, привлечение к работе не контактирующего с птицей в личных подсобных хозяйствах обслуживающего персонала и многие другие вопросы, направленные на охрану птицеводческих хозяйств от заноса инфекции. Защита птицеводческих предприятий должна осуществляться посредством использования програмных мер безопасности, с обязательным соблюдением принципа "все пусто - все занято".

Распространение инфекции может произойти при диагностических исследованиях птицы, поэтому участники проведения вакцинации и диагностических исследований, особенно при работе с вирусвакцинами, должны строго соблюдать все меры санитарной профилактики.

Аденовирус весьма устойчив к условиям внешней среды и может длительное время сохраняться в помете и подстилке. В качестве более эффективных дезинфектантов рекомендуются йодсодержащие препараты и гипохлорид натрия.

В регионах, неблагополучных по аденовирусному гидроперикардиту, применение только санитарных мер было малоэффективным и в связи с этим возникла необходимость разработки специфических мер профилактики.

В настоящее время в неблагополучных хозяйствах для специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита цыплят используются инактивированные гидроокисьалюминиевые или эмульсионные вакцины. Цыплят-бройлеров вакцинируют однократно в 10-17 дневном возрасте, внутримышечно или подкожно. Ремонтный молодняк и кур яйценоских пород вакцинируют дважды: в 10-17 дней и затем при переводе, в удвоенной дозе, не позднее чем за 30 дней до начала яйцекладки. В некоторых хозяйствах, ремонтный молодняк предназначенный для формирования родительских стад, в раннем возрасте вакцинируют дважды с 2-недельным интервалом, а затем третий раз в удвоенной дозе при переводе. Иногда вакцину применяют в суточном возрасте, одновременно с вакциной против болезни Марека. Иммунитет, регистрируемый в РДП, наступает через 14-21 день.

Эффективного специфического лечения и профилактики лекарственными препаратами при аденовирусном гидроперикардите не разработано [1].

Конкретную схему специфической профилактики для каждого птицеводческого хозяйства необходимо выбирать индивидуально, в зависимости от его эпизоотической ситуации.

Алиев А.С., Сираждинов Р.С., Джавадов Э.Д., Алиев Г.С. Гидроперикардит (ГИП) птиц || Сборник Трудов ученых Академии менеджмента и агробизнеса нечерноземной зоны Российской Федерации "Пути совершенствования переподготовки руководящих кадров и повышения эффективности аграрного производства". - Санкт-Петербург. - 1996. - С.146-151.
Алиев А.С., Никитина Н.В. Диагностика и специфическая профилактика инфекционного гидроперикардита птиц || Мат. научно-производственной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию вет. науки. С-Петербург. - 1998. - Ч.1 - С. 14-15.
Бакулин В.А. Патоморфология экспериментального проявления аденовирусного гепатита с тельцами-включениями || Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве, рекомендуемый для внедрения. - Загорск. - 1991. - С.33-37.
Бакулин В.А., Аксенова Е.Г., Горецкая Т.И. Ассоциированное течение инфекционных болезней респираторного комплекса, аденовирусной инфекции и болезни Гамборо || Мат. Всероссийской научно-производственной конф. "Ветеринарная биологическая наука сельскохозяйственному производству". - Н-Новгород. - 1997. - С.301-303.

В статье изложены распространения аденовирусной инфекции, клинические признаки и патологические изменения у цыплят-бройлеров. Предложены различные методы специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита бройлеров.

Ключевые слова : аденовирусная инфекция птиц, аденовирусный гидроперикардит, дифференциальная диагностика болезни Гамборо и Марека, вакцинация бройлеров и ремонтного молодняка.

Сведения об авторe

Ответственный за переписку с редакцией: Таймасуков Адам Азмето-вич, кандидат ветеринарных наук, генеральный директор ОАО "Компания Кубаньптицепром", 350000 г. Краснодар, ул. Северная 324, литер А, тел. 8 918 442 77 84, электронный адрес: kubpticeprom@yandex.ru.

ADENOVIRAL HYDROPERICARDITIS OF BROILER CHICKENS

Article describes distribution of adenoviral infection, its clinical signs and pathological changes in broiler chickens. Various methods of specific prevention of adenoviral hydropericarditis of broilers are offered.

Key words: adenoviral infection of birds, adenoviral hydropericarditis, differential diagnostics of Gumboro and Marek diseases, vaccination of broilers and young growth.

Aliev A.S., Sirazhdinov R.S., Dzhavadov Eh.D., Aliev G.S. Gidroperikardit ptits [Hydropericarditis of birds]. St. Petersburg (1996): pp.146 - 151. Print (in Russ.).
Aliev A.S., Nikitina N.V. Diagnostika i spetsificheskaya profilaktika infektsionnogo gidroperikardita ptits [Diagnostics and specific prophylaxis of infectious hydropericarditis of birds]. St. Petersburg (1998): pp. 14 - 15. Print (in Russ.).
Bakulin V.A. Patomorfologiya eksperimentalnogo proyavleniya adenovirusnogo gepatita s teltsami-vklyucheniyami [Pathomorphology of experimental display of adenoviral hepatitis with corpuscules-inclusions]. (1991): pp.33 - 37. Print (in Russ.).
Bakulin V.A., Aksenova E.G., Goretskaja T.I. Assotsiirovannoe techenie infektsionnykh bolezney respiratornogo kompleksa, adenovirusnoy infektsii i bolezni Gamboro [Associated course of infectious diseases of respiratory complex, adenoviral infection and Gumboro disease]. N.Novgorod (1997): pp. 301 - 303. Print (in Russ.).

Responsible for correspondence with the editorial board:

Здравствуйте! Помогите, пожалуйста, ситуация следующая: в июле взяли вторую партию бройлеров. В первый месяц росли хорошо, а потом стали дохнуть все по очереди. Пропоила байтрилом 10% не помогло. Симптомы - грязные, нахохлившиеся, понос водянисто-рыхлый коричневый (не желтый!), чихают, отстают в росте соответственно. Мрут и 2-х месячные бройлеры и те что старше. Находятся в одном сарае с домашними курами(те тоже начали чихать). Вчера узнала, что на местные птицефабрики кучу исков подали - реализовывали зараженную птицу, по словам ветсотрудников крупной ветаптеки - сальмонеллез и гепатит.
По соседству стоит курятник с породистой птицей, не хотелось бы потерять нажитое непосильным трудом(((

Та же проблема. Из 60 бройлеров и 14 индоуток осталось по 2 штучки. Фениксы дохли пачками. Завела Ла Флэшских, Бельфельдеров, Форверков и Джерсийских гигантов. Чуть с ума не сошла, когда падёж начался. Сначала в ветаптеке скупила всё что можно, а потом брала имп антибиотики от воспаления лёгких для людей. Прокапала в клюв 5 дней, а потом в питьё. Видов 6- 7 точно разных таблеток и порошков. Вроде остановился процесс. Самое обидное что люди отвозили птиц на анализы, но не взяли. Одной женщине сказали что труп старый. Вечером кура сдохла, положили в холодильник, утром отвезли. Просто никто работать не хочет. Диагноза до сих пор нет.
Никто не хочет признавать эпидемию в стране! Сейчас забьют птицу больную и народу скормят!

кошмар((( у нас могут взять птицу на анализ только обходится это удовольствие дорого..последний раз с человека 30 000 взяли. Проще всех сжечь да новых завести.А такими темпами можно всего остаться.
Хочется верить, что на остальных не перейдет эта зараза. Пропоила всю абсолютно птицу антибиотиком, стало получше, а сегодня захожу - 3 курят нет светлая, темная брама, да кох голубой(((( постоянно их что ли держать на лекарстве? На протяжении 2-3 недель каждое утро по ведру птицы выношу.Сначала была паника, а сейчас привыкли.Если никто не здох сегодня, значит завтра их будет в два раза больше.

Ветсотрудникам аптеки. берете всё подряд и хорошо. Для данного периода времени, очень может быть Ньюкасла, но надо хотя бы 2-3-5 цыпок вскрыть, посмотреть что там внутри, а так при большинстве, хохлятся и. жить не хотят. Есть ли кровоизлияния и язвочки на границе железистого и мышечного желудков. Надо, наверное, вакцинировать.

.
Специфичны кровоизлияния на слизистой оболочке в виде геморрагического пояска на границе между железистым и мышечным желудком при Болезни Ньюкасла, псевдочума птиц.

у меня нынче тоже из 33утят осталось 6 .В один день аж 10 пали.Чем только не поила.Купила парашок точно название не помню толи ВИТОН толи ВИНОН но точно знаю что в названии есть цифра "11" зеленый с желтым пакетик.Его нужно разводить в воду, но когда у меня у шестого утенка отнялась ножка и обезножил гусенок 2-х месячный я на свой страх и риск в рот начала засыпать порошок и в течении недели поднялись бегают, правда гусенок теперь косолапый. Пробовали вскрывать - вроде внутренности чистые. Когда заболел последний в целях профилактики всем сыпала. Сыпала картоночкой : полоса 5-7 мм, порошок набирала на 2-3мм с горочкой.

По всей видимости жара активировала всю эту заразу.Дохнут пачками и выживают лишь сильнейшие. Завтра сможем убрать одного, да посмотреть что у него внутри. Сделаю фотографии. Может быть тогда получится дать более точный диагноз.

сегодня опять есть падшие. Вскрыла : зоб полный, кровоизлияний нет, но очень много желчи в пузыре, он был буквально твердый. Фото прилагается
Файлы:
imag0503.jpg
imag0502.jpg
imag0500.jpg
imag0506.jpg

Бронхи смотрите. Все про плёнку какую-то говорят.

Там же где и бронхит. При такой даче антибиотиков, сложно будет что-то увидеть характерное, именнодля этого заболевания и ни одна ветлаборатория тоже скорее всего ничего не выделит.

Сергей Дмитриевич, так ведь я их неделю назад байтрилом пропоила, и еще месяц назад при первых появлениях энрофлоном(вроде так он назывался 10%) сейчас им дополнительно чиктоник даю. вроде все.

Я тоже в этом году с потерями-в мае купила с птицефабрики 25 гусят,через пару дней начали дохнуть.Никаких признаков болезни,но почти каждое утро один-два трупа.За пару недель сдохли все.А на прошлой неделе начали дохнуть мускусные утята точно также.Пропаивала всез антибиотиками,без эффекта.

Видите, если это заболевание бактериальное, то это дача обоснована, но если то были простейшие (колибактериоз, гистомоноз) или вирусы (Ньюкасла, Гамборо), то не очень. Птица взятая на пф и домашняя, особенно цыплята, посаженные вместе - обязательно. головная боль.

А таблетки метронидозола могут помочь? стоит ли их давать?

Ветом 1.1.надо было еще аспирина дать.вы когда у вас голова болит тоже неизвестные таблетки пьете?сказано без зла,но удивляет.

Если желчный не нормальный-не может ли дело быть в комбикорме?

А таблетки метронидозола могут помочь? стоит ли их давать?

Да, против гистомоноза. 2 на литр. где-то были на форуме очень хорошие фото печени с паткартиной данного заболевания и на"Куре".

Если желчный не нормальный-не может ли дело быть в комбикорме?

Главное чтоб хуже не было! А через 10 дней всех забьем.Если конечно выдержку не нужно после таблеток делать.

[/quote]Ветом 1.1.надо было еще аспирина дать.вы когда у вас голова болит тоже неизвестные таблетки пьете?сказано без зла,но удивляет.[/quote]
А что удивительного? Некоторым и ЦИТРАМОН от поноса помогает, а когда у тебя молодняк пачками мрет и на глазах шейки узлом завязываются, то готов и "г..ном" накормить лишбы выжили. Мы их по совету ветеринаров и глистогонили и витаминили и антибиотили и плюнули уже , но падеж остановить смогли когда начала порошок в клювы засыпать с мыслью что все равно сдохнут, а они не сдохли славо богу. Теперь бегают за мной 6-ть штучек и орут "кабачок, кабачок. " Очень любят кабачки.

Ветом 1.1.надо было еще аспирина дать.вы когда у вас голова болит тоже неизвестные таблетки пьете?сказано без зла,но удивляет.[/quote]
А что удивительного? Некоторым и ЦИТРАМОН от поноса помогает, а когда у тебя молодняк пачками мрет и на глазах шейки узлом завязываются, то готов и "г..ном" накормить лишбы выжили. Мы их по совету ветеринаров и глистогонили и витаминили и антибиотили и плюнули уже , но падеж остановить смогли когда начала порошок в клювы засыпать с мыслью что все равно сдохнут, а они не сдохли славо богу. Теперь бегают за мной 6-ть штучек и орут "кабачок, кабачок. " Очень любят кабачки.[/quote]
А что за порошок. Мне про него местные птицеводы говорили. название никто не помнит, но говорят что есть порошок, который стоит приобрести, и возможно он поможет.

[/quote]
А что за порошок. Мне про него местные птицеводы говорили. название никто не помнит, но говорят что есть порошок, который стоит приобрести, и возможно он поможет.[/quote]
Ветом 1.1, но по инструкции его положено разводить, но эфект был слабый , а я засыпала в рот каждому - смирилась,что все равно сдохнут.

Осень и новая напасть, позавчера к вечеру разом обезножили 2 утки.Днем еще бегали , а к вечеру уже на брюхе гребут. Отсадила, им и всем водоплавающим всыпала порошок, но этих двоих спасти не удалось. Один при мне пал, а другой что побойчей -ночью. В отличии от летнего падежа эти камнем не становились, шеи не закручивались, просто уронили голову и мягкие остались.Вскрыли: все органы вроде здоровы пятнышек как на фото выше нет, в желудке тоже нет ничего подозрительного, правда сердечко мне не понравилось какоето мягкое рыхловато из нутри.Остальные слава богу крякают и бегают.

Девочки, я тут нашла "аброкадабру" про наши проблемы. А по последней фразе я пришла к выводу, что нам прийдется похерить всю птицу и кушать "ножки Буша" Аденовирусный гидроперикардит цыплят-бройлеров
Таймасуков А.А. ОАО "Компания Кубаньптицепром"

Распространение инфекции может произойти при диагностических исследованиях птицы, поэтому участники проведения вакцинации и диагностических исследований, особенно при работе с вирусвакци-нами, должны строго соблюдать все меры санитарной профилактики.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Панкратов С. В., Придыбайло Н. Д., Крон Н. В.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Панкратов С. В., Придыбайло Н. Д., Крон Н. В.

УДК 619:616.98:579.881.11:636.52/58 ВЯКЦИНЗ. ПрОТИВ

синдрома гидроперикардита птиц

Ключевые слова: аденовирус, вакцина, птица, синдром гидроперикардита кур

В странах, где синдром гидроперикардита кур встречается наиболее часто (Пакистан, Индия, Мексика, Чили, РФ и др.), он наносит значительный экономический ущерб. Поэтому для профилактики болезни следует соблюдать, как общие ветери-нарно-санитарные мероприятия (размещать птицу разных возрастов по зонам, обеззараживать корма, проводить дезинфекцию, исключать контаминацию патогенными микроорганизмами вакцин), так и применять специфические средства.

Цель нашей работы состояла в изготовлении и испытании инактивированной эмульсионной вакцины против синдрома гидроперикардита кур.

В одном из птицеводческих хозяйств, неблагополучном по данному заболеванию, взяли материал от павших птиц, имевших типичные для аденов1груснош гепатита с включениями — гидроперикардита патологоанатомические изменения. Изолированный из него вирус использовали для приготовления вакцины.

Накопление производственного штамма вируса вели на серонегативных по данной инфекции цыплятах-бройлерах в возрасте 15, 20 и 30 сут. Их заражали 0,5 см3 вируссодержа-

щего материала в мышцу бедра. С соблюдением всех правил асептики и антисептики из трупов павших птиц извлекали печень. Орган гомогенизировали, а гомогенат осветляли центрифугированием. Надосадочную жидкость сливали и инак-тивировали. Антиген контролировали на полноту инактивации, активность в реакции диффузионной преципитации и стерильность. После такой проверки из него готовили опытные серии инактивированной эмульсионной вакцины.

В результате лабораторных испытаний оптимальной оказалась вакцина на основе масляного адъюванта ISA-70. По внешнему виду препарат представляет собой однородную стерильную эмульсию белого цвета с вязкостью 31 мм2/с и стабильностью 3,0 мм (вязкость определяли на вискозиметре ВСЖ-2, а стабильность 30-минутным центрифугированием при 4000 об/мин).

Безвредность препарата проверили на цыплятах 14 и 50-суточного возраста. Им инокулировали вакцину подкожно в область нижней трети шеи в объеме 2 см3. Клинических нарушений в течение 15-дневного периода наблюдения у привитой птицы не отметили. При вскрытии птиц, убитых по завершении опыта, в месте введения вакцины не обнаружили признаков воспалительной реакции; значительная часть вакцины рассосалась, и в тканях (под кожей шеи и в области зоба) были видны лишь ее единичные вкрапления диаметром 0,1. 1,0 мм.

Для оценки антигенной и иммуногенной активности вакцины сформировали 2 группы бройлеров 14-суточного возраста, серонегативных к синдрому гидроперикардита кур. Цыплят первой группы однократно подкожно (в область нижней трети шеи) иммунизировали эмульсионной вакциной в объеме 0,5 см3/гол. Вторая группа служила интактным контролем. Через 15 дн после вакцинации 50 % птицы каждой группы использовали для определения иммуногенной активности вакцины, а остальных цыплят —для определения ее антигенной активности.

Антигенные свойства опытной серии препарата оценивали по наличию антител в реакции диффузионной преципитации, а его иммуногенность определяли с помощью контрольного заражения подопытной группы патогенным изоля-том возбудителя болезни.

Транссудат в полости перикарда цыпленка, экспериментально зараженного возбудителем синдрома перикардита кур

Съ\воротслтъ\е вируспрецшнпирующие антитела в титре 1:8..Л : 16 обнаружили в реакции диффузионной преципитации у 80 % привитых цыплят на 21-е сут после иммунизации, а через неделю у всей птицы опытной группы. Контрольное внутримышечное заражение патогенным штаммом аденовируса в дозе 1 ЛД50, проведенное через 15 дн после иммунизации, показало, что вакцина надежно защищает птицу от возбудителя: все привитые цыплята остались здоровыми, в то время, как в контрольной группе заболеваемость составила 90 %, а смертность — 43 %. У павших цыплят при вскрытии обнаружили транссудат в перикардиальной полости, а

при гистологическом исследовании — базофилъные тельца-включения в клетках печени.

S.V. Pankratov, N.D. Pridibayio, N.N. Krön. Vaccine against hydropericarditis syndrome of poultry (AVIVAK — ADVG).

Применение в диагностических целях электронной томографии негативно окрашенных вирусов со сложной структурой

Дж. Мает, Л. Демистер, компания Кода-Церва (г. Брюссель, Бельгия)

Ключевые слова: вирусы, диагностика, томография, электронная микроскопия

Сокращения: ВБН — вирус болезни Ньюкасла; ВО — вирус орф (вирус контагиозного пустулезного дерматита овец); НК — негативное контрастирование

Метод НК с успехом применяют для подготовки проб для электронной микроскопии на протяжении почти 50 лет — с тех пор, когда его предложили С. Бреннер и Р.В. Хорн [7]. Этот метод основан на погружении в матрикс тяжелого металла электронно-прозрачных частиц на подложке, что повышает их контрастность. Периодически метод модифицируют и совершенствуют [8]. Благодаря простоте и быстроте осуществления, а также отсутствию необходимости в специальных реактивах НК часто пользуются для обнаружения и идентификации вирусов [9]. Эффективность такого подхода ограничена рядом факторов, связанных с особенностями НК [10] (например, артефактами, возникающими при пересыхании анализируемых проб) и трансмиссивной электронной микроскопии (деструкции потоком электронов и изменения положения выступающих частей объектов, что делает невозможным определение их ультраструктуры). Особенно сложно изучать негативно окрашенные вирусы, имеющие сложную или ассиметричную структуру.

В этой статье мы описываем результаты изучения ультраструктуры негативно-окрашенных парамиксовируса и парапоксвируса, имеющих сложную структуру.

Материалы и методы

Штамм ЛаСота ВБН получили в Международной референтной лаборатории болезни Ньюкасла (Вейбридж, Великобритания). Его репродуцировали на 9. 11-дневных СПВ-куриных эмбрионах посредством инокуляции в аллантоис-ную полость. [12].

Источником ВО служили пустулы слизистой оболочки ротовой полости овцы.

Суспензии этих вирусов окрашивали методом H К по стандартной схеме. Покрытые пиолоформом и углем медные сеточки (Agar Scientific) обрабатывали 1%-м алциановым синим (Fluka, Швеция) для усиления гидрофильное™ и 5 раз промывали водой. Затем на них помещали по капле вирусной суспензии, оставляли на 10 мин при комнатной температуре и 2 раза промывали водой. Сеточки с ВБН дополнительно обрабатывали 1 мин суспензией золотых частиц диаметром 10 нм, покрытых козьей антисывороткой к IgG мыши (Aurion, Нидерланды) — они служили основным маркером центровки изображения. Вслед за этим сеточки окрашивали 10 с каплей 2%-го уранил ацетата (Agar Scientific) или 1%-го фосфорно-вольфрамового калия (рН 7.2). Сеточки помещали в держатель (Model 2020, Fischione instruments) и исследовали в трансмиссивном электронном микроскопе Technai Spirit (FEI Со, Нидерланды).

Серийную микросъемку осуществляли в автоматическом режиме работы томографического модуля Explore 3D под разными углами наклона (с шагом в 1,5°) с помощью соответствующего программного обеспечения; каждый раз при изменении угла наклона корректировали фокусное расстояние. Снимки делали камерой высокого разрешения 4*4 k Eagle с увеличением в 49 000 раз. Их обрабатывали с применением программы Inspect 3D (версии 2,5). Серийные снимки ВО выравнивали по диаметру поперечного сечения изображения, а снимки ВБН — по тому же критерию и величине шести или большего количества частиц золота. Реконструкцию трехмерных изображений осуществляли на основании повторного определения алгоритма SIRTV и визуализировали вирусные частицы с помощью программы AMIRA (Mercury, Франция). На обработку каждой пробы тратили около 12 ч. Карту плотности гликопротеина F ВБН получали на основании кристаллографического анализа 11 ] с применением UCSF специальной компьютерной программы [2].

Читайте также: