Биологические свойства вируса бешенства

Бешенство — острая инфекция ЦНС, сопровождающаяся дегенерацией нейронов головного и спинного мозга; летальность при этом заболевании достигает 100%. Бешенство известно с глубокой древности.

4 мес; чувствителен к действию различных дезинфектантов.

Эпидемиология. Бешенство распространено повсеместно, исключая островные государства (Англию, страны Карибского бассейна и др.). Бешенство— типичный зооноз; резервуаром возбудителя могут быть практически все млекопитающие (собаки, кошки, крупный рогатый скот, летучие мыши, лисы, волки, грызуны и др.). Основной путь передачи бешенства — через укус больного животного; также возможно проникновение возбудителя через повреждённые кожные покровы (например, царапины) при ослюнении их больным животным. В слюне животных вирус бешенства появляется за несколько дней до начала клинических проявлений, что увеличивает риск развития бешенства после укуса до 30-40%. После проникновения вируса бешенства в ЦНС больного животного риск заражения через укус снижается до 10%. Выделяют два типа бешенства — бешенство лесное и городское.

• Дикое (лесное) бешенство. Основной резервуар — дикие животные, специфичные для отдельных регионов, например скунсы (США), лисицы (Россия, Северная Америка), летучие мыши-вампиры (страны Карибского бассейна и Южная Америка).

• Городское бешенство. Наибольшую эпидемическую опасность представляют больные собаки (до 90% всех случаев) и кошки. В Нигерии последние передают человеку близкий к бешенству вирус Мокола, вызывающий неврологические заболевания (параличи) с летальным исходом.

Патогенез. Вирус бешенства размножается в мышечной и соединительной тканях, где псрсистирует в течение недель или месяцев. Затем вирус бешенства мигрирует по аксонам периферических нервов в базальные ганглии и ЦНС, где размножается в сером веществе, вызывая дегенерацию нейронов. Затем вирус бешенства диссеминирует по центробежным нейронам в различные ткани (включая слюнные железы).

Клинические проявления. Длительность инкубационного периода бешенства варьирует от 1-3 мес до года, но она может сокращаться до б дней, что зависит от удалённости места проникновения вируса от головного мозга. Основные симптомы продромального периода бешенства — раздражительность, бессонница и чувствительные нарушения (например, парестезия) в области раны. Бешенство проявляется нарушением тонуса мышц, приводящим к затруднению глотания (сначала жидкой, а затем и твёрдой пищи), генерализованными судорогами, делирием и комой. В редких случаях наблюдают развитие параличей. Прогноз бешенства крайне неблагоприятный, летальность достигает 100%.

Микробиологическая диагностика. Для выделения и идентификации возбудителя бешенства применяют вирусоскопические, биологические и серологические методы. Материал для исследования на вирус бешенства— слюна, кровь и секционный материал (ткани мозга и подчелюстных слюнных желез). С помощью микроскопии окрашенных срезов или отпечатков выявляют в клетках коры полушарий, аммонова рота и мозжечка эозинофильные тельца Бабеша-Негри размером 5-10 мкм, образованные скоплениями вирусных нуклеокапсидов. Тельца включений располагаются около ядер и имеют неровные очертания. Срезы и отпечатки также используют для обнаружения Аг вируса бешенства в этих тканях с помощью РИФ или РНИФ. Возбудитель бешенства выделяют путем внутримозгового заражения мышей и кроликов слюной больных людей или свежим секционным материалом. У животных развиваются параличи с летальным исходом, и в тканях мозга можно обнаружить тельца включений и Аг вируса в РИФ и РНИФ. AT к вирусу бешенства у вакцинированных лиц выявляют в РСК, РН, РИФ и др.

Лечение и профилактика. Первоначально раны или укусы обрабатывают антисептиками; места ослюнения обмывают мыльным раствором. Затем проводят специфическую иммунопрофилактику антирабической вакциной и антирабическим иммуноглобулином. Перед проведением следует обратить внимание на характер поражения (укус или ослюнение), вид животного, подозрительного на бешенство, обстоятельства нападения (спровоцированное или нет), наличие предшествующей вакцинопрофилактики бешенства (по крайней мере, у человека), другие случаи бешенства в регионе.

Для активной иммунизации предложены живые аттенуированные и убитые вакцины. В настоящее время вакцины, изготовленные из ослабленного или убитого вируса бешенства, выращенного на нервных клетках, вытесняют культуральные вакцины из ослабленного вируса, полученные на линиях различных клеток. Такие вакцины лишены побочных эффектов (энцефалиты, параличи в результате перекрёстных реакций с Аг нейронов), более иммуногенны и не требуют столь многократного введения. В плановом порядке вакцину вводят в 1-е, 3-й, 7-с, 14-е и 28-е сутки; вакцину можно рассматривать как лечебно-профилактическое средство, так как специфические защитные реакции успевают развиться во время инкубационного периода. Нейтрализующее действие на возбудитель бешенства оказывают AT к поверхностным гликопротеиновым Аг.

При появлении клинических симптомов бешенства спасти больных не удаётся. Проводят симптоматическое лечение, облегчающее страдания больного. Профилактика бешенства включает контроль над заболеванием в природе и вакцинопрофилактику. Необходимо вакцинировать всех домашних и сельскохозяйственных животных, бороться с природными очагами бешенства (отслеживать численность животных и уничтожать заболевших), вносить в резервуары приманки с вакциной, применять жёсткие карантинные меры при импорте животных. Обязательную вакцинопрофилактику проводят в группах повышенного риска — звероловам, ветеринарам и др.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Таксономия: РНК-содержащий вирус, семейство Rhabdoviride, род Lyssavirus.

Морфология и антигенные свойства.Вирион имеет форму пули, состоит из сердцевины (РНП (рибонуклеопротеин) спи­рального типа и матриксного белка), окру­женной липопротеиновой оболочкой с гликопротеиновыми шипами. Гликопротеин G отвечает за адсорбцию и внедрение вируса в клетку, обладает антигенными (типоспецифический антиген) и иммуногенными свойс­твами. Антитела к нему нейтрализуют вирус и выявляются в РН(рекция нейтрализации). РНП состоит из геномной однонитевой линейной минус-РНК и бел­ков: N-белка, L-белка и NS-белка. РНП является группоспецифическим антигеном; выявляется в РСК, РИФ, РП.

Различают два вируса бешенства: дикий вирус, циркулирующий среди животных, патогенный для человека; фиксированный – не патогенный для человека.

Культивирование.Вирус культивируют путем внутримозгового заражения лабораторных животных (мышей, крыс) и в культуре клеток: фибробластов человека, кури­ного эмбриона. В нейронах головного мозга заражен­ных животных образуются цитоплазматические включения, содержащие антигены виру­са (тела Бабеша-Негри – эозинофильные включения).

Резистентность:Вирус бешенства неустой­чив: быстро погибает под действием солнеч­ных и УФ-лучей, а также при нагревании до 60С. Чувствителен к дезинфицирующим веществам, жирорастворителям, щелочам и протеолитическим ферментам.

Эпидемиология. Источниками инфекции в природных очагах являются волки, грызуны. Вирус бешенства накапливается в слюнных железах больного животного и выделяется со слюной. Животное заразно в последние дни инкубационного периода (за 2—10 дней до клинических проявлений болезни). Механизм передачи возбудителя — контактный при уку­сах. Иногда заболевание развивается при употреблении мяса больных животных или при трансплантации инфици­рованных тканей (роговицы глаза).

У собаки после инкубационного перио­да (14дн.) появляются возбуждение, обильное слюнотечение, рвота, водобоязнь. Она грызет место укуса, бросается на людей, животных. Через 1—3 дня наступают паралич и смерть животного.

Патогенез и клиника.Вирус, попав со слюной больного животного в поврежденные наружные покровы, реплицируется и персистирует в месте внедрения. Затем возбудитель распространяется по аксонам периферических нервов, достигает клеток головного и спинного мозга, где размно­жается. Клетки претерпевают дистрофические, воспалительные и дегенеративные изменения. Размножившийся вирус попадает из мозга по центробежным нейронам в различные ткани, в том числе в слюнные железы. Инкубационный период у человека при бешенстве — от 10 дней до 3 месяцев. В начале заболевания появляются недомогание, страх, беспокойство, бессонница, затем развиваются рефлекторная возбудимость, спазматические сокращения мышц глотки и гортани.

Иммунитет:Человек относительно ус­тойчив к бешенству. Постинфекционный иммунитет не изучен, так как больной обычно погибает. Введение людям, укушенным бешеным животным, инактивированной антирабической вакцины вызывает выработку антител, интерферонов и активацию клеточного иммунитета.

Микробиологическая диагностика: Постмортальная диагностика включает об­наружение телец Бабеша—Негри в мазках-отпечатках или срезах из ткани мозга, а также выделение вируса из моз­га и подчелюстных слюнных желез. Тельца Бабеша—Негри выявляют методами окраски по Романовскому—Гимзе. Вирусные антигены в клет­ках обнаруживают с помощью РИФ.

Выделяют вирус из патологического мате­риала путем биопробы на мышах: заражают интрацеребрально. Идентификацию вирусов проводят с помо­щью ИФА, а также в РН на мышах, используя для нейтрализации вируса антирабический иммуноглобулин.

Прижизненная диагностика основана на ис­следовании: отпечатков роговицы, биоптатов кожи с помощью РИФ; выделении вируса из слюны, цереброспинальной и слезной жидкос­ти путем интрацеребрального инфицирования мышей. Возможно определение ан­тител у больных с помощью РСК, ИФА.

Лечение.Симптоматическое; эффективное лечение отсутствует.

Профилактика.Выявление, уничтожение жи­вотных. Иммунизация антирабической вакциной собак. Специфическую профилактику проводят антирабической вакциной и антирабической сывороткой или иммуноглобулином. Инактивированная УФ- или гамма лучами культуральная вакцина. С лечебно–профилактической целью иммунизируют людей; формируется активный иммунитет.

Вирус бешенства – опасный микроорганизм, проникающий в организм человека и вызывающий развитие тяжелого инфекционного заболевания, которое сопровождается стойким поражением ЦНС и часто заканчивается летально. Отличительные признаки патологии: быстрое течение, тяжелые проявления и неблагоприятный прогноз.

Rabies virus относится к роду Lyssavirus семейства Rhabdoviridae. Вирус обладает тропностью к структурам нервной ткани, которые постепенно разрушаются и отмирают. Микроб оказывает двоякое действие – сначала повышает возбудимость нервных волокон, а затем вызывает их паралич, сопровождающийся мышечной дисфункцией с полным или частичным отсутствием способности к сокращению. Люди заражаются через укусы животных, в слюне которых содержатся патогены. Вирусы по аксонам нейронов распространяются по всему организму, устремляются к церебральным и спинномозговым центрам и поражают их, вызывая необратимые изменения, которые становятся причиной гибели больных.

Бешенство у человека сопровождается развитием специфического энцефалита с формированием патологических очагов в коре и других участках головного мозга. Симптомами инфекции являются признаки стойкой дисфункции ЦНС – различные фобии, приступы агрессии и эйфории, галлюциноз.

Бешенство — неизлечимая патология. Чтобы спасти человека, необходимо сразу после укуса животного ввести антирабическую вакцину. Иммуннопрофилактика до развития симптомов — единственный метод лечения. Даже самые сильные антибактериальные и противовирусные средства не помогают при бешенстве. Все случаи патологии после появления клинических признаков заканчиваются смертью пациента.

Этиология

Рабивирус — нейротропный вирус, вызывающий бешенство. Он передается здоровым лицам через секрет слюнных желез больных животных. Микроорганизм обладает целым рядом специфических свойств: морфологических, тинкториальных, физиологических, культуральных, патогенных, антигенных.

• 
  Вирус бешенства имеет цилиндрическую или многогранную форму, спиральную или кубическую симметрию, плотную оболочку и одну цепочку РНК. Внешне клетка напоминает пулю, один конец которой закруглен и немного заужен, а другой – плоский или слегка вогнутый.
• Гликопротеиновый каркас имеет на своей поверхности специальные шипы-рецепторы, позволяющие вириону внедриться внутрь клетки хозяина и обуславливающие его иммуногенность – способность вызывать иммунный ответ.
• Размножение вирусов происходит в цитоплазме нейронов головного мозга. Этот процесс сопровождается появлением особых новообразований. Тельца Бабеша-Негри имеют овальную или палочковидную форму. Они получили свое название в честь ученых, которые впервые их описали независимо друг от друга.
• К факторам патогенности микроба относятся: аксонный транспорт, обеспечивающий его перемещение по нервным волокнам в ЦНС; белок P, подавляющий иммунную реакцию макроорганизма; белок G – антиген, стимулирующий выработку иммуноглобулинов.
• Вирус бешенства сравнительно устойчив. Он живет во внешней среде — на поверхности земли при температуре + 2—16° до 3 месяцев. Микроб обладает высокой чувствительностью к гипертермии, ультрафиолету, этанолу и прочим дезинфицирующим средствам. Микроб быстро погибает при кипячении, высушивании и при попадании в кислую среду. Он обладает устойчивостью к гипотермии, антибиотикам и фенолу. В трупах больных животных вирус остается жизнеспособным в течение пяти недель, теряя при этом свою патогенность.
• Культивируют микроорганизмы в клетках почек новорожденных хомячков и головного мозга белых мышей, а также в желточном мешке куриных эмбрионов.

Патогенетические особенности

Патогенные биологические агенты проникают в макроорганизм через рану, образовавшуюся в результате укуса животного. В месте внедрения происходит первичная репликация микробов. Сначала поражаются мягкие ткани вокруг раны, а затем нервные волокна. По ним вирусы направляются в церебральные и спинномозговые структуры. Гематогенный и лимфогенный пути диссеминации возбудителя не играют существенной роли в развитии патологии. Вирусы взаимодействуют с нейромедиаторами, осуществляющими нервно-мышечную передачу, повышая возбудимость нейронов, а затем вызывая их паралич. Этот механизм лежит в основе патогенеза болезни.

Проникая нейрогенным путем в клетки мозговой ткани, вирусы провоцируют развитие грубых и необратимых нарушений в работе ЦНС. У больных возникает негнойный менингоэнцефалит, и происходит постепенное разрушение нервных клеток. На месте погибших нейронов образуются тельца Бабеша-Негри. Патоморфологические особенности бешенства – кровоизлияние в мозг, отек мозговой ткани, очаги некроза, дегенеративные изменения. Органическое поражение приводит к стойкой дисфункции. В организме нарушается иннервация внутренних органов и тканей, и развивается полиорганная недостаточность.

Стремительная деструкция очагов жизнеобеспечения, расположенных в коре головного мозга, клинически проявляется судорожным синдромом, парезами и параличами. Больные впадают в кому и погибают от асфиксии и остановки сердца, которые вызваны поражением соответствующих центров в головном мозге. Смерть наступает очень быстро без предшествующего развития осложнений и наступления негативных последствий.

Эпидемиология

Основными эпидемиологическими звеньями инфекции являются: источник, пути передачи, восприимчивый организм. Выключение любого из этих элементов приводит к прерыванию эпидемического процесса.

Природным резервуаром вируса бешенства являются различные животные – дикие, домашние, сельскохозяйственные. Носители и распространители инфекции считаются максимально опасными в эпидотношении в последние десять дней инкубации и в период выраженных клинических проявлений.

Микробы покидают организм больных животных вместе с секретом слюнных желез. Человек заражается парентеральным путем через укусы, ослюнение поврежденной кожи, оцарапывание, а также при контакте с предметами, загрязненными инфицированной слюной. Возбудитель через рану проникает в кровь. У 95% укушенных лиц развивается патологический процесс. Заражение контактным путем иногда происходит при разделке убитых животных. Известны случаи распространения инфекции аэрогенным путем при вдыхании инфицированной слюны и пищевым путем при поедании павших животных. Вирус бешенства не передается через бытовые предметы. Заболевание не развивается даже после тесного общения с зараженным пациентом или медицинским работником.

Восприимчивость людей к бешенству всеобщая. Она определяется локализацией очага поражения и глубиной повреждения мягких тканей. Лица, укушенные в шею и лицо, в 100% случаев заболеют. При укусах голеней, кистей и стоп бешенство возникает у 30% людей. Домашние животные и скот — основные виновники заражения человека. Инфекция крайне опасна для детей, проживающих на селе, где много беспризорных собак. В азиатских и африканских странах ежегодно от бешенства умирает более 50 тысяч людей.

Бешенство распространено практически повсеместно. Заболевание регистрируется на всех континентах, кроме Антарктиды. В России вирус широко распространен в Липецке, Туле, Брянске, Москве. Ранняя и адекватная медико-профилактическая помощь предотвратит развитие патологии у инфицированных лиц. Бешенство без вакцинации – гарантированная смерть.

Симптоматика

Бешенство как и любой другой инфекционный процесс представляет собой ряд сменяющих друг друга стадий.

1. Длительность инкубации зависит от локализации укуса: на голове — пару недель, на ногах и руках — 2-3 месяца. В это время у больного отсутствуют симптомы патологии.
2. Продрома — относительно короткий период, проявляющийся общим недомоганием, угнетением сознания, субфебрилитетом, зудом и болью в месте уже зажившей раны. Иногда воспаляется рубец и близлежащие ткани.
3. Начальная стадия называется депрессией. У больного начинает изменяться поведение. Появляются признаки поражения ЦНС — цефалгия, бессонница, потеря аппетита, равнодушие ко всему, подавленное настроение, беспокойство и раздражительность, панические атаки. Неврологические и психические расстройства обычно сопровождаются неприятными ощущениями за грудиной и нарушением пищеварения.
4. Разгар болезни называется возбуждением. Эта стадия через 2-3 дня сменяет депрессию. У пациента появляются фобии: они боятся воды, воздуха, звуков, света, перестают пить, уединяются в темной комнате, избегают общения. Вид и шум воды вызывают сильный страх, при котором возникают приступы удушья. Даже испытывая сильную жажду, больные не могут сделать и глотка. У пациентов спазмируются мимические мышцы, расширяются зрачки, дрожат руки. Возбуждение достигает крайней степени выраженности. Больные испытывают панику и ужас, кричат, откидываются назад, дышат прерывисто и громко со свистящими и шумными вдохами. Они становятся агрессивными, мечутся, кидаются в драку, рвут одежду, кусаются. Все изменения поведения сопровождаются повышенным выделением слюны, которая постоянно течет изо рта по подбородку. По мере развития патологии пациенты сильно худеют. Они перестают употреблять пищу и воду. В организме происходят дегидратационные процессы. У больных заостряются черты лица, возникают эпиприпадки, бред, галлюциноз.
   
   
5. Терминальная паралитическая стадия проявляется апатией, ограничением движения, снижением чувствительности. Фобические пароксизмы исчезают, и наступает мнимое благополучие. Больному лишь ненадолго становится лучше, он начинает есть и пить, а затем быстро поднимается температура тела, учащается сердцебиение, падает давление. Глазные, скуловые мышцы и мускулатура конечностей теряют свою силу, возникает паралич. Пациенты не шевелятся, тяжело дышат и подолгу смотрят в одну точку, не замечая происходящего вокруг. Они будто спят с открытыми глазами. Из-за параличей у них отвисает нижняя челюсть, возникает экзофтальм, лицо выражает глубокое страдание. У больных появляется икота, рвота, извращенный аппетит — они едят все несъедобное и опасное. В паралитический процесс вовлекаются и мозговые нервы. Поражение жизненно важных центров приводит к прекращению работы сердца и органов дыхания.

Диагностический процесс

Диагностика бешенства начинается с изучения симптоматики и сбора эпиданамнеза. Важно установить факт контакта с инфицированным животным – наличие укуса, оцарапывания или ослюнения. Симптомы патологии весьма специфичны: гидрофобия, аэрофобия, судороги и спазмы мышц, гиперсаливация, отвисшая челюсть и прочие. Врачи наблюдают за больным и отмечают мидриаз, странное поведение, тяжелое дыхание.

Результаты вирусологического исследования и серодиагностики имеют решающее значение при постановке диагноза. В лаборатории исследуют биоматериал от больного – ликвор, слюну, мозговую ткань, ставят биопробы, определяют антитела.

• Реакция иммунофлуоресценции — выявление антигенов вируса в мазках-отпечатках мозговой и железистой ткани.
• Реакция нейтрализации, связывания комплемента, радиоиммунный и иммуноферментный анализы — обнаружение антител против вируса бешенства.
• ПЦР ликвора — определение генетического материала микроба в испытуемом образце.
• Биопроба на лабораторных грызунах – их заражение слюной или ликвором больного.
• Гистологический анализ биопсийного материала – мозговой ткани, взятой от умершего человека.

Диагностические процедуры проводят сертифицированные специалисты в условиях лаборатории особо опасных инфекций. Окончательный диагноз бешенства обычно устанавливается посмертно.

Лечебно-профилактические меры

Бешенство — смертельно опасная патология, исход которой зависит от времени обращения в ЛПУ. При наличии у больного явно выраженных симптомов недуга прогноз становится неблагоприятным.

Сразу после обращения пострадавшего в больницу проводят местные лечебные процедуры. Сначала рану промывают и обрабатывают спиртом, затем ее края иссекают и ушивают. Иммуноглобулин вводят глубоко в рану и окружающие ткани. Специфическое лечение – введение больным антирабической вакциной. Эти препараты по разному воздействуют на макро- и микроорганизм. Вакцина не может самостоятельно убить вирус. Она предоставляет организму информацию о его антигенной структуре, благодаря чему начинается продукция антител, нейтрализующих антигены. На выработку активного иммунитета уходит 13-15 дней. Чтобы защитить организм в это время, используют иммуноглобулин. С его помощью вводят готовые антитела, полученные из крови донора. Больным с клиническими признаками болезни эти методы не помогут. Им проводят паллиативную терапию, облегчающую общее состояние и устраняющую неприятные симптомы.

Пациентам с бешенством показаны:

1. Госпитализация в темную и изолированную от шума палату,
2. Симптоматические препараты — антиконвульсанты, анестетики, седативные и снотворные средства,
3. Мероприятия, поддерживающие функцию дыхания и работу сердца,
4. Парентеральное питание,
5. Дегидратационные процедуры.

В настоящее время специалисты разрабатывают новые терапевтические методы. К ним относится иммуномодулирующая терапия, заключающаяся во введении больным специфических иммуноглобулинов. Хороший эффект в экспериментальных условиях дает гипотермия головного мозга. Новые методики интенсивной терапии направлены на продление и сохранение жизни пациентов. Но не смотря на разработки современных ученых-медиков, бешенство все еще остается серьезным инфекционным заболеванием, при котором летальность составляет 100%.

Чтобы предупредить развитие патологии, необходимо иммунизировать домашних животных. Профилактическое вакцинирование показано ветеринарным врачам и фельдшерам, сотрудникам лабораторий, лесникам, любителям охоты, работникам производств по разделке мяса. Вакцинация — это единственный эффективный способ предотвращения патологии, позволяющий сохранить жизнь человека.

Специалист в области микробиологии Луи Пастер является первооткрывателем вакцины против бешенства. В далеком 1885 году он получил вакцинный штамм путем многократного введения вируса в головной мозг кролика. Впервые вакцину ввели мальчику, которого укусила собака. Организм ребенка смог противостоять инфекции. Современные антирабические вакцины вводят шесть раз, начиная с дня обращения к врачу и далее, по специальной схеме, до 90 дня. Если выяснится, что животное здоровое, вакцинацию прекращают. К концу лечебного курса формируется стойкая иммунная защита, и вирус погибает. Успех вакцинопрофилактики зависит от времени начала лечения. Чем раньше введут вакцину, тем благоприятнее исход процесса.

Видео: бешенство: устойчивость вируса, осложнения, прогноз

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Самерханов И.И.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Самерханов И.И.

BIOLOGICAL PROPERTIESOF RABIES VIRUS ISOLATED IN HUMAN

Among the animal and human diseases, rabies has a special place because of the common susceptibility to the disease of warm-blooded animals and the absolute mortality in human. At planning the prevention measures and developing anti-rabies drugs the biological properties of rabies strains circulating in the area should be taken into consideration. In this regard, the aim of the research was to study biological properties of rabies virus isolated in human in comparison with the virus genotypes 1,2,4,5 and 6. Materials and methods: the rabies virus antigen was detected and identified by ELISA, immunofluorescence test, neutralization test using diagnostic drugs developed in ARRVI, Kazan. Rabies virus was isolated and its infection rate was determined on white mice. G gene fragment of rabies virus was sequenced using RT-PCR. The investigation results: in patient G. bitten by a stray dog on Goa island hydrophobia was registered in-vivo by detection of specific antigen to rabies virus in smears of eye cornea using fluorescent antibody test, as well as rabies virus genome in saliva and lacrimal fluid using RT-PCR and later was confirmed in postmortem studies in various parts of the brain by immunofluorescence test, ELISA, and isolation of the agent at biotest using white mice. As a result of comparative sequencing of rabies virus G gene fragment 238 n.b. long showed a slight difference between the studied isolate and RABVAY956319 for 1.68%. Conclusion: the results of in-vivo detection of hydrophobia were confirmed at postmortem studies of various parts of the brain by IFA, ELISA and biotest. Sequencing of rabies virus G gene fragment showed that the isolated virus belongs to the first serotype.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВИРУСА БЕШЕНСТВА ВЫДЕЛЕННОГО ОТ ЧЕЛОВЕКА

И.И.Самерханов - соискатель, мл.научный сотрудник.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гидрофобия; метод флюоресцирующих антител; иммуноферментный анализ; реакция нейтрализации; полимеразная цепная реакция.

В настоящее время на территории Российской Федерации сохраняется неблагополучная обстановка по бешенству, во многих регионах периодически отмечается активизация природных очагов бешенства, ежегодно регистрируются случаи гидро-фобии[1, 2, 3].

По данным ВОЗ, несмотря на то, что в мире ежегодно вакцинируется более 5 млн. человек против бешенства, регистрируется около 50 тысяч случаев гибели людей от этой болезни. Общепринятые меры борьбы с бешенством (упорядочение содержания собак, проведение их профилактической вакцинации) оказались недостаточными, поэтому сложность и опасность современной эпизоотической обстановки в РФ подтверждается ростом заболеваемости не только диких хищников, но и собак, кошек. В Российской Федерации за период с 2008 по 2012 годы зарегистрировано 61 летальных исходов заболеваний людей гидрофобией (бешенством). Более 86% всех заболеваний людей этой инфекцией приходится на субъекты Центрального, Южного, Северо-Кавказского и Приволжского федеральных округов Российской Федерации. В 2013 году зарегистрировано 6 случаев заболевания, в 2014 году - 3 случая. За медицинской помощью в

связи с нападением животных каждый год обращается от 250 до 450 тысяч человек. Более 200 тыс. человек получают назначения на проведение курса антираби-ческого лечения [4, 5, 6, 7].

В Республике Татарстан (РТ) эпизоотическая обстановка по бешенству также остается напряженной. За последние 15 лет за медицинской помощью обратились 11 990 - 16 065 человек, 2002 году и в 2014 году зарегистрировано два случая гидрофобии. При анализе случаев бешенства установлено, что основными причинами заболеваний людей гидрофобией, является укус бешенными животными, также несвоевременное обращение пострадавших за медицинской помощью, нарушение схемы иммунизации, отказ от назначенного курса вакцинации. Нарушение режима труда и отдыха в период проведения антирабических прививок. Факты не обращения людей за антирабиче-ской помощью даже при опасной локализации укусов свидетельствует о недостаточной санитарно-просве-тительской работе среди населения [6].

При планировании профилактических мероприятий, разработке антирабических препаратов необходимо учитывать биологические свойства штаммов возбудителя бешенства циркулирующих на террито-

рии региона. Учитывая изложенное целью исследований являлось изучить биологические свойства вируса бешенства, выделенного от человека в сравнении с вирусами 1, 2, 4, 5 и 6 генотипов.

Материалы и методы. В исследованиях использовали прижизненный клинический материал: слюну, слезную жидкость, отпечатки с роговицы и патологический материал: различные отделы головного мозга, слюнные железы умершего Г. от гидрофобии, укушенного бродячей собакой на о. Гоа в Индии.

ОТ-ПЦР проводили с помощью Thermo Scientific Maxima Reverse (Ferments) используя маркер молекулярного веса 100 - 3000 п.о. и набора Big Dye Terminator Cycle Sequencingkit (Applied Biosistems, США). Результаты ПЦР анализировали с помощью пакетов программ Bio Edit и программы Seq Man. Для сравнительного анализа использовали нукле-отидные последовательности гена G штаммов вируса бешенства 1, 2, 4, 5, 6-го генотипов из базы данных GenBank.

Результаты исследований. Ретроспективным эпидемиологическим анализом установлено, что в 2013 году в РТ зарегистрирован случай гидрофобии. В частности, гражданин Г. находясь в Индии на о. Гоа, был укушен бездомной собакой в правую нижнею конечность в области икроножных мышц. Пострадавший за антира-бической помощью не обратился и на 9-е сут болезни с признаками гидрофобии поступил в Республиканскую клиническую инфекционную больницу. Инкубационный период у заболевшего составило 55 дней, на 18-е сут болезни наступила смерть больного [8].

В отпечатках с роговицы глаза методом МФА, в пробах слюны больного методом ИФА выявлен антиген вируса бешенства, методом гнездовой ОТ-ПЦР в пробах слюны и слезы пациента определили геном вируса бешенства. В результате проведенных лабораторных исследований прижизненно был поставлен диагноз гидрофобии [1, 2, 3].

Постмортальный анализ различных отделов головного мозга методом МФА (рис.1), ИФА и гнездовой ОТ-ПЦР дал положительный результат по обнаружению специфического антигена вируса бешенства.

Возбудитель бешенства был выделен биопробой на белых мышах. Выделенный изолят вызывал заболевания белых мышей с летальным исходом как при интроцеребральном, так и при подкожном способах заражения. Продолжительность видимых проявлений болезни (взъерошенность шерсти, горбатость спины, тремор при поднятии на воздух пинцетом за кончик

хвоста, нарушение координации движении задних конечностей, паралич), составляла менее суток. Инфекционная активность на белых мышах составила 3,4 1д, Ш50/0,03 мл.

Рис.1. Постмортальное обнаружение антигена вируса бешенства в отпечатке головного мозга

у пациента Г. методом флюоресцирующих антител.

Молекулярно-генетическими исследованием был выделен фрагмент гена в вируса бешенства, полученный из патологического материала Г., который сравнивали со штаммами различных генотипов: 1-й генотип -ЯДВЧ БДЭВ19; 2-й генотип 0406БЕИ; 4-й генотип 86132БД; 94286БД; 5-й генотип 03002РЯД, 8918РЯД, Ш-1; 6-й генотип 9018Н0Ц №1333.Анали-зируемый участок гена гликопротеина вразмером 238 н.о. относительно вируса бешенства 1-го генотипа, ЯДВУДУ956319имел четыре нуклеотидные замены, что соответствует 1,68% отличий.

Нами также установлено, что нуклеотидная последовательность изучаемого изолята отличается на 32,7% от изолята 0406БЕЫ лиссаподобного вируса, относящегося ко 2-му генотипу (1_адс^ЬаЦ; на 27,7% от изолятов 86132БД и 94286БД лиссаподобных вирусов 4-го генотипа (ЭиуепИаде), от изолятов 03002РЯД, 8918РЯД, ЯУ9-1 летучих мышей лиссаподобных вирусов 5-го генотипа (ЕВ__У1) на 21-21,8%, от изолятов 9018Н01_ и ЯУ1333летучих мышей лиссаподобных вирусов 6-го генотипа(ЕВ|_У2) на23,5%.

Таким образом, в результате сравнительного анализа нуклеотидной последовательности фрагмента гена в вируса бешенства размером 238 н.о. установили незначительное отличие изучаемого изолята от ЯДВМУ956319, составляющее 1,68%.

Заключение. Гидрофобия у больного Г., укушенного бродячей собакой на о. Гоа в Индии, установлена при жизни пострадавшего обнаружением специфиче-

ского антигена вируса бешенства в отпечатках с роговицы глаза по МФА, слюне по ИФА, а также генома вируса бешенства в слюне и слезной жидкости в ОТ-ПЦР и подтверждена постмортально - в различных отделах головного мозга по мФа, ИФА, а также выделением возбудителя биопробой на белых мышах.

Анализ последовательности нуклеотидов фрагмента гена в вируса бешенства размером 238 н.о. показал на незначительное отличие изучаемого изолята

1.Ковалев, Н.А. Иммунофлуоресцентное исследование отпечатков роговицы при бешенстве / Н.А.Ковалев, А.С.Ша-шенько // Ветеринария. - 1970. - № 9. - С. 44-46.

2. Прижизненная клинико-лабораторная диагностика гидрофобии / Д.К.Баширова [и др.] // Казанский медицинский журнал. - 2007. - Т. 88. - № 5. - С. 449-492.

3. Прижизненная диагностика гидрофобии / Н.А.Хисматуллина [и др.] // Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов: тр. Междун. науч.-практ. конф., посвящ. 45-летию создания ВНИИВВиМ. - Покров, 2003. -С. 157-161.

4. Аналитический обзор мероприятий по профилактике и борьбе с бешенством животных в Российской Федерации / разработчики: В.А.Ведерников, А.А.Шабейкин, А.М.Гулюкин, А.В.Паршикова (ГНУ ВИЭВ им. Я.Р.Коваленко); С.Г.Дресвянникова, Н.А.Яременко, С.А.Коломыцев. (Департамент ветеринарии). - М., 2014. - 178 с.

5. Государственный стандарт Союза ССР. Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики бешенства. ГОСТ 26075-84 (СТ СЭВ 3452-81). - М, 1984. - 9 с.

7. Шабейкин, А.А. Анализ Закономерностей эпизоотического процесса бешенства на территории Европейской части Российской Федерации / А.А.Шабейкин, А.М.Гулюкин А.В.Паршикова // Ветеринария и кормление. - 2015. -№ 1. - С. 29-34.

8. Хисматуллина, Н.А. Два случая гидрофобии в Республике Татарстан: прижизненная и постмортальная лабораторная диагностика / Н.А.Хисматуллина А.М.Гулюкин, М.И.Гулюкин // Вопросы вирусологии. - 2015. - Т. 60, № 2. -С. 18-24.

BIOLOGICAL PROPERTIESOF RABIES VIRUS ISOLATED IN HUMAN

Samerkhanov I.I. - research assistant.

Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan (e-mail: [email protected]).

Among the animal and human diseases, rabies has a special place because of the common susceptibility to the disease of warm-blooded animals and the absolute mortality in human. At planning the prevention measures and developing anti-rabies drugs the biological properties of rabies strains circulating in the area should be taken into consideration. In this regard, the aim of the research was to study biological properties of rabies virus isolated in human in comparison with the virus genotypes 1,2,4,5 and 6. Materials and methods: the rabies virus antigen was detected and identified by ELISA, immunofluorescence test, neutralization test using diagnostic drugs developed in ARRVI, Kazan. Rabies virus was isolated and its infection rate was determined on white mice. G gene fragment of rabies virus was sequenced using RT-PCR. The investigation results: in patient G. bitten by a stray dog on Goa island hydrophobia was registered in-vivo by detection of specific antigen to rabies virus in smears of eye cornea using fluorescent antibody test, as well as rabies virus genome in saliva and lacrimal fluid using RT-PCR and later was confirmed in postmortem studies - in various parts of the brain by immunofluorescence test, ELISA, and isolation of the agent at biotest using white mice. As a result of comparative sequencing of rabies virus G gene fragment238 n.b. long showed a slight difference between the studied isolate and RABVAY956319 for 1.68%. Conclusion: the results of in-vivo detection of hydrophobia were confirmed at postmortem studies of various parts of the brain by IFA, ELISA and biotest. Sequencing of rabies virus G gene fragment showed that the isolated virus belongs to the first serotype.

KEYWORDS: hydrophobia; fluorescent antibody method; enzyme-linked immunosorbent assay; neutralization reaction; polymerase chain reaction.

1. Kovalev, N.A. Immunofluorestsentnoye issledovaniye otpechatkov rogovitsy pri beshenstve [Immunofluorescent studies of eye cornea smears at rabies] / N.A.Kovalev, A.S.Sashenko // Veterinariya. -1970. - Vol.9. -P 44-46

2. Prizhiznennaya kliniko-laboratornaya diagnostika gidrofobii [The in-vivo clinical and laboratory detection of hydrophobia]/ D.K. Bashirova [et al.] // Kazansky meditsinsky jurnal. - 2007. - Vol. 88. - No.5. - P. 449-492.

3. Prizhiznennaya diagnostika gidrofobii [The in-vivo detection of hydrophobia] /N.A.Khismatullina [et al.] // Veterinarniye i metsinskiye aspekty zooantroponozov - Veterinary and medical aspects of animal and human diseases: proceedings from the Int. scientific. - practical. Conf. dedicated to the 45th anniversary of VNIIVViM. - Pokrov, 2003. - P. 157-161.

4. Analitichesky obzor meropriyatiy po profilaktike i borbe s beshenstvom zhivotnyh v Rossiyskoy Federatsii [Analytical review of measures on rabies prevention and control in animal in the Russian Federation] / developed by V.A.Vedernikov, A.A.Sobakin, A.M.Gulyukin, A.V.Parshikov (Ya.R. Kovalenko Research Institute of Experimental Veterinary); S.G.Dresvyannikova, N.A.Yaremenko, A.S.Kolomytsev (Animal Health department). - Moscow, 2014. - 178p.

5. Gosudarstvenny standart Soyuza SSR. Zhivotniye selskohozyaystvenniye. Metody laboratornoy diagnostiki beshenstva [State standard of the USSR. Agricultural animals. Methods of rabies laboratory diagnostics]. State standard 26075-84 (ST SEV 3452-81). - Moscow, 1984. - 9p.