Что за анализ вирусный спектр

Острый гепатит А (ОГА). Основное значение для подтверждения диагноза вирусного гепатита А имеет определение в крови анти-HAV класса М методом ИФА (иммуноферментного анализа). Анти-HAV класса М выявляются в крови еще в фазе инкуба­ции, за 3-5 дней до появления первых симптомов, и продолжают выяв­ляться на всем про­тяжении клинического периода болезни, и затем еще в течение 4-6 ме­сяцев. Спустя 1 год после выздоровления анти-HAV класса М в крови не определяются. В сочетании с клиническим симптомокомплексом и соответствующими данными эпиданамнеза обнаружение анти-HAV класса М является надежным подтверждением диагноза вирусного гепатита А.

Анти-HAV IgG могут появляться в сыворотке крови уже в начале заболевания. После выздоровления анти-HAV IgG обнаруживаются в крови пожизненно, свидетельствуют о перенесенном заболевании и рассматриваются как показатель иммунной защиты против вируса.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) позволяет установить присут­ствие HAV-РНК в крови. Суть метода состоит в воспроизведении реп­ликации вируса in vitro. В субстрат - кровь, ткани вводят так называе­мый праймер - небольшую цепочку нуклеотидов искомого вируса. При его наличии в субстрате вирусная ДНК-полимераза с двух сторон “дошнуровывает” цепочку до полного размера. Такой метод амплифи­кации (умножения) позволяет получить неограниченное количество копий вируса (до 100 млн. за один день). Благодаря этому, с помощью ПЦР удается уловить присутствие минимального количества вируса, вплоть до одной молекулы. Метод ПЦР рассматривается как арбит­ражный метод референс-диагностики, дополняющий первичную скри­нинговую ИФА-диагностику. ПЦР позволяет оценить репликативную активность, оценивать эффективность лечения гепатита. Вирусемия при ОГА непостоянная и выявляется не у всех больных и только в на­чальном периоде заболевания.

Острый вирусный гепатит В (ОГВ). Для диагностики ОГВ ис­пользуют определение комплекса маркеров HBV. Наибольшее практи­ческое значение имеет определение в крови HBsAg, анти-HBs-антител, HBeAg, анти-HBe, анти-HBc-антител.

HBsAg (поверхностный антиген или австралийский антиген) явля­ется наиболее ранним маркером ОГВ, он появляется в крови в послед­ние 1-2 недели инкубации и продолжает обнаруживаться первые 4-6 недель клинического периода. В более поздние сроки заболевания HBsAg связывается с анти-НВs антителами и в свободном виде не об­наруживается. Длительная циркуляция HBsAg свидетельствует о высо­кой исходной концентрации вирусных антигенов и/или о тяжести тече­ния болезни. Обнаружение HBsAg через 6 месяцев после начала забо­левания может указывать на начало хронизации процесса.

У больных с ОГВ анти-HBs антитела начинают выявлять через 3-4 месяца после исчезновения HBsAg, реже они обнаруживаются через год. У 15% переболевших, несмотря на клиническое выздоровление анти-HBs не определяются, что связано с генетически обусловленными особенностями связывания анти-HBs в иммунные комплексы. Выявле­ние анти-HBs-антител является критерием перенесенного ОГВ и свиде­тельствует о наличии иммунитета к вирусу гепатита В. Через 5-6 лет после ОГВ анти-HBs-антитела начинают исчезать из крови.

Исследование анти-HBs проводят для оценки эффективности вак­цинации против вирусного гепатита В. При этом уровень этих антител в 10 mlu/мл и выше свидетельствует об адекватном ответе на вакцина­цию.

Антитела к сердцевидному антигену (анти-НВс IgM) принадлежит особая диагностическая роль. Эти антитела обнаруживаются уже в инку­бационном периоде, в начале острой фазы болезни, еще до пика по­вышение АлАт, до появления желтухи. Выявление этих антител сви­де­тельствует о репликации вируса и является подтверждением ОГВ. Через год после выздоровления анти-НВс IgM не обнаруживаются.

Определение анти-НВс IgM особенно важно в следующих случаях: 1) при поздней диагностике ОГВ (когда HBsAg в крови может уже от­сутствовать и анти-НВс IgM становится единственным маркером ОГВ); 2) при появлении признаков острого гепатита у больных с хрониче­ским гепатитом В. Если такой гепатит связан с суперинфицированием другими гепатропными вирусами анти-НВс IgM отсутствуют или их содержание незначительно.

Анти-НВс IgG появляются через 1,5-2 месяца с начала периода раз­гара заболевания и могут циркулировать пожизненно, являясь единст­венным маркером перенесенного гепатита В. При этом значимость анти-НВс IgG как маркера перенесенной инфекции выше, чем анти-HBs, поскольку:

1) анти-HBs могут появляться в результате вакцинации;

2) анти-HBc IgG присутствуют в фазу "серонегативного окна", ко­гда HBs Ag уже отсутствует, а анти-HBs еще не появились;

3) анти-HBs не развивается у 15% реконвалесцентов;

4) в течение 6 лет анти-HBs исчезает у 20% переболевших.

HBe Ag обнаруживается в крови уже при первых клиниче­ских про­явлениях заболевания и является маркером "инфекционности" крови. Высокая концентрация НВе Ag указывает на активную репликацию вируса и свидетельствует о тяжести состояния больного и его макси­мальной опасности для окружающих.

При благоприятном течении ОГВ НВе Ag исчезает из крови через 1,5-2 месяца после начала заболевания. Длительное сохранение НВе Ag свидетельствует о продолжающейся вирусной репликации и опасности развития хронического гепатита В.

При ОГВ с циклическим течением анти-Нве антитела выявляются на 2-3 неделе желтушного периода. Сероконверсия НВе Ag в анти-НВе антитела указывает на резкое снижение активности инфекционного процесса и переход его в стадию реконвалесценции. Анти-НВе анти­тела обнаруживаются в крови от нескольких месяцев до нескольких лет.

Т.О., различное сочетание маркеров вируса гепатита В позволяет судить о фазе заболевания, стадиях инфекционного процесса, делать прогноз заболевания. Точность диагностики повышается, если в крови, лимфоцитах или биоптате печени исследовать ДНК вируса гепатита В (HBV-ДНК) методом ПЦР или молекулярной гибридизации.

При первичном обследовании больных с начальными проявле­ниями ОГВ ( таб. 55) в крови выявляются: HBsAg, анти-HВc IgM, и непостоянно HBV-ДНК и HВe Ag в зависимости от сроков обследо­вания и тяжести течения процесса. При повторных исследованиях спустя 10-15 дней в крови продолжает циркулировать свободный HBs Ag. Показатели HBe Ag и анти-HBe-антител зависят от тяжести тече­ния заболевания. У тяжелых больных сохраняется НВе Ag, у легких - появляются анти-НВе или отсутствуют оба маркера. При исследовании антител к сердцевидному антигену выявляются как анти-HBc IgM, так и анти-HBc IgG. При прогредиентном течении инфекции в крови по­стоянно определяются HBV-ДНК, HBe Ag, HBs Ag.

Табл.55. Серологические маркеры при остром гепатите В

Серологи-	Период болезни	Серо-логи-
ческие	Начало	Конец	Острая фаза	Пери-од вы-	ческий статус
маркеры	инкуба-ции	инкуба-ции	Актив-ная ре-пликац-ия HBV	Конец фазы репли-кации	здоров-ления	по­сле­выздо-ровле-ния
4-12 н	1-2 нед	2нед -3 мес	3-6 мес.	годы
HBV-ДНК	-	+	+	-	-	-
HBsAg	-	+	+	-/+	-	-
HBeAg	-	+	+	-	-	-
Анти-HBc IgM	-	-/+	+	+	+/-	-
Анти-HBc IgG	-	-	-/+	+	+	+
Анти-HBe	-	-	-	+	+	+/-
Анти-HBs	-	-	-	-	-/+	+

Табл.56. Серологические маркеры при злокачественном гепатите В

Серологические	Период болезни
маркеры	Начало	Прекома	Кома I	Кома II
HBV-ДНК	+/-	-	-	-
HBsAg	+/-	+/-	-	-
HBeAg	+/-	-	-	-
Анти-HBc IgM	+	+	+	+
Анти-HBc IgG	+	+	+	+
Анти-HBe	-/+	+	+	+
Анти-HBs	-/+	-/+	+	+

Табл. 57. Серологические маркеры при HDV-суперинфекции у носи­теля HBsAg

Серологи-	Период болезни	Серо-логи-
ческие	Начало	Конец	Острая фаза	Фор-мирова-ние	чес-кий статус
маркеры	инкуба-ции	инкуба-ции	Актив-ная ре-пликац-ия HDV	Конец фазы репли-кации	хрони-ческо-го ге­патита дельта	при хр. гепа- тите
4-12 н	1-2 нед	2 нед -3 мес	3-6 мес	годы
HBV-ДНК	-	-	-	-	-	-
HBsAg	+	+	+*	+	+	+
HBeAg	-	-	-	-	-	-
Анти-HBc IgM	-	-	-	-	-	-
Анти-HBc IgG	+	+	+	+	+	+
Анти-HBe	+	+	+	+	+	+/-
Анти-HBs	-	+	+	+/-	+/-	+/-
HDV-IgM	-	-	-/+	+	+/-	+/-
Анти-HDV IgG	-	-	-/+	+	+	+

*- снижение концентрации HBsAg

Хронический гепатит В (ХГВ). Диагноз ХГВ репликативного типа подтверждается стабильным выявлением HBeAg, обнаружением HBV-ДНК в высокой концентрации (более 50 пг/50 мкл), выявлением в крови анти-HBc класса не только G, но и М, в относительно меньшей кон­центрации. Сохраняющаяся циркуляция анти-НВс IgM, особенно в высокой концентрации, в определенной степени соответствует индексу высокой активности патоморфологических изменений в печени.

Из дополнительных серологических тестов для ХГВ, протекающего с высокой активностью репликации, характерно также обнаружение антител к HBV-полимеразе и повышение уровня циркулирующих им­мунных комплексов HBeAg-анти-HBe.

ХГВ интегративного типа протекает с персистирующей HBs-анти­генемией разной концентрации при отсутствии HBeAg. В этом случае HBV-ДНК если и выявляется, то в низкой концентрации (менее 50пг/мкл). Закономерно выявляют анти-HBc, большей частью в ста­бильно низких титрах, без тенденции к их нарастанию. Анти-НВс об­наруживают в основном класса G, анти-HBc IgM чаще отсутствуют или выявляются в небольших количествах.

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

• ВИЧ;
• герпеса;
• различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
• кандидоза;
• гепатитов;
• мононуклеоза;
• листериоза;
• цитомегаловируса;
• туберкулеза;
• вируса папилломы человека;
• клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Россия готовится к тотальному тестированию, новые тест-системы позволяют быстро провести масштабную проверку на вирус. К массовому выпуску приступил один из разработчиков нового продукта, два других начинают производство. Олег Гусев, ведущий научный сотрудник Научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Казанского федерального университета и института физико-химических исследований RIKEN (Япония) помог РБК Тренды разобраться в том, как устроено тестирование на коронавирус в России и в мире.

Что предлагает ВОЗ

Глава Всемирной организации здравоохранения Тедрос Гебреисус еще в середине марта призвал страны проводить как можно больше тестов на вирус, который вызывает заболевание SARS-CoV-2, даже людям без симптомов. Согласно руководству ВОЗ, анализы на коронавирус COVID-19 должны проводиться методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией. Как говорится в рекомендациях, на сегодня это самый точный и надежный метод диагностики вирусной инфекции. Он позволяет определить даже очень небольшое количество РНК вируса в биологическом материале человека. Это помогает выявить болезнь в инкубационном периоде.

Изобретенный в 1983 году метод и сейчас считается фундаментальным в молекулярной диагностике. Американский ученый, который придумал способ значительного увеличения малых концентраций фрагментов ДНК в биологической пробе, получил за него Нобелевскую премию. Выявление ДНК/РНК методом ПЦР позволяет диагностировать такие заболевания, как ВИЧ, вирусные гепатиты, инфекции, передающиеся половым путем, туберкулез, боррелиоз, энцефалит и многие другие. Метод используют в археологии, криминалистике, генетике.

Как работает ПЦР-тест

Для анализа из физиологических жидкостей извлекают одноцепочечную РНК, моделируют на ее основе двуцепочечную ДНК и многократно дублируют с помощью специального фермента (полимеразы). Увеличение числа копий ДНК называется амплификацией. В результате концентрация определенных фрагментов ДНК/РНК в биологическом образце, изначально минимальная, значительно увеличивается. При исследовании копируется только необходимый для теста участок ДНК. И, конечно, дублирование происходит только в том случае, если искомый участок вирусной ДНК или РНК присутствует в исследуемом биоматериале. В случае с коронавирусом мазок для анализа берут из ротоглотки или носоглотки, поскольку в крови или в кале вирус появляется на более продвинутой стадии болезни.

Тест-система EMG — продукт совместной разработки российских и японских разработчиков, проводившейся с 2016 года, рассказывает Олег Гусев. На данный момент эти тесты включены в систему обязательного медицинского страхования в Японии.

В ближайшее время планируется производить до 2,5 млн. тестов и 1 тыс. портативных лабораторий в неделю. Сами тесты, как и многие реагенты производятся в России. Планируется, что цена на тесты EMG будет в среднем в пять раз меньше, чем на стандартные ПЦР-тесты в Европе.

Российско-японские тесты основаны на методе изотермальной молекулярной диагностики SmartAmp, превосходящем метод ПЦР по скорости работы в восемь раз, а переносная лаборатория позволяет тестировать до 20 пациентов в час, говорит Гусев.

Ключевое отличие теста EMG в том, что многие тесты, которые производятся сейчас, это тесты ИФА (имунноферментный анализ), а не ПЦР. Данные системы определяют антитела, которые организм начинает вырабатывать не ранее, чем через неделю после заражения. Российско-японская разработка позволяет получать результат уже за 30 минут, с точностью, равной почти 100%. Кроме того, тест EMG позволяет определить наличие вируса уже на самых ранних стадиях, в то время как другие системы диагностики короновируса обладают меньшей чувствительностью и не могут выявлять вирус на ранней стадии инфицирования.

Принцип технологии российско-японского теста, по сути, не отличается от классической ПЦР — это наращивание количества целевых фрагментов ДНК и их детекция. Однако в изотермической амплификации, в отличие от классической ПЦР, где необходимы циклы нагрева и охлаждения, все происходит при одной температуре. Это позволяет многократно увеличивать скорость реакции. Метод SmartAmp был изобретен более 15 лет назад (как и LAMP — другая популярная технология изотермальной амплификации, предшествующая SmartAmp). Впервые для инфекционных заболеваний эту технологию применили в 2009 году для быстрого выявления пандемического гриппа (H1N1) в Японии.

Повторные тесты необходимы при любом методе. Отрицательный тест на COVID-19 не гарантирует, что человек не заразится этим вирусом на следующий день. Поэтому, например, в японских лабораториях персонал тестируют каждые несколько дней. Повторный тест нужен и для того, чтобы подтвердить, что человек излечился.

Эта тест-система будет использоваться для диагностики COVID-19 не только в России и Японии. 40 тыс. тестов закупила Австрия, поступили заказы из других стран Европы, Ближнего Востока, и Латинской Америки. Подана заявка в Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) для поставок в эту страну.

На данный момент в России прошли регистрацию еще три теста на коронавирус.

По некоторым данным, в Москве проводится около 700 тестов на коронавирус в сутки. В планах у московских властей увеличить этот показатель до 10 тыс. тестов в сутки, а затем довести его до 25—28 тыс. тестов ежедневно.

Новые разработки за рубежом

Компания Bosch выводит на рынок свой тест на коронавирус, который сначала будет доступен в Германии, а вскоре появится в других странах. В его основе лежит диагностический аппарат Vivalytic, который, по словам изготовителей, станет первым автоматизированным тестом на COVID-19. Тест распознает не только коронавирус, но еще шесть респираторных заболеваний, например, вирусы гриппа А и B. Во время лабораторных испытаний аппарата его точность составила 95%.

Как пишет издание ZME Science, анализ может проводиться прямо в стационаре или медицинском центре — не нужно отправлять образцы в лабораторию и ждать, пока придет ответ. Врачи смогут быстрее идентифицировать и изолировать зараженных, а пациентам не придется пребывать в неизвестности несколько дней. Тест прост в обслуживании и не требует специальной подготовки. Медперсоналу нужно только взять мазок из носа или горла пациента, нанести его на картридж, содержащий реагент, и вставить картридж в анализатор. Каждый аппарат может выполнять до десяти анализов за 24 часа.

Еще более оперативный тест на COVID-19 разработали в Великобритании. Он позволяет выявить COVID-19 всего за 30 минут. Чтобы провести его, достаточно портативного оборудования стоимостью около $120 и набора полосок для мазков из носа и горла по $5 каждая. Одновременно проходить тест могут до шести человек.

FDA в экстренном порядке одобрило сверхбыстрый тест на коронавирус, разработанный калифорнийской компанией Cepheid. С его помощью диагноз можно будет поставить всего за 45 минут. Как отмечает Business Insider, для обработки результатов теста не требуется специальное обучение. Нужен лишь доступ к системе Cepheid GeneXpert — в США их 5 тыс., а по всему миру — 23 тыс.

Начало тотального тестирования людей на COVID-19 во всем мире — хорошая новость как для людей, так и для национальных органов здравоохранения. До сих пор в мире нет четкого представления о том, сколько людей заражены коронавирусом и выявление тех, у кого он уже есть: их госпитализация или отправка на домашний карантин позволит быстрее оценить масштаб угрозы и вовремя принять правильные меры.

ПЦР-диагностика гепатита С – это исследование биологических образцов с применением полимеразной цепной реакции. Способ заключается в многократном копировании фрагментов РНК вируса. Благодаря такой методике всего нескольких молекул возбудителя достаточно для того, чтобы тест отреагировал на присутствие вируса. Результат можно получить уже в первые 5-7 дней после контакта с зараженным человеком. ПЦР позволяет выявить факт инфицирования, а также приблизительную концентрацию HCV и его генотип.

Когда назначается анализ ПЦР

Самая очевидная причина для назначения ПЦР на гепатит С в крови – это наличие признаков заболеваний печени:

• хроническая усталость;

• боли в области печени;

• желтизна кожи и белков глаз;

• гипертрофия печени;

• тошнота.

Анализ на ПЦР целесообразно сделать в условиях повышенного риска заражения:

1. сексуальный контакт с предполагаемым носителем гепатита;
2. повышенная активность АЛТ и АСТ, выявленные по результатам биохимического анализа крови;
3. если результат ИФА на антитела к вирусу гепатита положительный.

Другие показания к сдаче крови:

• Врачи-гепатологи назначают ПЦР на гепатит С в профилактических целях перед операциями.
• Медработники и сотрудники детских садов и школ сдают анализ в ходе плановых проверок.
• Метод показан при проведении вакцинации против вируса гепатита В.
• Анализ проводится несколько раз в ходе терапии гепатита С, чтобы оценить ее эффективность.
• ПЦР нужен для исключения смешанного поражения печени, что иногда бывает при гепатите В.

Как подготовиться и сдавать кровь

В течение дня у человека меняется соотношение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, а также активность некоторых гормонов. Прием пищи влияет на наличие жирных кислот в крови. Этот фактор мешает точности анализа. По этим причинам анализ ПЦР на гепатит С проводится утром натощак. В качестве исследуемого образца берется кровь из вены.

Перед сдачей анализа требуется подготовка:

1. за 2-3 дня – ограничить нагрузку на печень (исключить алкогольные напитки, не употреблять жирную и жареную пищу);
2. за сутки – исключить стресс, поднятие тяжестей, посещение спортзала и бассейна;
3. за 8 часов – прекратить употребление любой пищи, так как глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь, изменяют качество ферментной реакции;
4. с утра до момента сдачи крови – не курить.

На результат анализа может повлиять повышение концентрации адреналина в крови. Чтобы исключить эту погрешность, нужно прийти на 20 минут раньше, отдышаться и успокоиться.

На эффективность анализа крови могут влиять разные препараты – БАДы, средства с кофеином, этанолом, глюкозой, леводопой, пероральные контрацептивы, антибиотики. Даже если человек принимает обычные витамины, об этом нужно предупредить врача.

Расшифровка ПЦР на гепатит С

В настоящее время используются три метода ПЦР:

1. качественный (тест на наличие или отсутствие вируса);
2. количественный (тест на концентрацию вируса в крови);
3. с генотипированием (определяет принадлежность HVC к конкретному генотипу и субтипу).

Качественный анализ – это метод диагностики гепатита С, который позволяет подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в крови. Выявляет наличие в определенной концентрации – в пределах 10-500 МЕ/мл. Выполняется в течение 1-4 дней и дает следующие результаты:

Этот метод оценивает вирусную нагрузку, которая меняется в зависимости от стадии заболевания или этапа излечения. Метод не только показывает наличие флавивируса, но и его концентрацию в МЕ (международных единицах) на 1 мл крови. Это играет решающую роль при выборе тактики лечения гепатита С. Результаты количественной ПЦР-диагностики записываются следующим образом:

Количество вируса (МЕ/мл)	Расшифровка
Нет	Вирус отсутствует или количество HCV недостаточно для того, чтобы тест на него среагировал.
Менее 1,8х10^ 2	Концентрация вируса ниже линии границы.
Менее 8х10^ 5	Количество незначительное, соответствует началу заболевания. Прогноз благоприятный.
Более 8х10^ 5	Количество высокое, требуется лечение.
Более 2.4х10^ 7	Концентрация вируса выше линейного диапазона.

Для упрощения подсчетов:

Просто подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите результат. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Если затрудняетесь или есть вопросы по другим переменным анализов, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы.

Количественный анализ ПЦР на гепатит С необходим для оптимального выбора препарата. С его помощью можно прогнозировать осложнения и эффективность терапии. Он позволяет оценить степень заразности носителя гепатита для окружающих: чем большее число вирусов насчитывается в крови, тем больше риск заражения.

Сегодня известно, что у гепатита С имеется 11 генотипов и огромное количество субтипов. В разных странах есть свои приоритетные разновидности. В России в основном встречается 1 генотип (1b чаще, чем 1а), на втором месте по распространенности – 3 генотип (субтип 3а), на третьем – 2.

У каждого генотипа свои особенности. Зная их, можно спрогнозировать характер течения инфекции, риск перехода в хроническую форму и вероятность ответа на противовирусную терапию. Например, 3 генотип HCV провоцирует стеатоз, а 1 генотип требует лечения в течение 48 недель. По рекомендациям Минздрава генотипирование должно предшествовать противовирусной терапии.

Исходя из результатов, врач определяет противовирусный препарат, его дозировку, курс приема.

Преимущества и недостатки ПЦР

ПЦР-диагностика на вирусный гепатит С опережает иные методы по чувствительности, низкой вероятности ошибок и другим показателям:

• Позволяет выявить вирус на самых ранних стадиях, когда концентрация его в крови ничтожно мала. Для сравнения, иммунофлюоресцентный анализ (ИФА) реагирует только на иммуноглобулины, а они вырабатываются лишь через несколько недель в ответ на инфекцию. В то же время ПЦР реагирует на сам антиген и показывает присутствие вируса уже через 5 дней после заражения.

• Ложные результаты возникают гораздо реже, чем у других методов. Так, у ИФА возможны ложные результаты на гепатит при появлении перекрестных антител, но ПЦР реагирует непосредственно на патогены и такой погрешности не имеет.

• ПЦР – высокочувствительный метод. Анализ реагирует на присутствие РНК вируса гепатита уже 10-100 клеток в пробе и дает результат еще задолго до появления первых симптомов.

• В отличие от культуральных методов исследования, ПЦР проводится методом высокотехнологичной автоматизированной амплификации, что позволяет проводить тестирование в день забора.

Тест универсален и позволяет обнаружить несколько типов возбудителей гепатита в одной биологической пробе.

ПЦР-диагностика гепатита имеет и свои недостатки. Главный из них связан со способностью микроорганизмов к мутации. Вирусы гепатита приспосабливаются к условиям окружающей среды, и их генотип меняется. Когда это происходит, диагностическая система не может уловить гибрид. Второй недостаток ПЦР связан с возможностью получения ложноположительного и ложноотрицательного результата. Чтобы избежать ошибки, нужно соблюдать правила забора материала. Чаще всего погрешности возможны после уже проведенного лечения, поэтому принимать решение об отмене терапии может только лечащий врач.