Цвет пробирки на гепатит

Вакуумная пробирка — основной инструмент для забора венозной крови. Она может быть наполнена реагентом, который позволит провести быстрый и точный анализ. В таком случае каждая пробирка имеет колпачок своего цвета. Цветное кодирование соответствует международному стандарту ISO 6710.

Вакуумные пробирки для получения сыворотки (биохимия, серология). Цвет крышечки – коричневый или красный

Сыворотка крови – жидкая часть крови лишенная форменных элементов и некоторых белков (фибрин и др.) в отличие от плазмы, в которой сохраняются все элементы жидкой части крови кроме форменных элементов.

Получение сыворотки крови является результатом двухступенчатого биохимического процесса: свертывания (коагуляции) крови и ретракции (уплотнения) сгустка. Для запуска коагуляционного каскада необходимо наличие внешнего активатора, каковым может служить кремния диоксид, поэтому процесс свертывания крови быстрее происходит в стеклянных пробирках, так как кремния диоксид является базовым материалом стекла или в пластиковых пробирках с активатором свертывания. Активатор свертывания (clot activator) выполнен в виде напыления на внутренней стенке пробирки.
После образования сгустка начинается этап его уплотнения и выделения сыворотки. На практике ретракция сгустка ускоряется центрифугированием пробирок с кровью.
Для получения максимально чистой сыворотки рекомендуется соблюдение трех условий:
1. После забора крови в пробирку в соответствии с инструкцией необходимо осторожно однократно перевернуть пробирку для более полного контакта крови с активатором свертывания;
2. Дождаться завершения процесса свертывания крови в течение 20-30 минут при комнатной температуре и вертикальном положении пробирки;
3. Центрифугировать пробирку со свернувшейся кровью не менее 10 минут с ускорением 1500 G (примерно 3000 об/мин) для максимального выдавливания сыворотки из сгустка. При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.
После центрифугирования и полной ретракции сгустка сыворотка располагается над сгустком, но в контакте с ним. Сохраняется опасность загрязнения сыворотки составляющими сгустка при неосторожном обращении с пробиркой (встряхивание, опрокидывание и пр.). Для лучшего очищения сыворотки и более полного разграничения сыворотки и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие биологически инертный олефиновый гель. Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее сыворотки, но легче кровяного сгустка, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером. Стабильность такого барьера гарантирована в течение 5-7 дней при хранении пробирки с кровью при комнатной температуре.
Оптимальные сроки сохранности образца крови в данных пробирках составляет при комнатной температуре 6 часов, при хранении в холодильнике (+4ºС) – 24 часа. Повторное центрифугирование пробирок, особенно с гелем, не допускается.
Полученная сыворотка крови применяется для очень широкого спектра лабораторных биохимических, ИФА и иммунологических исследований:
белковый состав, ферменты, гормоны, онкомаркеры, ВИЧ-инфицирование, гепатиты и пр.

Вакуумные пробирки для получения цельной крови или плазмы

Не все анализы в клинике делаются из сыворотки крови. Для многих видов исследований необходима цельная кровь, содержащая форменные элементы, или плазма, освобожденная от клеток крови центрифугированием. С целью получения несвернувшейся крови разработаны пробирки с определенными добавками – антикоагулянтами. На практике используют два вида антикоагулянтов:
ингибиторы (вещества, вызывающие торможение) тромбина. Тромбин является ключевым игроком в коагуляционном каскаде. Он принимает участие в формировании ряда факторов свертывания крови и способствует трансформации фибриногена в фибрин. Добавление биохимических ингибиторов тромбина эффективно активирует антикоагуляционные свойства крови.
связывание (удаление) ионов Ca2+. При прочих равных условиях свертывание крови происходит при активном участии ионов Ca2+. Удаление их является эффективным механизмом сохранения крови в жидком состоянии.

Гепарин. Цвет крышечки – зеленый, светло-зеленый

Гепарин - кислый мукополисахарид с молекулярной массой 4000-40000 – является натуральным антикоагулянтом, присутствующем в любом здоровом организме. Гепарин активирует создание комплексных соединений между антитромбином III и такими факторами свертывания крови, как тромбин, факторы XIIa, XIa, Xa, IXa и VIIa. В таком комплексе факторы свертывания инактивируются необратимо.
Для целей получения плазмы крови в пробирки добавляют литиевую либо натриевую соль гепарина в пропорции к забираемой в пробирку кровью 15-20 МЕ/1 мл, что служит гарантией полной инактивации свертывания крови и не искажает исследуемые параметры. Эритроциты сохраняются в образце крови до 8 часов. Нельзя использовать для проведения анализов образец крови, хранившийся более 48 часов даже в условиях холодильника (+4ºС).
Для получения качественного результата анализа необходимо:
Немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и гепарина,
Плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин). При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.
В клинике пробирки с гепарином применяются, в основном для проведения исследования:
электролитного состава крови,
газового состава крови,
содержания алкоголя в крови.
Не рекомендуется использовать гепарин для: морфологических исследований, так как кислотный характер гепарина способствует обесцвечиванию мазка крови, придавая ему голубоватый оттенок, подсчета лейкоцитов и тромбоцитов, поскольку гепарин стимулирует агрегацию этих клеток крови.
исследований по методике полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Для более чистого разграничения плазмы крови и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие кроме гепарина инертный олефиновый гель. Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее плазмы, но легче форменных клеток крови, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером.

Фторид натрия/ЭДТА калия. Цвет крышечки – серый

Добавление фторида натрия и ЭДТА калия в пробирку позволяет предотвратить разрушение глюкозы крови (процесс, называемый гликолизом) и сохранить ее уровень во взятом образце крови.
Фторид натрия и оксалат калия выступают в качестве антикоагулянтов, связывая ионы Са2+ и, кроме того, фторид натрия стабилизирует уровень глюкозы.
Глюкоза разрушается до пирувата и лактата при последовательном осуществлении различных энзиматических реакций. Фторид натрия ингибирует некоторые ферментативные реакции, включая превращение фосфоглицерата в фосфоенолпируватацид, и предотвращает гликолиз.
Для получения качественного результата анализа необходимо:
немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта
плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин).
Пробирки с добавлением фторида натрия и оксалата калия используют для проведения определения уровня сахара (глюкозы) в крови. Соотношение компонентов 1/1, общее количество добавляемых реагентов – 4,5 мг/1 мл забираемой в пробирку крови.

Замечания: Фторид блокирует активность уреазы и некоторых других ферментов. Образцы крови из данных пробирок нельзя использовать для прямого определения энзимов. Фторид натрия и ЭДТА калия связывают ион Са2+, заменяя в крови 1 ион кальция на 2 иона натрия или калия. Следствием этого является повышение напряжения ионов в межклеточной жидкости и выкачивание воды из внутриклеточного пространства в межклеточное, сморщивание клеток крови с умеренным "выдавливанием" из эритроцитов гемоглобина. Поэтому видимый гемолиз свойственен образцам крови с данной добавкой.
Глюкоза превращается в лактат в результате комплекса реакций, включающего в себя различные этапы. Фторид ингибирует один их последних этапов разрушения глюкозы, начальные этапы с участием гексокиназы и фосфофруктокиназы блокируются менее эффективно, поэтому можно наблюдать снижение содержания глюкозы в образце крови на 6-7% от первоначального.
После первоначального незначительного снижения уровня глюкозы ее количество остается постоянным при хранении крови в пробирке в течение 8-10 часов при температуре до 25ºС и в течение 2-3 дней в холодильнике (+4ºС).

ЭДТА-К2. Цвет крышечки - сиреневый

Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) является предпочтительным антикоагулянтом для гематологических исследований. ЭДТА и его щелочные соли способны создавать хелатные соединения с ионами кальция с образованием растворимых высокостабильных комплексов. Наиболее эффективная концентрация ЭДТА – 1,2 мг/мл крови. Во всем мире используют три варианта солей ЭДТА: ЭДТА-К3, ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2. Наиболее предпочтительной и рекомендуемой Международной Комиссией по Стандартизации в Гематологии является двукалиевая соль ЭДТА:

ЭДТА-К3 показывает меньшую способность поддержания крови в жидком состоянии, также ЭДТА-К3 влияет на подсчет лейкоцитов, занижая их количество.
различия между ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2 в клиническом плане незначительны и ими можно пренебречь, но ЭДТА-Na2 хуже растворим.

Для получения качественного результата анализа необходимо:
немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта;
плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин). При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.

Наиболее широко используются пробирки, содержащие 1,95 мг ЭДТА/1мл крови. Они нашли свое применение в таких областях лабораторной практики, как:
гематологические исследования – подсчет клеток крови, определение СОЭ и пр.
ПЦР-исследования (качественные и количественные методики).

Пробирки с образцами крови можно хранить до 6-10 часов при 4ºС, хранение свыше 24 часов не рекомендуется из-за снижения числа эритроцитов и лейкоцитов.

Цитрат натрия. Цвет крышечки - голубой

Цитрат натрия является антикоагулянтом для сбора венозной крови с це6лью проведения исследований коагуляционных свойств крови.

Процесс свертывания крови представляет собой последовательность сложных реакций, в которых результатом первых реакций (с участием активных ферментов) является активация следующих, первоначально неактивных энзимов. Последним активным ферментом в этой цепочке присутствует тромбин, который осуществляет превращение фибриногена в фибрин. Нити фибрина опутывают клетки крови и окончательно формируют кровяной сгусток. Крайне важную роль на этом этапе играют ионы Са2+. Антикоагуляционные свойства цитрата проявляются в формировании комплекса с ионами Са2+ и эффективном удалении их из крови.

Общее исследование свертывания крови определяется временем, необходимым для последовательной активации ферментов, участвующих в коагуляционном процессе. Проводится определение времени активации и количественное измерение различных составляющих коагуляционного каскада, для чего создаются так называемые "обходные пути" добавлением некоторых промежуточных продуктов свертывания.

Наиболее часто используются пробирки с 3,8% или 3,2% раствором цитрата натрия (0,129 моль/л), соотношение цитрата к количеству забираемой крови 1/9.

Для максимально качественного проведения коагулологических исследований рекомендуется соблюдение определенных правил:
нельзя использовать пробирку для взятия крови на коагуляционные тесты первой, сразу после венепункции, так как на результаты может повлиять выделяющийся при пункции тканевой тромбопластин;
венозный жгут во время взятия крови в пробирку должен быть снят;
немедленно после взятия крови пробирку аккуратно переворачивают 5-6 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта;
сразу после этого надо проверить количество взятой крови: ее верхняя граница должна быть на уровне голубой полоски на этикетке.

Оптимальными условиями хранения пробирки с образцом крови является температура 20-24ºС и исследование коагуляционных свойств и факторов свертывания крови должно быть проведено в течение 2-х часов с момента взятия крови

Информация о документе
Дата добавления:
Размер:
Доступные форматы для скачивания:

4.2.2. Вакуумные пробирки: виды, цветовая кодировка

Вакуумные пробирки представляют собой основной компонент для взятия венозной крови. Пробирки производятся из стекла или специального материала полиэтилен-терфталата (пластика и стекла), который отличается особой прочностью и препятствует газообмену. Они изготовляются и стерилизуются в заводских условиях, предназначены для одноразового применения. Пробирки выпускаются различных объемов и размеров и уже содержат все реагенты и добавки, необходимые для проведения анализа. Вакуум в пробирках обеспечивает взятие необходимого объёма крови и, соответственно, позволяет гарантировать соблюдение правильного соотношения крови и реагента.

Пробирка состоит из трех основных частей:

безопасная крышка с идентификационным кольцом;

Вакуумные пробирки с наполнителем (не реагентом) содержат в себе гель либо гранулы, и используются в случаях, когда требуется разделить составляющие крови. Гель обволакивает сгущенную кровь, обособляя ее от сыворотки, гранулы же превращаются в своеобразный барьер, работая аналогично гелю.

Для некоторых видов анализов добавлен реагент (литий, гепарин, ЭДТА).

Вакуумные пробирки закрываются резиновыми пробками или специальными крышками Hemogard , которые обеспечивают безопасность лаборанта при работе с пробой. Цвет крышки указывает на вид наполнителя и назначение пробирки. Цветовая кодировка пробирок соответствует международному стандарту ISO 6710.

Пробирки для получения сыворотки

Сыворотка крови – наиболее часто используемый материал в клинико-диагностических лабораториях. Для получения сыворотки кровь должна полностью свернуться.

Пробирки для получения сыворотки бывают двух видов – стеклянные и пластиковые. В стеклянных пробирках функцию активатора свертывания выполняет непосредственно само стекло, так как в его состав входит кремний, ускоряющий процесс коагуляции. В пластиковые пробирки для ускорения процесса коагуляции добавляются активаторы свертывания – кремнезем и/или тромбин. Пробирки могут содержать также специальный гель либо гранулы для четкого отделения сыворотки от сгущенной крови.

Стеклянные пробирки без наполнителя и пластиковые пробирки с кремнеземом для исследования сыворотки различают по красной крышке (рис. 5, а ). Пробирки для получения сыворотки с тромбином отличаются окрашенностью крышки или резиновой пробки в оранжевый цвет (рис. 5, б, в ). Тромбин является природным активатором свертывания и значительно сокращает время образования сгустка (3-5 мин.). Пробирки с тромбином применяются для ускоренного получения сыворотки, поэтому чаще всего используются для экспресс-анализов, когда требуется срочно получить сведения о составе крови пациента, к примеру, в реанимационной палате и т.д.

Производятся стеклянные пробирки, в которых содержится только тромбин, и пластиковые пробирки с комплексным наполнителем – тромбин с кремнеземом. Также производятся пробирки с тромбином и гелем, время свертывания крови в которых 3-5 минут.

После заполнения пробирку с тромбином следует обязательно перемешать путем переворачивания 5-6 раз. Полное свертывание крови происходит за 5 минут.

Пробирки с гелем для получения и отделения сыворотки производятся только из пластика, и их можно отличить по желтой крышке (рис. 5, г ). С целью лучшего отделения сгустка крови от сыворотки в пробирки добавлен гель. После взятия пробы пластиковые пробирки следует перемешать путем переворачивания 5–6 раз.

а б в

Рис. 5. Пробирки для получения сыворотки:

а – с активатором свертывания (пластиковые);

в – с тромбином и гелем;

Пробирки для исследования плазмы

Для получения плазмы в пробирках используется литиевая или натриевая соль гепарина, распыленная на внутреннюю поверхность пробирки. Гепаринизированную плазму обычно используют для биохимического и иммунологического анализа.

Основное действие гепарина – торможение перехода растворимого фибриногена в нерастворимый фибрин вследствие блокирования активности тромбина.

Пробирки без геля с гепарином (гепарин лития или гепарин натрия) отличаются зеленым цветом крышки. Гепарин лития используется для клинических анализов крови, гепарин натрия – при подборе дозы и мониторинге терапии препаратами лития. Пробирки с гепарином и разделительным гелем для получения плазмы имеют светло-зеленую крышку, в них используется только литиевая соль гепарина. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз. Центрифугирование следует производить сразу после взятия крови.

Рис. 6. Пробирки для получения плазмы: а – с гепарином; б – с гепарином и гелем.

Пробирки для коагулологических исследований

При взятии образцов для исследования системы гемостаза стандартным антикоагулянтом является цитрат натрия . Его механизм действия основан на связывании ионизированного кальция крови, что ведет к обратимому блокированию процесса коагуляции.

Выпускаются как стеклянные, так и пластиковые пробирки с крышкой голубого цвета (рис. 7). Для предотвращения испарения цитрата натрия пластиковые пробирки изготовляются по особой технологии из разного рода пластика и имеют двойные стенки.

Очень важно соблюдать правильное соотношение крови к антикоагулянту как 9:1. Недостаток цитрата в пробе ведет к образованию микросгустков и коагуляции пробы, а избыток – к искажению результатов за счет связывания кальция из реагентов.

При взятии пробы в несколько пробирок у одного пациента пробирка с цитратом должна заполняться до пробирки с активатором свертывания. Сразу после взятия образца пробирку необходимо аккуратного перемешать 4-5 раз.

Для проведения некоторых коагулологических анализов также могут использоваться пробирки с комплексным наполнителем CTAD (Цитрат натрия/Теофиллин/Аденозин/Дипиридамол).

Рис. 7. Пробирки с цитратом натрия.

Пробирки для гематологических исследований

В качестве антикоагулянта в пробирках для гематологических исследований цельной крови используется ЭДТА (калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Противосвертывающее действие ЭДТА обеспечивается за счет связывания ионов кальция в крови. В пробирках со светло-лиловой (сиреневой) крышкой антикоагулянт находится в виде раствора или порошка, распыленного на внутреннюю поверхность пробирок (рис. 8).

Для обеспечения правильного соотношения крови и антикоагулянта пробирка с ЭДТА должна заполняться точно до указанного объема. Недостаток ЭДТА в пробе приводит к ее коагуляции, а избыток – к сморщиванию клеток крови и искажению таких клинических показателей, как гематокрит, размер клеток и т.д.

Сразу после взятия крови в пробирку с ЭДТА ее необходимо тщательно перемешать, переворачивая 8-10 раз.

Рис. 8. Пробирки для гематологических исследований цельной крови.

Пробирки для специальных тестов

Пробирки для исследования глюкозы

Для стабилизации глюкозы используются пробирки с серой крышкой и следующими наполнителями: фторид натрия и оксалат калия, йодоацетат и лития гепарин, фторид натрия и ЭДТА.

Пробирки должны заполняться полностью до указанного на них объема. После взятия пробы пробирки следует перемешать, переворачивая 6-8 раз. Поскольку пробирки с фторидом/оксалатом особенно подвержены гемолизу, их необходимо перемешивать с особой осторожностью.

Рис. 9. Пробирки для исследования глюкозы.

Пробирки для исследования микроэлементов

Микроэлементы находятся в крови в крайне малых количествах, поэтому используемые материалы должны исключать возможность загрязнения образца инородными примесями. Это возможно при применении специальных пробирок с крышкой синего цвета (рис.10).

Пробирки предназначены для исследования цинка, железа, меди, кальция, селена в крови; а также токсикологических исследований свинца, кадмия, мышьяка, сурьмы.

Взятие образца и пробоподготовка производятся в соответствии с используемым наполнителем: они могут быть с активатором свертывания, К 2 -ЭДТА или гепарином натрия или без наполнителя. При анализе сыворотки на наличие микроэлементов в следовых количествах не рекомендуется использовать стандартные пробирки с красной крышкой, так как они содержат повышенную концентрацию цинка и других микроэлементов.

При взятии крови у одного пациента сразу в несколько вакуумных пробирок необходимо пробирку для микроэлементов следует заполнять последней для снижения вероятности загрязнения пробы через иглу.

Рис. 10. Пробирки для исследования микроэлементов.

Пробирки для исследования нестабильных гормонов белковой природы

Для сохранения нестабильных ферментов и гормонов белковой природы в пробирках вместе с антикоагулянтом ЭДТА используется ингибитор протеиназы – апротинин. Он применяется для стабилизации таких гормонов и ферментов, как ренин, адренокортикотропный гормон, глюкогон, соматостин, кальци-тонин, остеокальцин, b-эндорфин, секретин, нейротензин, вазоактивный интестинальный пептид. Апротинин содержится в пробирках объемом 5-10 мл с розовой пробкой .

Пробирки для определения группы крови с розовой крышкой

Эти пробирки используются как для определения группы крови, так и для перекрестной пробы при переливании крови. Выпускаются без наполнителя, с кремнеземом (активатор свертывания) или К 2 ЭДТА. Специальная этикетка на пробирке удобна для записи информации о доноре и пациенте.

Рис. 11. Пробирки для определения группы крови.

Пробирки для стабилизации цельной крови (для иммуногематологии)

Пробирки для стабилизации цельной крови содержат комбинированный наполнитель ACD, состоящий из активного антикоагулянта тринатрия цитрата, лимонной кислоты, которая обеспечивает буферный раствор с тринатрия цитратом, и декстрозы, являющейся питательным веществом для эритроцитов. Стеклянные пробирки с ACD можно отличить по светло-желтой крышке , они обычно используются в отделениях иммунной гематологии для анализа поверхностных антигенов лейкоцитов (HLA-типирование, некоторые приложения проточной цитометрии, исследование функций лейкоцитов и специальные иммунологические тесты).

В пробирках наполнитель ACD присутствует в виде раствора (тип А или В). Цельная кровь смешивается с образцом в соотношении 1:6 (1 часть ACD обеих концентрации к 6 частям образца).

Сразу же после заполнения пробирки с ACD пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз.

Рис. 12. Стеклянные пробирки с ACD для иммуногематологии.

Пробирки для измерения СОЭ по методу Вестергрена

Система для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Вестергрена состоит из вакуумных пробирок для взятия венозной крови и штатива с градуированной шкалой.

Стерильные стеклянные пробирки, закрытые черной крышкой Hemogard , содержат раствор цитрата натрия. При полном заполнении пробирки кровью (5,2 мл) достигается соотношение крови и антикоагулянта, равное 4:1.

Штатив рассчитан на 10 пробирок, каждая ячейка снабжена механизмом, с помощью которого совмещается уровень пробы в пробирке с нулевой отметкой шкалы штатива. Измерение СОЭ проводится в закрытой первичной пробирке, при этом пробу не нужно переливать и дополнительно разбавлять.

Хранить образец до анализа нужно при комнатной температуре, вдали от солнечного света и отопительных приборов. Анализ необходимо провести в течение 6 часов после взятия пробы. Для этого необходимо пробирка помещается в специальный штатив, стоящий на ровной горизонтальной поверхности. В течение всего времени проведения теста штатив должен оставаться неподвижным. Далее совмещают нулевую метку с мениском образца и по истечении 60 минут зафиксируют показатели СОЭ по градуированной шкале штатива между осевшими эритроцитами и плазмой.

Рис. 13. Система BD Seditainer для определения СОЭ по методу Вестергрена.

Пробирки для проведения анализов методами
молекулярной диагностики

Пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики

Эти пластиковые стерильные пробирки используются для взятия крови, пробоподготовки, транспортировки и хранения образца неразбавленной плазмы. Пробирки различаются по крышке жемчужно-белого цвета и применяются для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитах, а также для проведения анализов методами молекулярной диагностики (например, ПЦР) и идеально подходят для хранения и транспортировки плазмы.

Пробирки содержат антикоагулянт К 2 ЭДТА в виде порошка, распыленного на стенках пробирки, и полиэстерный гель, позволяющий отделить плазму от клеток крови во время центрифугирования.

Рис. 14. Пробирки для отделения плазмы с К2ЭДТА и гелем

Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя кровь необходимо тщательно перемешать с антикоагулянтом, аккуратно переворачивая 8-10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

Плазму в пробирках можно хранить в замороженном виде при
-70°C. В пробирках стабильность РНК ВИЧ и вируса гепатита С сохраняется в течение 72 часов при комнатной температуре.

Пробирки для выделения мононуклеарных клеток крови (моноцитов и лимфоцитов)

Пробирки позволяют отделить мононуклеарные клетки периферической крови в один прием, причем в одной первичной пробирке, внутренние стенки которой покрыты силиконом для минимизации неспецифической активации клеток.

Пробирки выпускаются двух видов:

с сине-черной пестрой пробкой (пробирки с натрия цитратом);

с красно-зеленой пестрой пробкой (пробирки натрия гепарином).

Пробирки содержат антикоагулянт разделительный гель и специальную жидкость фиколл, создающую градиент плотности для разделения мононуклеаров. Данные пробирки предназначены для:

исследования количественных и функциональных характеристик мононуклеарных клеток, исследования их активности,

обнаружения злокачественных новообразований,

анализа генетических маркеров,

исследование провирусной ДНК, РНК вирусов (в т.ч. ВИЧ).

Сразу же после извлечения пробирки с кровью из держателя ее необходимо аккуратно перевернуть 8–10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

Гепатит C – инфицирование печени, вызванное вирусом Flaviviridae HCV, состоящим из одной или нескольких молекул РНК. Как правило, проводится ряд диагностических мероприятий для установления у пациента гепатита C. ПЦР является анализом, точно подтверждающим диагноз. Часто заключение предоставляется врачами, когда у больного уже присутствуют первые признаки заболевания.

Что такое гепатит C

Поражение печени вирусной инфекцией, передающейся через кровь или половым путем, в медицине называется гепатитом С. Возбудителем является РНК-содержащий вирус неклеточных инфекционных агентов семейства Flaviviridae. Инфекция может долго находиться в организме, никак себя не проявляя. Поэтому лишь при обнаружении микроорганизма с помощью исследования крови методом ПЦР РНК гепатит C (как диагноз) считается обоснованным.

Флавивирус не продуцируется в искусственно выращенных изолированных клетках. В процессе размножения инфекционный агент создает иммунологически отличающиеся модификации. Эти факторы мешают организму давать соответствующий защитный ответ, а у специалистов возникают трудности с разработкой действенной вакцины.

Передается вирус парентеральным способом. Для заражения необходимо его попадание в достаточном количестве непосредственно в кровь.

Какие анализы сдают при гепатите C

Вирусные патологии печени диагностируются с помощью лабораторных тестов. Клинические исследования гепатита C проводят методом изучения чужеродных и опасных для организма антигенов или белковых соединений (антител) в биоматериале пациента, в основном в крови.

• Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод базируется на выявлении в крови антител lgM. Иммуноглобулин считается наиболее крупным и представляет собой пентамер. Он проявляется при первичном защитном ответе лимфоцитов на неизвестное чужеродное вещество.
• Радиоиммунологический анализ (РИА) – количественное определение иммуноглобулина lgM при помощи помеченного радиоактивного изотопа йода.
• ПЦР гепатита C – определение в биоматериале (крови) вирусной РНК. Данный анализ достоверно подтверждает диагноз.

Исследование на иммуноглобулин G не является достоверным. Его наличие в сыворотке крови может говорить не только о присутствии флавивируса, так и о другой перенесенной инфекции, имеющей такого же возбудителя.

Что определяет анализ ПЦР

Полимеразная цепня реакция (ПЦР) базируется на установлении участков ДНК, специфичных для некоторых болезнетворных микроорганизмов в образцах материала для исследований (эпителий, кровь). Анализ дает возможность определить патогенные мельчайшие организмы (вирусы) посредством выявления их РНК либо ДНК в биологическом материале.

Лабораторная процедура по выявлению антител ПЦР гепатита C проводится в 3 этапа:

1. Выделение. Исследуемый биоматериал очищают от примесей и получают ДНК в подвижной фазе хроматографической колонки.
2. Амплификация. Анализ проводят в приборе-термостате амплификаторе. Он с определенной цикличность нагревает и охлаждает пробирки. За одно исследование производится до 35 циклов. В результате получается достаточное количество фрагментов ДНК для выявления, идентификации и оценки возбудителя.
3. Электрофорез. Полученные фрагменты помещают в гель с разной насыщенностью агарозы и проводят электрофорез. Полученную электрофореграмму анализируют на компьютере.

Применяют не только стандартное исследование ПЦР, но и анализ Real Time PCR. Это диагностика в реальном времени. Метод позволяет проводить качественный и количественный анализ, что дает возможность выявить формацию и динамику болезни, а также назначить терапию, направленную на ликвидацию причины происхождения патологии. Также ПЦР в реальном времени применяют для определения чистой культуры инфекционных агентов (генотипирование).

Как сдается анализ на полимеразную цепную реакцию

Для диагностики может быть использована любая биологическая жидкость человека. Биоматериалом для исследования на гепатит C обычно является кровь.

Забор образцов для диагностики проводят в процедурном кабинете. Для взятия крови используют одноразовые пробирки с веществом, угнетающим ее свертываемость. Мероприятия, сориентированные на предотвращение распространения возбудителей инфекции, помогают избежать попадания другого штамма микроорганизмов извне.

Кровь на ПЦР гепатита C сдают утром натощак. Пробу стараются сразу доставить в лабораторию. Допускается хранение биоматериала при температуре от +4 до +8 градусов Цельсия. Контейнеры маркируют и снабжают направлением. Результаты анализа можно получить через 48 часов, иногда раньше.

Виды ПЦР

Спектр применения полимеразной цепной реакции достаточно широк. Инфекционисты определяют с помощью ПЦР гепатит B, заболевания, передающиеся кровососущими насекомыми, СПИД, туберкулез. В онкологии с помощью данного метода выявляют опухолевые клетки на ранних стадиях.

Существует около четырнадцати видов анализа. Использование того или иного вида зависит от сферы применения и конечных результатов анализов. Некоторые разновидности ПЦР незаменимы там, где результат необходим в течение 20 минут.

Для диагностики гепатита C используют 3 вида полимеразной цепной реакции:

• Качественная оценка может быть либо положительной указывающей на присутствие в организме инфекции, либо отрицательной – отсутствие флавивируса.
• ПЦР в реальном времени (количественный анализ) – определяет количественное РНК возбудителя в МЕ/мл.
• Генотипирование – анализ, выявляющий разновидность (генотип) вируса.

Для точного выявления и определения заболевания с последующим назначением оптимальной терапии применяют все три вида исследований.

Качественный анализ полимеразной цепной реакции

Анализ назначают в обязательном порядке всем, у кого ИФА выявил антитела к HCV. ПЦР качественный на гепатит C является стандартным тестом на чувствительность. Метод направлен лишь на обнаружение, никакого подсчета или выделения других веществ не производится.

Для определения антител используют специальные тест-системы с порогом чувствительности не ниже 50 МЕ/мл. При обнаружении антител назначаются другие уточняющие анализы. При отрицательном результате дальнейшие исследования не проводятся.

В некоторых случаях ложноотрицательный результат может быть следствием некомпетентности сотрудников лаборатории или низкокачественными реагентами. Для страховки лучше пересдать анализ в другом месте.

Количественный ПЦР

Метод применяется для прямого исследования числа флавивируса за один цикл реакции. Для точного измерения используют фрагменты ДНК, применяемые для гибридизации, или флуоресцентно-меченые праймеры. Существует экономичный вариант детекции, с применением красителя SYBL Green. Красящее вещество вклинивается в небольшую бороздку ДНК и при облучении лазером окрашивается в синий цвет.

Концентрация определяется аппаратом-амплификатором в цифровом эквиваленте. В разных лабораториях показатели могут немного отличаться, поэтому их необходимо сравнивать с референтными показателями.

Количественный ПЦР гепатита C помогает подобрать оптимальную дозировку лекарственных средств и определить продолжительность терапии. Частота проведения исследования зависит от стадии заболевания, вида генотипа и назначенного курса лечения.

Определение генотипа

Вирус гепатита C имеет изменчивое генетическое строение. Многочисленные модификации не дают возможность создать вакцину, а также затрудняют терапию. Всего выявлено и зафиксировано 11 генотипов и 100 подтипов. В странах бывшего СССР у лиц, инфицированных гепатитом C, ПЦР выявляет в основном генотипы 1b и 3.

При наличии любого из генотипов может резвиться цирроз или рак печени. Поэтому так важно обнаружить вирус вовремя.

Для некоторых пациентов определенные лекарства, предназначенные для борьбы с HCV, являются токсичными. Генотипирование позволяет определить разновидность белка и назначить эффективное лекарственное средство.

В результатах анализов на типирование стоит цифра со строчной латинской буквой, указывающая на генотип вируса. В случае если HCV обнаружен, но не типируется, это означает, что у человека несвойственный для определенной географической зоны генотип.

Результаты анализа

Расшифровкой результатов занимается врач. Только данные нескольких исследований (в совокупности с анамнезом и осмотром) могут дать общую реальную картину истории болезни.

На что указывает положительный анализ ПЦР

Любое серьезное заболевание требует комплексной диагностики. Положительный ПЦР гепатита C подтверждает диагноз, но прогнозы можно делать только после дополнительных лабораторных и инструментальных исследований.

Обнаружение вируса не дает полного представления о патологии. Необходимо выявить его тип и характер, определить, как он влияет на печень и другие органы. Выявление HCV на ранних стадиях часто имеет благоприятный терапевтический исход.

Отрицательный ПЦР при положительном ИФА

При наблюдении симптомов, свойственных поражениям печени, есть большая вероятность того, что инфекции уже попала в организм. Поэтому следует обратиться к гепатологу или инфекционисту. Специалист в ходе расспросов соберет анамнез и назначит необходимое обследование.

Если по результатам исследований на гепатит C ПЦР отрицательный, а иммуноферментный анализ положительный, то это говорит о наличие в крови антител к флавивирусу. Обычно так бывает, когда инфекция попала в организм в небольшом количестве, поэтому иммунитет справился с ней самостоятельно. Но такие люди все равно считаются инфицированными и обязаны проходить обследование каждые 6 месяцев. Если с такими результатами анализов человеку отказывают в бесплатном медицинском обследовании, для сохранения здоровья лучше сдать ПЦР платно, а при положительных показателях обратится к специалисту для постановки диагноза и назначения лечения.

Достоинства и недостатки метода

• Обнаружение возбудителя на ранних стадиях.
• Точное определение вируса.
• Оперативность проводимой диагностики.
• Минимальная вероятность ошибки.
• Высокая чувствительность.

• Высокая стоимость анализа. Для проведения теста необходимы дорогостоящее оборудование, реагенты и высококвалифицированные медицинские сотрудники. Все вместе складывается в немалую сумму.
• Жесткие требования к транспортировке биоматериала.

Лечение воспаления печени

Анализ ПЦР на вирус гепатита C считается основополагающим для постановки диагноза, но не окончательным. Чтобы терапия была эффективной, требуется ряд дополнительных лабораторных и инструментальных исследований. После прохождения всех диагностических мероприятий врач назначает лечение:

Медикаменты, назначенные гепатологом, применяют регулярно, не меняя дозировку. Продолжительность приема препаратов определяется врачом после сдачи контрольных анализов. После завершения курса терапии необходимо посещать доктора каждые полгода.

ПЦР-диагностика позволяет выявить возбудителя гепатита C на ранних сроках. Это способствует эффективности терапии и недопущению перехода заболевания в такие опасные формы, как цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.