Иммуноферментный анализ крови вирусный гепатит с что это
Нередко ВГС обнаруживается только в процессе сдачи анализов. Но если антитела к ВГС обнаружены — что это значит? Означает ли это, что инфицирование произошло? Бывают ли ложные положительные антитела на гепатит С? Ответы на все эти вопросы вы найдете в нашей статье.
Что такое антитела к гепатиту С?
После того, как в организм человека проникают инородные микроорганизмы и вирусы, иммунная система начинает вырабатывать особые белковые ферменты – иммуноглобулины. Появление специфических фракций белка свидетельствует об ответе иммунитета на сторонние раздражители. Именно эти фракции и являются антагонистами по отношению к антигенам патогена. Их наличие является маркером заражения определенным вирусом.
Но антитела гепатита С — что это такое? Это – иммуноглобулины, противостоящие именно антигенам ВГС. Антитела гепатита (АТ к ВГС) присутствуют в крови пациента. Именно поэтому основным методом диагностики гепатовируса является сдача образцов крови на специфическое обследование. Результаты анализов расшифровывают работники медицинских лабораторий и лечащий врач-гепатолог.
О чем говорят положительные антитела на гепатит С?
Положительный анализ на антитела гепатит С у многих пациентов вызывает панику. Им кажется, что страшный диагноз уже подтвержден, и впереди их ожидает длительное лечение сильнодействующими препаратами. Однако это не всегда так.
Если результат анализа на антитела на гепатит С положительный — что это значит? Результат расшифровки зависит от того, какие именно группы иммуноглобулинов удалось обнаружить:
- Anti—HVC IgG – проявляются одними из первых при заражении гепатовирусом. Фракции белков, говорящие об инфицировании пациента;
- Anti—HCV core IgM – второй тип антител гепатита С, свидетельствующий о заражении организма на ранних стадиях. Сохраняется в крови до полного выздоровления пациента;
- Белок NS3 – АТ к ВГС, наличие которого в плазме основной жидкости человеческого организма говорит о возможном переходе острой формы заболевания в хроническую;
- Белковые фракции NS4 и NS5 – соединения, свидетельствующие о развитии тяжелых осложнений текущего заболевания. Таковыми может быть фиброз, цирроз печени и даже онкологическая опухоль.
Если анализ на гепатит С антитела положительный, это еще не приговор. Обычно для однозначной постановки диагноза проводятся дополнительные обследования.
В противоположном случае возникает вопрос – если антитела к вирусу гепатита С не обнаружены, что это значит? К сожалению, это не является гарантией отсутствия гепатовируса в крови. Возможно, концентрация патогена настолько мала, что в настоящий момент его попросту невозможно выявить.
Что делать, если антитела к гепатиту С положительные?
Вероятнее всего, гепатолог даст направления на дополнительные обследования. Таковыми являются:
- Дополнительный анализ венозной крови пациента на определение генотипа вируса;
- Ультразвуковое обследование (УЗИ) поврежденного заболеванием органа с целью получения максимально подробной картины о масштабах поражения печени вирусом.
Все эти обследования необходимы для разработки будущего механизма лечения гепатовируса и подходящей терапевтической схемы. Также от результатов тестирований напрямую зависит длительность курса лечения и то, какие именно лекарства будут при этом использоваться.
Схемы лечения гепатовируса
Если в наличии такого диагноза, как ВГС, не возникает сомнений, больному назначается определенная схема лечения, которая зависит от следующих факторов:
- Возраст больного (к примеру, противовирусные препараты не рекомендуются детям до 12 лет);
- Общее состояние организма пациента, наличие других хронических болезней;
- Течение заболевания, наличие осложнений.
До недавнего времени использовалась только одна схема лечения гепатовируса – Рибавирин в совокупности с Интерфероном-альфа. У этого метода есть масса недостатков, в числе которых – множество серьезных побочных эффектов и слабая эффективность. Кроме того, из-за длительности терапии может возникнуть почечная недостаточность, а само сочетание лекарственных средств негативно сказывается на биохимии крови. Если резко повышается уровень лейкоцитов, лечение следует прекратить.
Схема Интерферон + Рибавирин значительно устарела, и используется только в тех случаях, когда лечение другими препаратами не допускается. Чаще всего при лечении вирусного заболевания рассматриваемого типа используются инновационные антивирусные лекарственные препараты индийского производства на основе оригинальной американской рецептуры.
В современных антивирусных схемах лечения обязательно присутствует Софосбувир – ингибитор вирусной РНК-полимеразы, и вещество, ингибирующее патогенный белок NS5A, в зависимости от генотипа ВГС:
- Ледипасвир – при 1, 4, 5 и 6 генотипах гепатовируса;
- Даклатасвир – применяется при 1, 2, 3 и 4 генотипах. Наиболее эффективен при терапии gen 3;
- Велпатасвир – универсальное вещество, которое применяется при лечении абсолютно всех генотипов патогена.
Курс лечения зависит от тяжести заболевания. Если течение болезни стандартное, терапевтический курс длится не более 12 недель. При повторной терапии, а также при наличии тяжелых осложнений, может назначаться 24-недельная терапевтическая схема. В этом случае к основным лекарствам могут прибавиться Рибавирин и различные гепатопротекторы.
Бывают ли ложноположительные результаты?
При получении положительного результата анализа на иммуноглобулины также следует учесть, что результат может быть ложноположительным. Подобное явление наблюдается в следующих случаях:
- Беременность на любом сроке из-за иммунных сбоев, характерных для данного периода жизни женщины;
- Формирование злокачественных и доброкачественных новообразований в печени и других органах пациента;
- Угнетение функций печени со значительным понижением АсТ и АлТ;
- Наличие других вирусно-инфекционных заболеваний (например, инфекции ВИЧ);
- Лечение препаратами из групп интерферонов и иммунодепрессантов;
- Неверная подготовка к сдаче анализов на обнаружение в крови антител гепатита С.
Таким образом, если белковые маркеры к ВГС положительные, это не всегда означает, что человек болен ВГС. Для подтверждения диагноза следует пройти ряд дополнительных обследований.
Какой анализ нужно сдавать на антитела гепатита?
- Качественный – позволяет выявить наличие или отсутствие иммуноглобулинов различных типов. В этом случае, если антитела ВГС обнаружены, в большинстве случаев можно говорить о заражении данного человека гепатовирусом;
- Количественный – тест, позволяющий выяснить уровень вирусной нагрузки на организм больного. Это тестирование проводится в том случае, если патоген ранее уже был обнаружен.
Анализ на белковые маркеры гепатовируса требует соблюдения особых нюансов, в частности:
- Полного отказа от жирной и перегружающей печень еды за 24 часа до обследования;
- Воздержание от употребления алкоголя и табакокурения за сутки до сдачи анализа;
- За 8 часов до явки в лабораторию не следует принимать пищу;
- Лучшее время для сдачи образцов крови – 8 часов утра.
Недостатком анализа ПЦР на АТ к ВГС является невозможность определения иммуноглобулинов при слишком низкой вирусной нагрузке. Но если антитела к вирусу гепатита С не обнаружены — что это значит? Это может означать, что человек полностью здоров. Однако отсутствие результата обследования на белковые маркеры ВГС положительного еще не говорит об отсутствии патогена в организме. Возможно, его концентрация слишком мала, что нередко наблюдается на начальных стадиях заболевания, либо при хроническом течении недуга.
Обнаруживаются ли маркеры ВГС после терапии?
Современные методы лечения ВГС являются весьма действенными. Но если после полноценного курса терапии обнаруживаются антитела гепатита С в крови — что это может обозначать? Далеко не всегда наличие иммуноглобулинов говорит о тщетности проведенных терапевтических манипуляций.
После медикаментозного курса у пациента в крови антитела гепатита С типа IgG являются нормой. Эти маркеры заболевания могут оставаться в организме пациента еще несколько лет. При чем, каждый случай индивидуален. Пациенту следует регулярно сдавать анализ крови и следить за количеством иммуноглобулинов. Если не появятся Anti—HCV core IgM, а уровень Anti—HCV core IgG начнет постепенно снижаться, болезнь можно считать побежденной.
Но если со временем терапии прошло достаточно много времени, а результат анализа на антитела на гепатит С положительный, что это значит? В этом случае велика вероятность рецидивного возвращения недуга.
Для диагностики вирусного гепатита в рамках медицинского протокола используется несколько лабораторных и инструментальных методик. Одной из самых достоверных является иммуноферментный анализ (ИФА). Метод помогает определить наличие антигена к тому или иному виду вируса. Для этого выполняется стандартная процедура забора крови из вены пациента. Результаты становятся известны уже через неделю после взятия анализа.
Что такое ИФА?
Плюсы исследования
ИФА — это высокоточная методика, ее чувствительность достигает 90%. Она помогает проводить скрининг парентеральных гепатитов. Эти заболевания передаются путем инъекции, или через переливание крови. ИФА помогает выявить пациентов, у которых отсутствуют симптомы. Таковыми является большинство хронических больных. Они имеют риск развития цирроза. Его обнаружение на поздних стадиях — это плохой прогноз. Поэтому иммуноферментная методика позволяет своевременно определить заболевание и сэкономить деньги на лечение. ИФА верифицирует этиологию возбудителя и определяет прогноз недуга. Диагностические наборы для нее стоят недорого и длительно хранятся. За быстроту, удобство и точность данных ИФА называют экспресс-методом.
Когда нужен анализ?
ИФА необходим, когда требуется уточнить этиологию вирусного возбудителя для определения схемы лечения. У пациента идентифицируют наличие хронического гепатита B и C, или перенесенного заболевания вирусом подтипа A. Методику нужно применять у членов семьи больного, которые могут заразиться. В инфекционном стационаре анализ выполняется всем пациентам, у которых присутствуют такие симптомы:
- Желтуха. Желтушность кожных покровов не сопровождается болями в правом подреберье и изменением цвета стула и мочи.
- Повышение температуры тела. Она вырастает до субфебрильных цифр, иногда наступает лихорадка.
- Диспепсия. Присутствуют тошнота и рвота, которая не приносит облегчение.
- Немотивированная слабость.
- Мелкоточечные высыпания на теле. Это мелкие кровоизлияния вследствие печеночной недостаточности.
- Тяжесть в правом подреберье. Симптом возникает вследствие растяжения увеличенной печенью собственной капсулы, содержащей множество нервных окончаний.
Основным показанием к выполнению анализа является наличие определенных анамнестических данных. Если пациент ранее страдал инъекционной наркоманией, ему переливали кровь или пересаживали органы — это повод выполнить ИФА.
Подготовка к проведению
Чтобы результаты ИФА были достоверными, требуется предварительно подготовиться. За день до сдачи крови пациенту рекомендуется перестать употреблять жирную и жареную пищу, продукты с высокой концентрацией красителей, стабилизаторов, консервантов, усилителей вкуса и аромата. Нежелательно непосредственно перед выполнением метода заниматься тяжелым физическим трудом и спортивными упражнениями. В день сдачи крови необходимо воздержаться от завтрака. Забор материала натощак позволит получить точный результат. Необходимо исключить из употребления некоторые лекарственные средства. Но самостоятельно это делать не рекомендуется, поскольку есть вероятность вреда для здоровья. Нужна предварительная консультация лечащего доктора.
Методология проведения
Метод ИФА состоит из двух этапов. На первом выполняется забор материала, на втором последний исследуется в лаборатории. Начальный этап проходит стандартно. Ему предшествует подготовка пациента к сдаче крови. В стерильном помещении проводится забор биоматериала, отправляемый в герметических контейнерах на лабораторное исследование. Дальнейшее определение комплексов антиген-антитело происходит с помощью ферментов и тест-систем на специализированном оборудовании. Результат становится известен в течение недели и отправляется пациенту на электронную почту.
Расшифровка показателей
Интерпретация данных подразделяется на качественную и количественную. При качественном определении результаты анализа считаются позитивными, если обнаружены суммарные антитела к определенному подтипу вируса. Выявление anti-НАV IgМ свидетельствует про острый, а anti-НАV IgG — хронический гепатит А. Позитивный маркер НВsAg — признак инфицирования вирусом подтипа В. Он наблюдается в острой и хронической фазах заболевания. Если же выявлен HBCAg, у человека присутствует хронический гепатит С. А anti-НDV сигнализирует про инфицирование подвидом D. Пациенты, у которых определен положительный маркер к вирусу, нуждаются в дальнейшем обследовании для более точной верификации диагноза.
Достоверность анализа
Чтобы оценить работоспособность защитных функций организма и выявить точные диагностические данные, проводят иммуноферментный анализ. В случаях инфицирования человека обнаруживаются кардинальные изменения в крови и получают результат ИФА на гепатит С положительный.
Метод изучения биологического материала ИФА относят к определению иммунохимических реакций, открывающих взаимосвязи антигенов и антител. В ходе проведения анализа к молекуле антитела химическим способом подсаживают антиген-экзим, служащий маркером, который указывает на компоненты процесса.
К компонентам иммуноферментного анализа относят:
- антитела:
- антитела промаркированные;
- antibodies-attacking-a-virus1-440×264 антиген;
- субстрат фермента;
- краситель-индикатор.
Процесс выработки антител и иммуноглобулинов запускается в момент проникания в организм пациента посторонних генов или болезнетворных бактерий.
Задачей иммуноглобулинов считают нейтрализацию антигенов, происходящую при их взаимодействии. В ходе взаимодействия иммуноглобулины формируют комплект антиген-антител, которые имеют количественные и качественные характеристики. Эти значения и изучаются в процессе исследования анализа.
Для регистрации результата в ходе тестирования иммуноферментного анализа у человека забирают биологический материал. Обычно для этих целей используют венозную кровь, но в определенных ситуациях необходим анализ спинномозговой жидкости, стекловидного тела или околоплодных вод беременной женщины. Главной особенностью этого теста является его высокая достоверность, которая составляет порядка 80%.
К плюсам иммуноферментного анализа также относят:
- метод ИФА превосходит прочие тесты по точности определения важных показателей в десятки раз;
- для выполнения ИФА не требуется много времени, результаты, подтверждающие или опровергающие наличие вируса в организме, получают довольно быстро;
- стоимость проведения ИФА доступна большинству категорий населения, в отличие от прочих тестов;
- проведение ИФА дает возможность обнаружить проблему при начальных проявлениях, что значительно облегчает последующий процесс лечения человека;
- все стадии проведения этого анализа автоматизированы;
- высокая степень унификации теста.
К негативным проявлениям данного анализа относят возможность ложноположительных и отрицательных результатов. Сомнительные итоги могут регистрироваться при различных патологических состояниях, беременности и при употреблении медикаментозных средств, которые влияют на выработку организмом антител.
Ложноположительный результат
С помощью проведения иммуноферментного анализа подсчитывается количество антител к вирусу гепатита С. В ходе исследования определяется число этих образований по IgM типу, который соответствует острому течению недуга и IgG, обнаруживаемому при хронической форме.
Антитела IgM регистрируют в течение двух недель после инфицирования организма пациента вирусом гриппа С в острой форме, срок существования этих образований от 3 до 5 месяцев.
Антитела IgG вырабатываются спустя несколько месяцев после поражения организма, но их существование подтверждается в течение десяти лет, даже при условии полного выздоровления пациента.
Отрицательный результат тестирования дает возможность утверждать, что антитела обоих типов отсутствуют в организме и на данный момент гепатит С не обнаружен. Следует учитывать, что если человек заразился в течение последних двух недель, определение патологии невозможно.
Положительный результат теста показывает наличие того или иного типа антител в организме пациента. Данный показатель характеризует инфицирование гепатитом С в острой или хронической форме. Следует учитывать, что фиксация этих образований не дает возможность однозначно указывать на заражение человека, вполне допустимо, что он является только носителем. Бывают случаи, когда при расшифровке данных фиксируется ложноположительный результат.
Это происходит в результате фиксирования лабораторными приборами антител, которые производятся защитной системой человека в ответ на следующие патологии:
- аутоиммунное воспаление;
- проникновение в организм пациента прочих инфекций;
- при беременности.
Статистика проведения иммуноферментного исследования показывает, что ложноположительный вывод регистрируется в 15% всех результатов, подтверждающих наличие вируса. Для беременных женщин данный показатель еще выше.
Причины ложноположительных результатов
Недостоверный вывод тестирования на гепатит С выявляется при сбоях функционирования внутренних органов и технических сбоев, то есть халатного отношения медицинского персонала к своим обязанностям. Ошибки обнаруживаются не более чем в 15% случаев, но их можно избежать, выполняя следующие правила:
Перед сдачей анализа нельзя курить
- для сдачи анализа необходимо выбирать только проверенные, сертифицированные лаборатории с обученным медицинским персоналом;
- накануне проведения анализов следует прекратить употребление любых медикаментозных препаратов, если прием лекарства обусловлен состоянием пациента, он должен предупредить персонал лаборатории об этом факте;
- процедура обычно проводится утром натощак, но перед этим пациенту не следует проявлять излишнюю физическую активность и курить;
- непосредственно перед проведением анализа рекомендуется определить температуру тела, она не должна превышать норму.
При сомнении в правильности выводов тестирования, назначается повторный анализ. В идеале требуется проведение трех исследований биологического материала на гепатит С.
Если первый тест показал наличие антител в крови пациента, а последующие два не выявили эти образования, можно утверждать, что инфицирования организма вирусом гепатита С нет. Существует ряд заболеваний, которые влияют на результат тестирования крови на наличие вируса гепатита С.
Некоторые патологии сопровождаются выработкой антител, и в этом случае подтверждение наличия вируса гепатита С в организме пациента производится с помощью других методов исследования, так как многократно повторяющиеся ошибки при ИФА анализе не дают гарантии правильного диагноза.
Комплексное изучение с применением исследования биологического материала человека в лабораторных условиях и с использованием инструментальных методов позволит выявить истинную причину недомогания, и исключить гепатит С.
Чаще всего причиной ложноположительного результата анализа являются следующие патологии:
- инфекционные заболевания острого или хронического типа;
- рак или доброкачественные новообразования во внутренних органах;
- заболевания аутоиммунного типа, при течении которых образуются антитела к собственным клеткам организма пациента;
- туберкулез;
- малярия;
- склеродермия;
- герпес;
- рассеянный склероз;
- артрит.
Все перечисленные заболевания являются причиной возникновения сбоев в иммунной системе человека, в результате чего иммуноглобулины начинают вырабатываться с превышением нормы, что и становится помехой для постановки точного диагноза и подтверждения наличия вируса гепатита С в организме пациента.
После соприкосновения с источником инфекции организм человека может успешно подавить воспаление, но антитела, при проведении ИФА, все еще обнаруживались в крови, что стало причиной ложноположительного результата теста.
Довольно часто такой результат тестирования регистрируется у беременных женщин, поэтому без повторного анализа, подтверждение заболевания у такого пациента, не проводится.
Причиной отклонений от нормы становится изменения в организме женщины, которая ждет ребенка. В этот период у нее происходит перестройка внутренних органов, что выражается в следующих процессах:
- изменяется гормональный фон;
- в крови формируются специфические белки, вследствие чего меняется ее состав;
- уровень цитокинов увеличивается.
Помимо перечисленных факторов, влияющих на итоги иммуноферментного анализа, нужно отметить ошибки медицинского персонала, приводящие к обнаружению ложноположительных выводов тестирования:
- недостаточная квалификация персонала, проводящего забор биологического материала;
- сбои в функционировании лабораторного оборудования;
- подмена проб по халатности;
- ненадлежащее хранение биологического материала (нарушение температурного режима).
При проведении иммуноферментного анализа следует учитывать, что пациент мог недавно получить прививку против гриппа, гепатита или столбняка. Этот факт нужно обязательно довести до сведения лечащего врача или медицинского персонала в лаборатории, чтобы была назначена другая дата исследования.
Что делать, если результат положительный
Регистрация антител в биологическом материале пациента, указывающая на присутствие вируса гепатита С в организме, не всегда является окончательным диагнозом заболевания. Ложноположительные результаты иммуноферментного анализа нередки, и повторные тесты часто опровергают первоначальные выводы.
При положительных анализах нужно обратиться к гепатологу
Нужно понимать, что ИФА тест дает возможность выявить количественные и качественные изменения в биологическом материале человека и определить характер течения заболевания. Делать окончательное заключение об инфицировании гепатитом С можно только после комплексного изучения состояния пациента с применением других лабораторных и инструментальных исследований.
Если положительный результат выявлен надлежащим образом, человеку следует отправиться к специалистам: инфекционисту и гепатологу. Только профильный врач сможет определить, какие тесты необходимо пройти дополнительно до назначения курса терапии
По данным медицинской статистики, в мире инфицировано гепатитом С почти 4% населения, но этот показатель явно занижен, так как многие носители недуга не подозревают о своей проблеме. Поэтому проведение ИФА теста в качестве профилактической меры поможет выявить заболевание на начальной стадии и быстро справиться с болезнью.
Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.
Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.
О чем я узнаю? Содержание статьи.
Что такое ИФА?
Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.
ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.
В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.
Показания к ИФА на гепатит С
Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:
- острых и хронических заболеваниях печени;
- желтухе неясного генеза;
- обследовании перед хирургическими вмешательствами;
- стандартном обследовании доноров крови;
- постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;
- прохождении гемодиализа;
- профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;
- незащищенном сомнительном половом контакте;
- рождении детей от инфицированных матерей.
В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.
Как проводится анализ?
За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.
Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:
Виды ИФА
Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:
- По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;
- По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;
- 3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.
При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.
- В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
- Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
- Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.
При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.
- В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
- В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
- В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
- Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.
Расшифровка результатов
Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.
При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).
При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.
Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.
Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.
Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.
ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:
- выполненной накануне вакцинации;
- при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;
- опухолевом процессе;
- инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).
Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.
ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?
Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.
Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.
Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.
Читайте также: