Как отследить хантавирус по крови

Кто из нас уже успел переболеть коронавирусной инфекцией? У кого появляется иммунная защита от CОVID-19 и как долго она сохраняется? Можно ли заболеть дважды? Именно эти вопросы, волнующие сейчас большинство людей в нашей стране и по всему миру, станут предметом нового научного исследования. Его запускают несколько российских биотехнологических компаний с участием ведущих медицинских экспертов.

ПРИБЛИЗИТЬ ЧЕЛОВЕЧЕСТВО К РАЗГАДКЕ ТАЙН КОРОНАВИРУСА

- Как будет выглядеть ваше исследование?

Руководитель научного центра молекулярно-генетических исследований ДНКОМ Андрей Исаев. Фото: YouTube

Участниками исследования смогут стать жители Москвы , Подмосковья , Рязани , Тулы и Курска . В этих городах находятся лаборатории, проводящие тестирование.

- У людей может возникнуть вопрос: с чего вдруг такая щедрость, бесплатный анализ на антитела, о котором многие давно мечтали?

- Как я уже сказал, это именно научное клинико -лабораторное исследование. Его задача, во-первых, собрать фундаментальные данные, которых сейчас нет нигде в мире. Это не преувеличение. Мы будем измерять уровень антител у разных групп людей: тех, кто переболел вирусной патологией в последние 6 месяцев, в том числе выписался из больниц после лечения COVID-19, кто не болел или, возможно, перенес инфекцию бессимптомно. Для этого участники будут заполнять анкеты. И мы проанализируем: как меняется концентрация антител к коронавирусу со временем.

ПОМОЧЬ В РАЗРАБОТКЕ ВАКЦИНЫ И ЛЕЧЕНИИ ТЯЖЕЛО БОЛЬНЫХ

- Во-вторых, по результатам исследования мы хотим получить ответы на прикладные вопросы, - продолжает Андрей Исаев . - Какие показатели говорят о том, что у человека действительно есть иммунная защита от СOVID-19? У кого больше антител: у тех, кто переболел легко или тяжело, или вообще у бессимптомных? Через какое время формируется иммунная защита и как долго она сохраняется? Кто и в какой срок может заболеть повторно?

Все это, с одной стороны, поможет продвинуться в исследовании новой инфекции, разработке вакцины против нее . А с другой стороны, позволит решать насущные проблемы. В частности, врачи смогут понять, в какое время эффективнее всего брать плазму у переболевших СOVID-19 для лечения тяжелобольных. Когда в ней будет оптимальный уровень антител - через неделю или через месяц?

КАКИЕ ТЕСТЫ БУДУТ ИСПОЛЬЗОВАТЬ?

- Да. Но в рамках научного исследования законодательство позволяет использовать и любые другие тесты. Мы будем применять закупленную для исследования высокоточную тест-систему немецкой компании Euroimmun. Она сертифицирована в Европе , и широко применяется по всему миру.

БУДЬ В КУРСЕ

Как это будет выглядеть на практике

Участниками исследования могут стать совершеннолетние, юридически дееспособные мужчины и женщины в возрасте до 65 лет, не болевшие или переболевшие вирусной патологией в последние 6 месяцев.

Чтобы стать участником нужно:

Срок подачи заявки — до 1 мая 2020 года. После заполнения анкеты в течение двух недель вы получите положительный или отрицательный ответ о попадании в исследование.

2. Если вы соответствуете требованиям участия в исследовании, с вами свяжется персональный куратор. Будет названа дата и адрес лаборатории для сдачи анализа крови. Для проведения теста потребуется не больше 10 мл, это одна маленькая пробирка.

3. Сотрудники лаборатории проведут анализ полученного биоматериала на предмет оценки антител к вирусу COVID-19.

4. Все участники получат информацию о личных показателях и результатах исследования.

ВАЖНО

Академик Гинцбург - о старте испытаний вакцин против коронавируса.

Статистика распространения коронавируса в мире на 23 апреля 2020

Заражено
2 692 579 +71 135

Вылечено
738 428 +24 089

Погибло
188 059 +5 070

На 23 апреля 2020 в мире зафиксировано 2 692 579 случаев заражения коронавирусом Covid-19. За последние сутки число зараженных выросло на 71 135 человек.
Общее число смертей от коронавирусной инфекции в мире составляет 188 059 человек, сегодня зафиксировано 5 070 случаев смерти.
В активной фазе болезни находятся 1 766 092 человек, из них 58 304 в критическом состоянии. Уровень летальности: 6.98%.
Подтвержденных случаев полного излечения от вируса на 23 апреля 2020 в мире: 738 428.

Статистика заражений коронавирусом по регионам России на 23 апреля 2020

Статистика заражений коронавирусом по странам на 23 апреля 2020

Коронавирус Covid-19 - симптомы и профилактика

Коронавирус Covid-19 – это опасное вирусное заболевание, которое за короткие сроки поражает желудочно-кишечный тракт и дыхательные пути человека, вызывая обширную пневмонию. Коронавирус относится к зоонозным вирусам, что означает, что такой вирус может передаваться не только от человека к человеку, но и от животного к человеку. А первичным источником коронавируса считается мутация, ключом к которой явились именно дикие животные.
Штамм вируса Covid-19 легко передается воздушно-капельным путем. Коронавирусу подвержены люди всех возрастных групп, а в особенной группе риска – люди с ослабленным иммунитетом, сахарным диабетом, астмой. Только за последние несколько месяцев этот смертельный вирус уже унёс жизни более 3000 человек, а число заражённых превысило 90 000 человек.

боль в мышцах и суставах;
частое чихание;
усиливающийся озноб тела;
боль и першение в горле;
затрудненное дыхание;
сухой, нерезультативный кашель.

Как и большинство респираторных инфекций, инкубационный период для коронавируса, как правило, составляет не более 10 дней. В некоторых случаях инкубационный период может быть увеличен до 14-16 дней, а в случае заражения от животного - до 21 дня. Всё это время, не имея никаких симптомов, человек может инфицировать других.
Протекает заболевание практически также, как и грипп или иная вирусная инфекция со всеми типичными признаками. На первом этапе заражения симптомы схожи с ОРВИ, но с каждым днём состояние зараженного ухудшается, температура повышается. Обнаружив эти симптомы у себя, ни в коем случае не занимайтесь самолечением или вовсе бездействием. Оставайтесь дома и вызывайте врача. При своевременном лечении выздоровление наступает уже через 5-6 дней.

На сегодняшний день вакцина от коронавируса не изобретена, но придерживаясь некоторых несложных правил можно уберечь себя и близких от заражения:

одно из самых важных правил – регулярное мытье рук;
используйте дезинфицирующие средства для рук в случае невозможности их тщательного мытья;
не касайтесь слизистых оболочек, в частности носа и рта руками;
не контактируйте с дикими животными, даже белками, собаками и кошками;
используйте влажные салфетки, когда кашляете и чихаете;
регулярно очищайте свое рабочее место и предметы к которым прикасаетесь (дверные ручки, клавиатура, смартфон);
в общественных местах старайтесь близко не контактировать с потенциально заразными людьми;
проветривайте помещение несколько раз в день;
разговаривайте с детьми и объясняйте почему так важна гигиена.

В целом, при грамотной политике власти, соблюдении правил карантина гражданами и своевременном лечении заразившихся, пандемия вируса Covid-19 не сможет нанести непоправимый урон человечеству.

Хантавирусы представляют собой одноцепочечные вирусы с отрицательным РНК-геном. Они относятся к семейству Буньявирусов, которые могут убивать людей. Хантавирусы обычно заражают грызунов, и не вызывают заболевания у этих хозяев. Люди могут заразиться хантавирусами через контакт с мочой грызунов, слюной или фекалиями. Некоторые штаммы хантавирусов вызывают потенциально смертельные заболевания у людей, такие как геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) и хантавирусный легочный синдром (ХЛС), также известный как хантавирусный сердечно-легочный синдром.

Грызуны переносят хантавирус

По данным Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC), крысы и мыши во всем мире распространяют более 35 различных заболеваний, которые могут воздействовать на людей. (1) Грызуны часто передают эти инфекции и заболевания людям, когда кто-то бессознательно вступает в контакт с фекалиями грызунов, мочой или слюной, или реже при укусах грызунов.

Единственным фактором риска заражения передаваемым грызунами вирусом под названием хантавирус, является заражение грызунами в вашем доме и возле него. Возможно, вы не подозреваете, что вам угрожает хантавирус или другие виды заболеваний, передаваемых грызунами. Но исследования показали, что многие заражавшиеся люди, не знали об их контакте с грызунами или их пометом, пока не становилось слишком поздно.

У людей, которые в основном здоровы, хантавирус обычно не вызывает каких-либо серьезных или длительных симптомов. Но у людей с нарушенной иммунной системой это, к сожалению, не всегда так. Раннее начало лечения, если вы испытываете симптомы хантавируса, имеет решающее значение, поскольку этот вирус может вызывать осложнения, если его не начать лечить вовремя. Ранние признаки и симптомы могут включать проблемы с дыханием, мышечные боли и симптомы, связанные с лихорадкой. Если вирусная инфекция продолжает ухудшаться, она может перейти в опасное для жизни состояние, под названием хантавирусный легочный синдром (ХЛС). (2)

Что такое хантавирус?

Хантавирус под микроскопом

Хантавирусы относятся к семейству Буньявирусов. Они переносятся грызунами и землеройками, особенно коричневыми крысами, обитающими по всему миру. Существует ряд штаммов хантавирусов, которые передаются от нескольких видов грызунов, обитающих в разных частях мира, особенно в городах, расположенных вдоль побережий в России, Соединенных Штатах, частях Канады, Азии и Мексики.

Разные типы штаммов хантавируса связаны с различными заболеваниями и симптомами. Было обнаружено, по крайней мере, семь типов патогенных хантавирусов Старого Света, которые вызывают болезни у людей, и один основной тип хантавируса Нового Света.
Хантавирусы включают серотипы: Син Номбре, Вирус Хантаан, Вирус Сеул, Вирус Пуумала и Вирус Добрава-Белград. (4)
Тип, называемый хантавирус Син Номбре, был впервые признан в 1993 году. Это один из нескольких хантавирусов Нового Света, который вызвал инфекции в Соединенных Штатах Америки.
Тип, называемый вирус Сеул, является типом Старого Света, который продолжает вызывать инфекции во всем мире, в том числе в городских районах. В отчете за 2014 год, опубликованном в American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, говорится, что вирус Сеул ранее назывался вирусом T Он вызывал болезни в южной части США, особенно вблизи Нового Орлеана, по крайней мере с 1980-х годов. (5) В 2014 году, когда исследователи захватили 178 грызунов, чтобы проверить их на вирус Сеул, около 3% проверенных животных оказались заражены этим вирусом.

Насколько хантавирусные инфекции распространены?

Признаки и симптомы хантавируса

Многие люди, заражающиеся хантавирусом Нового Света, могут полностью выздороветь, не испытывая каких-либо долгосрочных осложнений или симптомов хронической инфекции. Количество времени, которое требуется на восстановление, зависит от того, насколько здоровым является человек, особенно зависит от силы его иммунной системы. Некоторым людям с ослабленной иммунной системой может потребоваться больше времени для восстановления или полного избавления от вирусной инфекции.

При заражении вы можете испытывать следующие симптомы хантавирусов:

Инфекция легких, затрудненное дыхание и респираторный дистресс.
Повышение температуры тела, слабость, мышечные боли, тошнота, рвота, лихорадка и озноб.
Симптомы, связанные с геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ГЛПС). ГЛПС также иногда называют корейской геморрагической лихорадкой, эпидемической геморрагической лихорадкой и вирусной геморрагической нефропатией. Симптомы ГЛПС включают сильные головные боли, боль в спине и брюшной полости, лихорадку, помутнение зрения, покраснение лица, воспаление или покраснение глаз, или сыпь.
Некоторые люди с ГЛПС также испытывают низкое кровяное давление, острый шок, кровоизлияния и острую почечную недостаточность. Вирус Сеул обычно приводит к более мягкой форме ГЛПС и часто не вызывает кровоизлияний или очень серьезных симптомов.

Осложнения, связанные с инфекцией хантавируса:

Сильный кашель, вызывающий слизь/выделения
Одышка
Заполнение легких жидкостью
Сердечно-сосудистые проблемы, включая низкое кровяное давление и снижение работоспособности сердца

Было обнаружено, что до 30-50% людей, у которых развивается ХЛС, не выживают. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) является менее серьезной. Это состояние приводит к смерти примерно 1-15% инфицированных пациентов в зависимости от специфического штамма вируса.

Причины и факторы риска заражения хантавирусом

Люди заражаются хантавирусом после того, как они вступают в контакт с инфицированными хантавирусом грызунами, их зараженной мочой и/или пометом. Вирус передается через распыленную мочу или воздействие пыли из гнезд зараженных грызунов. Зараженная моча или другие материалы могут проникать в повреждения на коже или попадать на слизистые оболочки глаз, носа или рта.

Какие типы грызунов способны переносить хантавирус? К ним относятся следующие виды грызунов: (7)

Грызуны, которые переносят хантавирусы, встречаются почти во всех городах мира, особенно в перенаселенных и загрязненных городах, расположенных близко к воде (портовые города), что увеличивает риск избыточного присутствия грызунов.

В глобальном масштабе, повышенная концентрация грызунов в городах наблюдается в некоторых районах Скандинавии, Западной Европы, Западной России, Восточной Азии, США и особенно в городах Китая и Кореи.

Может ли хантавирус передаваться от одного человека другому (другими словами, заразен ли хантавирус)?

Научные данные показывают, что хантавирус, вероятно, не передается от человека другим людям. Он передается только от грызунов людям. На сегодняшний день CDC заявляет, что не было обнаружено никаких случаев хантавируса, которые были получены от контакта с другим инфицированным человеком. В больницах, где медсестры и врачи работают с пациентами, инфицированными хантавирусом, не было сообщений о том, что у рабочих развилась болезнь или ее симптомы сами по себе.

Существуют некоторые передающиеся грызунами заболевания, способные косвенно влиять на людей, которые распространяются от клещей или блох, переносящих вирус. Но доказательства показывают, что это не похоже на хантавирус. Также возможно, что инфицированная крыса носитель вируса, может укусить других животных, таких как кошки, собаки, свиньи и крупный рогатый скот. Но ни о каких случаях хантавируса у людей, связанных с контактом с другими животными, пока не сообщается.

Стандартные методы лечения хантавируса

К сожалению, в настоящее время нет методов лечения, способных помочь людям преодолеть хантавирусную инфекцию. Одна из причин, по которым ученые не смогли разработать вакцину или лечение хантавируса, заключается в том, что каждый раз, когда вирус передается от первоначального носителя другому носителю, он адаптируется к своей новой среде. Он мутирует и меняет форму, так как он проникает в РНК хозяина.

Если у пациента предположительно обнаружен хантавирус, то его следует лечить сразу же, в идеале, в отделении интенсивной терапии в больнице. В зависимости от того, насколько серьезны симптомы пациента, их обычно лечат одним или несколькими из следующих способов: (8)

Интубирование и кислородная терапия, чтобы помочь пациенту справиться с респираторными симптомами и попытаться предотвратить возникновение осложнений.
Контроль уровней жидкости и электролита (натрий, калий, хлорид) для предотвращения обезвоживания или отека.
Коррекция уровня кислорода и артериального давления.
Внутривенное введение рибавирина — противовирусного препарата, который может помочь снизить риск осложнений ГЛПС. Рибавирин используется для лечения многих типов вирусов, включая вирус гепатита С и других. Однако он не всегда эффективен, вызывает ряд побочных эффектов и не очень хорошо переносится людьми с некоторыми существующими проблемами со здоровьем, в том числе: аллергия, аутоиммунный гепатит, нарушение функции печени, заболевание почек, серповидноклеточная анемия или талассемия майор.

3 Совета по профилактике хантавируса

Существуют некоторые важные действия, позволяющие предотвратить заражение хантавирусом, а также снижающие урон организму при заражении.

Есть определенные шаги, которые вы можете предпринять, чтобы устранить (или, по крайней мере, значительно свести к минимуму) контакт с грызунами и их пометом, особенно в местах, где вы проводите много времени, например, дома или на рабочем месте. Возможно, вы даже не подозреваете, что очень часто вступаете в тесный контакт с грызунами или их пометом. Но исследования показывают, что многие люди, которые заразились хантавирусом, не подозревали, что они подвергаются риску или воздействию грызунов очень часто, прежде чем заболеть. Предотвращение заражения грызунами является наиболее важным, если вы живете в зоне повышенного риска, где обитают грызуны-носители.

Эксперты рекомендуют принять некоторые из следующих мер предосторожности в вашем доме и в других местах, где вы проводите время:

Заделайте любые отверстия или щели в стенах дома или в гараже. Таким образом, грызуны и насекомые не смогут проникнуть в ваш дом. Маленькие мыши могут протискиваться через крохотные отверстия в стенах и полу, величиной с маленькую монетку. Крысы также могут попадать в помещение через относительно небольшие отверстия!
Вот некоторые места, где вы можете обнаружить небольшие щели или отверстия внутри/вокруг вашего дома: под или за кухонными шкафами, холодильниками, трубами, стиральными машинами, водонагревателями, котлами и плитами; вокруг печей или каминов; вокруг дверей, напольных и настенных вентиляционных отверстий; внутри чердаков, подвалов.
Также неплохо разместить мышеловки в вашем доме и вокруг него, чтобы снизить риск заражения. Некоторые считают, что мышеловки лучше всего работают, когда вы кладете небольшое количество пищи на нее для приманки. Вы также можете завести домашнюю кошку, которая, как правило, отпугивает грызунов от входа в ваш дом.

Не оставляйте продукты, мусор или объедки вокруг вашего дома, так как они привлекают грызунов и других животных.
Если вы проводите время снаружи, например, отдыхая или делая шашлыки на заднем дворе, всегда убирайте любые отходы и продукты.
Если вы подозреваете, что грызуны пробираются в ваш дом или присутствуют во дворе, примите меры, чтобы как можно быстрее избавиться от них.

Крепкая иммунная система может не полностью защитить вас от заражения хантавирусом. И нет никаких добавок, трав или лекарств, которые смогут полностью вылечить вас, если у вас уже есть хантавирусная инфекция. Но укрепление вашего иммунитета должно помочь вам быстрее восстановиться и снизить вероятность развития серьезных осложнений. Вот несколько способов, позволяющих усилить защиту от симптомов хантавируса или помочь справиться, если вы уже заражены:

Противовирусные растительные средства, которые поддерживают иммунную систему, такие как полынь, черный орех, эфирное масло или добавки орегано, чеснок, бентонитовая глина, активированный уголь и экстракты семян грейпфрута. Как действуют противовирусные растительные средства? У них есть ряд механизмов и защитных эффектов. К ним относятся: лечение инфекций (как правило, при отсутствии каких-либо побочных эффектов, в отличие от антибиотиков); повышение иммунной системы, помогая организму атаковать вирусные патогены; помощь организму бороться с патогенами, которые мутируют с течением времени; поддержка сердечно-сосудистой и пищеварительной систем; противовоспалительная активность.
Если вы имеете дело с симптомами лихорадки, такими как тошнота или рвота, попробуйте есть мягкие продукты, пить имбирный чай и есть продукты с высоким содержанием влаги, чтобы предотвратить обезвоживание. Питьевая вода также важна, если вы испытываете диарею и рвоту из-за лихорадки. Продукты с высоким содержанием влаги включают все виды фруктов и овощей, особенно листовую зелень, дыню, помидоры, огурцы, сельдерей, ягоды, яблоки и т.д. Продукты для восстановления электролитов также включают бананы, авокадо, зелень и другие некрахмалистые овощи. Это не должно заменять посещение к врачу или получение профессиональной медицинской помощи для восстановления уровней электролита, если это необходимо; скорее, подумайте об этом как о дополнительном методе восстановления организма.
Если вы чувствуете усталость или слабость, постарайтесь больше отдыхать, чтобы поддерживать организм во время выздоровления. Плюс держитесь от любой повышенной физической активности, пока вы не почувствуете себя намного лучше.
Некоторые добавки могут также помочь вам чувствовать себя лучше, в том числе: омега-3 жирные кислоты для уменьшения воспаления; витамины группы В, чтобы помочь предотвратить усталость; магний, чтобы помочь вам спать и уменьшить мышечные боли; и адаптогенные травы, такие как лекарственные грибы, чтобы помочь вам преодолеть заболевание.

Меры предосторожности если вы думаете, что заражены

Эксперты предупреждают, что людям, которые потенциально могли в той или иной мере контактировать с грызунами, и испытывают признаки или симптомы хантавируса, включая лихорадку, глубокие мышечные боли и сильную одышку, необходимо сразу получить неотложную медицинскую помощь. Когда подозревается хантавирусная инфекция, пациент должен сообщить своему врачу, что они подвергался воздействию грызунов. Таким образом, врач может проверить его на вирусную инфекцию, переносимую грызунами, и обеспечить правильное лечение.

Заключительные мысли о хантавирусе

Хантавирусы относятся к семейству Буньявирусов. Эти вирусы передаются от грызунов, живущих по всему миру, людям, соприкасающимся с пометом, мочой и через укусы.
Предотвращение заражения грызунами очень важно. Единственным фактором риска заражения вирусами, передаваемыми грызунами, в том числе хантавирусом, являются грызуны и их помет внутри и вокруг вашего дома.

Не существует никаких методов лечения симптомов хантавируса, таких как лихорадка и серьезные проблемы с дыханием. Но существуют способы помочь обеспечить безопасность вашего дома; повысить вашу иммунную систему с помощью растительных средств и добавок; и лечить такие симптомы, как обезвоживание, затруднение дыхания, боли и низкое кровяное давление.

Владельцы патента RU 2484478:

Изобретение относится к области медицины и касается диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике, иммунологии. Способ включает электрофоретическое определение полипептидного состава антигенного препарата хантавируса, определение антител к хантавирусу в сыворотке крови методом иммуноблот анализа, при этом антитела класса IgG определяют в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) с использованием антигенного препарата, подвергнутого очистке и концентрированию методом изопикнического ультрацентрифугирования в самоорганизующемся градиенте плотности бромида калия. При обнаружении антител класса IgG к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа в медленнопреципитирующих циркулирующих иммунных комплексах диагностируют тяжелые формы геморрагической лихорадки с почечным синдромом на ранних сроках. Предлагаемый способ позволяет повысить эффективность и специфичность обнаружения антител к антигенам хантавируса при геморрагической лихорадке с почечным синдромом и выявить предикторы тяжелого течения заболевания. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС). Может быть использовано в клинической лабораторной диагностике, иммунологии.

Значительный прогресс в лабораторной диагностике ГЛПС наметился после внедрения различных вариантов иммуноферментного анализа с определением антител класса G и М. Эти методы позволяют определить общее количество антител без определения специфических антител к определенным компонентам хантавируса.

В настоящее время для серологической диагностики ГЛПС используется диагностикум производства ИПиВЭ (г.Москва), позволяющий обнаружить антитела класса G к вирусу ГЛПС уже на первой неделе с начала заболевания в реакции непрямой иммунофлуоресценции (1). Однако в данном случае для подтверждения диагноза необходимо протестировать вторую сыворотку, отобранную через 5-7 дней после первой.

Прототипом нашего изобретения является иммуноблот анализ, используемый для выявления антител к различным компонентам вирусов, свободно циркулирующих в сыворотке крови, с использованием в качестве твердой фазы нитроцеллюлозных мембран (НЦМ) (2).

Недостатком этого метода при диагностике геморрагической лихорадки является недостаточная специфичность.

Задачей изобретения является повышение эффективности обнаружения антител к антигенам хантавируса при геморрагической лихорадке с почечным синдромом и выявление предикторов тяжелого течения заболевания.

Поставленная задача достигается тем, что способ включает электрофоретическое определение полипептидного состава антигенного препарата хантавируса, определение антител к хантавирусу в сыворотке крови методом иммуноблот анализа, при этом антитела класса IgG определяют в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) с использованием антигенного препарата, подвергнутого очистке и концентрированию методом изопикнического ультрацентрифугирования в самоорганизующемся градиенте плотности бромида калия. При обнаружении антител класса IgG к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа в медленнопреципитирующих циркулирующих иммунных комплексах диагностируют тяжелые формы геморрагической лихорадки с почечным синдромом на ранних сроках.

Способ осуществляется следующим образом.

Антигенный препарат хантавируса подвергают очистке и концентрированию при помощи изопикнического ультрацентрифугирования в 30% растворе калия бромида при 24000 об/мин в течение 20 часов при 20°С. После окончания центрифугирования содержимое отсасывают со дна пробирки при помощи перистальтического насоса через увикорд. Материал, содержащий максимальное поглощение при длине волны 280 нм, объединяют и проводят электрофоретическую разгонку в 5% растворе агарозы, содержащей 0,1% додецилсулфата натрия. Вырезают фрагменты агарозы, содержащие антиген, элюируют забуференным физраствором. Элюированный антиген подвергают диск-электрофорезу по Laemmli (3) для определения полипептидного состава антигенных препаратов хантавируса.

Электрофорез проводят при комнатной температуре при силе тока 7 мА/пластинка до внедрения белков в концентрирующий гель. Основной режим фракционирования - 30 мА/пластинка. Продолжительность электрофореза составляет 4-6 часов в зависимости от концентрации полиакриламидного геля (ПААГ).

Выявление белкового спектра после фракционирования антигенных препаратов в ПААГ проводят, как после переноса белков на мембранные фильтры, так и непосредственно после электрофореза.

Белки после фракционирования фиксируют в водном растворе, содержащем 40% спирта (этанола или изопропанола-2) и 7% уксусной кислоты в течение суток. Фиксированный гель дважды промывают по 30 минут в дистиллированной воде при постоянном покачивании и проводят окрашивание 0,04% кумаси G-250 в 3,5% растворе хлорной кислоты в течение полутора часов. Затем гель погружают в 5% водный раствор уксусной кислоты для избавления от избытка красителя до полного обесцвечивания фона.

Также проводят дополнительное окрашивание с помощью азотнокислого серебра для выявления полисахаридов и повышения чувствительности окрашивания белковых зон с целью снижения фонового окрашивания и придания полученным дискретам черного цвета. Для этого гель выдерживают 3-е суток в дистиллированной воде при комнатной температуре с ежедневной сменой, далее воду сливают, гель перемешивают в растворе формалина (0,15 мкл на 350 мл H₂O), выдерживают 30 минут при 37°С, дважды промывают дистиллированной водой по 20 минут, погружают в свежеприготовленный окрашивающий раствор на 15 минут (4 мл 20% водного раствора AgNO₃), титруют раствором, содержащим 7,5 мл 0,36% NaOH и 3 мл 10% NH₄OH до полного исчезновения бурого осадка, объем раствора доводят до 100 мл дистиллированной водой, гель дважды промывают дистиллированной водой по 10 минут (350 мл на гель), погружают в проявляющий раствор, содержащий 2,5 мл 1% лимонной кислоты и 1 мл 37% раствора формалина. После появления черного окрашивания гель промывают два раза 5% раствором тиосульфата натрия. Окрашенный гель протоколируют при помощи оптического сканирования.

Для выявления антител класса IgG в сыворотке крови и в циркулирующих иммунных комплексах больных к хантавирусу инактивированный, лиофильно высушенный антигенный препарат хантавируса растворяют в лизирующей смеси, содержащей 1% додецилсульфата натрия и 2-меркаптоэтанола. Антигенный препарат кипятят 3 минуты в водяной бане и разгоняют в 12,5% полиакриламидном геле по Laemmli (3). По окончанию электрофореза гель выдерживают 30 минут в буфере для переноса (0,025М трис, 0,191М глицин, 20% метанол), собирают полусухой сендвич (semi-dry).

Нами проведены исследования динамики образования антител к хантавирусам и определение их диагностической значимости у больных ГЛПС при различных формах тяжести методом иммуноблот анализа.

Для выполнения поставленных задач было обследовано 226 больных ГЛПС. В зависимости от тяжести течения болезни все больные были разделены на 3 группы. Первую группу составили 24 человека с легким течением болезни, вторую группу - 105 человек со среднетяжелым течением и третью группу - 97 человек с тяжелым течением.

Результаты исследований частоты выявления спектра хантавирусных антител класса IgG у больных ГЛПС методом иммуноблот анализа представлены в таблице 1.

Результаты анализа на наличие серологических маркеров хантавируса у больных различными формами тяжести ГЛПС показали, что частота выявления антител класса IgG к поверхностным белкам (молекулярной массы 58 кДа и 72 кДа) в сыворотке крови и в составе ЦИК-1 у наблюдаемых больных была 100%, носила стабильный характер и не зависела от тяжести инфекционного процесса (табл.1).

Антитела к нуклеокапсидному белку 45 кДа не были обнаружены ни в одной из тестируемых сывороток, как в свободном виде, так и в составе ЦИК-1.

Анализ выявления специфического спектра антител в составе ЦИК-2 показал, что доминирует по частоте выявление антител к поверхностным белкам с молекулярной массой 58 кДа, 72 кДа. Тем не менее, каких-либо корреляционных взаимосвязей частоты обнаружения антител и тяжести инфекционного процесса выявлено не было.

Наименьшая частота индикации антихантавирусных антител в ЦИК-2 была к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа. Максимальная частота выявления антител к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа наблюдалась у больных тяжелой формой заболевания, которая составила 100%, начиная с лихорадочного периода.

У больных легкой формой антитела к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45кДа в лихорадочном периоде не определялись, в олигурическом периоде - лишь у 46,1% больных, в полиурическом - у 73,2%. У больных среднетяжелой формой заболевания частота их обнаружения была выше - 37,2%, 66,6% и 78,2% соответственно. Частота выявления антител к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45кДа у больных тяжелой формой заболевания была достоверно выше частоты выявления антител у больных легкой и среднетяжелой формами заболевания (р 9 /л, тромбоцитопения, повышение мочевины - 25 ммоль/л, креатинин - 600 мкмоль/л.

Больному проводили исследование сыворотки на выявление антител класса IgG к хантавирусам в сыворотке крови и в составе циркулирующих иммунных комплексов.

Проводили электрофоретическое определение полипептидного состава антигенного препарата хантавируса (фиг.1), определение антител к хантавирусу в сыворотке крови методом иммуноблот анализа, также антитела класса IgG определяли в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) с использованием антигенного препарата, подвергнутого очистке и концентрированию методом изопикнического ультрацентрифугирования в самоорганизующемся градиенте плотности бромида калия.

В результате проведенного иммуноблот анализа в сыворотке крови в составе ЦИК-1 выявили антитела класса IgG к поверхностным белкам молекулярной массой 58кДа и 72 кДа. В составе ЦИК-2 выявлены антитела класса IgG к белкам массой 45 кДа, 58 кДа и 72 кДа. Выявление антихантавирусных антител подтверждает диагноз ГЛПС. Наличие антител в составе ЦИК-2 к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа в ранние сроки заболевания свидетельствовали о тяжелом течении болезни.

Больная Ф. 27 лет. Поступила на 3 день болезни с жалобами на повышение температуры до 38 С°, головную боль, слабость. Уменьшение диуреза не отмечала. В анализах крови лейкоцитов - 6×10 9 /л, тромбоцитов 190 тыс в мкл, мочевина - 6 ммоль/л, креатинин - 110 мкмоль/л.

Проведено исследование сыворотки крови на наличие антихантавирусных антител в сыворотке крови и в ЦИК методом иммуноблот анализа.

В результате проведенного иммуноблот анализа в сыворотке крови в составе ЦИК-1, ЦИК-2 выявлены антитела класса IgG к поверхностным белкам с молекулярной массой 58 кДа и 72 кДа. Выявленние антихантавирусных антител подтверждает диагноз ГЛПС. Отсутствие в составе ЦИК-2 антител к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа свидетельствовало о легком течении болезни.

Список использованной литературы

2. Иванов А.П. Система иммуноферментного анализа с использованием биотинилированных моноклональных антител для типирования антигенов хантавирусов / А.П.Иванов // Вопр. вирусол. - 1996. - №6. - С.236-265.

3. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the bacteriophage / U.K. Laemmli // - Nature. London. - 1970, T4. V.227, pp.680-685.

1. Способ обнаружения антител к хантавирусу при геморрагической лихорадке с почечным синдромом, включающий электрофоретическое определение полипептидного состава антигенного препарата хантавируса, определение антител к хантавирусу в сыворотке крови методом иммуноблот анализа, отличающийся тем, что антитела класса IgG определяют в циркулирующих иммунных комплексах с использованием антигенного препарата, подвергнутого очистке и концентрированию методом изопикнического ультрацентрифугирования в самоорганизующемся градиенте плотности бромида калия.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при обнаружении антител класса IgG к нуклеокапсидному белку с молекулярной массой 45 кДа в медленнопреципитирующих циркулирующих иммунных комплексах диагностируют тяжелые формы геморрагической лихорадки с почечным синдромом на ранних сроках.

Читайте также: