Молекулярно-генетический анализ гепатита с

Молекулярно-генетическое исследование для определения генотипа вируса гепатита С.

Применяемый набор реагентов может быть использован для диагностики вируса гепатита С и наиболее распространенных на территории России генотипов HCV (1a, 1b, 2, 3a и 4) in vitro.

Вирус гепатита С (ВГС).

Hepatitis C Virus (HCV) Genotyping, HCV Subtype.

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) способен поражать клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты). В основном инфекция передается через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже вероятно заражение половым путем.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остается невыявленным. У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, которая увеличивает риск развития цирроза, печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы. За свое скрытое, но разрушительное действие инфекция получила неофициальное название "ласковый убийца".

ВГС обладает наибольшей вариабельностью среди всех возбудителей вирусных гепатитов и благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Геномы вируса значительно отличаются в разных странах мира и имеют различную чувствительность к препаратам интерферонов.

Существует 6 основных генотипов вируса гепатита С и около 500 субтипов. Наиболее распространен в мире генотип 1 (40-80 %). 1а тип часто выявляется в США, 1b характерен для Западной Европы и Южной Азии. Генотип 2 встречается с частотой 10-40 %. Генотип 3 распространен в Шотландии, Австралии, Индии и Пакистане. ВГС 4 типа характерен для Средней Азии и Северной Африки, генотип 5 – для Южной Африки, 6 – для некоторых стран Азии. В России преобладает генотип 1b, далее с убывающей частотой - 3, 1a, 2, в США – 1a/1b, 2b, и 3a.

Противовирусная терапия, направленная на подавление прогрессирования заболевания, в редких случаях может ускорить развитие осложнений со стороны печени. Это происходит при неправильной оценке клинических и лабораторных показателей. Генотипирование РНК вируса гепатита С позволяет спрогнозировать эффект от планируемой терапии.

Генотип 1 хуже поддается лечению, чем генотипы 2 и 3. Кроме того, биопсию печени важнее провести именно при генотипе 1. Повышенные дозы препаратов интерферона рекомендованы для пациентов с 1-м и 4-м генотипами. Курс терапии у таких пациентов должен быть продлен до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. В случае успешности лечения, которая подтверждается снижением вирусной нагрузки крови ( Для чего используется исследование?

• Чтобы определить необходимость лечения и спрогнозировать течение заболевания.
• Для планирования длительности противовирусной терапии и дозировки лекарств.
• Для прогнозирования эффективности лечения.
• Для принятия решения о биопсии печени.

Когда назначается исследование?

• При обнаружении РНК вируса гепатита С и планировании противовирусной терапии.

Что означают результаты?

Референсные значения: РНК HCV не обнаружена.

При обнаружении указывается генотип:

Результат

Значение

Очень высокий риск хронизации инфекции и развития тяжелых осложнений. Необходимо лечение более высокими дозами интерферона в течение 48 недель.

В большинстве случаев в течение 24 недель достигается планируемый терапевтический эффект.

Труднее поддается лечению, требует доз препаратов, отличных от применяемых при терапии с генотипами 2 или 3.

Что может влиять на результат?

• Генотип вируса гепатита С иногда не выявляется при концентрации вируса в крови менее 1,25*10^3 МЕ/мл.



• Решение о длительности терапии, необходимой дозе препаратов и прекращении лечения может принять только лечащий врач на основании биохимических анализов функции печени, биопсии (при необходимости) и вирусной нагрузки.
• Существует вероятность повторного заражения вирусным гепатитом С другого генотипа из-за отсутствия перекрестного иммунного ответа и стойкого иммунитета.

Количественная ПЦР – молекулярно-биологический анализ, при котором подсчитывается количество генетического материала возбудителя в крови. Исследование на гепатит С (количественно) выполняется после подтверждения диагноза для определения вирусной нагрузки. Полимеразная цепная реакция характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью. Поэтому анализ считается золотым стандартом в диагностике гепатита С.

Что такое количественный анализ на гепатит С

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – анализ, который основан на определении участков РНК или ДНК, специфичных для возбудителя инфекции. В качестве исследуемого материала чаще используется венозная кровь. Тест обладает высокой специфичностью, так как при исследовании плазмы выявляется генетический материал конкретного вируса.

Метод полимеразной цепной реакции впервые был запатентован в 1983 году Кэри Мюллисом. Внедрение в клиническую практику молекулярно-биологического анализа совершило переворот в диагностике бактериальных, грибковых и вирусных болезней.

ПЦР количественный при гепатите С – исследование, при котором подсчитывается количество РНК ВГС (HCV RNA). По результатам определяют вирусную нагрузку, от которой зависят:

1. дозировка медикаментов;
2. продолжительность противовирусной терапии (ПВТ);
3. вероятность осложнений;
4. успешность лечения.

РНК вируса гепатита С (ВГС) обнаруживается спустя 10-12 суток после заражения, когда до первых симптомов еще далеко. Поэтому исследование применяется для ранней диагностики HCV-инфекции.

Когда нужно сдать тест

Молекулярно-биологический анализ назначается при положительном результате скринингового обследования на гепатит – ИФА и качественной ПЦР. Исследование применяется для:

• подтверждения диагноза;

• определения уровня виремии (вирусной нагрузки);

• прогнозирования течения болезни;

• оценки результативности лечения;

• диспансерного обследования после ПВТ.

ПЦР-диагностика рекомендована всем людям с вирусным гепатитом. Точность исследования варьируется в пределах 97-99%, поэтому риск ложных результатов минимален.

Показания для анализа:

• обнаружение антител к вирусу гепатита С (anti-HCV);
• признаки воспаления печени;
• качественное выявление РНК ВГС;
• острый и вялотекущий гепатит;
• микст-гепатиты.

Количественный тест выполняется на всех этапах заболевания. Чтобы оценить результативность терапии, вирусную нагрузку определяют перед, во время и после ПВТ. Если уровень виремии высокий, увеличивается риск цирроза и рака печени. Поэтому для профилактики осложнений назначают антивирусные средства в больших дозах.

Подготовка и сдача крови

Количественный анализ ПЦР проводится в лабораторных условиях. Домашних тестов для выявления числа вирусов в крови не существует.

Объективность результатов зависит от правильности подготовки к исследованию. Чтобы снизить вероятность погрешностей, нужно:

1. сдавать венозную кровь натощак;
2. выполнять процедуру до 12 часов дня;
3. не есть за полсуток до визита в лабораторию;
4. отказаться от газированных напитков и кофе в день обследования.

Забор крови у женщин рекомендуется выполнять за 1-2 дня до менструации. В этот период иммунная защита ослабевает, поэтому сывороточная концентрация возбудителя максимальная.

За 5-7 суток до анализа исключают алкогольные напитки, жирную и острую пищу. Врачи не советуют курить за 2-3 часа до забора крови.

Точность ПЦР-диагностики на гепатит С во многом зависит от правильности сбора и транспортировки биоматериала:

• забор крови осуществляют в условиях процедурного кабинета;
• пользуются только одноразовыми стерильными шприцами;
• для исключения заражения биоматериала соблюдают правила асептики и антисептики.

Контейнер с пробой маркируют в присутствии пациента, после чего отправляют в лабораторию.

Как выполняют подсчет вирионов

Во время количественной ПЦР возбудителя идентифицируют путем обнаружения РНК в плазме крови. Это возможно за счет удвоения участка нуклеиновой кислоты вируса в среде фермента РНК-полимеразы. Во время анализа копируются (амплифицируются) только определенные участки генома.

Подсчет количества РНК вируса гепатита осуществляют в 3 этапа:

1. Выделение генетического материала. Чтобы очистить вирусную РНК от крови и белковых включений, биоматериал пропускают через сорбенты, отмывают в растворе, центрифугируют, а потом обезвоживают. В результате остается осадок с вирусными частицами, который растворяют в специальной жидкости. На выходе получается РНК вируса гепатита в элюенте.
2. Амплификация. Анализ выполняется в приборе-термостате, в котором периодически подогревают и охлаждают пробирки. При одном исследовании делают до 35 циклов, состоящих из 3 фаз: денатурация (разрушение) РНК, отжиг и синтез нуклеиновых кислот матричной цепи. За несколько десятков циклов в пробирке образуется множество фрагментов РНК, достаточное для подсчета количества генетического материала.
3. Электрофорез. Пробирку с копиями вируса гепатита помещают в агарозный гель. Образец подключают к источнику тока, под действием которого фрагменты РНК разделяются. Благодаря электрофорезу копии нуклеиновых кислот становятся различимыми в свете ультрафиолета. Затем с применением специального оборудования подсчитывают количество РНК вируса.

В настоящее время для определения уровня виремии все чаще проводят ПЦР-диагностику в реальном времени (Real-Time PCR). В отличие от стандартного анализа, в образец крови вводят раствор с флуоресцентными метками. Благодаря этому удается подсчитать количество амплифицированной РНК ВГС в реальном времени после каждого цикла.

Результаты количественного определения РНК

Количественная оценка позволяет судить об уровне виремии, то есть активности вирусного процесса. С учетом результатов анализа гепатолог подбирает дозу лекарства, определяет продолжительность терапии гепатита С.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С:

Данные количественной ПЦР, в МЕ/мл	Трактовка
не обнаружено	вариант нормы, вируса в крови нет
менее 150	содержание РНК ниже линейного диапазона концентраций, минимальная вирусная нагрузка
150-3*10 4	низкий уровень виремии
от 3*10 4 до 8*10 5	средняя вирусная нагрузка
более 8*10 5	содержание РНК ВГС выше линейного диапазона концентраций

Вирусная нагрузка – важный показатель, который учитывается при разработке схемы терапии. Если уровень виремии минимальный или низкий, прогноз течения гепатита и результативности ПВТ благоприятный. Ситуация ухудшается при средней и высокой вирусной нагрузке. Такие пациенты подвержены осложнениям – фиброзу, жировому гепатозу, циррозу.

Уровень виремии не отражает степень повреждения печеночной паренхимы или тяжесть течения гепатита. Чтобы определить серьезность изменений в печени, прибегают к инструментальному обследованию – фибросканированию, биопсии и гистологическому анализу.

Сколько по времени делается качественный и количественный анализ и примерная цена

Чтобы провести исследование на гепатит С (качественный и количественный ПЦР-анализ), посетите лабораторное отделение поликлиники, частную клинику или лабораторию. Стоимость диагностики в Москве зависит от:

1. типа анализируемого биоматериала;
2. чувствительности применяемой тест-системы;
3. количества определяемых инфекций.

Примерная стоимость лабораторного анализа

Тип анализа	Цена в рублях
забор крови	170-200
качественная ПЦР	750-1000
количественная ПЦР (реал-тайм)	3800-4000
генотипирование	1350-1400

Анализ ПЦР на гепатит С делается не более 3 часов. Забрать окончательные результаты можно уже в течение 1-2 суток.

Бывает ли ложный результат

Генетический материал возбудителя гепатита выявляется в крови спустя 1.5 недели после заражения. До этого периода содержание РНК ВГС в крови так мало, что ее нельзя обнаружить в лабораторных условиях. Для оценки вирусной нагрузки рекомендуется пользоваться высокочувствительными тест-системами: 150-1*10 8 МЕ/мл.

ПЦР-диагностика – исследование, достоверность результатов которого достигает 97-99%. Искажение данных возможно при:

1. игнорировании правил подготовки к исследованию;
2. нарушении требований антисептики;
3. несоблюдении методики анализа крови;
4. неправильном заборе и хранении биоматериала.

Перед обследованием пациент должен сообщить врачу о приеме медикаментов, так как их компоненты могут влиять на активность возбудителя и результаты исследования.

ПЦР-диагностика – высокоточное исследование, при котором определяют наличие и количество копий возбудителя инфекции. Получение ложноотрицательных результатов почти невозможно. Погрешности выявляются в единичных случаях при диагностике хронического гепатита вне обострения.

Стоимость услуги:

2190 руб.* Заказать

Срок исполнения: 1 - 5 к.д. Заказать Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: ПЦР.

Услуга 030207 заказывается только с исследованием 030202. В случае выявления генотипа 2 вируса гепатита С срок выполнения исследования 030207 увеличивается до 10 к.д.

Генотип ВГС определяет тактику противовирусной терапии. Вирус гепатита С имеет 6 генотипов и большое число подтипов. В РФ распространены по убывающей частоте генотипы 1, 3, 2. Генотип 4 наиболее часто выявляется в Северной Африке, генотип 5 — в Южной Африке, генотип 6 — в Юго-Восточной Азии. На территории РФ циркулируют 1а, 1b, 2a, 2c, 2k, 3а субтипы. Доминирующими на территории РФ являются 1b и 3a субтипы ВГС. От генотипа ВГС зависит тактика терапии и ее эффективность. Гепатит С, вызванный вирусом генотипов 1 и 4, является наиболее неблагоприятным в отношении прогноза эффективности лечения. Согласно современным рекомендациям генотипирование ВГС должно проводиться всем пациентам до начала противовирусной терапии.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

• Больные ХГС до начала противовирусной терапии с целью определения тактики лечения.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения: не указываются.

В зависимости от выявленного генотипа ВГС определяется тактика терапии.

" ["serv_cost"]=> string(4) "2190" ["cito_price"]=> NULL ["parent"]=> string(2) "25" [10]=> string(1) "1" ["limit"]=> NULL ["bmats"]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) "N" ["own_bmat"]=> string(2) "12" ["name"]=> string(22) "Кровь с ЭДТА" > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Кровь с ЭДТА

Подготовка к исследованию:

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: ПЦР.

Услуга 030207 заказывается только с исследованием 030202. В случае выявления генотипа 2 вируса гепатита С срок выполнения исследования 030207 увеличивается до 10 к.д.

Генотип ВГС определяет тактику противовирусной терапии. Вирус гепатита С имеет 6 генотипов и большое число подтипов. В РФ распространены по убывающей частоте генотипы 1, 3, 2. Генотип 4 наиболее часто выявляется в Северной Африке, генотип 5 — в Южной Африке, генотип 6 — в Юго-Восточной Азии. На территории РФ циркулируют 1а, 1b, 2a, 2c, 2k, 3а субтипы. Доминирующими на территории РФ являются 1b и 3a субтипы ВГС. От генотипа ВГС зависит тактика терапии и ее эффективность. Гепатит С, вызванный вирусом генотипов 1 и 4, является наиболее неблагоприятным в отношении прогноза эффективности лечения. Согласно современным рекомендациям генотипирование ВГС должно проводиться всем пациентам до начала противовирусной терапии.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

• Больные ХГС до начала противовирусной терапии с целью определения тактики лечения.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения: не указываются.

В зависимости от выявленного генотипа ВГС определяется тактика терапии.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Исследуемый биоматериал	Кровь венозная (с ЭДТА)
Метод исследования	ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR)
Cрок исполнения с момента поступления биоматериала в лабораторию	4 к.д.

Вирус гепатита С представлен 6 основными генотипами, некоторые из них имеют подтипы, например 1а, 1b. Наиболее часто встречается 1 тип. В зависимости от географического положения выделяют преобладающие в данной стране типы. Так, В России распространены генотипы 1, 3, 2 (в порядке убывания). Наиболее распространенные подтипы — 1в и 3а.

Вне зависимости от конкретного генотипа вирус гепатита С может вызывать достаточно серьезное заболевание, сопровождающее губительным влиянием на печень, кроветворную систему. Гепатит С относят к хроническим инфекционным (вирусным) заболеваниям. Передается инфекция несколькими путями, но основным является, конечно же, гематогенный путь, то есть заражение через кровь (иглы или иные инструменты с элементами инфицированной крови). Также выделяют половой путь передачи, но риск инфицирования повышается в таком случае при непосредственном контакте с кровью (ссадины, трещины, эрозии). Передать вирус гепатит С может и мать-носитель своему ребенку во время родов (что бывает достаточно редко) или во время ухода за ним. Стоит отметить, что вирус не попадает в грудное молоко, поэтому не следует опасаться лактации как пути передачи инфекции малышу.

Так как заболевание чаще всего протекает без выраженной клинической картины, пациенты не предъявляют жалоб и узнают о наличии вируса в организме случайно, инфекцию называют “ласковый убийца”. Действительно, вирус влияет на организм умело маскируясь, при этом в течение длительного времени человек может не замечать никаких изменений в себе и без необходимой лабораторной диагностики может узнать о наличии заболевания уже на поздних стадиях (выраженные изменения ткани печени). В зависимости от фазы болезни выделяют признаки, которые обращают на себя внимание: слабость, повышение температуры тела, тошнота, рвота, изменение цвета мочи, кожные высыпания, зуд при острой инфекции. При хроническом инфицировании вне обострения пациента могут волновать депрессия, слабость, снижение веса, раздражительность.

Учитывая, что заболеваемость гепатитом С каждым годом растет, единственным точным методом диагностики является лабораторная диагностика, например, исследование на выявление всех известных генотипов вируса С.

Определение генотипа вируса гепатита С (HCV) помогает определить прогноз заболевания и тактику противовирусного лечения. Существует 6 генотипов и большое число подтипов ВГС. В России распространены генотипы 1, 3, 2 (в порядке убывания). Наиболее распространенные подтипы — 1в и 3а. HCV генотипа 1 имеет самый неблагоприятный прогноз эффективности терапии. Определение генотипа HCV необходимо проводить всем больным вирусным гепатитом C до начала противовирусного лечения.
Данное исследование заказывается только с услугой

(HCV), качественное определение РНК.
Обращаем внимание, что при выявлении 2 генотипа вируса гепатита С лаборатория проводит дополнительное исследование - определение рекомбинантного генотипа (RF1_2k/1b HCV). Данная информация окажет значительную помощь лечащему врачу в выборе определенной схемы и препаратов противовирусной терапии и будет способствовать более эффективному лечению хронического гепатита С.

В случае выявления генотипа 2 вируса гепатита С срок выполнения исследования может быть увеличен до 10 дней.

Крайне важно вовремя узнать о наличии того или иного генотипа вируса С в организме, сдать анализ на вирус гепатита С. От этого будет зависеть комплекс терапии. Так, противовирусной терапии хуже поддается генотип 1, и лучше 2 и 3. Для решения о длительности лечения врач будет ориентироваться на вирусную нагрузку. При своевременном полной терапии можно ожидать стадию ремиссии без наличия осложнений со стороны органов и тканей. Конечно, в первую очередь во внимание принимаются изменения со стороны печени. На оценке ее состояния также основываются дополнительные методы диагностики активности гепатита.
Показания для проведения исследования:
· В случаях обнаружения вируса гепатита С при помощи иных анализов - выявление РНК качественно, обнаружении антител к вирусу гепатита С. В таких случаях исследования помогает лечащему врачу прогнозировать развитие заболевания, выбрать полный комплекс терапии, решить вопрос о необходимости биопсии печени.
Следует обратить внимание, что при минимальной вирусной нагрузке в ряде случаев исследование может быть затруднено, а результат ложнотрицательным.

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Описание

Генетическое типирование IL28b для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита С — выявление факторов, влияющих на успех лечения, в том числе генетических, составление прогноза эффективности лечения, а также определение сроков лечения, дозы и возможные побочные действия противовирусных препаратов.

Гепатит С
Гепатит С — наиболее тяжёлая форма вирусного заболевания, которая поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).

Основной путь передачи вируса гепатита С — кровь и другие жидкости организма инфицированного человека, трансплацентарным путём, реже половым и парентеральным путём (от матери к ребенку). Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови, заключённые.

Основные клинические проявления гепатита С
Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны: слабость, утомляемость, тошнота, отсутствие аппетита, потеря веса, при циррозе печени может появиться желтуха. Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьёзное пожизненное заболевание. Особо тяжёлый исход хронического гепатита С — цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома.

Гепатит С имеет менее яркую клиническую картину и в большинстве случаев переходит в хронические формы. Чаще всего хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и очень редко — к развитию гепатоцеллюлярной карциномы. С большой частотой возникают аутоиммунные осложнения.

Длительность инкубационного периода от 5 дней до 3 недель. В конце инкубационного периода повышаются уровни печёночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезёнки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В 30% случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Очень редко возникает холестаз. Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печёночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию: HCV+HBV.

Полиморфизмы гена IL28B
Генетические варианты, связанные с функциями определённых цитокинов, влияют на индивидуальные особенности иммунного ответа на данную инфекцию. IL28B представляет собой интерферон-λ-3 и является лигандом цитокинового рецептора II класса. Эти лиганды запускают JAK/STAT сигнальный каскад, активируя синтез 2’,5’-олигоаденилат-синтетазы, который активирует эндо-нуклеазу. Эндонуклеаза, в свою очередь, участвует в процессах стимуляции образования фермента протеинкиназы, который блокирует синтез вирусных белков.

Показано, что полиморфизмы гена IL28B, связаны с вероятностью самопроизвольной элиминации HCV и ответа на противовирусную терапию. Основную роль играют две замены: замена цитозина на тимин (C>T) в однонуклеотидном полиморфизме rs12979860 и замена тимина на гуанин (T>G) в однонуклеотидном полиморфизме rs8099917.

По однонуклеотидному полиморфизму rs12979860 генотип С/С связан с вдвое более высокой вероятностью положительного ответа на лечение интерфероном и рибавирином, в то время как генотипы T/C и T/T в этой позиции связаны с меньшей вероятностью ответа на лечение. Генотип СС преимущественно выявляется среди людей со спонтанным разрешением инфекции. Иммунная система носителей аллелей С/С более способна самостоятельно побеждать вирус. Интересно, что при генотипе С/С, вирусная нагрузка (количество вируса в крови) до лечения выше, чем у носителей аллелей Т/Т.

По однонуклеотидному полиморфизму rs8099917 генотип Т/Т связан со спонтанным разрешением инфекции, независимо от лечения, в то время как генотипы G/T и G/G в этой позиции связаны с меньшей вероятностью ответа на лечение и достижения устойчивого вирусологического ответа. Аллель G в rs8099917 является аллелем риска и ассоциирован с низким уровнем ответа на терапию пегилированным интерфероном и рибавирином.

Положительное предсказательное значение полиморфизма IL28B выше, чем других базовых характеристик, применяемых для прогноза успеха терапии (индекс массы тела, возраст, стадия фиброза и вирусная нагрузка). Однако, у больных хроническим гепатитом с различным клиническим профилем (стадия фиброза печени от 0 до 4, исходный уровень виремии низкий и высокий), что предсказательное значение генотипа пациента по IL28 для достижения устойчивого вирусологического ответа может существенно модифицироваться в зависимости от клинических характеристик и снижаться с 74,4% до 37,3% для пациентов с генотипом rs12979860 С/С. Из этого следует, генетические маркёры необходимо учитывать в комплексе с другими базовыми характеристиками конкретного пациента. Показано, что наибольшее значение полиморфизм IL28B имеет при инфицировании 1 субтипом HCV.

Перед диагностикой не рекомендуется подвергать себя стрессовым ситуациям, принимать спиртные напитки и курить.

Рацион и приём лекарственных препаратов не влияет на результат исследования.

Интерпретация результатов

Для интерпретации результатов генетического тестирования требуется консультация врача-генетика.

ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

Виды ПЦР

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом - 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель - число копий на 1 мл крови (1 МЕ - это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Показания для анализа

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

• У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
• Проводятся скрининговые профилактические исследования.
• Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
• Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
• Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
• У пациента диагностирован цирроз.
• Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

• Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
• Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
• Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
• Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка результатов ПЦР-исследования

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Качественный анализ. Расшифровка

Обнаружено	Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
Не обнаружено	Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

Не обнаружено	Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл	Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
До 8*10^5 МЕ/мл	Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
Больше 8*10^5 МЕ/мл	Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл	Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

Обнаружена РНК определенного генотипа	В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
Обнаружена РНК вируса гепатита С	В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
Не обнаружено	Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
2. Загрязнение образца крови.
3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа - низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Недостатки ПЦР

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области - от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В - от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.