Набор для выявления антител к вирусу лейкоза

3.3. НАСТАВЛЕНИЕ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ВЛКРС) МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)-VERI TEST

УТВЕРЖДЕНО 2 февраля 2004 г., N 13-5-02/0899

1. Общие положения

1.1. Набор предназначен для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в сыворотке крови и в молоке крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа (ИФА).

1.2. Набор включает следующие компоненты:

- две полистироловые 96-луночные микропанели с адсорбированными в лунках специфическим антигеном gp51 ВЛКРС (нечетные ряды) и контрольным отрицательным антигеном (четные ряды);

положительные контроли:

- флакон N 1: специфическая сыворотка крови, содержащая антитела к gp51 ВЛКРС - прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета, 0,1 см - 1 флакон;

- флакон N 3: молоко, содержащее антитела к gp51 ВЛКРС, - жидкость белого цвета, 2,5 см - 1 флакон;

отрицательные контроли:

- флакон N 2: нормальная сыворотка крови - прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета, 0,1 см - 1 флакон;

- флакон N 4: молоко, не содержащее антител к gp51 ВЛКРС, - жидкость белого цвета, 2,5 см - 1 флакон;

- флакон N 5: промывочный буфер (ФСБТ, фосфатно-солевой буфер, содержащий 0,05% твина) - концентрированный 20-кратный раствор - бесцветная прозрачная жидкость, 25 см - 3 флакона; или таблетка, рассчитанная на 500 см буфера, - 4 шт.;

- флакон N 6: буфер для разведения образцов (БР) - бесцветная прозрачная жидкость, 20 см - 1 флакон;

- флакон N 7: конъюгат (моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченные пероксидазой), лиофильно высушенный, - 2 флакона, каждый из которых содержит таблетку белого цвета;

- флакон N 8: субстрат - раствор тетраметилбензидина (ТМБ), содержащий перекись водорода, бесцветная прозрачная жидкость, 20 см - 1 флакон;

- флакон N 9: стоп-раствор, раствор для остановки реакции - бесцветная прозрачная жидкость, содержащая H SО , 10 см - 1 флакон.

1.3. На флаконах с компонентами должны быть этикетки с указанием предприятия-изготовителя и его товарного знака, наименования компонента, количества во флаконе, номера серии, даты изготовления (месяц, год).

1.4. Компоненты набора упаковывают в картонные коробки с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих целостность флаконов. На коробке должна быть этикетка с указанием наименования и товарного знака предприятия-изготовителя, полного названия набора, номера серии и контроля набора, срока годности, условий хранения и обозначения ТУ.

1.5. В каждую коробку вкладывают наставление по применению набора.

1.6. Набор рассчитан на анализ 44 испытуемых проб на каждой микропанели.

1.7. Срок годности компонентов набора - 12 мес. с даты изготовления при хранении их в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С. Не допускается замораживание компонентов!

1.8. Флаконы без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета подлежат выбраковке.

2. Принцип метода

2.1. Антиген gp51 ВЛКРС, иммобилизованный на поверхности лунок полистироловой микропанели с помощью специфических моноклональных антител, связывается с антителами, присутствующими в исследуемом материале, формируя при этом комплекс антиген - антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом (моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченные пероксидазой), фермент которого после добавления субстрата вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. При этом интенсивность окраски в лунке микропанели пропорциональна содержанию ВЛКРС-специфических антител в исследуемой пробе.

Код	Наименование услуг	Цена, руб.	Доступность экспресс	Ед. измер.	Материалы	Заказать
4293	АТ к вирусу лейкоза КРС (ИФА)	600 p (Время исполнения 3-5 дней)	1 исслед.	S P N V C

Цель исследования:
Тест предназначен для выявления в организме крупного рогатого скота антител к вирусу лейкоза КРС.
Преимущество данного теста в том, что есть возможность диагностировать антитела в сливных пробах молока от коров.
Результат оценивается в сравнении с пороговым коэффициентом = 1,0. Образцы считаются положительными (т.е. содержащими антитела к вирусу лейкоза) при значении оптической плотности больше величины порогового коэффициента

Диагностическая значимость:
Тест должен использоваться для подтверждения результатов, полученных экспресс методами, а также для верификации сомнительных результатов, полученных другими методами, не основанными на определении активности антител (например ПЦР).

Метод исследования:
Сендвич-вариант твердофазного иммуноферментного анализа;
Принцип непрямого варианта ИФА заключается в выявлении комплекса, образованного антигеном, иммобилизованным с помощью моноклональных антител на поверхности лунок полистиролового планшета и специфическими антителами, содержащимися в пробах сыворотки крови или молоке крупного рогатого скота. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым конъюгатом моноклональных антител к IgG крупного рогатого скота с пероксидазой и обнаруживается по изменению окраски раствора в результате химических превращений субстрата и хромогена. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации специфических антител в исследуемой пробе.

Требования к взятию материала: 1. Сыворотка. Кровь в пробирке для биохимии (с активатором свертывания или гранулами) или пустой пробирке - мин. объем 1 мл. Сыворотка- мин.объем 150 мкл. Без признаков гемолиза и бактериальной контаминации. 2. Плазма. Кровь в пробирке с ЭДТА - мин.объем 1 мл, или плазма - мин. объем 150 мкл. Без признаков гемолиза и бактериальной контаминации 3. Молоко, индивидуальные пробы. Объем не менее 5 мл. Рекомендовано брать из обмытого вымени в чистую (по возможности стерильную) посуду 4. Молоко, сливные (пулированные) пробы – допустимо до 50 индивидуальных образцов в пуле, минимальный объем индивидуального образца – не менее 5мл. Пул формируется из РАВНЫХ объемов индивидуальных образцов. 5. Молозиво, индивидуальные пробы. Объем не менее 5 мл. 6. Секрет вымени сухостойных коров, индивидуальные пробы. Объем не менее 5 мл. Стабильность антител в пробах крови и молоке: Допускается хранение образцов при температуре +2-+8 ⁰С в течение 72 ч.

Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, которая протекает бессимптомно или проявляется лимфоцитозом и злокачественными разрастаниями клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются опухоли. Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является РНК–содержащий вирус семейства Retroviridae, классифицированный по морфологическим признакам как онковирус типа С млекопитающих, местом обитания и размножения которого являются лимфоциты. Клинические признаки. В настоящее время нет пород крупного рогатого скота, абсолютно устойчивых к заражению вирусом лейкоза КРС и заболеванию лейкозом. Различают две формы клинического течения болезни: энзоотическую и спорадическую. Энзоотический лейкоз поражает взрослых (5—8 лет) животных и протекает с длительным латентным периодом (до нескольких лет), который характеризуется стойким лимфолейкозом без клинических признаков болезни. Терминальная стадия сопровождается снижением массы тела, молочной продуктивности, увеличением лимфоузлов и заканчивается смертью. Экономический ущерб очень высокий. Спорадический лейкоз встречается редко и в экономическом отношении малоактуален. Поражается молодняк до трех лет. Болезнь протекает в трех формах: ювенальной, тимусной и кожной. Локализация вируса. Вирус локализуется в лимфоидных клетках разных органов, где сохраняется пожизненно (персистирует). В инфицированных лимфоцитах в форме провируса (непродуктивное состояние) вирус защищен от действия вируснейтрализующих антител и может передаваться потомству во время деления клеток. Провирус может изменять экспрессию генов клетки, что приводит к ее трансформации и развитию опухолевой стадии лейкоза. Постоянным признаком инфекции служит продукция специфических антител. Источник инфекции — больные животные. Возбудитель передается со всеми секретами и экскретами, содержащими зараженные вирусом лейкоциты (кровь, молоко, молозиво, сперма, носовая и влагалищная слизь, слюна). Чаще всего вирус передается с кровью. Наибольшую опасность с точки зрения распространения инфекции представляют животные с персистентным лимфоцитозом, у которых доля инфицированных лимфоцитов в периферической крови значительно выше, чем у животных инфицированных, но не достигших гематологической стадии заболевания. Основной путь передачи инфекции в естественных условиях через контаминированные вирусом инъекционные иглы, хирургические инструменты и т. д. при проведении санитарно-ветеринарных мероприятий. Кроме того, вирус может передаваться трансплацентарно (хромосомная или экстрахромосомная трансмиссия) от матери к плоду, алиментарно через молоко и молозиво, а также половым путем через инфицированную сперму. Распространяться инфекция может и кровососущими насекомыми. Метод ИФА позволяет обнаружить специфические антитела у инфицированных животных, начиная с 6-месячного возраста и старше (телята, выпаиваемые молозивом и молоком инфицированных коров, могут получать материнские антитела, которые сохраняются до 6 мес, следовательно при применении серологических методов исследования в этом возрасте могут быть получены ложноположительные результаты). Используется для быстрого скрининга стада на наличие инфицированных животных (допускается исследование в группах со смешиванием сывороток максимум от 10 голов), а так же для подтверждения результатов ПЦР в периоды, когда уровень провирусной ДНК минимален.

Производитель: НИИ ДПБ

Оставить заявку

или проконсультироваться по телефону:

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) (Вариант 1)
В состав набора входят:

две полистироловые 96-луночные микропанели с адсорбированным специфическим антигеном gp51 ВЛКРС;
положительные и отрицательные контроли сыворотки крови и молока;
моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченные пероксидазой (Конъюгат);
неспецифические химические компоненты.

Бесплатное обучение Использованию прибора

Сервисное обслуживание Диагностика, калибровка, поверка, расходные материалы

Доставка по РФ Транспортная компания, самовывоз, транспорт нашей компании

Наглядные пособия:

Видео обзор:

Описание

Оплата

Доставка

Сервис

Набор предназначен для выявления специфических антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в сыворотке крови и в молоке методом иммуноферментного анализа. Для исследования используют индивидуальные сыворотки крови крупного рогатого скота или пробы молока объемом 0,3-0,5 см 3 .

Набор рассчитан на анализ 176 проб (по 88 испытуемых проб на каждой микропанели).

Антиген gp51 ВЛКРС, иммобилизованный на поверхности лунок микропанели, связывается с антителами, присутствующими в исследуемом материале. Полученный иммунный комплекс антиген-антитело выявляется антивидовым конъюгатом, фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и окрашивание содержимого лунок. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию в исследуемом материале специфических антител к ВЛКРС.

Наборы хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С. Не допускается замораживание компонентов.

Мы работаем как с физическими, так и с юридическими лицами, в том числе бюджетными организациями. Принимаем участие в тендерах и государственных закупках.

Для всех наших клиентов предусмотрена гибкая система скидок. Условия предоставления скидок и их размер вы можете уточнить у наших менеджеров.

Контрагент	Способы оплаты	Комиссия	Комментарий
Юридические лица и ИП	Безналичный расчет	Не взимается	Оплата производится путем предоплаты. Для получения счета необходимы реквизиты организации
Бюджетные организации	Безналичный расчет	Не взимается	Предусмотрены следующие формы оплаты: предоплата 30%, остаток 70% по факту поставки; отсрочка платежа в течение 15-30 календарных дней согласно договору поставки. Для получения счета необходимы реквизиты организации
Физические лица	Наличными в магазине, расположенном по адресу: г. Воронеж, Пирогова 87Б	Не взимается	При условия самовывоза и наличие товара на складе.
	Оплатой банковской картой в магазине, расположенном по адресу: г. Воронеж, Пирогова 87Б	Не взимается	При условия самовывоза и наличие товара на складе. Мы принимаем пластиковые карты международных платежных систем МИР, VISA, MasterCard и т.д.
	Безналичный расчет	Сбербанк – 3%

Другой банк – ставка за перевод уточняйте в банке Оплата производится путем предоплаты. Оплата в отделении банка по квитанции ПД-4 или через банкомат Безналичный расчет через Сбербанк Онлайн 3%

Отправка заказа при безналичной оплате производится после поступления денег на наш расчетный счет, о чем мы известим вас по e-mail или по телефону.

1. Выберите товар в ассортименте на нашем сайте.

2. Закажите счет у менеджера, предварительно предоставив ему реквизиты Вашей компании.

Для выставления счета необходимы:
Юридическим лицам/ИП: Точное наименование организации, ИНН, КПП, банковские реквизиты.
Физ. лицо: ФИО, адрес, телефон и e-mail, скан паспорта РФ.

3. Счет обязательно подписывается главным бухгалтером и генеральным директором и передается покупателю в электронном виде. Счета могут быть выставлены как с НДС, так и без НДС.

4. Получив счет, проверьте, пожалуйста, нужный ли Вам товар отражен в счете и реквизиты Вашей компании.

Счет действителен в течение 5-х банковских дней. Если в течение этого времени вы не направили средства в оплату счета, он становится недействительным и Вам необходимо получить новый счет. Датой оплаты заказа считается дата зачисления средств на банковский счет компании.

6. Для оперативной отгрузки заказа рекомендуем сразу после оплаты выслать по электронной почте копию платежного поручения, либо позвонить и проинформировать об оплате, сообщив дату и номер оплаченного счета, сумму оплаты.

Все платежные документы необходимо сохранять до момента получения товара.
Получение заказа производится после оплаты счета при наличии:

Для юридических лиц и ИП: оригинал доверенности с синей печатью или печать. Генеральный директор (руководитель) может получить груз без доверенности при наличии печати организации, паспорта и документа, подтверждающего его полномочия (приказ о назначении на должность, решение учредителя или участников общества).

Если индивидуальный предприниматель работает без печати, доверенность должна быть заверена нотариально. При условии предоставления заранее письма с образцом подписи ИП, доверенность заверяется личной подписью Индивидуального предпринимателя.

Физ.лицо: паспорт РФ, платежное поручение

В случае, если плательщик и получатель разные лица необходимо предоставить копию паспорта плательщика и заполненную доверенность на получение заказа с данными получателя. При получении заказа получателю необходимо предъявить паспорт.

– оригинал счёта,
– товарная накладная,
– счет–фактура при расчете в НДС
– гарантийный талон,
– инструкция по применению.

Доставка заказа осуществляется со склада в Воронеже. Оплата стоимости доставки осуществляется в ТК по факту получения товара. Отгрузка товара для физ. лиц осуществляется на условиях 100% оплаты, для юр. лиц согласно условиям договора.

Отправка со склада осуществляется 2 раза в неделю ВТ и ЧТ

НАБОР ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

СОСТАВ

Каждый набор содержит: - антиген вируса лейкоза; - разбавитель антигена вируса лейкоза; - специфическую преципитирующую сыворотку; - солевую смесь агара; - разбавитель солевой смеси агара.

НАЗНАЧЕНИЕ

Применяют для исследования сывороток крови в реакции иммунодиффузии в геле агара с целью выявления антител против гликопротеидного антигена вируса лейкоза.

ПРИМЕНЕНИЕ

Набор используется для лабораторной диагностики при исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота в соответствии с наставлением по его применению.

ФОРМА ВЫПУСКА

Выпускается во флаконах. В коробке содержится по 4 флакона каждого компонента набора (1000 доз - III вариант комплектации). Возможны варианты комплектации наборов с контрольными сыворотками, указанные в наставлении по применению ( II вариант - по 250 и I вариант – по 1000 доз).

ХРАНЕНИЕ

Препарат сохраняет свои свойства при температуре от 0 до 6 0 С в течение 24 месяца с даты его изготовления.

НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ (Вариант №1 – скрининг)

СОСТАВ

- компонент № 1 - полистироловый 96-луночный цельный или стрипованный планшет для иммуноферментного анализа с иммобилизованным в лунках гликопротеидным антигеном (gp51) ВLV – 2 планшета;
- компонент № 2 - сыворотка крови крупного рогатого скота, содержащая антитела к gp51 BLV (положительный контроль), цельная, прозрачная жидкость соломенно-жёлтого или красноватого цвета, 0,1 см3 – 1 флакон;
- компонент № 3 - сыворотка крови крупного рогатого скота, не содержащая антител к gp51 BLV (отрицательный контроль), цельная, прозрачная жидкость соломенно-жёлтого или красноватого цвета, 0,1 см3 – 1 флакон;
- компонент № 4 - молоко, содержащее антитела к gp51 BLV (положительный контроль), цельное, жидкость белого цвета, 1,0 см3 – 1 флакон;
- компонент № 5 - молоко, не содержащее антител к gp51 BLV (отрицательный контроль), цельное, жидкость белого цвета, 1,0 см3 – 1 флакон;
- компонент № 6 - антивидовой конъюгат (моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченные пероксидазой), концентрированный, жидкость розового цвета, 0,5 см3 – 1 флакон;
- компонент № 7 - концентрат (x 20) буферного раствора для разведения контрольных и испытуемых проб сывороток крови и конъюгата, жидкость красного цвета, 20,0 см3 – 1 флакон;
- компонент № 8 - концентрат (x 20) промывочного буферного раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 20,0 см3 – 2 флакона;
- компонент № 9 - раствор субстрата (Н202), прозрачная бесцветная жидкость, 22,0 см3 – 1 флакон;
- компонент № 10 - раствор хромогена (ТМБ), прозрачная бесцветная жидкость, 0,6 см3 – 1 флакон;
- компонент № 11 - стоп-раствор (0,2 М раствор серной кислоты), прозрачная бесцветная жидкость, 12,5 см3 – 1 флакон.

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (BLV) в сыворотках крови и молоке крупного рогатого скота иммуноферментным методом, мониторинга эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота и проведении оздоровительных мероприятий. Вариант № 1 рассчитан на проведение 184 анализов.

ФОРМА ВЫПУСКА

Компонент №1 (96-луночный планшет) упакован в индивидуальный полиэтиленовый пакет с влагопоглотителем. Остальные компоненты набора расфасованы во флаконы из непрозрачного полиэтилена соответствующей вместимости, с завинчивающимися пробками. Флаконы упакованы в картонные коробки.

ХРАНЕНИЕ

Срок годности компонентов набора – 12 месяцев от даты изготовления при условии хранения и транспортирования набора в защищённом от света месте и температуре от 2 °С до 8 °С. Запрещено смешивать компоненты наборов разных серий и использовать набор по истечении срока годности. Не допускается замораживание компонентов!

НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ (Вариант №2 – верификация)

СОСТАВ

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для подтверждения специфичности антител в пробах сыворотки крови и молока крупного рогатого скота, исследованных с положительным результатом с использованием варианта № 1 ИФА набора, при отрицательных результатах исследования в РИД и как самостоятельный тест. Вариант № 2 рассчитан на проведение 90 анализов.

ФОРМА ВЫПУСКА

ХРАНЕНИЕ

1. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (КРС).

2. Состав набора.

Содержание ингредиента в единице упаковки

Количество единиц препарата в одном наборе, варианты

2. Разбавитель антигена ВЛ

3. Специфическая преципитирующая сыворотка - СПС

4. Отрицательная контрольная сыворотка - ОКС

5. Положительная контрольная сыворотка - ПКС

6. Слабоположительная контрольная сыворотка - СПКС

7. Положительная контрольная сыворотка с антителами к р-24 антигену - ВЛ-ПКСр24

8. Смесь солевая агаровая - ССА

9. Разбавитель ССА

Набор выпускают в четырех вариантах комплектации. Варианты I и III рассчитаны на проведение 1000 исследований, вариант II на 250 исследований, вариант IV рассчитан на 4000 исследований. Комплектация наборов по вариантам осуществляется по согласованию с потребителем.

3. Антиген вируса лейкоза - лиофилизированная гомогенная аморфная масса светло-коричневого цвета с красноватым оттенком. При добавлении разбавителя в объеме, соответствующем объему антигена до высушивания, содержимое флакона полностью растворяется в течение 10 мин без хлопьев и осадка и представляет собой опалесцирующую жидкость темно-красного цвета.

Специфическая преципитирующая сыворотка (СПС) - прозрачная слегка опалесцирующая жидкость светло-желтого цвета или с розоватым оттенком. Допускается наличие небольшого осадка белка, легко разбивающегося при встряхивании.

Разбавитель антигена вируса лейкоза КРС - прозрачная бесцветная жидкость без механических примесей.

Контрольные сыворотки: ОКС, ПКС, СПКС и ПКСр24 представляют собой прозрачные жидкости светло-желтого цвета или бесцветные, образующие пену при встряхивании.

Смесь солевая агаровая (ССА) представляет собой сухую смесь, содержащую два типа частичек: порошок агара и кристаллы хлористого натрия.

Разбавитель ССА - прозрачная бесцветная жидкость.

4. Антиген вируса лейкоза КРС и разбавитель антигена вируса лейкоза расфасовывают по 5 см 3 , а СПС - по 10 см 3 во флаконы вместимостью 10 см 3 . Смесь солевую агаровую и разбавитель смеси солевой агаровой расфасовывают соответственно по 18,6 г и по 20 см 3 во флаконы вместимостью 20 см 3 . Флаконы плотно закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.

Контрольные сыворотки (ОКС, ПКС, СПКС и ПКСр24) расфасовывают по 0,5 см 3 во флаконы вместимостью 10 см 3 или в ампулы вместимостью 2 см 3 . Ампулы запаивают, флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают колпачками.

5. Маркированные флаконы устанавливают в маркированные картонные коробки с разделительными перегородками или любые другие, обеспечивающие их целостность.

Срок годности набора - 2 года с даты выпуска при соблюдении условий хранения.

Хранить набор в сухих, закрытых и темных помещениях при температуре от 2 до 8 °С.

Транспортируют набор всеми видами крытого транспорта в условиях, исключающих замораживание и перегрев выше 25 °С.

В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению набора.

По истечении срока годности препарат не должен применяться.

6. Принцип реакции иммунодиффузии заключается в том, что антигены и антитела, помещенные в лунки, диффундируют в геле агара и при взаимодействии образуют комплекс, который проявляется в виде линии преципитации.

7. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота применяется для исследования сывороток крови в реакции иммунодиффузии (РИД) в геле агара с целью выявления антител против гликопротеидного антигена вируса лейкоза (ВЛ) крупного рогатого скота.

8. Для постановки РИД необходимо смесь солевую агаровую, содержащуюся в одном флаконе, перенести в стеклянную колбу вместимостью 500 см 3 , прилить 20 см 3 разбавителя смеси солевой агаровой (содержимое одного флакона) и 180 см 3 дистиллированной воды (или воды очищенной). Колбу поставить на кипящую водяную баню и выдержать до полного расплавления агара. В каждую чашку Петри внести по 12,5 см 3 расплавленного агара. При комплектации наборов по IV варианту реакцию иммунодиффузии проводить в 1 %-ном агаровом геле, приготовленном на фосфатно-буферном растворе с pH 7,2 - 7,6. Чашки оставить в течение часа с приоткрытыми крышками. При помощи штампа сделать отверстия (лунки) в геле агара, не допуская отслоения геля от дна чашки.

9. В каждой чашке прорезать по 4 фигуры, каждая из которых состоит из 7 лунок (одна в центре, остальные 6 - по периферии). Диаметр каждой лунки 7 мм, расстояние между центральной и периферическими лунками - 3 мм. Образовавшиеся диски геля удалить из лунок канюлей, соединенной с вакуумным насосом (или любым другим способом).

10. Лиофилизированный антиген ВЛКРС во флаконе растворить в 5,0 см 3 соответствующего разбавителя (или 0,85 % раствор натрия хлорида). Антиген растворяется в течение 10 мин без хлопьев и осадка. Растворенный антиген вносят в центральные лунки каждой фигуры.

11. Заполнение периферических лунок СПС можно проводить по одной из схем, приведенных на рисунках 17 и 18. СПС вносят в две диаметрально расположенные периферические лунки (1-й вариант постановки РИД - рис. 17) или в 3 периферические лунки, расположенные через одну (2-й вариант постановки РИД - рис. 18). При выборе заполнения периферических лунок следует учитывать, что 2-й вариант расположения лунок облегчает выявление слабоположителных испытуемых сывороток, однако количество исследований одним и тем же объемом антигена сокращается на 25 % по сравнению с 1-м вариантом.

12. Чашки закрыть крышками и инкубировать при температуре (20 - 26) °С. Через 48 ч осуществить учет реакции.

13. При оценке результатов реакции с испытуемыми сыворотками прежде всего устанавливают специфичность образовавшихся линий преципитации. Специфической считают линию преципитации, которая образуется между лункой с испытуемой сывороткой и антигеном и плавно сливается с контрольной линией, т.е. идентична ей (рис. 19). Неспецифической считают линию преципитации, которая формируется между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном, но не сливается с контрольной линией преципитации, а пересекает ее или упирается в нее, образуя иногда шпору (рис. 20) (реакция неидентичности).

В зависимости от наличия в испытуемых сыворотках специфических антител против вируса лейкоза крупного рогатого скота и формой образовавшихся линий преципитации реакцию оценивают как отрицательную или как положительную.

14. Использование препарата не требует специальных мер предосторожности и не представляет опасности для здоровья человека.

15. Препарат следуют хранить в местах, не доступных для детей.

Читайте также: