Напряженность иммунитета к гриппу птиц
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
от 3 апреля 2006 г. N 105
ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРАВИЛ
ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА A ПТИЦ
В целях повышения эффективности борьбы с гриппом птиц и в соответствии с пунктом 5.2.11 Положения о Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации, утвержденного Постановлением Правительства Российской Федерации от 24 марта 2006 г. N 164 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2006, N 14, ст. 1543), приказываю:
утвердить Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа A птиц согласно приложению.
к Приказу Минсельхоза России
от 3 апреля 2006 г. N 105
ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА A ПТИЦ
1. Область применения
1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к организации лабораторной диагностики гриппа A птиц (далее - грипп птиц).
1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на территории Российской Федерации органами государственной власти, предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.
2. Общие положения
2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее - лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных учреждениях.
2.2. Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в исследуемых объектах ветеринарного надзора:
вируса гриппа птиц;
РНК вируса гриппа птиц;
антигенов вируса гриппа птиц;
антител к вирусу гриппа птиц.
2.3. При проведении лабораторных тестов могут быть использованы методы лабораторных исследований, применяющие:
тесты, утвержденные в установленном порядке;
тесты, которые реализуются с использованием тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке в Российской Федерации.
3. Обязательные требования по отбору проб
для проведения диагностики гриппа птиц
3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.
3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице - владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.
3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с диагностической целью птицы.
3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5 - 10 трупов или патологический материал от 5 - 10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10 - 15 голов, 1 - 10 сборных проб помета от стада.
У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.
Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.
3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25 - 30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).
Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре или в термостате при 37 град. C в течение 1 - 2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16 - 18 часов при температуре 2 - 4 град. C. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные, чистые пробирки.
Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).
Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10 - 15 минут при 1000 об./мин. для осаждения свободных эритроцитов.
Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4 - 10 дней.
3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.
При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3-й группы патогенности.
3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4 град. C.
При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80 град. C.
4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований
4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:
а) для выявления вируса гриппа птиц - биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) - цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции;
б) для выделения вируса гриппа птиц - метод выделения вируса на СПФ - куриных эмбрионах или в культуре клеток;
в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;
иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;
иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее - РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее - ИЭОФ);
иммунохроматографические методы (далее - ИХА);
радиоиммунный анализ (далее - РИА);
непрямая гем- и латексагглютинация;
реакция связывания комплемента (далее - РСК);
г) для обнаружения гемагглютинина (гемагглютинирующей активности) вируса гриппа птиц:
реакция гемагглютинации (далее - РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
д) для обнаружения РНК вируса:
полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР);
ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
е) для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:
ж) для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:
сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
з) для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину.
4.2. Применение иных тестов допускается для получения предварительных результатов.
4.3. Методы проведения лабораторных исследований реализуются на основе утверждаемых в установленном порядке методик проведения обязательных диагностических исследований.
4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца.
Динамика напряженности поствакцинального иммунитета у экспериментальной птицы при гриппе А
Донник Ирина Михайловна Директор ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института (УрНИВИ). Член-корреспондент РАСХН, профессор
Шилова Евгения Николаевна Зав. отделом инфекционной патологии ГНУ УрНИВИ Кандидат ветеринарных наук, доцент
В последние годы большое внимание уделяется профилактике высокопатогенного гриппа птиц, как инфекции, представляющей возможную угрозу человечеству. Одним из наиболее эффективных средств профилактики гриппа А птиц является иммунопрофилактика. Вакцинация, не препятствуя инфицированию птицы, защищает ее от клинического проявления заболевания, увеличивая порог вирусной инфекции, необходимый для инфицирования привитой птицы, а также воздействует на эпизоотический процесс, ограничивая пути передачи и распространение инфекции (Ямникова С.С, Смоленский В.И., Хохлачев О.Ф. и др., 2007).
Как известно, эффективность применения вакцины оценивают по трём показателям: уровню поствакцинального иммунитета, выраженного в установлении протективных титров антител, заболеваемости и смертности птиц при экспериментальном или полевом инфицировании. Согласно "Инструкции по применению вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульгированной" (2006), данная вакцина должна вызывать не менее чем у 80 % вакцинированных птиц накопление в крови антител к вирусу гриппа птиц в титре 1/16 со штаммом вируса, имеющего иную антигенную форму, иммунитет формируется в течение 28 дней после вакцинации.
Установлено, что интенсивность иммунного ответа у животных и птиц может отличаться на разных территориях, в случае, если на организмы влияют разные факторы внешней среды, в т.ч. и неблагоприятная экологическая обстановка (Бектимиров Т.А., Горбунов М.А., Никитюк Н.М. и др., 2001).
В связи с этим, нами проведены исследования напряженности и длительности иммунитета при вакцинации взрослых гусей против гриппа птиц А.
Нами проведена экспериментальная вакцинация разных видов домашней птицы против гриппа птиц А. Птицу содержали в опытных вольерах вивария. Рацион был стандартным на основе комбикорма. Ведение препарата организовывали в отдельном помещении, вынесенном за пределы птицепредприятий.
Вакцинацию гусей проводили разработанной в ФГУ ВНИИЗЖ инактивированной эмульгированной вакциной против гриппа птиц из шт. H5N1 (производство ОАО "Покровский комбинат биопрепаратов"). Вакцину вводили согласно наставлению: подкожно, в дозе 0,5 мл. на голову. Вакцинацию проводили трехкратно, с интервалом в 1 мес.
Для получения сыворотки кровь у гусей брали из яремной вены каждые 10 дней после вакцинации.
Уровень поствакцинальных антител в сыворотке эксперементальной птицы определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием стандартного диагностического набора.
Дополнительно у опытной и контрольной птицы определяли гематологические и иммунологические показатели. В цельной крови выявляли содержание гемоглобина (гемометром Сали), количество эритроцитов и лейкоцитов [И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев, 1980]. Подсчет эритроцитов и лейкоцитов осуществляли одновременно в камере Горяева по методике Фриед и Лукачевой в модификации Болотникова И.А Для характеристики клеточного и гуморального иммунитета (проводили количественное определение Т- и В- лимфоцитов [Л.С. Колабская, 1980].
Исследования проводились в течение 2005-2007 г.
Результаты исследования:
После проведенной вакцинации установлено, что уже через 10 дней во всех пробах сыворотки крови птиц выявляются антитела в протективных титрах. При этом разброс разведений, в которых обнаружены антитела, составляет от минимального - 1/16 до максимального - 1/256 (у 25 % птиц титры составили 1/16, у 8,3% - 1/32, у 16,6% - 1/64, у 16,6% - 1/128, у 33,3% - 1/256).
Однако уже через 30 дней после введения вакцины у гусей отмечено снижение титров антител, при этом у 33% гусей выявлены антитела ниже протективного титра (разведение 1/8). Таким образом, однократное введение вакцины не вызывало полноценную иммунную защиту у 67% птицы через 30 дней после первичной вакцинации.
Первую ревакцинацию птицепоголовья провели через 30 дней (третья декада). Анализ показал, что через 10 дней после ревакцинации было отмечено значительное снижение напряженности иммунитета у гусей. При этом у 33% птиц антитела совсем не выявляли, у 17%титр был ниже протективного (1/8), у 50 % в титре 1/16 - 1/32. То есть, повторное введение вакцины через 30 дней после предыдущей вакцинации (четвертая - пятая декада) искусственно снижает напряженность иммунитета вплоть до исчезновения антител, и птица в этот период становилась не иммунной к возбудителю гриппа птиц.
Через 14-21 день после ревакцинации (шестая декада) отмечали рост титра антител, при этом все 100% вакцинированных птиц имели специфические гемагглютинины в протективных концентрациях (1/16-1/128). Таким образом, после рекомендуемой наставлением однократной ревакцинации у птиц есть резистентность к данным заболеваниям.
После второй ревакцинации (седьмая декада) снижение концентрации антител не происходило, напротив, были отмечены максимальные титры (1/64-1/128), которые удерживались в течение месяца (70-100-й день опыта).
Начиная со 110-го дня опыта (одиннадцатая - двенадцатая декада), отмечено снижение концентрации антител к вакцин¬ному антигену . Также установлено, что в экспериментальной группе вакцинированных против ГП птиц ежемесячно отмечалось наличие, в среднем, 30-40% птиц, не имеющих иммунной защиты к вакцинному антигену, а, следовательно, к возбудителю гриппа птиц А. У остальных птиц концентрация специфических гемагглютининов оставалась низкая, но достаточная для защиты от заболевания (1/16-1/64).
К концу периода наблюдения (через 12 мес. после начала вакцинации) протективные титры сохранялись у 50% поголовья, средняя концентрация антител составила 1/42.
Обобщая полученные данные, можно отметить, что, в це¬лом, всех птиц данной популяции можно было условно разделить на три группы: с высоким уровнем антителообразования, со средним и с низким. При этом, если у птиц после первой вакцинации отмечались высокие титры антител, то и на протяжении всего периода наблюдения они продолжали оставаться высокими (1/128-1/512). Количество таких птиц в экспериментальной популяции было, в среднем, 15% .
У гусей, которые после первой вакцинации показывали низкие значения напряженности иммунитета, после 1 и 2 ре¬вакцинации уровень антител продолжал оставаться низким и, спустя 4-5 мес. после начала опыта, исчезал совсем. Данная группа птиц более половины срока наблюдения оставалась неиммунной после трехкратной вакцинации, их количество составляло, в среднем, 37%. Поголовье птицы, которое показывало средние уровни антителообразования (1/16-1/64), составляло, в среднем, 48%.
При проведении биохимических и гематоиммунологических исследований установлено, что у гусей перед вакцинацией отмечено низкое содержание у-глобулинов, средние значения данного показателя составили 17,6% от среднего содержания (при норме 35-37%). Также у гусей отмечено достаточно низкое содержание тимоцитов и В-клеток (34% и 21 % соответственно), изменение их соотношения (Т/В составило 2,1 у.е.), что свидетельствует об иммунологической недостаточности.
Проведенные исследования показали, что полноценный иммунный ответ на введение вакцины отмечен только после трехкратного введения вакцины с интервалом 30 дней, концентрация защитных антител у птиц удерживалась при этом до 12 мес. в протективных титрах. также необходимо отметить, что в популяции, в среднем, до 40% птиц не формируют иммунитет против ГП.
Заключение: Таким образом, исследованиями установлено, что при вакцинации гусей трехкратно с интервалом 1 мес, в среднем, 37-50% поголовья показывают низкий иммунный ответ на введение вакцины, что выражается отсутствием антител либо уровнем антител ниже протективного уровня (1/8). Данные исследования являются предварительными, поскольку проведены на ограниченном поголовье экспериментальной птицы и требуют дальнейших производственных опытов.
Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Садовников Н.В., Шараевская И.М.
Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Садовников Н.В., Шараевская И.М.
LABORATORy ANALySIS OF AvIAN FLU AND PREvENTIvE vACCINATION AGAINST IT
The purpose of the the research was to study effective diagnostic methods, prophylaxis and control of avian flu , identification of the factors influencing development of resistant immunity to highly pathogenic avian influenza (HPAI). The research has been carried out at the department of an epizootilogy, microbiology, parasitology and veterinary sanitary inspection of the Bryansk State Agricultural Academy. The immunostimulating effect of tincture of purple Echinacea and enzyme “NIST” on development of antibodies and the level of postvaccinal immunity against the avian flu was tested on experimental groups of chickens. To study the immune status of birds we used an immunostimulator, purple echinacea (a dose of 0.5 ml for 40 % of tincture for 1 kg of mass of a bird) and the complex drug “NIST” (1 g of drug on 1 kg of forage). Inactivated virus vaccine against flu of A type of the H5 subtype made of the inactivated influenza virus of the H5N1 subtype and an oil adjuvant was used for immunization. Optimal variants were by practical consideration developed for sampling, works with various pathological material, identification of the received results, as control are used samples with the highpathogenic strain (H5 and H7). As a result, we proved the expediency of use of enzymes and immunostimulating drugs before carrying out vaccination of poultry.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА И ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА ГРИППА ПТИЦ
доктор биологических наук, профессор, уральский государственный аграрный университет
(620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, д. 42)
управление ветеринарии ленинградской области
(191311, г. Санкт-Петербург, ул. Смольного, д. 3)
Ключевые слова: вакцины, грипп птиц, напряженность иммунитета, титр антител, ферментные препараты, иммуностимуляторы.
LABORATORY ANALYSIS OF AvIAN FLU AND PREvENTIvE vaccination AGAINST IT
doctor of biological sciences, professor, Ural State Agrarian University
(42 K. Liebknechta Str., 620075, Ekaterinburg)
I. m. sharaevskaya,
Veterinary Department of Leningrad region
(3 Smolnogo Str., 191311, Saint-Petersburg)
Keywords: vaccines, avian flu, immunity level, antiserum capacity, enzymes, immunostimulators. The purpose of the the research was to study effective diagnostic methods, prophylaxis and control of avian flu, identification of the factors influencing development of resistant immunity to highly pathogenic avian influenza (HPAI). The research has been carried out at the department of an epizootilogy, microbiology, parasitology and veterinary sanitary inspection of the Bryansk State Agricultural Academy. The immunostimulating effect of tincture of purple Echinacea and enzyme "NIST" on development of antibodies and the level of postvaccinal immunity against the avian flu was tested on experimental groups of chickens. To study the immune status of birds we used an immunostimulator, purple echinacea (a dose of 0.5 ml for 40 % of tincture for 1 kg of mass of a bird) and the complex drug "NIST" (1 g of drug on 1 kg of forage). Inactivated virus vaccine against flu of A type of the H5 subtype made of the inactivated influenza virus of the H5N1 subtype and an oil adjuvant was used for immunization. Optimal variants were by practical consideration developed for sampling, works with various pathological material, identification of the received results, as control are used samples with the high-pathogenic strain (H5 and H7). As a result, we proved the expediency of use of enzymes and immunostimulating drugs before carrying out vaccination of poultry.
Положительная рецензия представлена О. Г. Петровой, доктором ветеринарных наук, профессором уральского государственного аграрного университета.
В последние годы эпизоотическая обстановка в мире по гриппу птиц значительно ухудшилась. По данным Всемирной организации здравоохранения животных, в хозяйствах ряда азиатских стран регистрируются массовые заболевания, вызванные высокопатогенным вирусом гриппа А. Такие эпизоотии зарегистрированы в Японии, Республике Корея, Вьетнаме, Таиланде, Камбодже, Тайване, Индонезии, Малайзии, Пакистане, Лаосе, Китайской Народной Республике и Гонконге.
Высокопатогенный грипп птиц (ВПГП) - вирусная остро протекающая крайне контагиозная, пан-тропная, системная болезнь, вызывающая высокую смертность (до 100 %), практически всех домашних, синантропных и диких птиц, возбудителем которой является РНК-содержащий 1п/1ывтау1гш из семейства Orthоmyxoviridae подтипа Н5№. Вирусы гриппа высоко вариабельны и включают быстрое накопление точечных мутаций и реассортацию генов (Ямникова, 2005). На сегодняшний день известно 16 подтипов вируса гриппа А по поверхностному белку гемагглютинину (Н) и 9 подтипов нейраминидазы сочетание этих двух антигенов становится основой паспорта каждого вируса гриппа.
Вакцинация в нашей области используется как один из элементов всесторонней программы по искоренению заболевания, а своевременный серологический контроль - как один из наиболее эффективных путей защиты птицепоголовья от вирусных инфекционных заболеваний и контроля над вирусом. В 2015 году в России было вакцинировано против гриппа 84 млн. 570 тыс. птиц, почти 19 млн. птицы ревакцинировано. Для иммунизации используют инактивированные вирусные или рекомбинантные вакцины, включающие ген агглютинина. Гемаг-глютинин - один из основных структурных белков вируса гриппа, который вызывает выработку вирус-нейтрализующих антител и принимает основное участие в формировании иммунитета у домашней птицы. Иммунизации против гриппа подлежат клинически здоровые птицы любого возраста из частных подворий граждан.
Цель и методика исследования. Целью настоящих исследований явилось изучение эффективных методов диагностики, профилактики и контроля гриппа птиц, выявление факторов, влияющих на выработку стойкого иммунитета к ВПГП.
Для решения поставленной цели были поставлены следующие задачи:
— организовать проведение эпизоотологиче-ского мониторинга и массовых лабораторных исследований материала от дикой и домашней птицы методами ИФА, РТГА и ПЦР с анализом лабораторных исследований;
— изучить особенности различных лабораторных методов диагностики гриппа птиц;
провести массовые серологические исследования у вакцинированного птицепоголовья частного сектора Брянской области против высокопатогенного гриппа птиц Н5№; изучить факторы, влияющие на эффективность вакцинации птицы;
— изучить влияние концентрированного корма НИСТ и настойки травы эхинацеи пурпурной на физиологическое состояние птицы, гематологические показатели крови птицы;
— исследовать влияние иммуностимулирующего препарата настойки травы эхинацеи пурпурной на формирование поствакцинального иммунитета у вакцинированной птицы;
— исследовать влияние полиферментного препарата НИСТ на формирование поствакцинального иммунитета и его однородность;
— разработать рекомендации по диагностике и профилактике ВПГП.
Работа выполнена на кафедре эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветсанэкспертизы Брянской государственной сельскохозяйственной академии. Использованы данные ветеринарных, зоотехнических, экономических отчетов и производственная документация, данные актов вакцинации, экспертиз лабораторных исследований и результаты экспериментов.
Объектом исследования явились: беспородные птицы 7-8-месячного возраста из фермерского хозяйства и личного подворья граждан, в котором не проводилась плановая вакцинация кур до начала опыта. Для получения достоверных результатов опытные и контрольные группы птицы имели одинаковый возраст, породу, упитанность, иммунный статус, условия кормления, содержания, ветеринарное обслуживание, обслуживающий персонал, в ходе опыта все птицы были подвергнуты вакцинации одной серии вакцины, для исследования одновременно были отобраны пробы крови.
3740/65 (Н6Ш), ГП7-А (вирус чумы птиц) Росток/34 (Н7Ш), ГП8-А (индейка) Онтарио 6118/68 (Н8Ш), ГП9-А (индейка) Висконсин 1/66 (Н9Ш), ГП10-А (цыпленок) Германия №/49 (Н10Ш), ГП11-А (утка) Англия /56 (Н1Ш6), ГП12-А (утка) Альберта 60/76 (Н12№), ГП13-А (черноголовый хохотун) Астрахань 142/7 (Н13№); моноспецифические гипериммунные сыворотки к 15 серологическим вариантам вируса гриппа птиц (подтипам Н1-Н15); нормальная сыворотка, не содержащая антител к вирусу гриппа птиц. Коммерческий набор рассчитан на анализ до 100 проб сывороток крови больных и переболевших птиц (ретроспективная диагностика), контроля напряженности иммунитета со специфическими антигенами.
Результаты исследований. Наибольшую опасность в последнее время из подтипов вируса гриппа птиц А представляет (Н5№), который не только нанес огромный экономический ущерб промышленному птицеводству, но и перешел, так называемый видовой барьер. Поэтому при серологическом исследовании большое внимание уделялось реакции торможения гемагглютинации с антигеном ГП (Н5).
Впервые в нашей области изучали напряженность поствакцинального группового иммунитета после применения новой вакцины (высокопатогенный подтип вируса Н5№). При постановке РТГА с особой тщательностью определялась рабочая доза вируса (4 ГАЕ), чтобы не получить заниженные титры сывороток вакцинированных птиц. Реакция была проведена с использованием штамма Н5№, входящим в набор РТГА.
Исследования проводили по утвержденным «Правилам лабораторной диагностики гриппа А
В результате изучения напряженности поствакцинального иммунитета своевременно выдавались практикующим ветеринарным врачам рекомендации, а в соответствии с полученными титрами предлагалась схема корректировки для получения стойкого иммунитета.
Также проводилось экспериментальное скармливание препарата НИСТ и выпаивание настойки травы эхинацеи пурпурной домашней птице, не вакцинированной против гриппа птиц.
В опыте изучалось применение препаратов на двух опытных группах кур, по 10 птиц в каждой, одна группа из 10 кур оставалась контрольной. До начала опыта все три группы птиц поголовно были исследованы на наличие антител к гриппу птиц методами ИФА и РТГА на подтипы Н1-Н13 и был проведен молекулярный анализ образцов (белка яиц,
помета) на наличие РНК вируса гриппа, в результате исследований антител в сыворотке крови к вирусу гриппа птиц не обнаружено, РНК вируса гриппа А не выделена. До начала опыта и по окончании применения препаратов кровь от кур всех трех групп была исследованы гематологически.
Средняя простая величина показателей крови вычислялась по методу Стьюдента: Х ср = сумма х/Ы
После применения ферментного препарата НИСТ в первой опытной группе содержание гемоглобина к крови увеличилось на 5,7 %. Во второй опытной группе после выпаивания настойки травы эхинацеи по окончании опыта показатель крови - гемоглобин - остался на прежнем уровне, а в контрольной группе уровень гемоглобина вырос на 2 %.
В первой опытной группе среднее количество содержания эритроцитов в крови по окончании опыта возросло на 10 %, при этом во второй и в третьей (контрольной) группах осталось на прежнем уровне.
В первой опытной группе средняя величина лейкоцитов в конце опыта практически не изменилась (снизилась на 0,03 %). А во второй опытной группе средняя величина лейкоцитов в конце опыта увеличилась значительно, на 9,697 %, что обеспечило впоследствии качественный показатель уровня поствакцинальных антител. В третьей группе кур количество лейкоцитов после окончания опыта осталось неизменным.
В проведенном опытном исследовании птице первой опытной группы скармливали концентрированный корм вместе с полиферментным препаратом НИСТ.
Птице второй опытной группы скармливали в таком же объеме сухой концентрированный корм и выпаивали настойку травы эхинацеи пурпурной в дозе 0,5 мл на 1 кг массы птицы.
Третья контрольная группа птиц получала сухой концентрированный корм без добавок. Условия содержания всех трех опытных групп были одинаковы.
Через три дня от начала опыта все три группы кур в количестве 30 голов были подвергнуты вакцинации против гриппа птиц. Антигенную активность вакцины оценивали по динамике накопления антител к вирусу ГП у привитых цыплят. На 14, 21 и 28 сутки после вакцинации у привитых цыплят и цыплят контрольной группы брали кровь и получали сыворотки, которые индивидуально тестировали в РТГА.
В контрольной группе 3 пробы сывороток крови имели титры антител от 1:4 до 1:8, что является недостаточным для того, чтобы считать поголовье иммунным. В то же время в первых двух опытных группах вся птица была достаточно иммунной, титры антител в РТГА составили от 1:16 до 1:128.
1 группа (применялся препарат НИСТ) 1st group (NIST) 2 группа (применялась настойка эхинацеи пурпурной) 2nd group (purple echinacea) 3 группа (контрольная) 3rd group (control)
Титр антител в РТГА Antiserum capacity in HIT Титр антител в РТГА Antiserum capacity in HIT Титр антител в РТГА Antiserum capacity in HIT
1:16 - 5 проб 1:16 - 5 tests 1:16 - 2 пробы 1:16 - 2 tests 1:4 - 1 проба 1:4 - 1 test
1:32 - 3 пробы 1:32 - 3 tests 1:32 - 3 пробы 1:32 - 3 tests 1:8 - 2 пробы 1:8 - 2 tests
1:64 - 2 пробы 1:64 - 2 tests 1:64 - 3 пробы 1:64 - 3 tests 1:16 - 3 пробы 1:16 - 3 tests
1:128 - 2 пробы 1:128 - 2 tests 1:32 - 4 пробы 1:32 - 4 tests
100 % напряженность 100 % immunity level 100 % напряженность 100 % immunity level 70 % напряженность 70 % immunity level
Через 28 дней после применения вакцины у птицы всех групп была третий раз взята кровь. Сыворотку крови исследовали на наличие поствакцинальных антител к гриппу птиц подтипа Н5 в реакции торможении гемагглютинации. У кур первой и второй опытных групп результаты вакцинации составили 100 %, в контрольной группе - 70 %, что доказывает усиление действия иммуногенности вирусных вакцин при применении ферментного и иммуностимулирующих препаратов.
Напряженность иммунитета против гриппа птиц Н5 и уровень антител в сыворотке крови птиц в двух первых группах были в титре от 1:16 и выше и составили 100 %, а в контрольной группе кур напряженность иммунитета была недостаточно эффективна и составила лишь 70 %. Следовательно, применение препарата НИСТ и выпаивание настойки травы эхи-нацеи пурпурной могут рассматриваться как перспективный источник для повышения эффективности вакцинных препаратов, они оказывают заметное влияние на иммунную систему птиц и позволяют обеспечить надежную защиту организма при применении вирусвакцин.
1. Проведена сравнительная оценка молеку-лярно-диагностического (ПЦР) и серологических (РТГА, ИФА) методов.
температурной ферментации концентрированных кормов, в процессе которой питательные вещества переходят в легкоусвояемую животными форму, при ферментации содержащиеся в концентрированных кормах полисахариды (целлюлозы, гемицел-люлозы, крахмала) переходят в хорошо усвояемую организмом птицы форму, белки расщепляются до низших пептидов и аминокислот. Антипитательные вещества белковой природы, а также микотоксины -афлатоксин, зеараленон, Т2 - после ферментации не оказывают отрицательного влияния на процесс пищеварения. Подготовка концентрированных кормов к скармливанию по технологии высокотемпературной ферментации обеспечивает увеличение усвоения питательных веществ примерно на 30 %.
3. Итогом работы стало доказательство целесообразности применения ферментов и иммуностимулирующих препаратов перед проведением вакцинации поголовья в птицеводстве. Вакцинация была проведена более эффективно, напряженность поствакцинального иммунитета составила в опытных группах 100 %, в контрольной группе лишь 70 %, следовательно, контрольная группа птиц подлежит ревакцинации. Таким образом, применение препарата НИСТ и настойки эхинацеи пурпурной предотвращает экономические потери на проведение возможной ревакцинации птицы.
1. Маловастый К. С. Грипп птиц : обзор методических рекомендаций для ветврачей Брянской области. Брянск, 2006. 50 с.
2. Шараевская И. М. Стратегия профилактики гриппа птиц // Мат. междунар. науч.-практ. конф. (23-24 мая 2014). Брянск, 2014. С. 76.
3. Шараевская И. М. Актуальные проблемы вакцинации и напряженности иммунитета против гриппа птиц в ветеринарной практике в Брянской области // Ветеринария. Зоотехния. Комбикорма : мат. междунар. спец. конгресса-выставки. СПб., 2013. С. 260.
4. Шараевская И. М., Маловастый К. С. Актуальные проблемы вакцинации против гриппа птиц в ветеринарной практике в Брянской области // Научный журнал Брянской государственной сельскохозяйственной академии. Отдельный выпуск. Брянск, 2007. С. 65-68.
5. Маловастый К. С., Шараевская И. М. Поствакцинальный иммунитет птицы к гриппу // Птицеводство. 2007. № 5. С. 23.
6. Шараевская И. М., Маловастый К. С. Опыт применения оценки поствакцинального иммунитета к гриппу птиц // Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества : сб. науч. тр. международной научно-практ. конф. Брянск, 2007. С. 455 .
7. Ториков В. Е., Маловастый К. С., Шараевская И. М. Эффективность использования эхинацеи // Совершенствование методов профессиональной подготовки врача ветеринарной медицины : мат. Всеросс. сем. Брянск, 2008. С. 20.
1. Malovasty K. S. Avian flu : review of methodical references for veterinarians of the Bryansk region. Bryansk, 2006. 50 p.
2. Sharayevskaya I. M. Strategy of prophylaxis of an avian flu // Proc. of intern. scient. and pract. symp. (May 23-24, 2014). Bryansk, 2014. P. 76.
3. Sharayevskaya I. M. Urgent problems of vaccination and immunity level against avian flu in veterinary practice in the Bryansk region // Veterinary medicine. Zootechnics. Compound feeds : proc. of intern. special congress exhibition. SPb., 2013. P. 260.
4. Sharayevskaya I. M., Malovasty K. S. Urgent problems of vaccination against avian flu in veterinary practice in the Bryansk region // Scientific Journal of the Bryansk State Agricultural Academy. Special issue. Bryansk, 2007. P. 65-68.
5. Malovasty K. S., Sharayevskaya I. M. Postvaccinal immunity of a bird to flu // Poultry farming. 2007. № 5. P. 23.
6. Sharayevskaya I. M., Malovasty K. S. Experience of use of assessment of postvaccinal immunity to an avian flu // Scientific problems of production of livestock production and improvement of its quality : coll. of scient. art. of intern. scient. and pract symp. Bryansk, 2007. P. 455.
7. Torikov V. E., Malovasty K. S., Sharayevskaya I. M. Efficiency of use of echinacea // Improvement of methods of vocational training of the doctor of veterinary medicine : proc. of all-Russian symp. Bryansk, 2008. P. 20.
Читайте также: