Осмотр животного на бешенство

Далеко не каждый человек знает, как себя правильно вести после укуса животного. Некоторые отмахиваются от этой ситуации. Но промедление может стоить человеку жизни. Такое заболевание, как бешенство, не лечится. Однако спасти себя можно, вовремя проведя вакцинацию. Если взрослого или ребенка укусило животное, нужно узнать, как и где сдать анализ на бешенство у человека. Это будет подробно рассмотрено далее.

Общее описание заболевания

Анализ крови на бешенство у человека является практически единственным способом вовремя распознать наличие болезни в организме. Чтобы понимать, насколько серьезными могут быть последствия, нужно рассмотреть особенности этого заболевания. Бешенством называется недуг, вызванный вирусной инфекцией. Она поражает головной, спинной мозг. Без своевременного лечения болезнь приводит к смерти.

Бешенству подвержены все млекопитающие в природе. Вирус передается от одного организма к другому через биологические жидкости. Чаще всего это слюна. Люди в большинстве случаев заражаются вирусом в момент укуса животного. По статистике, чаще всего это бывают собаки, кошки, еноты, кролики, ежи, лисы, летучие мыши и т. д. Практически любое дикое или домашнее животное может быть носителем вируса.

Анализ на бешенство у человека после укуса позволяет выявить вирус еще до появления характерных симптомов. Стоит отметить, что даже если животное не имеет признаков бешенства, это еще не значит, что оно не является носителем инфекции. На первой стадии у него появляется усиленное слюноотделение. При этом появляется четкая боязнь воды. Настроение быстро меняется от угнетенного до агрессивного.

По статистике, в мире ежегодно от этого недуга погибает 55 тыс. человек. В нашей стране за последние 8 лет от бешенства умерло 75 человек. Проблема в том, что заболевание не поддается никакому лечению. Если не были предприняты меры сразу после укуса, смерть неизбежна. Даже при попадании слюны больного животного на слизистые оболочки вирус начинает развиваться в организме.

Протекание болезни

Есть ли анализ на бешенство у человека? Это довольно сложная диагностическая процедура, которая должна быть дифференцирована от других заболеваний. В Московской области, по статистике, основными носителями вируса являются дикие ежи и лисы. Заражение происходит в момент укуса человека, который собирает ягоды или грибы в лесу, а также людей на пикнике. Часто такие звери заражают бродячих собак или домашний скот. Уже от них вирус может передаваться человеку.

В 60 % случаев человек заражается от собак. Гораздо реже вирус передается от кошек (10 % случаев). В 24 % случаев бешенством заражаются из-за укуса лисы. Причем животное может выглядеть нормальным. Оно становится заразным за 3-10 дней до появления первых признаков бешенства.

После попадания в организм вирус стремительно распространяется по нервным стволам, достигая центральной нервной системы. Далее он по тем же путям попадает в периферийные участки. В результате поражается вся нервная система. Вирус по нервным стволам попадает и в слюнные железы, начиная выделяться со слюной. Скорость, с которой он продвигается в организме, составляет около 3 мм/ч.

Активно размножаясь в нервных тканях, вирус вызывает их отек, некротические изменения и кровотечения. Симптомы появляются постепенно. При появлении первых признаков бешенства у человека остается максимум 20 дней до наступления летального исхода. При этом в таком состоянии повлиять на болезнь нельзя. Это необратимый процесс. Только пока болезнь не успела достигнуть центральной нервной системы, ее можно победить путем введения специальных препаратов.

Симптомы

Анализ на бешенство у человека после укуса собаки или иного животного нужно сдать как можно раньше. Однако порой приходится предпринимать срочные меры до того, как будут получены результаты теста. Это заболевание не терпит промедления. Инкубационный период составляет от 30 дней до 3 месяцев. Причем этот процесс индивидуален. Известны случаи, когда инкубационный период длился всего 12 дней или растягивался до 1 года. Это зависит от места укуса или попадания вируса в организм.

Болезнь протекает в 3 стадии. На каждой из них появляются определенные симптомы. Первая стадия называется депрессией. В области укуса появляется жжение, зуд, боли, хотя рана может уже даже зажить. Иногда в этом месте возникает новое воспаление. Температура тела поднимается до 37,2 ºС. При этом появляются первые признаки психических нарушений. Человек чувствует страх, тревогу, тоску. Он замкнут, плохо спит. Эта стадия длится всего до 3 дней. Затем недуг переходит в стадию возбуждения.

На втором этапе протекания болезни появляется повышенная возбудимость и страх воды. При попытках пить глотательные мышцы болезненно сокращаются, наступает приступ удушья. Страх постоянно усиливается. В результате даже при упоминании о воде человек чувствует приступ спазма дыхательных и глотательных мышц.

На этой стадии человек остро реагирует на любой возбудитель. Даже из-за дуновения воздуха в лицо могут начаться судороги. Зрачки при этом расширены. Наблюдается сильное слюно- и потоотделение. На пике приступа человек чувствует ярость, агрессию, пытаясь навредить окружающим. Развиваются галлюцинации. Иногда наступает остановка дыхания и сердца. В промежутках между приступами сознание проясняется. Этот период длится 2-3 дня. Если за это время во время приступа не наступила смерть, бешенство переходит в третью стадию.

На этом этапе наступают параличи. Это говорит о необратимых изменениях в коре головного мозга, подкорковых образованиях. Наступает снижение двигательной и чувствительной функции. Раньше этот период ошибочно принимали за улучшение состояния из-за прекращения судорог и прочих проявлений второй стадии. Однако это далеко не так. Температура повышается до критической отметки 42 ºС. Спустя максимум сутки смерть наступает из-за паралича дыхательного центра и сердца. Чаще всего от момента появления первых симптомов до смерти проходит всего 5-8 дней.

Диагностика

Сдать анализ на бешенство у человека нужно после посещения инфекциониста. Диагностика проводится комплексно. Для этого проводится забор крови, мочи и тканей, на которые попала слюна. У человека, который заболел бешенством, в крови обнаруживается лимфоцитарный лейкоцитоз. При этом наблюдается анэозинофилия. Антиген к вирусу бешенства обнаруживается в отпечатках, взятых с поверхности роговой оболочки глаз.

Если была констатирована смерть, у человека берут анализ тканей аммонового рога. Здесь при наличии вируса обнаруживают тельца Бабеша-Негри.

Стоит отметить, что при диагностике наблюдаются схожие с другими заболеваниями проявления. Нужно определить, вызвано подобное состояние бешенством или такими заболеваниями, как столбняк, истероневроз, белой горячкой, отравлением стрихнином или атропином и т. д. Есть определенные отличия у подобных состояний.

Анализ крови на бешенство у человека позволяет избежать постановки неправильного диагноза. Это позволяет спасти ему жизнь при обнаружении других заболеваний. Если же диагноз подтвердится, помочь человеку будет невозможно.

Где проводят анализ?

При появлении характерных симптомов врач назначит пройти обследование. Если человек не предпринял своевременных действий после укуса или попадания слюны на слизистые, открытые раны, диагностика позволит лишь установить факт развития этого недуга в организме.

Где и как сдать анализ?

Существует несколько вариантов, где сдать анализ на бешенство человеку. После посещения инфекциониста в случае необходимости следует обратиться в частную или государственную лабораторию. При появлении первых признаков болезни врач обязательно госпитализирует больного. Здесь у него берут на обследование кровь, мочу. Также обязательно проводится биопсия кожи с поврежденного участка.

Также выявить вирус при появлении симптомов врачи могут при исследовании кожи, которая берется с затылка больного, из слезной, слюнной, спинномозговой жидкости.

Общий анализ крови позволяет исключить повышенный уровень СОЭ и лейкоцитарной формулы. Также определяются антитела, которые вырабатываются иммунитетом больного человека к возбудителю инфекции.

Могут быть взяты отпечатки с роговицы глаза. Одним из основных методов диагностики является проведение анализа ПЦР на исследование генетического материала вируса. При помощи электронной микроскопии исследуются ткани мозга.

Существуют и другие методы, которые применяются современной медициной при диагностике бешенства. Так, например, может быть назначена электроэнцефалограмма (ЭЭГ). Это позволяет оценить работу головного мозга, определить определенные отклонения в электрических потенциалах.

Как действовать после укуса?

Анализ на бешенство у человека после укуса кошки, собаки или иного животного проводится в течение 7 рабочих дней. При этом правильный результат можно получить только после инкубационного периода заболевания. Поэтому нужно знать, как вести себя после укуса. Если такая неприятность произошла со взрослым или ребенком, нужно промыть рану проточной водой и обработать ее антисептиком.

Далее на поврежденную поверхность накладывается стерильная повязка. Пострадавший человек должен обратиться в больницу. Его осматривает инфекционист или травматолог. В этот же день пациенту вводится вакцина, которая способствует созданию иммунитета против бешенства. Пока вирус не успел проникнуть далеко, это позволяет эффективно бороться с ним.

Если животное, укусившее человека, домашнее, его наблюдают в течение 10 дней. При этом продолжается проведение вакцинирования. Препарат вводят каждому пациенту, который обратился за помощью к врачу, даже если травма произошла месяц или несколько месяцев назад.

Вакцинация

Прежде чем будет сделан анализ на вирус бешенства у человека, проводится вакцинация. Препарат должен вводиться в соответствии с установленными правилами. Это позволяет сформировать иммунитет, предотвратив развитие болезни. Вакцина вводится в день обращения пациента к врачу, а затем на 3-й и 7-й день после контакта с животным. Если в течение 10 дней у домашнего питомца или дикого зверя не появились признаки бешенства, были проведены соответствующие анализы, которые не подтвердили наличие вируса в слюне, вакцинация прекращается.

Если наблюдение за животным невозможно или были выявлены признаки его инфицирования, вакцину продолжают вводить на 14-й, 30-й, 90-й день после контакта.

Кроме этого в место укуса вводят антитела, которые позволяют максимально быстро побороть вирус непосредственно в месте укуса. Этот метод применяется в первые часы после происшествия. Вещество нужно ввести не позднее, чем через 7 суток после контакта с животным.

Группа риска

Анализ на бешенство у человека не позволяет эффективно бороться недугом. Поэтому его проводят только в крайних случаях (при появлении характерных симптомов). Нужно знать, что есть люди, которые входят в группу риска. Для них обязательно проводится вакцинация раз в год.

Такие меры необходимо предпринимать жителям сельской местности, у которых есть непривитые животные. В группу риска попадают люди, путешествующие по развивающимся странам или просто выезжающие часто на природу, контактирующие с дикими зверями. К этой категории относятся охотники, звероловы, ветеринары, а также работники питомников и зоопарков. Вакцинацию проходят медицинские сотрудники, которые работают с вирусом в лаборатории.

Профилактика

Чтобы не потребовалось делать анализ на бешенство у человека или проходить вакцинацию, нужно придерживаться элементарных правил безопасности. Выезжая на природу с детьми, нужно объяснить малышам, как опасны могут быть дикие звери. Нужно отучить ребенка гладить бездомных котов и собак, прочих животных.

Если в доме живут коты, их не выпускают на улицу, чтобы избежать случайного заражения. Собак, которых выгуливают на улице, обязательно вакцинируют по всем правилам. Даже если человека укусило знакомое домашнее животное, нужно обратиться к врачу.

Рассмотрев особенности проведения анализа на бешенство у человека, можно понять, как правильно действовать после укуса или попадания слюны на слизистые. Это позволит избежать серьезных последствий.

Выгуливая питомца, можно заразиться различными заболеваниями. Одно из таких – бешенство. При появлении малейших симптомов болезни, необходимо сдать анализ на бешенство у собак.

Как собака может заразиться

Бешенством называется заболевание, имеющее инфекционную этиологию и протекающее остро. Вызывается вирусом, поражающим центральную нервную систему, внутри организма происходят серьезные нарушения.

Возбудитель болезни – рабдовирус (РНК-содержащий вирус), поражающий всех животных. Он бывает искусственным и естественным

Инфекция способна передаваться от животного к человеку.

Заразиться можно от инфицированных хищников путем непосредственного контакта (после укуса, при попадании в открытую рану слюны). Слюна содержит в себе вирус. В организме он проходит по нервным путям в головной и спинной мозг, размножается в слюнных железах.

В слюне оказывается за неделю до возникновения первоначальных симптомов. В этот период животное является носителем рабдовируса и может заразить человека и других домашних питомцев.

Симптомы бешенства – стадии

Инкубационный (латентный) период может длиться несколько недель. На выраженность симптомов влияет возраст питомца, состояние иммунной системы, концентрация вируса. Болезнь как правило наблюдается в тихой, буйной или атипической форме.

Обычно наблюдается буйная форма, длится от шести до десяти дней. Выделяются несколько стадий данной формы.

1. Продромальная (протекает двое суток) – изменяется поведение животного: оно выглядит угнетенным, подавленным, сидит в тихих уголках, избегает общения, неадекватно реагирует на раздражители.
2. Маниакальная (три-четыре дня) – стадия возбуждения. Животное ведет себя агрессивно по отношению к животным и людям. Агрессивное поведение меняется на ласковое. Питомец бродяжничает, ест все подряд.
3. Паралитическая (до шести дней) – депрессивная. Проявляются следующие симптомы: паралич гортани, спазмы, судороги. Собака не может глотать, слюна постоянно вытекает. Панические состояния при громких звуках, изменяется координация движения. Наступает паралич сначала задних, затем передних конечностей. Питомец оказывается в коме, из которой не выходит (гибнет от истощения, нарушения дыхания и сердечной деятельности).

Больная собака может укусить, не предупредив об этом лаем.

При тихой форме (длится не более пяти суток) отсутствует стадия возбуждения. Животное угнетено, не реагирует на внешние раздражители. Гибнет от паралича мышц тела, глотки.

Болезнь не лечится, обязательно наступает летальный исход.

Атипичная форма (очень редкая). Она характеризуется следующими признаками: изменяется поведение, нарушается работа центральной нервной системы и желудочно-кишечного тракта.

Анализ крови на бешенство – как и где сдать

При появлении нехарактерных признаков у животных, рекомендуется срочно обратиться в ветеринарную клинику и проверить собаку на наличие вируса.

Перед тем как поставить первичный диагноз, учитывается история болезни, симптоматика, эпизоотологическая ситуация. Проводят несколько лабораторных и других анализов, экспресс анализ, биологический материал изучается под микроскопом. Проводится разграничивающая диагностика, с целью исключения инфекций со схожими симптомами.

Если человека укусила собака, ее изолируют на 10 дней. Пока готовятся анализы, за ней ведется наблюдение. При подтверждении заболевания, собаку усыпляют.

Точный диагноз можно поставить после смерти: получают патматериал и исследуют его при помощи различных методик.

Самый эффективный метод – изучение биоматериала под микроскопом на наличие телец Бабеша-Негри. Чтобы обнаружить специфический антиген в мозге, применяется реакция диффузной преципитации, иммунофлуоресцентный анализ отпечатка роговицы. Иммунофлуорисцентный метод способен обнаружить антиген в 93% случаев.

Из-за того, что вирус движется по нервным путям, его сложно обнаружить в крови. Обычно исследуется спинномозговая жидкость. Тем не менее проводят общий и биохимический анализ крови собаки, чтобы изучить изменение лейкоцитоза, олигурии и других показателей. Кровь берут из вен, которые расположены там же, где и у человека. Иногда берут анализ слюны животного.

Тест на наличие антирабических антител в крови можно сделать в аккредитованных лабораториях (реже в ветеринарных клиниках). Стоимость ее высокая, результаты готовы после двух-трех недель. Существует два вида теста RFFIT (быстрого торможения фокуса флюоресценции) и FAVN (определяет титр антител в МЕ/мл).

Обычно тест проводится при перевозе животного заграницу (некоторыми государствами запрещено завозить животных, которых не прививали от бешенства). Анализ на антитела к бешенству сдается только после выработки в крови антител к данной инфекции. Иммунитет к болезни развивается не раньше, чем через 30 дней после проведения вакцинации. По истечении этого срока питомец может сдавать тест на бешенство.

Если количество антирабических антител не достигает 0,50 МЕ/мл – животное ревакцинируют, спустя месяц сдают еще один анализ. На воспроизведение защитных антител оказывают влияние: порода, возраст питомца, индивидуальные особенности. Врачи рекомендуют проводить наблюдение за количеством антител после вакцинации.

Что делать, если результат положительный

Лечение от данной болезни не разработано. При подтверждении подозрений собаку усыпляют. Единственный выход – вакцинация. Если хозяин не сделал укол от бешенства – питомец гибнет от любого вируса, который влияет на его поведение.

Во время инкубационного периода болезнь не дает о себе знать. Тем не менее, как было сказано, собака уже заразна. После появления первых признаков болезни (боязнь воды, неспособность пить, агрессивное поведение), сроки жизни питомца составляют не более 11 дней, после чего умирает.

Что делать, если человека укусила собака

Люди заражаются через укус больного животного. Для человека характерны те же симптомы, что и для животных: судороги, паралич, боязнь воды, спазм глотки, смерть. После укуса первые признаки заболевания проявляются через неделю и до одного года (зависит от места поражения). Сразу после укуса (не позднее десятого дня) нужно обратиться к специалисту и сделать серию уколов (они помогут избежать летального исхода).

Первые действия при укусе собаки:

• промыть место укуса под сильной струей воды (можно под краном или воспользоваться бутылкой); постараться вымыть грязь и слюну;
• кожу тщательно вымыть хозяйственным мылом – не менее двух раз;
• наложить чистую сухую повязку;
• обратиться в травмпункт или поликлинику;
• в экстренных случаях (при больших и глубоких ранах) вызвать неотложную помощь.

Врач устанавливает график вакцинации, дает рекомендации относительно питания во время лечения.

Профилактика заражения

Существует один способ профилактики от бешенства – своевременная вакцинация. Выбирается подходящий препарат, каждый год (при некоторых вакцинах раз в три года) проводят ревакцинацию (схему подбирает врач ветеринар. Цена прививки около 1400 рублей за отечественный препарат, 1600 за импортный.

Без прививки от бешенства запрещено вывозить питомца в некоторые страны, принимать участие в выставках. Прививка в некоторых государственных клиниках может проводиться бесплатно, она гипоаллергенная и безопасная.

Первый раз прививку нужно делать щенкам в возрасте трех-четырех месяцев, затем делается каждый год. До процедуры питомца обрабатывают от гельминтов и паразитов, она должна быть здорова. По желанию делают моноукол или комбинированным препаратом (от всех болезней).

Привитая собака тоже может заразится, если:

• вакцина была просроченная или неправильно хранилась;
• во время прививки животное было заразно, болезнь находилась в инкубационном периоде.

После прогулок с другими собаками (или поездок в лес) питомца нужно осмотреть на предмет укусов, ссадин и царапин.

Выгуливая питомца лучше не контактировать с незнакомыми и бродячими собаками. Особенно опасны стаи бездомных собак, которые могут не только покусать и заразить бешенством, но и нанести серьезный вред здоровью. Своевременная прививка от бешенства гарантирует здоровье и долгую жизнь четвероногому любимцу.

Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.

Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результа­тов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении те­лец Бабеша - Негри и биопробе на белых мышах.

В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.

Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мел­ких животных, от крупных животных - голову или головной мозг. В некоторых случаях до­пускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг - в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницае­мую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологи­ческим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.

Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).

Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша - Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.

Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматрива­ют в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша - Негри (при окраске по Селлерсу - четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплаз­ме, при окраске по Муромцеву - светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша - Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.

Наиболее характерная особенность телец Бабеша - Негри - их внутренняя структура, по­зволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки - базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.

Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша - Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами иден­тификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравле­ния змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша - Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследу­ется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).

ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном вы­полнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микро­скопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в ви­де ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаружи­вают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.

Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод по­давления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфиче­скими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого голов­ного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресци­рующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким обра­зом препаратах флюоресценции не должно быть.

Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предвари­тельно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования по­дозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, по­кусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все прави­ла личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим ве­ком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для кон­троля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в тече­ние 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.

В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубаци­онного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера - от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного - не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более кле­ток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здо­ровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.

Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постанов­ке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период забо­левания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря матери­ал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса нерав­номерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.

Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или лате­ральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них де­лают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с дан­ными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корре­ляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.

РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге жи­вотных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микро­методом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой ме­тодике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А - аммонов рог (правая сторона); В - кора головного мозга (правая сторона); С - мозжечок (правая сторона);
Д - продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) - положительный контроль; - (минус) - отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 - лунки с разведе­нием специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно

Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастооб­разную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм ге­лем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.

РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в ис­следуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полу­ченного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в иссле­дуемом материале телец Бабеша - Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.

Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша - Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказыва­лась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.

Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции ис­пользуют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скун­сов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хо­мячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.

РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового от­дела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнат­ной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.

ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.

В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА - наиболее перспективный лабораторный метод обнару­жения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является тех­ника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно пре­восходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.

РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.

Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термола­бильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и "утиных" штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.

Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, исполь­зуя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реаги­руют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии компле­мента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ исполь­зовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT ис­пользуют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксиро­ванный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выяв­лении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.

РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за на­личия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствите­лен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувстви­тельностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращен­ный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугирова­нием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активно­стью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.

Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гу­синых эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавле­нием 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, оконча­тельный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус - через 1-1,5 ч.

Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связы­ваться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммун­ной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие ре­зультаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.

Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сы­воротке и гибридомных супернатантах.

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при кото­рой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломие­лите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.