Патологический материал при бешенстве

Клинические признаки и течение болезни. У Собак Инкубационный период длится от нескольких дней до нескольких месяцев (в среднему 2-8 недель), что зависит от века, индивидуальной резистентности животного, расстояния от места укуса к председателю, размеров и глубины раны, количества и вирулентност вируса. Перебежал болезни всегда острый. Клиническая картина характеризуется повышенной возбуждаемостью и значительной агрессивностью, которые изменяются депрессией, развитием параличей, слюнотечением. Определяют несколько форм клинического проявления бешенства: буйная, паралитическая, атипова и особая африканская форма — улуфато.

При буйной форме бешенства четко выраженные три стадии развития болезни: продромальная, или меланхоличная, стадия возбуждения, или маниакальн, и паралитическая, или депрессивная. Продромальная стадия длится 1,5-2 поры, характеризуется изменением обычного поведения собаки и постепенным возрастанием клинических признаков болезни. В начале болезни собака становится невнимательной к хозяину, не сразу откликается на призыв, тяжело поднимается с своего места, нередко бывает очень кроткой, беспричинно лает, щелкает зубьями. С развитием болезни собака старается забиться в темные уголки, глотает инородное тело, куски дерева, тряпки. В отдельных случаях раздирает зубьями место укуса. Под конец второго дня появляется разлад акта глотание, собака не затрагивать корм, не пьет воду. В этот период заболевших собак часто доставляют в больницу с просьбой удалить из глотки кость, которой якобы подавилось животное. Со временем усиливается слюнотечение, появляется стремление укусить человека или животного. Стадия Возбуждения Длится 3-4 поры. Характеризуется резко выраженными нападениями буйства, стремлением собаки убежать из дома, большой агрессивностью к другим животным, в особенности собак, попытками беспощадно их кусать. Усиливается слюнотечение, развивается косоглазие, водобоязнь. Постепенно стадия возбуждения переходит в Паралитическую Стадию, которая длится 2-4 поры. Эта стадия характеризуется быстрым развитием параличей мышц задних концовок, хвоста, туловища, прямой кишки, мочевого пузыря. Животное очень изможденная, шерсть всклокочена, глаза глубоко западают, нижняя челюсть отвисает, язык вываливается наружу, из рта вытекает много слюны. Походка вследствие пареза задних концовок становится шаткой, потом животное вообще не может подниматься. Гибель наступает через 6-8 пор от начала болезни.

При тихой форме бешенства возбуждение выражено слабо или его вообще не бывает. Тихая форма наблюдается в случае заражения собак от лисиц, характеризуется депрессией, быстрым развитием параличей, сильным слюнотечением, затруднением во время глотания. Гибель наступает на 2 - 4-ту пору болезни.

Атиповая форма характеризуется подострым течением. Наблюдается истощение, атрофия мышц, гастроентерит, а также поздние параличи. Собаки Не проявляют агрессивности. Атиповая форма случается очень редко.

Улуфато — особая форма африканского бешенства, при которой перебежал болезни значительно более легкий, чем бешенство в странах воздержанного климата, и характеризуется параличами отдельных мышц. Возможное выздоровление больного животного.

У Котов Болезнь проходит в буйной форме с высокой агрессивностью, которая представляет значительную опасность для людей. Гибель котов наступает на 2 - 5-ту пору после паралича задней части тела.

У Большого рогатого скота Преобладает тихая форма бешенства. При этой форме болезни из ротовой пустоты выделяется много слюны, в участке укуса появляется свербеж, обнаруживаются парезы и параличи концовок, сосудистые сокращения отдельных групп мышц. Наблюдается частый хриплый рев, затрудненное глотание, частое мочевыделение. Гибель скота наступает на 3 - 6-ту пору болезни. При буйной форме резко повышается рефлекторная возбуждаемость, отмечается сосудистое сокращение отдельных мышц. Глаза вытаращены, животное беспокоится, скрежещет зубьями, бьет ногами и рогами, хрипло ревет, часто проявляет агрессивность относительно собак, реже — к другим животным иd людей. Нападения буйства изменяются периодом покоя и повторяются через разные промежутки времени. Аппетит и жвачка отсутствуют, из ротовой пустоты выделяется большое количество слюны. Нередко признаком бешенства у рогатого скота является зуд и расчесы кожи на месте укуса. Гибель наступает внезапно, во время нападения буйства или при симптомах общей слабости, бульбарного паралича и быстрого снижения температуры тела.

У Овец Болезнь длится 3-5 пор, у коз — 8 пор, всегда заканчивается параличами и смертью. У больных животных наблюдается агрессивность, хриплое, глухое, протяжное блеяние, слюнотечение, скрежетание зубьями, затрудненное глотание. Гибель наступает на 3 - 6-ту пору болезни.

У Коней Бешенство наблюдается сравнительно редко. При буйной форме проявляется беспокойством, иногда — агрессивностью, стремлением убежать. Из ротовой пустоты вытекает много слюны, губы судомно сжатые, зрачка расширенные. Усиливается половое возбуждение, возможные нападения судорог жевательных и дыхательных мышц. Частым признаком бешенства коней есть свербеж на месте укуса. Заболевший кон нападает на животных и людей, старается их укусить или ударить, срывается из коновязи, натыкается на препятствия, ржание становится хриплой. Нападения буйства изменяются периодом угнетения, походка становится шаткой, глотание затрудняется, выпитая вода выливается назад через ноздри. Гибель наступает на 3 - 5-ту пору болезни. При тихой форме кон придавлен, упирается председателем в стену или кормушку, из ротовой пустоты выделяется много слюны. Развиваются параличи глотательных мышц, прогрессируют параличи задней части тела, наступает быстрая смерть.

У Свиней Болезнь сопровождается беспокойством, хрюканьем, сильным слюнотечением. Иногда на месте укуса появляется свербеж, на 2 - 4-ту пору после появления параличей наступает смерть.

У Диких животных Характерным признаком бешенства есть отсутствие страха перед людьми, а также агрессивность. Гидрофобии не бывает. Перед гибелью в них развиваются парезы и параличи концовок.

У Человека Заболевания на бешенство связанное с укусами больных собак, котов и других животных. В начале болезни наблюдаются лихорадка, придавленное состояние, свербеж и боли в участке укуса, со временем появляются боязливость, беспокойство, разлад дыхания и глотание, слюнотечение, повышенное рефлекторное возбуждение и судороги. Во время попытки проглотить воду развиваются мучительные судороги. Вскоре отвращение к воде наблюдается даже при виде стакана или шума воды. Больной галлюцинирует, иногда свирепствует, из рта выделяется много слюны. Бешенство у людей всегда заканчивается летально, смерть наступает на 2 - 3-тю пору болезни. Перед смертью развиваются параличи мышц лица, языка, глаз, концовок, туловища.

Патологоанатомические изменения. При бешенстве не специфические. Трупы животных изможденные, на коже могут быть следы укусов, незалеченных ран. При разрезе проявляют кровоизлияния, гиперемию слизистых оболочек ротовой пустоты и неба, набух языка. Желудок обычно пустой, иногда содержит инородный тела. Слизистая оболочка травного канала отекшая, с кровоизлияниями разного размера и формы. Оболочки мозга также отекшие и гиперимированные. Кровь темно-красного цвета, не свертывается. Во время гистологического исследования главного и спинного мозга проявляют ячейки дисемінованого негнойного энцефаломиелита. Чрезвычайно большое диагностическое значение имеет нахождение в цитоплазме нейронов специфических ацидофильных включений — телец Бабеша — Негре с базофильной зернистостью, которые в 65-85 % Случаев дают возможность обнаружить заболевание на бешенство.

Диагностика. Предшествующий диагноз для употребления неотложных мер устанавливают на основе анамнеза, анализа существующей эпизоотологической ситуации относительно бешенства, клинических признаков болезни. Окончательный диагноз устанавливают по результатам лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика. Лабораторные исследования на бешенство проводят вне очереди, а о результатах немедленно сообщают врача ветеринарной медицины, что прислал патологический материал. Разрез трупа, удаление мозга, отбор проб и их исследования осуществляют при суровом соблюдении мероприятий личной профилактики — надевают спецодежду, руки защищают двумя парами перчаток (хирургическими и анатомическими), глаза закрывают защитными очками, нос и рот прикрывают 6-пластовой марлевой повязкой. В лабораторию для исследования на бешенство присылают нарочным свежие трупы мелких животных или председателя погибшего или забитого большого животного. Для проведения биопробы направляют главный мозг (свежий или консервированный в С - 50 %-м растворе глицерина). Патологический материал может быть тщательно запакован в герметичную тару с притертой пробкой, залитой парафином, а труп животного помещенный в любой герметичный водонепроницаемый контейнер.

Лабораторная диагностика включает микроскопические исследования главного мозга животных с целью выявления телец-включений Бабеша — Негре, серологические исследования за РОД для выявления специфического рабічного антигена, а также проведение биологической пробы на белых мышах и кролях.

Для микроскопического выявления телец-включений Бабеша - Негре готовят мазки, мазки-отражения и гистологические срезы из аммониевого рога, коры главного мозга, мозжечка (при буйной форме бешенства), а также из продолговатого и спинного мозга (при паралитической форме бешенства). В гистологических препаратах тельца-включения имеют округлую, овальную или немного удлиненную форму, размер от 0,24 до 27 мкм. Размещаются между ядром и одним из рогов нейрона или в его отростке. Внутри телец Бабеша — Негре проявляют маленькие (0,25-0,5 мкм) базофильные зернистые включения, которые дают возможность надежно дифференцировать их от других структурных элементов клетки. В отличие от мазков, где выявление телец Бабеша — Негре возможное лишь в случае значительной их количества, в гистологических препаратах быстро разыскиваются даже одиночные включения. Выявление в патологическом материале цитоплазматичних телец-включений Бабеша — Негре есть безусловно достоверным показателем бешенства, а их отсутствие не выключает этой болезни. Следует иметь в виду, что телец Бабеша — Негре никогда не бывает в нервных клетках больных на бешенство лисиц и корсаков, а также в мозга покусанных ними животных.

Для серологічних исследований за РОД используют неконсервированный главный мозг животных, которые погибло от уличного бешенства, или мозг зараженных для биопробы белых мышат. Постановка реакции диффузной преципитации в агаровом геле дает возможность установить диагноз относительно бешенства в течение одной поры, даже при исследовании загнивающего патологического материала. Рабічний антиген в мозга инфицированных животных можно обнаружить также с помощью имунофлуоресцентного метода, которые используют для быстрого установления предшествующего диагноза.

Биологическую пробу проводят на 6-10 белых мышатах массой 8-10 г и на 4 кроликах массой 1,5 кг, которых заражают интрацеребрально и подкожно надосадовою жидкостью 10 %-ой суспензии мозга. В случае положительного результата биопробы мышата заболевают и гибнут через 7-15 пор после заражения, кроли — через 16-21 пору. Главный мозг погибших или убитых подопытных животных исследуют на наличие телец Бабеша — Негре за РІФ или РДП. В сомнительных случаях ставят РН на мышатах.

Дифференциальная диагностика. Предусматривает необходимость исключения болезни Ауэски, острого менингоенцефалита, чумы собак. При болезни Ауэски проявляют розчухування, не бывает агрессивности, отклонений в аппетите, параличей нижней челюсти. В клетках главного мозга отсутствуют тельца Бабеша — Негре. Острый менингоэнцефалит характеризуется спорадичностью, отсутствием укусов, а также специфических телец-включений. Чума собак отличается высокой контагиозностью, продолжительным течением болезни, наличием конъюнктивита и ринитов. Нет агрессивности, не бывает параличей мышц нижней челюсти. Возможное выздоравливание больных животных.

Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.

Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результа­тов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении те­лец Бабеша - Негри и биопробе на белых мышах.

В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.

Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мел­ких животных, от крупных животных - голову или головной мозг. В некоторых случаях до­пускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг - в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницае­мую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологи­ческим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.

Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).

Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша - Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.

Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматрива­ют в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша - Негри (при окраске по Селлерсу - четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплаз­ме, при окраске по Муромцеву - светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша - Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.

Наиболее характерная особенность телец Бабеша - Негри - их внутренняя структура, по­зволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки - базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.

Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша - Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами иден­тификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравле­ния змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша - Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследу­ется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).

ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном вы­полнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микро­скопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в ви­де ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаружи­вают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.

Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод по­давления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфиче­скими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого голов­ного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресци­рующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким обра­зом препаратах флюоресценции не должно быть.

Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предвари­тельно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования по­дозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, по­кусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все прави­ла личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим ве­ком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для кон­троля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в тече­ние 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.

В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубаци­онного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера - от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного - не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более кле­ток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здо­ровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.

Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постанов­ке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период забо­левания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря матери­ал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса нерав­номерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.

Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или лате­ральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них де­лают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с дан­ными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корре­ляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.

РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге жи­вотных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микро­методом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой ме­тодике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А - аммонов рог (правая сторона); В - кора головного мозга (правая сторона); С - мозжечок (правая сторона);
Д - продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) - положительный контроль; - (минус) - отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 - лунки с разведе­нием специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно

Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастооб­разную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм ге­лем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.

РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в ис­следуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полу­ченного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в иссле­дуемом материале телец Бабеша - Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.

Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша - Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказыва­лась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.

Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции ис­пользуют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скун­сов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хо­мячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.

РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового от­дела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнат­ной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.

ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.

В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА - наиболее перспективный лабораторный метод обнару­жения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является тех­ника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно пре­восходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.

РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.

Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термола­бильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и "утиных" штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.

Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, исполь­зуя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реаги­руют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии компле­мента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ исполь­зовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT ис­пользуют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксиро­ванный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выяв­лении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.

РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за на­личия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствите­лен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувстви­тельностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращен­ный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугирова­нием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активно­стью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.

Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гу­синых эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавле­нием 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, оконча­тельный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус - через 1-1,5 ч.

Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связы­ваться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммун­ной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие ре­зультаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.

Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сы­воротке и гибридомных супернатантах.

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при кото­рой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломие­лите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.

Бешенство (rabies) – водобоязнь, гидрофобия – остро протекающее инфекционное заболевание теплокровных животных и человека, характеризующееся поражением центральной нервной системы (необычное поведение, непровоцируемая агрессивность, парезы, параличи и т.д.). Болезнь, как правило, заканчивается летально.

Заболевание регистрируется во всех странах мира, в том числе в Республике Беларусь, имеет экономическую, экологическую и социальную значимость.

Этиология. Возбудителем болезни является нейротропный РНК-содержащий вирус, относящийся к рабдовирусам. Размеры вириона 180?80 нм. Вирус термолабилен (при температуре 60 °С разрушается через 5-10 мин), но устойчив к низким температурам. В патматериале сохраняется до 3 мес. Быстро инактивируется дезинфицирующими растворами щелочей и кислот, относительно устойчив к фенолу и йоду.

Эпизоотологические данные. Восприимчивы теплокровные животные всех видов. Наиболее восприимчивы к нему лисы, шакалы, волки. Признана высокая чувствительность кошек и крупного рогатого скота, средняя – собак, овец, коз, лошадей и приматов, низкая – птиц. Источник возбудителя инфекции – больные животные и вирусоносители, которые выделяют вирус во внешнюю среду преимущественно со слюной за 3-8 дней до появления клинических признаков болезни.
Заражение происходит преимущественно через укус, реже через ослюнение, алиментарным и аэрогенным путями.

Для бешенства характерна природная очаговость и периодичность, которые связаны соответственно с наличием в природе резервуара вируса бешенства – диких плотоядных, особенно лис, и с трехлетней периодичностью снижения популяции этих животных.

Заболевание протекает в виде спорадических случаев, летальность 100%.

Патогенез. Заражение происходит при попадании вируса на поврежденные кожные покровы или слизистые оболочки вследствие укусов или ослюнения. Укус обнаруживают примерно у 91% погибших от бешенства животных. С места первичной локализации вирус проникает в ЦНС и вызывает развитие негнойного энцефалита. Из мозга по центробежным нервам вирус попадает в слюнные железы, где он репродуцируется и выделяется со слюной.

Патологические изменения в ЦНС приводят к развитию нервного синдрома, а в последующем – к параличу органов дыхания или сердца и смерти животного.

Течение и симптомы болезни. Инкубационный период от 3-8 недель, а иногда до года и более. Болезнь проявляется в различных клинических формах: буйной, тихой, абортивной, атипической.
Буйная форма начинается с угнетения животного. Оно ко всему безразлично, теряет аппетит, поедает несъедобные предметы. Через 1-2 дня повышается рефлекторная возбудимость, развивается агрессивность. Бешеные собаки молча набрасываются на животных или людей и наносят укусы. Голос хриплый развивается косоглазие, нижняя челюсть отвисает, при развитии параличей глотки – слюнотечение. Собаки стремятся сорваться с привязи и убегают на значительные расстояния, стремясь покусать встречных животных и людей. Затем наступает стадия парезов и параличей. Животные гибнут на 8-11 день от начала заболевания.

Тихая (паралитическая) форма отличается от буйной отсутствием возбуждения и характеризуется развитием параличей нижней челюсти, мышц туловища и конечностей. Смерть наступает на 3-4 день болезни.

При абортивной форме после клинического проявления болезни наступает выздоровление.
Атипичная форма характеризуется хроническим течением, прогрессирующим истощением и поздним развитием параличей.

Волки и лисицы теряют присущую им осторожность, даже в дневное время забегают в населенные пункты, набрасываются на людей и животных.

У крупного и мелкого рогатого скота тихая форма заболевания сопровождается отказом от приема корма, атонией рубца, мышечной дрожью, пучеглазием, слюнотечением, развитием параличей. Буйная форма сопровождается сильным возбуждением и беспокойством, ложной охотой, агрессией, запрокидыванием головы. Смерть наступает у лошадей и свиней протекает в буйной форме с признаками поражения ЦНС, агрессивности, параличей и гибели животных на 2-6 день болезни.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии трупов характерных изменений не обнаруживают. У собак обнаруживают: отсутствие кормовых масс в желудке, иногда инородные предметы в нем: цианоз слизистых оболочек; острую венозную гиперемию головного мозга, печени, легких и селезенки; сгущение крови, сухость серозных покровов, подкожной клетчатки и кожи. При гистоисследовании в нервных клетках аммоновых рогов – тельца Бабеша-Негри.

Диагностика. При постановке диагноза учитывают эпизоотологические данные, клинические признаки и результаты патологоанатомического вскрытия. Окончательная диагностика осуществляется на основании результатов иммунофлуоресцентного исследования мазков-отпечатков головного мозга или биопробы на мышатах.

Дифференциальная диагностика. У крупного рогатого скота следует исключать губкообразную энцефалопатию, болезнь Ауески, злокачественную катаральную горячку, листериоз, острое течение лептоспироза, у лошадей – энцефаломиелит.

Лечение. Больных бешенством животных не лечат, их уничтожают.

Специфическая профилактика. Для активной, в том числе вынужденной, иммунизации используется ряд антирабических вакцин.

Профилактика и меры борьбы. С целью профилактики бешенства следует: проводить пероральную иммунизацию диких плотоядных и уменьшать их популяцию, путем их отстрела, а бродячих собак и кошек – путем стерилизации самок, создание для них приютов и т.д.; осуществлять ежегодную вакцинацию домашних собак против бешенства; соблюдать действующие правила и санитарно-гигиенические нормы содержания собак, кошек и других хищных животных.

При возникновении бешенства вводится карантин. Покусавших людей или животных собак или кошек (кроме явно больных бешенством) подвергают карантинированию в течение 10 дней. Больных бешенством животных убивают и уничтожают (сжигают), остальных – подвергают вынужденной вакцинации. Карантин снимают через 2 месяца со дня последнего случая заболевания животных бешенством.

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.