Пцр при гриппе свиней

Методические указания
по обнаружению вируса гриппа свиней типа А методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
(утв. Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору 21 мая 2009 г.)

Вирус гриппа является возбудителем острых респираторных заболеваний у человека и животных. Он принадлежит к семейству Orthomyxoviridae. Существует три типа вируса гриппа: A, B, C. Вирус типов В и С обычно обнаруживают у людей. Грипп типа А поражает широкий круг хозяев: птиц, людей, свиней, лошадей, морских млекопитающих. Вирус гриппа типа А делят на подтипы на основании антигенных свойств его поверхностных гликопоротеинов - гемагглютинина (Н1-15) и нейраминидазы (N1-9).

Грипп свиней распространен в большинстве стран мира с развитым свиноводством. Хотя смертность от него минимальна, заболеваемость может доходить до 100%. В настоящее время среди свиней наиболее распространены три подтипа вируса гриппа А: H1N1, H3N2 и H1N2. Подтип H1N1 считают классическим свиным гриппом, известным с 1918 года. С 1979 г. у свиней выделяют антигенно отличающийся вариант H1N1 птичьего происхождения. Вирус подтипа H1N1 является наиболее распространенным, антитела к нему обнаруживают у 25% свиней по всему миру. Подтип H3N2 был впервые выявлен у свиней в 1970 г., он считается результатом межвидового перехода вируса гриппа от человека к свиньям. Подтип H1N2 выделяют от свиней с 1994 г., этот подтип является результатом реассортации вирусов гриппа свиней, человека и птиц.

В связи с тем, что свиньи восприимчивы к вирусам гриппа А птиц и человека, они считаются промежуточным хозяином, в котором происходит реассортация генов между свиными, человеческими и птичьими вирусами. Реассортация может приводить к возникновению новых антигенных вариантов вируса гриппа, потенциально способных вызывать эпидемии среди людей. Это обстоятельство определяет значимость гриппа свиней не только для ветеринарии, но и для здравоохранения людей.

В этих условиях разработка методов быстрой и высокоспецифичной диагностики гриппа свиней является крайне актуальной задачей.

Предлагаемый метод обнаружения вируса гриппа свиней основан на полимеразной цепной реакции с детекцией результатов в режиме реального времени (ПЦР-РВ). ПЦР-РВ сочетает в себе достоинства классической ПЦР (высокую чувствительность, специфичность, быстроту получения результатов) и одновременно обладает рядом преимуществ. Регистрация результатов реакции в режиме реального времени позволяет отказаться от электрофореза продуктов ПЦР, что сокращает продолжительность анализа и уменьшает вероятность ложноположительных результатов из-за контаминации исследуемых проб продуктами амплификации.

Методика основана на амплификации высококонсервативного фрагмента гена, кодирующего матриксный протеин М1 вируса гриппа свиней, и позволяет выявлять вирус гриппа А всех подтипов.

2. Сущность метода

Выявление вируса гриппа свиней проводится методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ), в которой используются вирусспецифичные праймеры и TaqMan зонд. Метод ПЦР-РВ позволяет проводить детекцию продуктов амплификации в процессе реакции и вести мониторинг кинетики накопления ампликонов. В реакционную смесь добавляют ДНК-зонд, меченый на 5' - конце флюоресцентным красителем, а на 3' - конце - фосфатной группой и гасителем флюоресценции. Зонд комплементарен внутреннему участку амплифицируемой области генома. Гаситель поглощает испускаемое флюоресцентной меткой излучение, а фосфатная группа в 3' - положении блокирует полимеразу. На этапе отжига зонд связывается с комплементарным участком ДНК. Во время стадии элонгации полимераза синтезирует комплементарную цепь ДНК и, дойдя до участка, гибридизованного с зондом, начинает расщеплять последний за счёт 5' - экзонуклеазной активности. В результате флюоресцентная метка отделяется от тушителя, и её свечение может быть детектировано. Таким образом, увеличение флюоресценции будет прямо пропорционально количеству наработанного ПЦР-продукта.

Поскольку геном вируса гриппа свиней представляет собой РНК, проведению собственно ПЦР-РВ предшествует этап обратной транскрипции.

3. Область применения

Методика предназначена для использования в научно-исследовательских и диагностических учреждениях ветеринарного профиля.

4. Оборудование и реактивы

1. ДНК-амплификатор для ПЦР в режиме реального времени (модель Bio-Rad iQ5 или аналоги);

2. Вакуумный насос;

3. Устройство для фильтрации Vacuum Manifold;

4. Микроцентрифуга для пробирок;

5. Микроцентрифуга для плашек на 96 лунок;

7. Набор автоматических пипеток;

8. Холодильник на +4°С и на -20°С;

9. Полипропиленовые плашки 96 лунок на 200 мкл;

10. Одноразовые наконечники к автоматическим пипеточным дозаторам;

11. Одноразовые наконечники для пипеток переменного объёма с аэрозольным барьером;

12. Полипропиленовые пробирки на 0,5 и 1,5 мл.

Ферменты и реактивы:

1. АМV обратная транскриптаза (10 ед./мкл);

2. Tag ДНК-полимераза (5 ед./мкл);

3. Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (дНТФ). Водный раствор дезоксинуклеозидтрифосфатов с концентрацией 10 мМ каждого;

4. 5-кратный реакционный буфер для обратной транскрипции;

5. 10-кратный реакционный буфер для ПЦР;

6. Смесь праймеров для обнаружения вируса гриппа свиней (праймеры М1, М2 в концентрации 10 пM/мкл каждого);

7. TaqMan зонд (М* в концентрации 5 пМ/мкл);

8. Контрольная РНК: водный раствор РНК вируса гриппа свиней в концентрации 0,01 мкг/мкл;

9. 6М гуанидинтиоцианат;

10. 96% этиловый спирт.

5.1. Выделение РНК

5.1.1. Из образцов исследуемого биологического материала (носовые смывы, экссудат трахеи, 10% суспензия легочной ткани и бронхов, вируссодержащие культуры клеток) отбирают 0,1 мл в полипропиленовую пробирку объемом 1,5 мл, смешивают с 0,2 мл 6М раствора гуанидин-тиоцианата (ГТЦ) и инкубируют при комнатной температуре 3-5 мин. Добавляют 0,3 мл этилового спирта, перемешивают и наносят на миниколонки со стекловолокнистыми фильтрами GF/F. C помощью вакуумного насоса и устройства для фильтрации Vacuum Manifold смесь фильтруют. Далее фильтры промывают 3 мл 80% этанола и центрифугируют в течение 1 мин при 13000 g для удаления остатков этанола. Переносят миниколонку в новую пробирку, добавляют 50 мкл воды и через 3-5 минут центрифугируют 30 сек. при 10000-13000 g.

Полученный раствор РНК сразу используют в реакции обратной транскрипции или хранят при -70°С.

Кроме описанной выше методики также могут быть использованы отечественные или импортные коммерческие наборы для выделения РНК фирм Биоком, Qiagen и других производителей.

5.2. Постановка ОТ-ПЦР в режиме реального времени

1. В пробирку вносят следующие компоненты в указанном порядке из расчёта на одну пробирку:

Свиной грипп – это несколько подтипов вируса гриппа А, способных вызывать заболевание у свиней. Наиболее актуальным в плане эпидемиологической настороженности в настоящее время является подтип А/H1N1.

Вирус гриппа H1/N1 (свиной грипп) [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

Swine influenza virus, SIV, pH1/N1, pndH1/N1, H1N1v, (swine flu, swine influenza, 2009 flu pandemic), RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.

Общая информация об исследовании

Influenza virus A/H1 – один из подтипов вируса гриппа, характеризующийся особой вирулентностью и приводящий к тяжелым формам заболевания и пандемиям. Грипп, вызванный Influenza virus A/H1 (грипп свиней, свиной грипп), отличается от сезонного (эпидемического) гриппа по нескольким характеристикам. Во-первых, возбудитель гриппа свиней – это новый вариант вируса гриппа, возникший в организме свиней в результате мутаций его генетического материала и затем распространившийся в популяции человека. Большинство людей не имеют иммунитета к нему, поэтому заболевание характеризуется очень высокой заразностью. Кроме того, оно чаще протекает в более тяжелой форме с вовлечением нижних отделов респираторного тракта и с осложнениями (в виде пневмонии, дыхательной и почечной недостаточности, энцефалопатии и др.), что обуславливает необходимость раннего и интенсивного лечения. Поэтому диагностика гриппа свиней должна быть произведена в кратчайшие сроки. На основании опыта борьбы с пандемией гриппа Influenza A H1/N1 в 2009 году был сделан вывод, что "золотым стандартом" идентификации этого подтипа вируса является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в отделяемом носоглотки) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Такое исследование позволяет получить максимально точный результат в кратчайшие сроки.

РТ-ПЦР относится к так называемым быстрым методам диагностики гриппа, обеспечивающим возможность постановки окончательного, лабораторно подтвержденного диагноза еще до начала лечения. Это преимущество отличает РТ-ПЦР от выделения вируса в культуре клеток (требует 7-10 дней) и большинства серологических методов (требуют нарастания титра антител, 10-14 дней).

Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1). Специфичность этого анализа составляет 98-100 %. Среди "быстрых" тестов только РТ-ПЦР способна дифференцировать подтип вируса гриппа свиней от других подтипов Influenza A. Положительный результат исследования указывает на наличие генетического материала Influenza A/H1 в образце, однако не всегда означает продолжающуюся репликацию вируса, так как в реакции определяется не сам вирус, а фрагменты его РНК. По этой же причине положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Чувствительность исследования составляет 86-100 %. Это самый высокий показатель среди других "быстрых" диагностических тестов. Например, чувствительность экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа в отношении Influenza H1/N1 составляет 10-70 %, а чувствительность прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции – 47-93 %. Важно отметить, что несмотря на это возможность ложноотрицательного результата все же существует. В отличие от большинства других лабораторных методов, результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения, однако необходимо помнить, что частота ложноотрицательных результатов выше в период эпидемии. Для более точной постановки диагноза рекомендуется повторное (многократное) исследование образцов разных биоматериалов (отделяемого носоглотки, ротоглотки, мокроты) с интервалом 48-72 часа. Причем отрицательный результат РТ-ПЦР полностью не исключает диагноза "грипп Influenza A/H1" и не препятствует назначению противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

Для диагностики Influenza A/H1-гриппа.

Когда назначается исследование?

При постановке диагноза "грипп, среднетяжелая/тяжелая форма" и при осложнениях гриппа (пневмония, дыхательная недостаточность, энцефалопатия и др.).
При постановке диагноза "грипп" у пациента с факторами риска гриппа Influenza A/H1: возраст до 2 лет и старше 65 лет, беременность, хроническая обструктивная болезнь легких, хронические заболевания сердца, почек, печени, сахарный диабет, иммуносупрессия.
При отсутствии улучшения или при ухудшении состояния в течение 72 часов после постановки диагноза "грипп, легкая форма" у пациента без факторов риска Influenza A/H1.
При обследовании пациента, контактировавшего с больным с установленной Influenza A/H1-инфекцией.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

отсутствие Influenza A/H1-инфекции.

Оптимально брать биоматериал через 48-72 часа после начала заболевания. Несмотря на то что идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов, биоматериал должен быть получен как можно раньше. У детей, а также при вовлечении нижних отделов респираторного тракта этот период более длительный.
Отрицательный результат не препятствует назначению противовирусной терапии.
Положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, эпидемиолог, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

Li K, Xiao L, Liu C, Zhang J, Sirois P. Transforming viral sequences to A (H1N1) flu diagnosis: the current status and future prospects of rtPCR based assays. Curr Pharm Biotechnol. 2010 Jan;11(1):113-6.
Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.
WHO World Health Organization. Clinical management of human infection with pandemic (H1N1) 2009: revised guidance. – World Health Organization, 2009.

[Influenza suis (лат.), Swine Influenza, swine flu, hog flu, pig flu (англ.); Schwieneinfluenza, Shope's Schwiene grippe (нем.)]

Гриппл свиней (инфлюэнца свиней, энзоотическая бронхопневмония) — высоко контагиозная, остро протекающая болезнь, возникающая в холодное время года и характеризующаяся внезапным началом, резко выраженной лихорадкой, обшей слабостью и поражением органов дыхания. Вирус гриппа свиней (ВГС) может вызвать заболевание людей и, наоборот, возможно заражение свиней вирусом гриппа человека.

Болезнь впервые диагностирована в США в 1918 г. вовремя пандемии гриппа людей.

Вирус впервые выделили и идентифицировали Шоуп и Левине в 1931 г. Он был обозначен как А/Айова/15/31. Аналогичные штаммы ВГС были выделены в ряде государств Европы и США. К 1980 г. среди всех вирусов гриппа А было идентифицировано 13 типов ГА и 9 типов нейраминидаз. Большинство случаев гриппа свиней обусловлены вирусом H1N1; вирус гриппа H3N2 как этиологический агент встречается значительно реже.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный период длится от 1 до 6—7 дней. Болезнь протекает остро, подостро, типично и атипично. Наиболее восприимчивы поросята-отъемыши. Ведущим патоморфологическим синдромом инфекции является развитие множественных очагов некроза бронхиального эпителия. Начинается болезнь с повышения температуры тела до 41—42 "С, сопровождается вялостью, отказом от корма, конъюнктивитом, слизистым истечением из носовой полости, чиханием и кашлем. В области пятачка образуются струпьевидные корки. Дыхание становится сопящим вследствие набухания слизистой оболочки носа и сужения воздухопроводящих путей. Больные животные чаще лежат, зарывшись в подстилку, не реагируют на окружающее, во время подъема у них возникает болезненный кашель.

При типичном течении болезни развивается воспаление легких — затрудненное дыхание брюшного типа. Из-за ослабления сердечной деятельности кожа в области живота приобретает синюшный оттенок. Иногда поражаются мышцы и суставы. При хороших условиях содержания свиней болезнь продолжается 7—10 дней. При типичном течении летальность не превышает 1— 4 %. Порося та-сосуны и отъемыши переболевают гриппом тяжело. У них наблюдается поражение легких, плевриты, перикардиты, истощение. На вскрытии находят изменения в верхних дыхательных путях и легких; на слизистой оболочке носовой полости — пенистая слизь красноватого цвета; в просвете бронхов — слизистые пробки; в легких — пневмонические очаги катарального характера, увеличение, гиперемия и отечность бронхеальных и средостенных лимфоузлов. Иногда развиваются односторонние или двусторонние плевриты. В качестве атипичной формы гриппа свиней описана пролифирирующая некротическая пневмония, которая наряду с РРСС представляет новую угрозу свиноводству.

Brown и другие описали легочную гипоплазию эмбрионов свиней, зараженных ВГС H1N1 на 55-й день супоросности. В течение 3-7 дней наблюдались некрозы в бронхиолах и слабая дифференцировка главных бронхов. Через 28 дней после инокуляции легкие составляли не более половины нормальной величины. Патогистоло-гически наблюдается распространенная дегенерация и некрозы эпителия бронхов и бронхиол. Просвет бронхов, бронхиол и альвеол заполнен экссудатом, содержащим десквамированные клетки и нейтрофилы, позднее, главным образом, моноциты. Наблюдается различной степени гиперемия с инфильтрацией альвеолярной ткани лимфоцитами, гистиоцитами, плазматическими клетками. Ателектаз альвеол, интерстициальная пневмония, эмфизема; периваскулярная и перибронхиальная клеточная инфильтрация сопровождает эти поражения.

Возбудитель гриппа свиней сравнительно малоустойчив к факторам физического и химического воздействия. Нагревание до 60 °С в течение 20 мин его полностью инактивирует. При -20—70 °С он сохраняется несколько месяцев, в лиофилизированном виде под вакуумом — в течение 3,5 — 4 лет. Оптимальный рН для хранения вируса 7,0—7,2. Антигенная структура типична для миксовирусов.

Антигенная вариабельность и родство. Установлено АГ родство между вирусами А(свинья)Айова/15/31 и вирусом ГП А/цыпленок/Шотландия/59. Считают, что свиньи могут являться резервуаром для человеческих пандемических штаммов. Во время вспышек гриппа свиней в Европе зимой 1990—1991 гг., кроме классического серотипа HI N1, был выделен серотип H3N2. Клонированы гены ГА вируса гриппа А свиней (H1N1), изолированные в плазмидных векторах, определен их нуклеотидный состав. Сконструировано филогенетическое дерево генов свиных и человеческих вирусов гриппа А. Установлено, что дивергенция между свиными и человеческими вирусами гриппа произошла в период 1905 г. Определены нуклеотидные последовательности кодирующей НА1 части гена ГА трех вирусов гриппа свиней. Гены ГА двух европейских штаммов ВГС (SW38, SW39) (А/свинья/29/37) и N176 (A/New-Jersey/I 1/76) произошли скорее от какого-то другого эволюционного предка HI нежели от ГА классического штамма ВГС. С помощью набора монАТ к АГ вируса гриппа, выделенным от птиц и лошадей, показан широкий спектр родства между ВГС и этих животных.

Из анализа случаев одновременного распространения гриппа среди свиней и людей, вызванных одними и теми же этиологическими агентами, считают, что назрела необходимость систематической вакцинации свиней против гриппа, чтобы исключить этот резервуар вируса в природе. Недавно сравнение ВГС H1N1 показало, что ГА ВГС H1N1 не изменялся интенсивно по крайней мере последние 50 лет в противоположность активному АГ дрейфу штаммов ВГ человека. Это, по-видимому, связано с менее выраженным иммунным прессингом на свиньях, как коротко живущих, и их вирус быстро передается на чувствительных животных. Изучено 24 изолята вируса гриппа A/H1N2, выделенных от свиней в 1999—2000 гг. в США. Все изоляты были ре-ассортантами и содержали гены классического вируса гриппа свиней A/H1N2 и гены вируса гриппа человека, а также вируса гриппа птиц. 15 изолятов были филогенетически сходны с первыми изолятами A/H1N2, 9 — с геном, кодирующим нейраминидазу вируса гриппа свиней HIM, PB1 ген двух изолятов происходил от вируса гриппа птиц.

В период острого течения болезни вирус в высоких концентрациях содержится в экссудате трахеи, слизи носовой полости, бронхах и легочной ткани. Свиноматки-реконвалесценты являются вирусоносителями и служат резервуаром инфекции. ВГС независимо от типа способен эффективно преодолевать плацентарный барьер, заражать и приводить к гибели зараженные эмбрионы.

У животных-реконвалесцентов формируются AT, выявляемые в РН, РЗГА и РСК. Специфические сыворотки в условиях лаборатории получают на кроликах, морских свинках и белых крысах. Не всегда отмечают корреляцию между уровнем AT и тяжестью проявления болезни.

Экспериментальная инфекция. Из лабораторных животных к ВГС чувствительны белые мыши, крысы, хорьки и хомяки. Уже через 24—48 ч после интраназального заражения у мышей проявляются симптомы болезни. Обычно они гибнут через 3—8 суток после заражения. Смертность зависит от вирулентности штамма, которая по мере серийного пассирования вируса возрастает для мышей и снижается для свиней. В легких павших мышей видны темно-красные участки, влажные на поверхности разреза, гепатизация. Мыши не чувствительны к подкожному, интраперитонеальному и внутримозговому заражению. Исключение составляют хорьки, у них легко возникает контактное заражение. Установлена высокая восприимчивость к ВГС серых крыс (пасюков), которые рассматриваются как резервуар вируса в природе. Кролики и щенки к данному вирусу не восприимчивы. Свиньи восприимчивы к различным подтипам вируса гриппа А и, возможно, вместе с водоплавающей птицей являются главным резервуаром вируса гриппа в природе. Помимо мелких лабораторных животных, экспериментальная инфекция легко воспроизводится на поросятах, заражаемых интраназально. Через 6 ч после заражения вирус обнаруживали в трахее и разных частях легких; максимальное содержание его выявлялось уже через сутки и удерживалось на одном уровне до 5-го дня после заражения. Через 6 ч титр вируса составлял 103 ИД50 в 1 г ткани.

С 9-го дня после экспериментального заражения активная репродукция вируса прекращается. Скрытое вирусоносительство может продолжаться до трех месяцев. Вирус гриппа человека H3N2 легко передается свиньям, а вирус гриппа H1N1 представляет большую опасность для человека. Подтверждена также возможность передачи ВГС телятам.

Культивирование. Вирус репродуцируется в КЭ, не вызывая их гибели, мышах, хорьках и культуре клеток. Адаптированные к КЭ штаммы вызывают появление на ХАО беловатых точечных фокусов. При заражении КЭ в аллантоисную полость на теле зародышей появляются геморрагии. Для культивирования используют 10—11-дней КЭ. Максимальное накопление вируса происходит в течение 48—72 ч, титр его в аллантоисной или амниотической жидкости обычно достигает 107—10s ЭИД50 /мл. Присутствие вируса в экстраэмбриональных жидкостях устанавливают с помощью РГА. ВГС можно адаптировать к организму белых мышей или хорьков и непрерывно вести интраназальные пассажи. Возможна репродукция вируса в культуре клеток почки теленка, обезьяны, хомяка, мыши, поросенка и легких эмбриона свиньи. Вирус приобретает цитопатогенные и ГА-свойства и накапливается в высоких титрах 105—10& ЭИД50/МЛ и 10б ТЦД50/МЛ. При одновременном инфицировании культуры фибробластов КЭ вирусами чумы птиц FPVh гриппа свиней SW размножается только FPV, так как размножение SW ингибируется, причем интерференция происходит не на стадии адсорбции, а на более поздней стадии вирусной репликации. В естественной популяции ВГС A/N1/11/ 76 обнаружены варианты Z и Н, имеющие мутации ГА и различающиеся по степени репродукции в КЭ, организме свиней и клетках МДСК.

ВГС агглютинирует эритроциты кур морской свинки, человека (0-группы), утки, галки, хорька, крысы, собаки, ежа, но в более низких разведениях, чем вирус гриппа человека типов А и В. При выращивании в КЭ при 35—37 °С вирус имел титр ГА 1:10-1:80, однако после серийных пассажей при 38 "С титр ГА возрос до 1:2048. Отмечена корреляция титра ГА и инфекционности вируса для КЭ.

ГАд свойства воспроизводятся общепринятым методом в культуре фибробластов КЭ с эритроцитами курицы, морской свинки или 0-группы человека.

Источники и пути передачи инфекции. Грипп свиней подобно гриппу человека — воздушно-капельная инфекция. ВГС могут долгое время существовать в организме свиней, возможно, в географически ограниченных районах. Отличные друг от друга штаммы ВГС циркулировали в Южном и Центральном Квебеке (Канада), по крайней мере, до 1993 г. В природе вирус поддерживается необычным биологическим механизмом, например легочными гельминтами свиней (Metagastrongilus elangatus, Chaerostrongilus puderdorectus), инфицированные яйца которых попадают во внешнюю среду и захватываются дождевыми червями. При поедании последних свиньями создаются условия для возникновения энзоотии. В дождевых червях вирус может сохранятся до 19 месяцев. Однако появились данные о наличии хронической или латентной инфекции у отдельных животных, свободных от легочных гельминтов. Так, в частности, появились данные о трансплацентарной передаче ВГС. Он участвует в пролиферативной и некротической пневмонии свиней.

Иммунитет и специфическая профилактика. Продолжительность иммунитета у свиней-реконвалесцентов не изучена. Анти-ГА и ВНА в крови выявляются до 8—10 месяцев. Для профилактики ГС в ряде стран используются инактивированные вакцины, обеспечивающие достаточно напряженный иммунитет. Свиньи, привитые дважды вакциной Suvaxyn Flu-3, приобретают полную устойчивость к экспериментальному заражению. В организме вакцинированных свиней гомологичный вирус не размножался. В случае возникновения заболевания проводят поголовную вакцинацию свиней. Разработка и испытание инактивированных вакцин для профилактики ГС продолжаются. Живой, температурочувствительный штамм ВГС обеспечивал некоторую защиту свиней.

Gourean и другие описали инактивированную адъювант-вакцину против ГС (H1N1), которая превосходит жидкую инактивированную вакцину. AT не ее введение выявлялись через 15 дней и сохранялись до 2 месяцев после вакцинации. При 2-й инокуляции (бустериммунизации) AT сохранялись до 8 месяцев. При инфекции свиней свиным вирусом гриппа H1N1, а затем H3N2 у свиней не наблюдалось повышение температуры тела и вирус выделялся в меньших титрах, чем при заражении только вирусом H3N2. Наблюдалось повышение IgG антител в сыворотке к домену экстраклеточного вирусного белка М2, но не NP, что свидетельствует о роли первого белка в иммунитете более широкого спектра. Наблюдалось также увеличение СД8+Т клеток в легких и лимфопролиферативный ответ в крови, что также свидетельствует о роли СД8+Т клеток в гетеротипичном иммунитете.

Вакцина против гриппа свиней представляет собой аттенуированный рекомбинантный вирус осповакцины, в геном которого встроены гены, кодирующие гемагглютинин и нейраминидазу вируса гриппа. Эффективная вакцинация против гриппа свиней уменьшает экономические потери в индустрии свиней и возможность возникновения новых пандемических вирусов, поскольку свиньи являются промежуточными хозяевами, генерирующими пересортировку вирусов среди птиц и млекопитающих. Интраназальная иммунизация свиней вакциной, инактивированной формалином, или эфиррасщепленной, вызывает образование вирусопецифических антител: IgG. IgM и IgA в назальных секретах и сыворотке, давая полную защиту от вируса. У иммунизированных свиней не наблюдалось реакции образования антител при разрешающем заражении, что свидетельствовало о подавлении репликации вируса в первичных мишенях — респираторных эпителиальных клетках. Результаты указывают на эффективность контроля гриппа свиней инактивированными вакцинами и обеспечивают хорошую модель, подобно мышиной модели, для оценки интраназального применения гриппозной вакцины для человека. Разработан мультиплексный метод обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) для идентификации подтипов генов гемагтлютининов (Н) 1 и 3 вируса гриппа свиней. Результаты ОТ-ПЦР сравнили с данными субтипирования с использованием теста ин-гибирования гемагглютинации. Проведен анализ 235 образцов, полученных от свиней с ОРВИ и выявили 26 и 13 образцов позитивных по HI и НЗ соотвественно. Сделан вывод, что мультиплексная ОТ-ПЦР может быть использована для выявления и субтипирования вируса гриппа свиней.

Свиной грипп – это инфекционное заболевание, вызванное вирусом гриппа В и его многочисленных подвидов. Как происходит заражение и как можно это предотвратить?

Давайте рассмотрим симптомы болезни, которые часто абсолютно идентичны обычному гриппу или простуде.

Что такое свиной грипп

Свиной грипп – это заболевание дыхательных путей, очень заразное и с тенденцией к острому течению (появляется внезапно и уходит после достаточно короткого промежутка времени). Свиной грипп вызывают некоторые типы вируса гриппа, а именно от вирусы гриппа типа В и C, подтипы H1N1, H1N2, H2N1, H2 N3, H3N1, H3N2.

Наиболее распространенным является вирус гриппа H1N1.

Обычно вирусы гриппа живут в балансе с эндемичными видами и с трудом переходят от одного вида к другому. Следовательно, вирусы птичьего гриппа заражают птиц, вирус гриппа свиней встречается у свиней, его влияние на человека весьма ограничено. Это обуславливается тем, что для перехода вируса на клетку-хозяина, последняя должна иметь на мембране соответствующие рецепторы.

Например, вирус птичьего гриппа вряд ли перейдёт на человека, потому что он имеет очень мало клеток в дыхательной системе, которые экспрессируют на своей мембране рецепторы, способствующие адгезии таких вирусов.

Однако, может случиться так, что вирус гриппа человека и вирус птичьего гриппа одновременно заражает одну свинью, которая обладает как рецепторами птиц, так и человека. В результате, вирус приобретает способность связываться с рецепторами, специфическими для вируса гриппа человека. Тогда может произойти развитие эпидемии.

Так вирус не только передается от свиньи к человеку, но и приобретает способность быстро перемещаться от человека к человеку. В наше время сверхмобильности населения эпидемия может легко превратиться в пандемию.

Первая зафиксированная пандемии свиного гриппа имела место с января 1918 до декабря 1920 года, более известна как испанский грипп. Изучение вирусной РНК показало, что эта пандемия была вызвана вирусом гриппа A H1N1. Он затронул более 500.000.000 людей по всему миру: от Антарктики до островов Тихого океана. В результате чего погибло от 50 до 100 миллионов человек (оценки являются приблизительными, потому что во многих местах не велось реестра смертей, и даже там где были, данные подвергались цензуре из-за первой мировой войны).

Вторая пандемия свиного гриппа была отмечена в 2009-2010 годах. Виновником вновь оказался вирус H1N1.

Заражение и инкубационный период вируса

Распространение вируса гриппа A H1N1 путём контакта с вирусом, который содержится в аэрозольных частицах, испускаемых зараженным человеком время чихания или кашля. Другой путь заражения – это прямой контакт с выделениями из дыхательных путей.

Инкубационный период свиного гриппа длится несколько дней (1-3 с момента заражения).

Можно так же выделить несколько факторов риска, способствующих заражению свиным гриппом:

Работа при частом контакте со свиньями, например: ветеринар, фермер.
Путешествие в регионы или страны, в которых в настоящее время наблюдается эпидемия заболевания.
Контакт с инфицированным человеком.
Посещение мест большого скопления людей.

Следует отметить, что потребление в пищу свинины не представляет абсолютно никакой опасности.

Симптомы и возможные осложнения свиного гриппа

Симптомы свиного гриппа очень похожи на проявления других штаммов вирусов гриппа, в частности:

Лихорадка и озноб.
Чихание и заложенность носа.
Жжение в глазах и слезотечение.
Боли в мышцах и голове.
Боль в горле.
Сухой кашель.
Усталость и утомление даже после минимальных усилий.
Желудочно-кишечные проблемы, такие как тошнота, рвота и диарея.
Отсутствие аппетита.
Спутанность сознания у пожилых пациентов.

Наиболее грозным осложнением является бактериальная инфекция легких и, следовательно, пневмония, которая может привести к сепсису.

Другими возможными осложнениями свиного гриппа являются:

Неврологические проблемы. Это могут быть судороги.
Дыхательная недостаточность (неспособность дыхательной системы обеспечить адекватный газообмен, который необходим для насыщения кислородом организма).
Обострение хронических заболеваний пациента. Это осложнение, типичное для пожилых людей, которые обременены болезнями, такими как диабет и сердечно-сосудистые заболевания.
Обезвоживание. И, соответственно, гастроэнтерологические проблемы (рвота и/или диарея).

Некоторые люди имеют безусловную предрасположенность к развитию осложнений гриппа ввиду слабости иммунной системы:

Возраст больше 65 лет.
Младенцы и маленькие дети.
Лица с ослабленным иммунитетом, например, зараженные ВИЧ.
Больные хроническими заболеваниями: диабет, астма, эмфизема легких, заболевания сердца, анемия и других заболеваний крови.
Женщины во время беременности.

Диагностики и терапия свиного гриппа

Чтобы быть уверенным в заражении свиным гриппом, необходимо собрать образец выделений из дыхательных путей, мазок из носа или зева в первые 4-5 дней после появления симптоматики и провести микробиологический анализ методом ПЦР, который обнаруживает фрагменты РНК вируса.

Лечение свиного гриппа, как правило, сводится к отдыху в постели и приему парацетамола, чтобы держать под контролем болезненные симптомы и снизить температуру тела при лихорадке.

Если пациент страдает от патологии органов дыхания, то могут быть предписаны пенициллины, чтобы бороться с воспалением дыхательных путей и препараты для разжижения секрета.

Недостаточность иммунной системы может потребовать введения противовирусных препаратов с активными ингредиентами, такие как занамивир и осельтамивир. Эти препараты так же вводят пациентам, которые имеют высокий риск развития опасных осложнений, см. список выше.

Как предотвратить свиной грипп

Ниже мы резюмируем основные меры, которые можно применить, чтобы предотвратить заражение вирусом свиного гриппа:

Вакцинация против сезонного гриппа. Ежегодно состав вакцин меняется, исходя распространенности тех или иных типов вируса гриппа. Но, в любом случае, вакцинация помогает иммунной системе даже в случае новых подтипов вирусов.
Часто мытьё рук с мылом. Помогает предотвратить передачу вируса через предметы.
Избегание закрытых помещений и многолюдных.
Избегайте контакта со свиньями и посещения мест, где их можно увидеть и потрогать (например, сельскохозяйственные выставки).
Избегайте контакта с больными гриппом.

Читайте также: