Репликация вируса гриппа происходит в эпителиоцитах
Гриппу подвержены все возрастные группы. В 2002 г. в России зарегистрировали 1 млн 719 тыс. 106 случаев гриппа (1 190,6 случаев на 100 000 человек), что в структуре инфекционных заболеваний составило 6,2% [2]. Дети болеют гриппом в 4,6 раза чаще, чем взрослые. Пик заболеваемости в детском возрасте отмечен в группе 7–14-летних. Смертность от гриппа и его осложнений занимает первое место в структуре смертности среди всех инфекционных и паразитарных заболеваний.
Во время эпидемий частота госпитализаций по поводу гриппа и его осложнений среди пациентов моложе 65 лет с одним и более сопутствующим заболеванием составляет 56–63,5 случая на 100 000 человек, а у пациентов без сопутствующей патологии — 13–60 случаев на 100 000 человек [3]. В структуре смертности ведущее место занимают пациенты старше 65 лет — 80–90%, тогда как смертность среди пациентов 45–64 лет без сопутствующей патологии составляет примерно 2 случая на 100 000 человек [4].
Вирусология. Вирус гриппа относится к семейству ортомиксовирусов. Выделяют, в зависимости от содержания отдельных протеинов, три серологических типа вируса: А, В и С. При электронной микроскопии вирус выглядит как сферическая частица с располагающимися на поверхности гликопротеинами: гемагглютинином (Н) и нейраминидазой (N) [5].
Природным резервуаром вируса гриппа А являются птицы, редко — животные. Вирус гриппа В встречается только у людей, вирус гриппа С — у людей, свиней и, возможно, собак. Периодические пандемии и частые эпидемии, ассоциированные с высокой заболеваемостью и смертностью, связывают с вирусом гриппа А, реже — с вирусом гриппа В, а грипп С, как правило, протекает в инаппарантной (бессимптомной) форме и почти не влияет на уровень заболеваемости [1].
С учетом антигенных различий поверхностных гликопротеинов вирус гриппа А подразделяется на подтипы. Различают 15 подтипов гемагглютининов (Н1–Н15) и 9 подтипов нейраминидаз (N1–N9). Каждое изменение антигенной структуры поверхностных гликопротеинов в результате мутаций вируса вызывает развитие новых пандемий и эпидемий. Существенная группа антигенных разновидностей вируса гриппа А (Н5 и Н7) циркулирует только в пределах природного резервуара, вызывая заболевание исключительно у птиц и, в редких случаях, у свиней. Наибольшую проблему в последние годы представляют те вирусы, которые смогли преодолеть межвидовой барьер вследствие мутаций с образованием новых, высокопатогенных, подтипов.
В зависимости от степени генных изменений выделяют антигенный дрейф (drift) и антигенную трансформацию (shift) [1].
Антигенный дрейф представляет собой генные мутации в виде перемещений участков генома внутри одного подтипа вируса А или В. Изменяются гены, кодирующие поверхностные гликопротеины (чаще Н). Антигенная природа вируса меняется. В результате один и тот же подтип вируса распознается иммунной системой человека как новый. С антигенным дрейфом связывают вспышки заболеваемости в межпандемический период.
Антигенная трансформация состоит в перемещении генных участков между геномами двух разных подтипов вируса гриппа А (причем не только между человеческими подтипами, но также между птичьим и человеческим). Антигенная трансформация вызывает значительные изменения Н и, возможно, N. С антигенной трансформацией связывают развитие пандемий гриппа А.
N, в свою очередь, облегчает высвобождение вирусных частиц с поверхности инфицированных клеток и предотвращает их слипание. В силу способности N расщеплять сиаловую кислоту терминальных участков протеинов, находящихся на поверхности эпителиальных клеток, а также содержащихся в N и Н вновь синтезированных вирусных частиц, вирус распространяется в организме. Если же N ингибирована (медикаментозно) или разрушена (например, у чувствительных штаммов при изменении температуры), то вновь синтезированные вирусные частицы слипаются, образуя крупные агрегаты на поверхности эпителиальных клеток, и распространение инфекции прекращается [1]. N облегчает продвижение вируса через мукополисахаридный слой, выстилающий эпителий верхних дыхательных путей. Кроме тогo, изменения N при антигенном дрейфе способствуют выживаемости вируса, защищая его от распознавания иммунной системой макроорганизма.
Репликация вируса происходит в эпителиальных клетках респираторного тракта. Цикл репликации составляет 4–6 ч. После этого вирусные частицы высвобождаются с поверхности эпителиальных клеток и инфицируют близлежащие клетки. Таким образом, за короткий период многие клетки эпителия верхних дыхательных путей оказываются пораженными, высвобождая вирус или погибая.
В присутствии рибонуклеиновой кислоты (РНК) вируса лейкоциты вырабатывают интерфероны, способные блокировать репликацию вируса. Однако вирус гриппа противостоит этому защитному механизму вследствие наличия NS1-протеина. Последний частично нарушает синтез белка в клетке макроорганизма путем блокирования транспорта матричной РНК из ядра, в результате чего снижается выработка интерферона [8]. На основе этих данных, используя генно-инженерные методы, можно создать культуру вируса, в которой бы отсутствовал эффекторный участок NS1-протеина, а значит создать и новый тип вакцины.
Исследования выделенного в 1997 г. вируса А (H5N1) показали наличие ряда факторов, которые делают вирус высоковирулентным. К ним относятся измененный H, облегчающий слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной, а также специфические протеины, пролонгирующие репликацию вируса и повышающие его резистентность к компонентам противовирусного иммунитета (интерферону, фактору некроза опухоли a, макрофагам и др.) [10]. Однако относительно низкая заболеваемость у людей, несмотря на широко распространенные контакты с больной домашней птицей, свидетельствует о достаточно высокой прочности межвидового барьера.
Эпидемиология. Инфицирование происходит при вдыхании микрокапель секрета дыхательных путей, образующихся при кашле или сморкании. Цикл репликации длится 4–6 ч. Выделение вируса из дыхательных путей инфицированного человека начинается за 1–2 дня до появления симптомов и прекращается через 5–7 дней после исчезновения клинических проявлений болезни. Эти сроки могут увеличиваться у детей и пациентов с иммуносупрессией.
Высокая вирулентность, короткий инкубационный период, массивное выделение с назофарингеальным секретом способствуют быстрому распространению вируса гриппа, особенно в изолированных группах людей. Так, например, грипп является важной причиной внутрибольничных вспышек, увеличивая заболеваемость и смертность в отделениях интенсивной терапии, неонатальных и гериатрических отделениях.
Заболеваемость гриппом носит четкий сезонный характер, что может быть связано с несколькими причинами: скоплением людей в закрытых помещениях в плохую погоду, учебными занятиями в школах и институтах с начала осени до конца весны и, возможно, лучшей выживаемостью вируса в аэрозоле в зимние месяцы. Вспышки гриппа совпадают с повышением заболеваемости другими респираторными инфекциями, вызываемыми, в частности, респираторным синцитиальным вирусом, коронавирусом, риновирусом, аденовирусом. Летом вспышки гриппа наблюдаются в Южном полушарии, зимой — в Северном.
Короткие вспышки инфекции обычно начинаются внезапно и длятся 5–6 нед. Число заболевших быстро растет, достигая максимума и сохраняясь на этом уровне 2–3 нед, а затем идет на убыль. При уровне еженедельной заболеваемости более 100 случаев на 100 000 человек констатируются эпидемии гриппа [13], продолжительность которых может достигать 3 мес. Высок риск заболеть у детей до 1 года, лиц старше 65 лет, имеющих сопутствующие заболевания (сердечно-сосудистые и хронические легочные заболевания, сахарный диабет, почечная недостаточность, неврологические расстройства, иммуносупрессии), а также у беременных [14].
С 1948 г. активность вируса гриппа ежегодно оценивается национальными отделениями ВОЗ по изучению этой инфекции более чем в 80 странах. Определяются время и место циркуляции тех или иных подтипов вируса, степень их активности и особенности течения вызванной ими инфекции, изучаются новые антигенные варианты вируса. На основании этих данных специальное подразделение ВОЗ (WHO Collaborating Center for Reference and Research on Influenza at CDC) дает рекомендации по профилактике, лечению и ограничению распространения гриппа в предстоящем сезоне. В феврале каждого года ВОЗ рекомендует соответствующие штаммы вируса для включения в вакцину на следующий сезон в Северном полушарии. Так, на 2007–2008 гг. эксперты ВОЗ рекомендуют такие штаммы: A/Solomon Islands/3/2006 (H1N1), A/Wisconsin/67/2005 (H3N2) и B/Malaysia/2506/2004 [15].
Клинические проявления. Клиническая картина гриппозной инфекции включает широкий спектр проявлений — от бессимптомного течения до развития вторичной бактериальной или первичной вирусной пневмонии и полиорганных осложнений. Это зависит от возраста, иммунного статуса, наличия сопутствующей патологии, беременности (у женщин детородного возраста) [1, 16, 17].
Инкубационный период продолжается 1–4 дня (в среднем 2 дня). При гриппе А (H5N1) инкубационный период может увеличиваться до 8 дней. Пациенты могут быть заразны для окружающих за 1 день до появления клинических симптомов и до 5 дней после их исчезновения. Дети могут быть заразны более длительное время.
Неосложненный грипп у взрослых. Характерны острое начало таких системных и респираторных проявлений, как лихорадка, головная боль, озноб, суставная и мышечная боли, анорексия, саднение в горле, непродуктивный кашель, ринит со слизистыми выделениями. Лихорадка до 38–40 °С — наиболее частый системный симптом — может длиться от 1 до 5 дней. Разрешение симптомов наступает обычно через 3–5 дней, хотя слабость и кашель могут сохраняться в течение 2 нед после нормализации температуры тела. Для дебюта гриппа А (H5N1) более характерны диарея, рвота, абдоминальная и плевральная боли, носовые и десневые кровотечения (иногда даже при отсутствии респираторных проявлений).
Грипп у детей. Обычно клинические проявления гриппа у детей схожи с таковыми у взрослых, но наблюдаются и некоторые возрастные особенности. Так, например, сонливость встречается у каждого второго болеющего ребенка в возрасте до 4 лет. Высокая лихорадка — признак, отмечаемый более часто у детей, нежели у взрослых. На высоте лихорадки у детей могут возникать судороги (фебрильные судороги). Гастроинтестинальные расстройства — тошнота, рвота, боли в животе, диарея — встречаются у 40% детей, причем в некоторых случаях симптомы могут быть столь выраженными, что симулируют аппендицит. Миалгии (чаще — боли в ногах и спине) возникают в ранние сроки болезни. Миозит — нечастое осложнение (чаще всего гриппа В), возникающее в период реконвалесценции; проявляется болями и слабостью в ногах, может сопровождаться миоглобинурией (с нарушением функции почек или без такового), длится 1–5 дней.
Частота госпитализаций у детей в период эпидемий гриппа колеблется в зависимости от возраста и наличия факторов риска. У детей 0–4 лет частота госпитализаций составляет 100–500 на 100 000, достигая максимума в возрастной группе 0–6 мес — до 1040 на 100 000 [18].
Грипп у пожилых. Если учитывать распространенность сопутствующих заболеваний, то пожилые люди составляют группу высокого риска развития осложнений гриппа. Частота госпитализаций по поводу обострения/декомпенсации сопутствующих заболеваний у лиц старше 65 лет в период эпидемий гриппа составляет 200–1000 на 100 000 [19].
При гриппе у пациентов пожилого и старческого возраста чаще, чем у молодых, поражаются нижние отделы дыхательного тракта, что клинически проявляется экспекторацией мокроты, свистящими хрипами или болями в грудной клетке.
Осложнения со стороны органов дыхания. Наиболее частые респираторные осложнения гриппа включают острый бронхит, ларинготрахеобронхит, бронхиолит, пневмонию, абсцесс легкого, эмпиему плевры, пневмоторакс, обострение хронического бронхита/хронической обструктивной болезни легких, бронхиальной астмы и муковисцидоза.
Пневмония развивается у 5–38% пациентов с гриппом А и у 10% с гриппом В [1]. Различают первичную вирусную пневмонию (в результате непосредственного вирусного поражения легких) и вторичную бактериальную пневмонию (она может сочетаться с первичной вирусной или быть самостоятельным поздним осложнением гриппа).
Другие респираторные осложнения гриппа [1, 20]:
- острый средний отит;
- обострение фиброзирующего альвеолита (вирусная инфекция верхних дыхательных путей и развитие вторичной бактериальной инфекции вызывает прогрессирование заболевания);
- абсцесс легкого;
- эмпиема плевры;
- инвазивный легочный аспергиллез.
Нереспираторные осложнения. Вирус гриппа редко обнаруживается за пределами бронхолегочной системы, и развитие нереспираторных осложнений обычно связывается с патоиммунными механизмами, а не с непосредственным цитопатическим действием вируса.
Синдром Рейе. Синдром острой энцефалопатии и жировой инфильтрации внутренних органов развивается у детей и подростков 2–18 лет. В этом случае через 5–6 дней после начала вирусной инфекции появляется неукротимая рвота, сопровождающаяся внезапным изменением психического статуса. Прием салицилатов во время гриппозной инфекции увеличивает риск развития синдрома Рейе.
Осложнения со стороны сердечно-сосудистой системы. Изменения электрокардиограммы без клинических проявлений встречаются у 81% госпитализированных больных с гриппом и y 43% амбулаторных больных [1]. Чаще всего эти изменения не сопровождаются клиническими проявлениями и продолжаются короткое время (до 24 ч), реже — месяцы и годы. Иногда у пациентов с латентно протекающей сердечной патологией переносимая гриппозная инфекция является провоцирующим фактором для развития тяжелых нарушений ритма или рестриктивной кардиомиопатии. Миокардит — характерное осложнение гриппа — протекает, как правило, бессимптомно. Грипп часто вызывает ухудшение течения уже имеющихся у пациентов сердечно-сосудистых заболеваний, и прежде всего сердечной недостаточности.
Сахарный диабет. Больные сахарным диабетом 2 типа умирают от гриппа и пневмонии в 1,7 раз чаще, чем в популяции. Во время эпидемий гриппа А в 1968–1970 и 1972–1973 гг. смертность среди пациентов только с сердечно-сосудистыми заболеваниями составила 104 на 100 000, а среди пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и диабетом — 481 на 100 000 человек [1].
Другие нереспираторные осложнения:
- неврологические расстройства (фебрильные судороги, токсическая энцефалопатия, вирусный энцефалит, иммунный параинфекционный энцефалит);
- бактериальный менингит;
- цереброваскулярные заболевания;
- психические расстройства.
Поражения нижних дыхательных путей, встречающиеся у большинства пациентов, проявляются уже в ранние сроки заболевания. В среднем на 6-е сутки появляются одышка, продукция мокроты, выслушивается инспираторная крепитация. Почти у всех пациентов диагностируется пневмония. Ограниченные микробиологические данные свидетельствуют о первичном вирусном характере воспаления легких. Рентгенологические симптомы разнообразны и включают диффузные, многофокусные или локальные инфильтраты (сегментарные или дольковые), а также интерстициальную инфильтрацию. Плевральный выпот не является характерным.
Часто инфекция приобретает прогрессирующее течение с развитием острого респираторного дистресс-синдрома, полиорганной недостаточности с поражением почек и сердца. Реже развиваются другие тяжелые осложнения: вентилятор-ассоциированная пневмония, легочное кровотечение, пневмоторакс, панцитопения, синдром Рейе.
Большинство госпитализированных пациентов уже в ранние сроки нуждались в респираторной поддержке. В некоторых случаях требовалось проведение интенсивных мероприятий в связи с выраженной гипотензией и развивающейся полиорганной недостаточностью.
Продолжение читайте в следующем номере.
По вопросам литературы обращайтесь в редакцию.
А. И. Синопальников, доктор медицинских наук, профессор
Ю. Г. Белоцерковская
ГИУВ МО РФ, Москва
1. Укажите специфическое средство для лечения тяжелых и ослож-
ненных форм гриппа:
Правильный ответ: в
2. Для плановой профилактики гриппа используется:
б) гаммаглобулин специфический
в) сыворотка противогриппозная
Правильный ответ: г
3. Увеличение печени и селезенки характерно для:
б) аденовирусной инфекции
в) респираторно-синцитиальной инфекции
г) риновирусной инфекции
Правильный ответ: б
4. Увеличение лимфатических узлов характерно для:
б) аденовирусной инфекции
в) респираторно-синцитиальной инфекции
г) риновирусной инфекции
д) всех перечисленных
Правильный ответ: б
5. Наличие сыпи наиболее вероятно при:
б) аденовирусной инфекции
в) респираторно-синцитиальной инфекции
г) риновирусной инфекции
д) всех перечисленных
Правильный ответ: б
6. Синдром крупа характерен для:
в) аденовирусной инфекции
г) риновирусной инфекции
д) респираторно-синцитиальной инфекции
Правильный ответ: б
7. Назовите препарат, используемый для иммунизации населения:
д) иммуноглобулин коревой
Правильный ответ: б
8. Наиболее тяжелым клиническим вариантом течения гриппа является:
Правильный ответ: д
9. Для риноцитоскопического исследования при гриппе производят
а) слюны, мокроты
б) отделяемого из носа
Правильный ответ: б
10. К диагностическим критериям аденовирусной инфекции относятся
а) выраженного катарального синдрома с преобладанием
б) выраженных изменений со стороны нервной и сердечно-сосудистой
в) острого начала с умеренной интоксикацией
д) способности возбудителя размножаться в кишечнике
Правильный ответ: б
11. Укажите характерный симптом аденовирусной инфекции:
б) гнойные наложения на слизистой миндалин
в) увеличение околоушных желез
г) глаза кролика-альбиноса
д) пятна Бельского-Коплика-Филатова
Правильный ответ: а
12. Для парагриппа не характерно:
а) кратковременная вирусемия
б) слабые явления интоксикации
в) активация бактериальной флоры
г) развитие у взрослых менингеального синдрома
д) длительность инкубационного периода до 2-7 дней
Правильный ответ: г
13. Ведущим путем передачи инфекции при диареях аденовирусной
Правильный ответ: в
14. Наиболее типична локализация патологического процесса при
Правильный ответ: в
15. Укажите характер воспаления верхних дыхательных путей при неосложненном
д) правильного ответа нет
Правильный ответ: а
16. Естественным резервуаром сохранения вируса гриппа A (H5Nа)
(птичьего гриппа) является:
г) водоплавающие птицы
Правильный ответ: г
17. Вирус гриппа отнесен к семейству:
Правильный ответ: д
18. Репликация вируса гриппа происходит в:
Правильный ответ: г
19. К группам высокого риска заболевания гриппом относятся все
а) учащихся младшего возраста
б) медицинского персонала
в) военнослужащих на казарменном положении
г) работников транспорта и сферы обслуживания
д) взрослого трудоспособного населения
Правильный ответ: д
20. К звеньям патогенеза гриппа относятся все перечисленные, кроме:
а) репликации вируса в клетках цилиндрического эпителия
б) серозного воспаления слизистых оболочек
в) угнетения неспецифических и специфических гуморальных
г) активации условно-патогенной микрофлоры
Правильный ответ: д
21. При гриппе A (H5Nа) (птичьем гриппе) у человека могут наблюдаться все
клинические проявления, кроме:
в) острого респираторного дистресс-синдрома
Правильный ответ: д
22. При гриппе А в гемограмме определяются:
а) лейкопения, нейтропения, эозинопения, умеренный моноцитоз
б) лейкоцитоз, сдвиг формулы крови влево
в) нормоцитоз, повышенная СОЭ
г) лейкопения, лимфопения, тромбоцитопения
д) анемия, повышенная СОЭ
Правильный ответ: г
23. Субстратом для вирусологического исследования при гриппе является:
Правильный ответ: а
24. Какой метод применяется для лабораторной экспресс-диагностики гриппа ?
б) кожноаллергическая проба
Правильный ответ: д
25. Предварительный диагноз гриппа A (H5Nа) (птичьего гриппа) может
быть поставлен на основании сочетания всех перечисленных
клинико-эпидемиологических данных, кроме:
а) контакта с больным ОРВИ неясной этиологии
б) контакта с больной домашней птицей, случаи массовой гибели кур
в) лихорадки в сочетании с затрудненным дыханием, кашлем
г) примеси крови в фекальных массах
д) диареи (при отсутствии примеси крови в испражнениях)
Правильный ответ: д
26. Этиотропное лечение больного гриппом А при неосложненном течении
Правильный ответ: д
27. Для химиопрофилактики гриппа используют:
б) специфический иммуноглобулин
Правильный ответ: г
28. К факторам риска развития тяжелых форм гриппа A (H5Nа)
(птичьего гриппа) у людей относят все, кроме:
а) длительности срока заболевания до госпитализации
б) полиорганного дисфункционального синдрома
г) тяжелого иммунодефицита
д) лейкопении, лимфопении, тромбоцитопении
Правильный ответ: в
29. Наличие в клинике заболевания высокой лихорадки и
незначительных катаральных явлений говорит о:
б) аденовирусной инфекции
в) геморрагической лихорадке с почечным синдромом
д) менингококковой инфекции
Правильный ответ: г
30. Ведущим методом лечения гриппа является:
а) отсутствие клеточного
строения;
б) наличие только одного типа нуклеиновой кислоты;
в) наличие белоксинтезирующей системы;
г) дизъюнктивный тип
репродукции;
а) обработать раствором щелочи;
б) обработать антибиотиками;
в) прогреть при температуре
80 °С в течение 20 мин;
г) подвергнуть центрифугированию.
^ :
а) феномен гемадсорбции;
б) феномен интерференции;
г) образование бляшек;
а) гибель эмбриона;
б) феномен интерференции;
г) образование бляшек;
а) выявления вируса в курином эмбрионе;
б) выявления вируса в культуре клеток;
в) идентификации вируса;
г) серодиагностики вирусных
заболеваний.
^ :
б) цветную пробу Солка;
д) РН.
8. Вирусные гастроэнтериты могут вызывать
представители следующих
семейств:
б) имеющие суперкапсид;
г) не имеющие суперкапсида.
^ :
12. Для продуктивного типа взаимодействия вируса
с клеткой характерно:
а) прерывание инфекционного процесса в клетке
на определенном этапе;
б) встраивание вирусной ДНК
в виде правируса в хромосому клетки и совместное
существование;
в) образование нового поколения вирионов.
^ :
а) прерывание инфекционного процесса в клетке на определенном этапе;
б) встраивание вирусной ДНК в виде правируса в хромосому клетки и совместное существование;
в) образование нового поколения вирионов.
^ :
а) прерывание инфекционного процесса в клетке на определенном этапе;
б) встраивание вирусной ДНК
в виде правируса в хромосому клетки и совместное
существование;
в) образование нового поколения вирионов.
^ :
а) гигантская многоядерная
клетка;
б) совокупность эритроцитов,
адсорбированных на поверхности пораженной вирусом клетки;
в) вирусные включения в клетке;
г) губкообразные скопления
нервной ткани, возникшие
под воздействием прионов.
^ :
а) об отсутствии вируса;
б) об отсутствии патогенных
бактерий;
в) о наличии патогенных
бактерий;
д) о присутствии вируса.
^ :
г) вирион.
18. Для просто устроенных
вирусов характерно наличие:
г) пепломеров.
20. Капсид состоит из морфологических субъединиц,
которыми являются:
а) вирусов, не дающих отчетливого цитопатического действия;
б) вирусов с отчетливыми
проявлениями цитопатического
действия;
в) вируса везикулярного соматита;
г) ДНК-содержащих вирусов.
^ :
а) тип нуклеиновой кислоты;
б) размер и морфология вирионов;
в) тинкториальные свойства;
г) наличие суперкапсида;
д) антигенные свойства.
^ :
г) перевиваемые.
25. Человеческий лейкоцитарный интерферон используют для:
а) диагностики вирусных
инфекций;
б) определения уровня естественной резистентности в РНГА;
в) лечения и экстренной профилактики вирусных инфекций.
г) аденовирусов.
27. Поливалентная гриппозная сыворотка используется для:
а) экстренной профилактики;
г) лечения.
29. Семейство Orthomixoviridae включает следующие родовые таксоны:
а) сложными вирусами;
в) не имеют внечеловеческого
резервуара;
г) возбудители ОРЗ;
д) имеют нуклеокапсид
спиралевидной симметрии.
^ :
б) масштаб антигенной
изменчивости;
в) строение вириона;
г) спектр вирионных ферментов;
а) матриксный белок;
б) матриксным белком;
д) РНК-полимеразным комплексом.
^ :
д) ферментами РНК-полимеразного комплекса.
^ :
б) высокая мутабельность;
г) транскрипция / репликация
в цитоплазме;
б) РНК-зависимая РНК-полимераза;
в) обратная транскриптаза;
а) инициирует взаимодействие вируса с клеткой;
б) обретает активность после
ограниченного протеолиза;
в) является фактором слияния;
г) является протективным
антигеном;
д) отличается эпиотропным
консерватизмом;
е) имеется у всех типов (видов) рода Influenza.
^ :
а) является протективным
антигеном;
б) обеспечивает рецепцию
вирионов;
в) является фактором
распространения;
г) отличается эпиотропной
изменчивостью;
д) имеется у всех типов (видов) рода Influenza.
^ :
в) ферментам РНК-полимеразного комплекса;
а) характерен только для типа А;
б) имеет экологическую детерминацию;
в) сопровождается сменой
субтипов поверхностных белков вириона;
г) содействует возникновению пандемических штаммов;
д) сопровождается сменой антигенного (эпиотропного) профиля нуклеокапсидных белков;
е) имеет генетическую
детерминацию.
^ :
а) рецепция вириона;
б) проникновение вириона
в клетку;
г) транспорт нуклеокапсида в ядро;
д) транскрипция и репликация вирусной РНК;
а) реакция связывания
комплемента;
г) реакция торможения
гемагглютинации;
д) реакция непрямой
гемагглютинации.
^ :
а) отсутствие протективных
антигенов;
б) антигенные различия между вакцинальными и эпидемическими штаммами;
в) типовая неоднородность;
в) типов А и С.
46. Геном вируса гриппа А представлен:
б) двунитчатой ДНК с однонитчатым участком;
а) в клетках эпителия
дыхательных путей;
б) в клетках лимфатических узлов дыхательных путей;
в) в макрофагах лимфатических узлов;
г) противогриппозный
гамма-глобулин;
д) инактивированную
гриппозную вакцину.
^ :
е) Pneumovirus.
50. Выберите положения, справедливые для парамиксовирусов:
а) вероятность шифт-вариаций;
б) антигенный (эпиотропный) консерватизм;
в) способность к симпластообразованию;
г) экологическая неоднородность;
д) универсальная склонность
к персистенции.
^ :
а) структура генома;
в) внутриклеточная локализация виропласта;
г) антигенная изменчивость;
д) принцип строения вириона.
^ :
г) склонность к дрейф-вариациям;
д) склонность к шифт-вариациям.
^ :
а) гемагглютинирующая
активность;
б) нейраминидазная активность;
в) взаимодействие с клеточными рецепторами;
г) протективная иммуногенность;
д) слияние с плазматической
мембраной.
^ :
б) РНК-зависимая
РНК-полимераза;
в) обратная транскриптаза;
г) обратная транскриптаза;
а) является отражением
шифт-вариаций;
б) является результатом
дрейф-вариаций;
в) закреплена в стабильных
(консервативных) иммунотипах;
г) проявляется на уровне
суперкапсидных белков;
д) имеет патогенетические
параллели.
^ :
а) живую коревую вакцину;
б) убитую коревую вакцину;
в) противокоревой
гамма-глобулин.
^ :
б) РНК- содержащим;
в) парамиксовирусом.
59. Вирус кори бывает
причиной:
а) склеротизирующего
энцефалита;
б) острого энцефалита;
в) герпетических высыпаний
на поверхности кожи.
^ :
а) заразный насморк;
в) энцефаломенингит.
61. Аденовирусы могут быть причиной:
Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.
Задуманные и разработанные эксперименты: WW. Выполняли эксперименты: WZ JLB. Проанализированы данные: WW WZ. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: WW WZ JLB JPM. Написал газету: WW WZ JPM.
Инфекция гриппа является основной причиной заболеваемости и смертности. Считается, что ретиноевая кислота-индуцибельный ген I (RIG-I) играет важную роль в распознавании вируса гриппа и других РНК-вирусов и реакции на него. В нашем исследовании основное внимание уделяется гипотезе о том, что пандемический вирус гриппа H1N1 / 09 изменяет вызванный гриппом провоспалительный ответ и подавляет антивирусную активность хозяина. Мы впервые сравнили врожденный ответ на клинический изолят вируса гриппа A (H1N1) pdm09, OK / 09, клинический изолят сезонного вируса H3N2, OK / 06, и на лабораторный адаптированный сезонный вирус H1N1 PR8 с использованием уникального человека модель органной культуры легких. Воздействие ткани легкого человека на вирус пандемии или сезонного гриппа приводило к инфицированию и репликации в альвеолярных эпителиальных клетках. Вирус пандемий индуцирует уменьшенную реакцию мРНК RIG-1 и противовирусного цитокинов, чем сезонный вирус в легких человека. Подавление антивирусного ответа и экспрессии мРНК RIG-1 подтверждалось на уровне белка с помощью ELISA и вестерн-блоттинга. Мы провели временной курс индукции RIG-I и интерферона-β (IFN-β) мРНК двумя вирусами. Индукция RIG-I и IFN-β по ОК / 09 имела более низкую амплитуду и более короткую продолжительность, чем вызванная PR8. Напротив, пандемический вирус OK / 09 вызвал аналогичную индукцию провоспалительных цитокинов, IL-8 и IL-6, как на транскрипционном, так и на трансляционном уровне, как PR8 в легких человека. Дифференциальные противовирусные реакции, по-видимому, не были связаны с различием в клеточной инфекционности, поскольку иммуногистохимия показала, что оба вируса заражают альвеолярные макрофаги и эпителиальные клетки. Эти данные показывают, что вирус pdm09 вируса гриппа A (H1N1) подавляет антивирусные иммунные ответы в инфицированном человеческом легком посредством ингибирования вирусной опосредованной индукции рецептора распознавания образов RIG-I, хотя индукция провоспалительной цитокины не изменялась. Эта иммуносупрессия антивирусного ответа хозяина пандемическим вирусом, возможно, способствовала более серьезным инфекциям легких, которые произошли в пандемии H1N1 в 2009 году.
В 2009 году глобальная вспышка, вызванная новым вирусом гриппа H1N1, распространенная во многих странах, заразила более 300 000 человек, имеющих по меньшей мере 16 000 подтвержденных человеческих смертей во всем мире (ВОЗ). Вирус был совершенно новым реассортированным вирусом [1], [2], и большинство населения не имело ранее существовавшего иммунитета против него. Вирус гриппа A (H1N1) pdm09 возник из двух штаммов вируса гриппа A свиней. Новый вирус имеет сегменты генов из североамериканского H3N2 тройного реассорта, классической свиной линии H1N1 и евразийского птичьего свиного вируса H1N1. Последовательный анализ этого нового пандемического вируса показал, что гемагглютинин (НА), нуклеопротеид (NP) и сегменты гена NS были получены из классических вирусов свиней через тройной реассортант. Сегменты PB1, PB2 и PA были получены из североамериканской линии тройной реорганизации H3N2. Кроме того, сегменты NA и M происходили от линии вируса евразийской свиньи. Вирус гриппа A (H1N1) pdm09 генетически и антигенно отличается от предыдущих сезонных вирусов гриппа A H1N1. Таким образом, сезонные вакцины против гриппа обеспечивали небольшую защиту [3].
В настоящее время патогенез и передача пандемического вируса гриппа H1N1 / 09 у людей все еще неясны. Исследования на животных показали, что вирус пандемии реплицируется лучше, чем сезонные вирусы H1N1 в дыхательных путях животных, о чем свидетельствует повышенная патогенность по сравнению с сезонным вирусом гриппа у хорьков [4], [5]. Многие группы также сообщили, что пандемия H1N1 эффективно реплицируется у приматов, отличных от человека, вызывает более серьезные патологические поражения в легких инфицированных мышей, хорьков и нечеловеческих приматов, чем первые циркулирующие вирусы H1N1 человека [6], [7]. Тяжесть пневмонии из-за пандемического вируса гриппа H1N1 у хорьков является промежуточной между тем, что связано с сезонным вирусом H1N1 и высокопатогенным вирусом птичьего гриппа H5N1 [8], [9]. Одно из исследований сравнило патогенез у мышей, вызванный двумя различными подтипами вируса гриппа, пандемическими H1N1 и H5N1. Результаты показывают, что смертельные инфекции, вызванные различными вирусами гриппа, не обязательно имеют один и тот же патогенез [10]. Вместе эти данные подчеркивают необходимость лучшего понимания механизмов, лежащих в основе вируса гриппа A (H1N1) pdm09 у людей.
Эпителиальные клетки являются основным местом репликации вируса для гриппа, хотя моноциты / макрофаги и другие лейкоциты также могут быть инфицированы [11]. Специфический антиген вируса гриппа был обнаружен в альвеолярных эпителиальных клетках типа 1 и 2 типа, а также в альвеолярных макрофагах. Вирусы инициируют инфекцию путем связывания вирусной HA с сиаловой кислотой на поверхности клетки и проникают в клетки с помощью рецептор-опосредованного эндоцитоза. Внутри клеток вирус гриппа отключает синтез белка клетки-хозяина и быстро и эффективно реплицируется. Этот процесс приводит к апоптозу клеток-хозяев или смерти цитолизом [12] — [14]. Однако клетки-хозяева реагируют несколькими способами, чтобы ограничить распространение вируса. Наиболее значительным ответом является продуцирование цитокинов и хемокинов эпителиальными клетками и лейкоцитами посредством активации множественных транскрипционных и посттрансляционных систем [15].
Врожденные иммунные противовирусные реакции являются первой линией защиты от вирусной инфекции [16], [17]. Интерфероны (ИФН) имеют решающее значение для борьбы с гриппом в клетках-хозяевах [18], [19]. ИФН мешают вирусной репликации, активируют иммунные клетки, такие как естественные киллерные клетки и макрофаги, увеличивают распознавание инфекции путем повышения рецептуры антигена Т-лимфоцитам и повышают способность неинфицированных клеток-хозяев противостоять новой инфекции вирусом. Реакции IFN на вирусы РНК с отрицательной цепью, включая вирус гриппа, требуют действия ретиноевой кислоты-индуцибельного гена 1 (RIG-I) [20], [21]. Этот белок находится в цитоплазме и ощущает присутствие вирусной РНК, либо двухцепочечной РНК [22], либо одноцепочечной РНК с 5′-фосфатом [23]. Когда эти РНК связывают RIG-I, инициируется сигнальный каскад, кульминацией которого является производство IFN. IFN, в свою очередь, активируют синтез почти тысячи клеточных белков, которые обладают противовирусными свойствами. Ощущение присутствия вируса и индукция цитокинов через путь RIG-I имеют решающее значение для успешной защиты хозяев от инфекций с РНК-вирусами [24]. Вирус гриппа, эволюционно, разработал стратегии профилактики иммунной активации хозяина. Фактически, вирулентность некоторых вирусных штаммов обусловлена, по крайней мере частично, дерегулированием врожденного иммунного ответа [25] — [27].
Мы разработали модель культивирования органов легкого человека для изучения локального ответа легких на патогены человека [28] — [30]. Прецизионные срезы легкого часто используются в исследованиях токсикологии и имеют преимущества перед использованием изолированных культивируемых эпителиальных клеток для исследований инфекционных заболеваний. Сохраняется структурная целостность легочной ткани, что позволяет взаимодействовать с клетками в более сложной и нативной трехмерной системе.
В настоящем исследовании мы сравнили скорости репликации вируса и врожденные иммунные ответы на вирус pdm09 гриппа A (H1N1) pdm09, сезонные штаммы H3N2 и H1N1 в нашей модели культуры органов человека. Мы обнаружили, что пандемический вирус H1N1 подавляет индукцию RIG-I и оказывает иммунодепрессантное действие на антивирусные иммунные ответы в инфицированном человеческом легком, что может способствовать увеличению легочной патогенности этого пандемического штамма.
Во-первых, мы сравнили инфекцию и репликацию вируса гриппа A (H1N1) pdm09 с клиническим изолятом сезонного вируса H3N2, A / Oklahoma / 309/06 (OK / 06) и прототипическим штаммом H1N1 (PR8) в органе легкого человека культура модель. Вирус гриппа A (H1N1) pdm09, A / Oklahoma / 3052/09 (OK / 09), является клиническим штаммом, выделенным во время пандемии H1N1 2009 года. После облучения среза легкого в течение 24 ч вирусу инфекцию оценивали путем конфокальной иммунофлуоресценции для внутриклеточного вирусного нуклеопротеина (NP). Репликацию определяли путем количественного определения вирусной NP-мРНК с течением времени. Воздействие ткани на OK / 09 в течение 24 часов приводило к обнаружению внутриклеточного вирусного NP (красного), связанного с множественными клетками, которые морфологически являются альвеолярными эпителиальными клетками и макрофагами (фиг.1A, b). Воздействие ткани на PR8 в течение 24 часов также приводило к обнаружению NP (красного) (фиг.1A, c). В ткани, подверженной воздействию вирусных разбавителей, не было обнаруженной красной флуоресценции, в которой содержится тот же буфер, в котором вирусы были разведены, но не содержат вируса (фиг.1А, а). Рисунки d-f 1A соответствуют соответствующим изображениям яркого поля, которые демонстрируют, что в эксперименте сохраняется архитектура легких. Таким образом, срезы легких человека поддерживают инфекцию во время воздействия обоих штаммов вируса гриппа. Чтобы продемонстрировать кинетику репликации этих вирусов, мы измерили экспрессию мРНК NP в срезах ткани с помощью количественной RT-PCR в течение 36 ч инфекции. Данные демонстрировали значительную экспрессию вирусной NP-мРНК при инокуляции вирусом (фиг.1B). Предполагая, что вирусы заражают относительно равное количество клеток, начальные скорости репликации PR8 и OK / 09 весьма схожи и существенной разницы не обнаружено, за исключением 12 часов после инокуляции. Напротив, мы обнаружили, что H3N2 реплицируется быстрее, чем пандемический H1N1at 12, 24 и 36 ч.
(A) Лёгкие ломтики обрабатывали для иммуногистохимии для обнаружения вирусного НП с использованием кроличьего поликлонального антитела (красного цвета). Панели a, b и c показывают mock (буфер для разведения вирусов), OK / 09 и PR8, соответственно. Панели d, e и f соответствуют изображениям яркого поля, которые демонстрируют, что во время эксперимента сохраняется архитектура легких. (B) Репликация вируса гриппа OK / 09, OK / 06 и PR8 в модели культуры органов человека. Кусочки легких, подвергнутые воздействию вируса при 6 × 106 ПФУ / мл, культивировали в разное время и экстрагировали полную клеточную мРНК. Количественную RT-ПЦР проводили с использованием Oligo dT в качестве праймера для синтеза первой цепи. Праймеры, специфичные для NP, использовали для изучения экспрессии мРНК NP.
Сначала мы исследовали реакцию врожденного иммунного цитокина на пандемию и прототипические штаммы H1N1 в легком человека. Лёгкие ломтики подвергали воздействию 6 × 106 PFU / мл вируса или вирусного разбавителя (отрицательный контроль) в течение 8 и 24 часов. Цитокины измеряли в срезах ткани по относительной конечной RT-ПЦР уровней мРНК. Индукционные образцы мРНК IFN-β, интерферон-индуцибельный белок-10 (IP-10), интерлейкин (IL) -6 и IL-8 были существенно различными между двумя штаммами. В соответствии с нашим предыдущим докладом мы обнаружили, что прототипический PR8 стимулирует значительную индукцию IP-10 и IFN-β [21], [30]. Однако индукция IP-10 и IFN-β с помощью ОК / 09 была существенно уменьшена по сравнению с окрашиванием PR8. В частности, индукция IP-10 и IFN-β мРНК по ОК / 09 была меньше, чем индуцированная PR8 через 24 ч после заражения (фиг.2А). Вирус OK / 09 вызывал аналогичное количество провоспалительного цитокина IL-6 как PR8 и более высокий IL-8 в течение 24 часов, хотя индукция OK / 09 была ниже для обоих цитокинов через 8 часов. Наша предыдущая работа, а также другие, подразумевает RIG-I в индукции противовирусного цитокина IP-10 и IFN-β, в то время как провоспалительные цитокины IL-6 и IL-8, как было показано, контролируются другими путями [21]. Поэтому в дальнейшем мы попытались определить, может ли уменьшенный ответ на противовирусный цитокины пандемическим пятном может быть вызван уменьшением индукции RIG-I этим вирусом (фиг.2B). Выражение RIG-I, индуцированное OK / 09, было подавлено по сравнению с PR8. Эти данные свидетельствуют о том, что ОК / 09 вызывает иммуносупрессию антивирусных реакций путем выхода или подавления опосредованного RIG-I вирусной инфекции.
Человеческие ломтики легких подвергались воздействию 6 × 106 PFU / мл PR8 или OK / 09 в течение 8 ч и 24 ч. Общая РНК затем выделялась из ломтиков легких. Относительные конечные продукты RT-PCR разделяли электрофорезом в агарозном геле, а экспрессию мРНК определяли путем денситометрии соответствующих полос на гелях, окрашенных этидиумбромидом. Уровни транскрипции цитокинов (A) и RIG-I (B) были нормированы относительно конститутивно экспрессируемого гена GAPDH. Данные представляют собой 3 отдельных эксперимента.
Чтобы подтвердить дифференциальные вирусные иммунные ответы на пандемический и сезонный грипп, мы исследовали временной ход индуцирования мРНК RIG-1 и IFN-β в легочной ткани человека до OK / 09, OK / 06 и PR8. Лёгкие участки были подвергнуты воздействию 6 × 106 PFU / мл вируса или вирусных разбавителей (отрицательный контроль) в течение 4, 8, 12, 16, 24 и 32 часов, а полная РНК экстрагирована для измерения уровней RIG-I и IFN- -PCR. Оба вируса вызывали зависящую от времени индукцию RIG-1 и IFN-β в легочной ткани. Пиковая индукция RIG-I PR8 происходила между 8 и 16 часами после инфицирования, тогда как индукция достигала максимума при 16-часовой после инфекции как для OK / 06, так и для OK / 09. Важно отметить, что экспрессия RIG-1 была намного ниже в пандемической H1N1 OK / 09 инфицированной ткани, чем у двух других вирусов, но в начальный момент времени — 4 часа. (Фиг.3А). Пиковая индукция для IFN-β всеми тремя пятнами происходила через 8-16 ч после инфицирования, а экспрессия IFN-β была значительно ниже в легких, инфицированном пандемическим штаммом, чем оба других вируса в моменты времени через 8 часов (фиг.3В ). Поскольку PR8 и OK / 09 имеют сходную динамику репликации, как мы показали на фиг.1B, дифференциальная индукция не связана с разной скоростью репликации вируса.
Читайте также: