Рнга при гепатите в
Комплексное исследование при подтвержденном вирусном гепатите В (HBV). Анализ маркеров инфекции позволяет установить клиническую стадию заболевания, иммунологический статус обследуемого, а также оценить эффективность лечения. Включает в себя определение белков вируса (антигенов), основных классов специфических антител, а также обнаружение ДНК вируса в крови.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
- Не курить за 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Вирусный гепатит B (HBV) – инфекционное заболевание, которое является причиной серьёзных поражений печени. Зачастую гепатит B переходит в хроническую форму, его течение становится затяжным и провоцирует возникновение цирроза и рака печени.
Вирус гепатита B (Hepadnaviridae) содержит двухцепочечную ДНК, окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит антиген HBcAg, и внешней оболочкой, содержащей антиген HBsAg. Этот антиген обнаруживается в крови за 6 недель до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в при их отсутствии (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания присутствует у 90-95 % больных.
Особенностью вируса гепатита B является то, что он поступает непосредственно в кровь и циркулирует в ней на протяжении всего периода заболевания. У некоторых пациентов вирус в крови сохраняется всю жизнь. По этой причине источником заражения могут стать не только те, кто болен гепатитом в его острой форме, но также те, кто уже перенес данное заболевание, а также люди, у которых заболевание не проявляется, однако они являются носителями вируса.
Полное выздоровление регистрируется у 92-95 % больных острым гепатитом В, и лишь у 5-8 % из них отмечается переход заболевания в хроническую форму.
Гепатит B лечится исключительно в условиях стационара. Это заболевание в случае длительного течения является фактором риска развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы (рак печени).
В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции. В фазе репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где с помощью ДНК-полимеразы синтезируется нуклеокапсид, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, которые являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg), и, таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его "узнавание" иммуноцитами. Антиген HBcAg серологическими методами не определяется, потому что отсутствует в крови в свободном виде. Определяется наличие в крови антител (anti-HBc) к этому антигену, вырабатывающихся вследствие его высокой иммуногенности.
Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:
- выявление в крови антигенов HBeAg и anti-HBc (Ig M).
У 7-12 % больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются anti-HBe). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.
В фазе интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.
Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоциты, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.
Фаза интеграции сопровождается становлением клинико-морфологической ремиссии. В этой фазе в большинстве случаев формируется состояние иммунологической толерантности к вирусу, что приводит к купированию активности процесса и носительству HBsAg. Интеграция делает вирус недосягаемым для иммунного контроля.
Серологические маркеры фазы интеграции:
- наличие в крови только HBsAg или в сочетании с anti-HBc (IgG);
- отсутствие в крови ДНК-вируса;
- сероконверсия HBeAg в anti-HBe (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление anti-HBe).
Пациенты, перенесшие инфекцию и имеющие антитела к вирусу, не могут повторно заразиться гепатитом B. В некоторых случаях полное выздоровление не наступает и человек становится хроническим вирусоносителем. Вирусоносительство может протекать бессимптомно, но в некоторых случаях развивается хронический активный гепатит B. Ключевым фактором риска активного вирусоносительства является возраст, когда человек был заражен: для грудных детей уровень риска превышает 50 %, в то время как для взрослых остается на уровне 5-10 %. Исследования показывают, что мужчины чаще становятся носителями, чем женщины.
HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В
Поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg) является белком, который присутствует на поверхности вируса. Обнаруживается в крови при остром и хроническом гепатите В. Самый ранний маркер. Достигает максимума к 4-6-й неделе заболевания. Сохраняется до 6 месяцев при остром гепатите, свыше 6 месяцев – при переходе заболевания в хроническую форму.
HBeAg – ядерный 'е’-антиген вируса гепатита В
Антиген, находящийся в ядре вируса. Появляется в крови одновременно с HBsAg и сохраняется в течение 3-6 недель. HBeAg появляется в крови больного острым гепатитом В одновременно с HBsAg или вслед за ним и сохраняется в крови 3-6 недель. Указывает на активное размножение и высокий риск передачи вируса при половом контакте, а также перинатально. Инфекционность HBeAg-положительной сыворотки в 3-5 раз выше, чем HBsAg-положительной. Выявление HBeAg в крови более 8-10 недель свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. При отсутствии репликативной активности вируса во время хронической инфекции HBeAg не выявляется. Его появление же свидетельствует о реактивации вируса, что чаще происходит на фоне иммуносупрессии.
При лечении вирусного гепатита В исчезновение HBeAg и появление антител к HBe-антигену свидетельствует об эффективности терапии.
anti-HBc (Ig M) – специфические антитела класса IgМ к ядерному 'core' антигену вируса
Начинают вырабатываться еще до клинических проявлений, указывают на активную репликацию вируса.
Появляются в крови через 3-5 недель, сохраняются в течение 2-5 месяцев и исчезают в период выздоровления.
anti-HBc – суммарные антитела (IgM+IgG) к ядерному ‘core' антигену вируса гепатита В
Важный диагностический маркер, особенно при отрицательном значении HBsAg. Антитела класса IgM вырабатываются через 3-5 недель. Антитела класса IgG начинают вырабатываться с 4-6-го месяца и могут сохраняться пожизненно. Подтверждают контакт организма с вирусом.
anti-HBs – суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В
Появляются медленно, достигая максимума через 6-12 месяцев. Указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител. Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Обнаружение антител в высоком титре в первые недели заболевания может быть связано с развитием гипериммунного варианта фульминантного гепатита В.
anti-HBe – антитела к 'е’-антигену вируса гепатита В
Появляются на 8-16-й неделе после инфицирования у 90 % больных. Свидетельствуют о завершении острого периода болезни и начале периода реконвалесценции. Могут сохраняться до 5 лет после перенесенного заболевания.
HBV (ДНК) – ДНК вируса гепатита В
Маркер наличия и репликации вируса. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса результаты теста на специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, но при этом риск распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека сохраняется.
Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию. Определение вирусной нагрузки (количество ДНК вируса в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую форму.
Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует об эффективности лечения.
Для чего используется исследование?
- Для оценки серологического профиля;
- для выяснения стадии заболевания и степени контагиозности;
- для подтверждения заболевания и уточнения его формы (острая, хроническая, носительство);
- для наблюдения за течением хронического гепатита В;
- для оценки эффективности противовирусной терапии.
Когда назначается исследование?
- При выявлении у пациента поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg);
- при подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологических тестов;
- при микст-гепатитах (сочетанные вирусные гепатиты В и С);
- при динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).
Что означают результаты?
Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:
Острый гепатит В. Выделяют "дикий" штамм (естественный) и "мутантный" штамм (вид) вируса. Определение штамма вируса имеет определенное значение при выборе противовирусного лечения. Мутантные штаммы вируса несколько хуже поддаются лечению в сравнении с "диким".
Хронический гепатит В (ХВГВ). Выделяют три серологических варианта:
- ХВГВ с минимальной активностью (ранее использовали термин "носительство HBsAg");
- НВе-негативный ХВГВ;
- НВе-позитивный ХВГВ.
Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита В
Лабораторная диагностика ВГВ построена на выявлении специфических для ВГВ антигенов и антител в крови пациента.
Важнейшими серологическими маркерами при постановке диагноза вирусного
Гепатита В являются: HBsAg, HBeAg, анти- HBs, анти- НВс и анти- НВе иммуноглобулины. Через 3-5 недель после заражения вирусом гепатита В и за 4-5 недель до проявления клинической картины в сыворотке крови людей обнаруживается поверхностный антиген вируса - HBsAg (австралийский антиген). Выявление HBsAg свидетельствует об острой или хронической инфекции. Антитела против этого антигена появляются в сыворотке крови через 2-5 месяцев после начала заболевания, их обнаружение может свидетельствовать о ранее перенесенной инфекции.
Лабораторная диагностика гепатита В острой стадии осуществляется путем индикации HBsAg в сыворотке крови больных. Для этого используют наиболее чувствительные серологические реакции: иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) и радиоиммунный анализ (РИА).
При острой форме заболевания в крови определяются HBsAg, HBeAg и IgM анти-НВс и HBs.
При хронической форме заболевания определяются HBsAg, высокие титры антител — анти-НВс IgG и анти-HBs IgG.
Провирус ВГВ при хронической форме заболевания выявляется с помощью поли-меразной цепной реакции. Чувствительность метода составляет 10-100 молекул ДНК ВГВ в 1 мл. С помощью метода встречного иммуноэлектрофореза антигены вируса выявляются в 70% случаев, а с помощью реакции преципитации в геле - в 55-60%.
Основное место в диагностике гепатита В занимает ИФА, дающая положительный результат исследований в 90-95% случаев.
В последнее время применяют метод микроиммунофильтрации, который используется для экспресс - диагностики. Принцип основан на селективной фильтрации микрочастиц. Окрашенные микрочастицы, покрытые антигенами или антителами, служат визуальным сигналом для учета результата реакции. Присутствие соответствующего антитела или антигена в образце исследуемой пробы приводит к агглютинации микрочастиц. Способность агглютинированных частиц задерживаться на фильтре указывают на положительный результат тестируемого образца.
Независимо от присутствия в крови HBs-Ag, анти-НВс обнаруживается во всех случаях при возникновении острого заболевания гепатита В. Наличие анти-НВс относящихся к классу IgM достоверно свидетельствуют об острой форме гепатита В, а анти-НВс класса IgG являются маркером перенесенной в прошлом инфекции.
В лабораторной диагностике, наряду с серологическим выявлением вирусных антигенов или антител, используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который делает возможным определение ДНК вируса гепатита В в сыворотке крови и в гепатоцитах.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕПАТИТА Д
Лабораторная диагностика дельта-инфекции основывается на выявлении в ИФА антител к антигену вируса гепатита дельта (HDAg, анти- HDV) в сыворотке при одновременной положительной реакции на HBsAg.
HDAg может быть обнаружен иммунно-гистохимической реакцией в печеночных клетках; PHK-HDV определяется в сыворотке крови методом гибридизации нуклеиновых кислот или ПЦР.
Провирус ВГD при хронической форме заболевания выявляется с помощью ПЦР. Чувствительность метода составляет 10-100 молекул ДНК ВГD в 1 мл. С помощью метода встречного иммуноэлектрофореза антигены вируса выявляются в 70% случаев, а с помощью реакции преципитации в агаре - в 55-60%.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕПАТИТА С
Предварительный клинический диагноз ВГС основывается на исключении вирусного гепатита А и вирусного гепатита В. Окончательный диагноз ставится на основании лабораторных исследований.
Специфические серологические методы диагностики гепатита С в настоящее время разрабатываются.
В отдельных случаях выявление антител к антигенам HCV может дополняться определением РНК вируса в сыворотке крови больных с помощью постановки ПЦР. Так можно обнаружить HCV вскоре после инфицирования. В Тюмени лабораторная диагностика ВГС этими методами проводится с 1989.
Диагностика заболеваний проводится в зависимости от клинических проявлений болезни. При острой инфекции с помощью ИФА в сыворотке выявляют циркулирующие антигены и иммуноглобулины класса М к ВГС. С помощью иммуноблоттинга устанавливается антигенная структура ВГС, циркуляции его в крови.
При хронической форме инфекции вирус гепатита С в крови находится в меньшей концентрации и диагноз ставится по выявлению в крови IgG к ВГС. Вирус при этой форме находится в клетках, поэтому РНК можно определить с помощью ПЦР.
ПЦР в настоящее время является единственным высокочувствительным методом диагностики острого ВГС и выявления больных с хроническим гепатитом.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции проводится на основании комплексного обследования больного: клинического, выявления специфических антител в крови, выделения вируса из исследуемого материала путем заражения культур клеток (Т-хелперов), идентификации вирусных антигенов с помощью иммуноблоттинга, по обратнотранскриптазной активности, выявлению провируса в инфицированных клетках, по состоянию иммунной системы организма.
Способность вируса поражать клетки, имеющие СД-4 рецептор, позволяет проводить косвенную диагностику СПИДа на основании иммунного статуса организма. В здоровом организме имеется постоянное соотношение между рецепторами клеток СД 4 и СД 8. Этот показатель у здорового человека составляет 2,0 и более. Диагностическое, и особенно, прогностическое значение имеет показатель количество Th в 1 мл крови больного СПИДом и соотношение Th/Ts.
Если отношение Th/Ts равно 2 и более, то человек здоров. При снижении этого показателя до 0,5-легкое течение болезни и возможны оппортунистические инфекции, то есть заболевание, указывающее на наличие ВИЧ-инфекции. При значении Th/Ts от 0,2 до 0,5- регистрируется средней степени тяжести заболевание. Снижение этого показателя до 0,2 и ниже наблюдается при тяжелом течении болезни.
Зависимость между количеством Тh в 1 мл крови больного и процентом выживаемости больных СПИДом:
| Процент выживаемости больных со СПИДом | Количество Т-хелперов в 1 мл |
| Здоровый человек | |
| 90% | Более 300 |
| 50-60% | 100-300 |
| 20% | Менее 100 |
Маркеры гепатитов с парентеральным механизмом передачи инфекции
| Возбудитель | Маркеры | Диагностическое значение |
| Вирус НВ | HBsAg | Положительный в большинстве случаев острого или хронического гепатита |
| HBcAg | В сыворотке обычно не определяется | |
| HBeAg | Транзиторно положительный при репликации вируса | |
| анти-HBc (IgM, IgG) | Положительные в случае острой и хронической инфекции и у носителей – маркеров HBV-инфекции; не протективные; анти- HBc IgM отражают репликацию вируса | |
| анти-HBe | Транзиторно позитивные при реконвалесценции, при некоторых формах хронической инфекции и у носителей, не протективные, отражают низкую инфекционность | |
| анти-HBs | Становятся позитивными в позднюю фазу реконвалесценции в большинстве острых случаев, протективные. | |
| preS1Ag | Маркер инфекционности и высокого риска вертикальной передачи НВV | |
| анти-preS2 | Маркер выздоровления после HBV-инфекции высокой эффективности | |
| Вирус НС | анти-HCV | Становятся позитивными через 5-6 недель после появления клинических симптомов; серопозитивные лица должны рассматриваться как зараженные (как инфицированные) |
| Вирус НД | ДельтаG анти-HDV (IgM илиIgG) | Указывают на инфицированность; не протективные |
|
АНТИМИКРОБНЫЕ ПРЕПАРАТЫ
Антивирусные препараты первого поколения - аденинарбинозид, видарабин, ацикловир, рибовир, квинакрин.
• АЦИКЛОВИР - аномальный нуклеотид, который встраивается в геном вируса и репродукция прекращается.
• АДЕНИНАРАБИНОЗИД - антивирусный эффект обусловлен включением нуклеотида во вновь синтезируемую ДНК вируса. Данные препараты не нашли широкого применения.
• ИНТЕРФЕРОНЫ и его индукторы обладают иммуномодулирующим и противовирусным эффектом. Широко применяется реаферон и велферон -высококачественный препарат человеческого α - интерферона.
I. ВАКЦИНЫ против ВГВ:
1. Отечественная вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая жидкая фирмы
2. Бельгийская вакцина—Engerix - В, фирмы "Смит Кляйн Бичем".
3. Американская вакцина—Recombivax НВ, производства фирмы "Мерк Шарп
4. Кубинская —ДНК рекомбинантная вакцина против гепатита В (Rec-HBsAg).
Наибольшее распространение получила вакцина "Энджерикс - В" (Engerix - В). Одна доза вакцины содержит 20 мкг HBs антигена, продуцируемого культурой дрожжевых клеток, полученных методом генной инженерии и имеющих ген, кодирующий формирование HBsAg ВГВ. Этот антиген очищается и адсорбируется на алюминии гидрохлориде. Вакцина обеспечивает высокий уровень антител, а также обладает высокой эффективностью.
Вакцинация проводится трехкратно с интервалом в 1 мес. Ревакцинацию проводят через 3-5 лет, т. е. вакцина создает надежный иммунитет в течение 5 лет. В первую очередь вакцинации подлежат лица группы риска.
П. Иммуноглобулин человека против гепатита В применяется для пассивной профилактики болезни.
Занятие № 21
Последнее изменение этой страницы: 2016-07-16; Нарушение авторского права страницы
Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.
При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.
Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.
Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.
При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.
Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.
HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.
При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении - санации организма.
Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:
для диагностики острого гепатита В:
- инкубационный период;
- острый период заболевания;
- ранняя стадия реконвалесценции;
для диагностики хронического вирусного гепатита В;
при заболеваниях:
- персистирующем хроническом гепатите;
- циррозе печени;
для скрининга и выявления больных в группах риска:
- больные с частыми гемотрансфузиями;
- больные с хронической почечной недостаточностью;
- больные с множественным гемодиализом;
- больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.
Оценка результатов исследования
Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.
Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В JgG (анти- HBcAg JgG )
В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.
Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.
В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.
Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.
Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.
Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.
Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.
Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.
Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.
Критериями наличия хронического гепатита В являются:
Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (качественно)
Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.
Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.
Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.
Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.
Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:
Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии
Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (количественно)
Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.
Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.
- Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
- менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
- от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
- более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.
Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.
Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).
Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.
Читайте также: