Рнк-содержащий вирус из семейства парамиксовирусов

ПАРАМИКСОВИРУСЫ (греч, para около + миксовирусы) — семейство РНК-содержащих вирусов (Paramyxoviridae), являющихся возбудителями респираторных инфекций или тяжелых генерализованных заболеваний человека и животных. В составе семейства различают три рода: парамиксовирусы (вирусы парагриппа, паротита и ньюкаслской болезни — псевдочумы птиц), мор-билливирусы (вирусы кори, чумы плотоядных и чумы крупного рогатого скота) и пневмовирусы (респи-раторный синцитиальный вирус человека, синцитиальный вирус крупного рогатого скота и вирус пневмонии мышей). Для человека патогенны вирусы парагриппа, паротита, ньюкаслской болезни, кори и респираторный синцитиальный вирус.

П. отличаются от ортомиксовирусов (см.) большими размерами, нефрагментированным геномом, отсутствием ядерной фазы репликации и наличием гемолитической активности. Среди П. нейраминидазу содержат только представители рода парамиксовирусов; морбилливирусы и пневмовирусы включены в семейство П. на основании сходства их морфологии с родом парамиксовирусов.

П. имеют форму неправильных сфер диам. 150—300 нм или длинных нитей, сечение к-рых имеет такой же диаметр. Общая масса сферических вирионов 6,3 — 7,5 X 10 8 дальтон, коэффициент седиментации 1000 S, плавучая плотность в р-ре хлорида цезия 1,20— 1,24 г/см 3 , в р-ре сахарозы — 1,18 — 1,20 г/см 3 . Вирионы содержат 65 — 73% белка, 20—25% липидов, 6 — 7% углеводов и 1—3,5% РНК.

П. имеют одноцепочечную линейную РНК с мол. массой 6,5—7,5 X 10 6 дальтон. Вокруг нее по спирали располагается 2400—3000 субъединиц белка. Их длина 1,02 нм, мол. масса ок. 6х10 4 дальтон. На каждый виток спирали приходится 11 —13 субъединиц белка. Образованный таким образом нуклеокапсид имеет длину 1 мкм, диам. 16 —18 нм и внутренний канал шириной 4— 5,5 нм. Масса нуклеокапсида составляет ок. 25% от массы вириона.

Нуклеокапсид окружен внутренней оболочкой вириона, сформированной из мембранного белка М с мол. массой 3,4—4,1 х 10 4 дальтон. Снаружи вирион покрыт липидной оболочкой; по своему составу она отражает липидный состав плазматической мембраны клетки, где происходила репликация вируса, и содержит детерминанты групп крови и антигена Форссмана. Наружная оболочка вириона имеет выступы, состоящие из гемагглютинина (у представителей рода парамиксовирусов, вирусов кори и пневмонии мышей) и нейраминидазы (у представителей рода парамиксовирусов). С поверхностными структурами связана также гемолитическая активность П. и фактор, вызывающий слияние клеток, вследствие чего в зараженной клеточной культуре формируются многоядерные синцитии. Иногда в одной оболочке может быть заключено несколько нуклеокапсидов; такие вирионы крупнее обычных.

Проникновение вируса в клетку происходит в результате слияния оболочек вириона и клетки. Далее вирусная и клеточная оболочки разрушаются и в цитоплазму клетки попадает вирусный нуклеокапсид. Весь цикл репликации П. протекает в цитоплазме клеток.

С помощью входящей в состав нуклеокапсида транскриптазы на матрице вирионной (родительской) РНК (вРНК) транскрибируется несколько РНК, комплементарных вРНК (т. е. кРНК) с константами седиментации 18S и 35S. Т. о., возникает набор транскриптов с разных участков генома вируса, состоящего из 6—7 генов. Они служат матрицами для синтеза вирусных белков, в т. ч. двух гликопротеидов. Синтез белков начинается, напр., у вируса ньюкаслской болезни через 2—2,5 часа и достигает максимума к 5—6-му часу после заражения.

Помимо транскриптов, участвующих в синтезе белка, образуется и новая (дочерняя) вирусная РНК. Эта РНК быстро связывается с синтезировавшимися вирусными белками, в результате этого формируются нуклеокапсиды новых вирионов. В цитоплазме клеток нередко накапливается большое количество нуклеокапсидов, образующих включения.

Общего антигена у членов семейства П. нет, однако у вирусов, относящихся к одному роду, имеется нек-рая антигенная общность, обусловленная антигенами оболочки. Серотипы известны только у парагрип-позных вирусов. Остальные П. однородны в антигенном отношении.

Парагриппозные болезни (см.) у людей вызывают вирусы 4 типов, к-рые различаются в реакциях нейтрализации, связывания комплемента, подавления гемагглютинации и гемадсорбции. Парагриппозные вирусы являются частой причиной заболеваний дыхательных путей особенно у детей раннего возраста. Течение этих заболеваний различно — от субклинических форм до тяжелых поражений нижних отделов дыхательных путей с летальным исходом.

Паротитом болеет только человек. Вирус вызывает воспаление слюнных желез, к-рое в типичных случаях протекает довольно легко, но иногда сопровождается менингоэнцефалитами, орхитами, оофоритами, панкреатитами и др. (см. Паротит эпидемический).

Вирус ньюкаслской болезни поражает практически все виды птиц. Штаммы вируса различны по патогенности. Высокопатогенные штаммы вызывают тяжелое, обычно летальное заболевание с поражением дыхательных путей и ц. н. с.; при заражении малопатогенными штаммами основной симптом — уменьшение яйценоскости. Резервуаром инфекции являются дикие птицы, к-рые в естественных условиях легко переносят заболевание, а в неволе нередко погибают от него. Вирус обнаруживается в основном в фекалиях, и заражение, очевидно, происходит алиментарным путем.

Люди заражаются аэрогенным путем от больных птиц при обработке тушек больных кур и при работе с культурой вируса. Вакцинные штаммы, утратившие патогенность для кур, полностью сохраняют ее для человека. Клинически у людей наблюдается гранулярный конъюнктивит, часто с воспалением склеры. Обычно поражается один глаз, нередко на той же стороне возникает преаурикулярный аденит. Иногда заболевание протекает с ознобом, повышением температуры, головной болью, болью в спине, водянистым стулом зеленоватого цвета. Выздоровление наступает через 1—2 нед., иногда позже. Инфекция может протекать в виде гриппоно-добного заболевания с фарингитом и болью в суставах; выздоровление в этих случаях наступает через 3—4 дня. Вирус обнаруживается у больных людей в отделяемом из носа, крови, моче. Диагноз основывается на выделении вируса на 2—5-й день болезни. Материал вводят в аллантоисную полость куриных эмбрионов. Через 3—4 дня эмбрионы погибают; аллантоисную жидкость исследуют путем постановки реакции гемагглютинации с эритроцитами кур при 4°. С 6-го дня в сыворотке крови можно обнаружить анти-гемагглютинины. Однако антитела появляются не всегда; иногда после перенесенного заболевания наблюдается подъем парагриппозных и паротитных антител.

Вирус кори вызывает у человека остро протекающее заболевание с характерной сыпью (см. Корь). Опасность представляют гл. обр. осложнения — бронхопневмония, отит, энцефалит.

Респираторный синцитиальный вирус занимает одно из ведущих мест в этиологии заболеваний органов дыхания человека (см. Респираторно-синцитиальная инфекция), распространен повсеместно, в городах им инфицируется практически все население. Эпидемические подъемы заболеваемости наблюдаются почти ежегодно в зимне-весенний период. Вирус передается воздушно-капельным путем. Он выделяется со слизью носоглотки в течение 10 —14 дней, начиная с конца инкубационного периода, к-рый продолжается 3—7 дней. Первичное инфицирование человека происходит обычно в раннем детстве. Имеющиеся у детей первых 6 — 8 мес. жизни противовирусные антитела матери не создают эффективной защиты, и дети этой возрастной группы заболевают наиболее часто и тяжело. По-видимому, большое значение при этом имеют иммунопатол. реакции. У грудных детей процесс обычно захватывает как верхние, так и нижние отделы дыхательных путей, что проявляется в виде тяжелых бронхитов, бронхиолитов и бронхопневмоний. Температура при этом может быть нормальной или слегка повышенной. В результате воспаления стенки бронхиол и повышенной секреции уменьшается их просвет, воздух блокируется в альвеолах, что приводит к развитию эмфиземы. При рассасывании воздуха в альвеолах возникают очаги ателектаза. В случаях с летальным исходом изменения в легких складываются из пневмонии, эмфиземы и ателектаза.

У более старших детей и у взрослых заболевания, обусловленные респираторным синцитиальным вирусом, наблюдаются реже и протекают легче, захватывая только верхние отделы дыхательных путей. Нередко заболевания развиваются даже при наличии в сыворотке крови соответствующих вируснейтрализующих антител.

С целью диагностики из отделяемого носоглотки больных и из ткани дыхательных путей погибших выделяют вирус путем заражения восприимчивых клеточных культур. В прус выращивают в культурах перевиваемых клеток человека HeLa, Н.Ер-2 и др., где формируются гигантские клетки и синцитий. Гемагглютинирующих и гемадсорбирующих свойств у респираторного синцитиального вируса не обнаружено. Для серологической диагностики используют реакцию нейтрализации на культурах клеток и реакцию связывания комплемента. Первую пробу сыворотки крови берут у больного в начале заболевания, вторую — через 2—4 нед. У грудных детей сдвиги иногда регистрируются лишь через 4—6 нед. В первых пробах сыворотки крови могут содержаться специфические антитела (у детей первых месяцев жизни — материнские, у более старших детей и взрослых больных — как результат предшествующей инфекции).

Попытки вакцинопрофилактики респираторной синцитиальной инфекции не дали положительных результатов.

К респираторному синцитиальному вирусу высоко восприимчивы шимпанзе, у к-рых он вызывает заболевание верхних дыхательных путей. При введении вируса через ное бе-лым мышам, сирийским хомячкам, морским свинкам и африканским хорькам возникает латентная инфекция.

Библиография: Букринская А. Г. и 3айдес В. М. Молекулярная биология парамиксовирусов, М., 1978, библиогр.; Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний, под ред. Э. Леннета и Ы. Шмидт, пер. с англ., с. 349, М., 1974.

Семейство Paramyxoviridae (от лат. para — около и myxa — слизь) состоитиз трех родов: Paramyxovirus — вирусы парагриппа человека (ВПГЧ) типов 1—5, свинки, Сендай, ньюкаслской болезни; Morbillivirus — вирусы кори, собачьей чумы, чумы коров и Pneumovirus — рес-пираторно-синцитиальный вирус. В качестве типичного представителя семейства будет описан вирус Сендай.

Морфология. Вирусы имеют сферическую форму с ди­аметром 150—200 нм. Это наиболее крупные из РНК-содержащих вирусов. Внутренний компонент представлен нуклеокапсидом, имеющим спиральную симметрию. Длина нуклеокапсида 1 мкм, диаметр 12—18 нм. Шаг спирали нуклеокапсида 5—7 нм, на каждом витке спирали нахо-

дятся 11—13 субъединиц, образованных нуклеокапсидным белком (NP). Всего в нуклеокапсиде содержится 2400— 2800 белковых субъединиц. Нуклеокапсид окружен ли-попротеидной оболочкой, которая покрыта шипиками, об­разованными двумя гликопротеидами вируса, HN (ге-магтлютинин и нейраминидаза) и F (белок слияния). Шипики имеют меньшую длину, чем шитики вируса грип­па (около 8 нм). Вирионы характеризуются значительной хрупкостью, и в препаратах наряду с цельными частица­ми всегда содержатся разрушенные частицы и спирали нуклеокапсида (см. рис. 4,а).

Молекулярная масса вирионов 500 • 10 6 , коэффи­циент седиментации 1000S, плавучая плотность в сахарозе 1,18—1,2 г/см 3 , в хлориде цезия 1,24 г/см 3 . Коэффици­ент седиментации нуклеокапсида 200S, плавучая плот­ность в хлориде цезия 1,31 г/см 3 .

Белки, антигены. РНК тесно связана с белком NP. Помимо белка NP с РНК ассоциированы два других белка. Один из них является РНК-полимеразой, представляющей собой самый высокомолекулярный L-белок (от англ. lar­ge — большой) в вирусной частице. Другой, Р-белок, так­же участвует в синтезе РНК, и, по-видимому, является субъединицей РНК-полимеразы.

Остальные 3 белка связаны с липопротеидной оболоч­кой. Два из них являются гликопротеидами. Это белок HN, который обладает функциями гемагглютинина и нейра-минидазы, и белок слияния, Р-белок.

Р-белок синтезируется в виде белка-предшественника fo, который нарезается в клетке на белки f( и Рд. N-конец белка Рц образующийся при нарезании белка-предшественника Pa, имеет последовательность из 10—15 незаряженных аминокислот. Эта гидрофобная последова­тельность обусловливает слияние вирусной и клеточной мембран при проникновении вируса в клетку. Р-белок способен вызывать слияние мембран при нейтральных значениях рН.

Вирус имеет один или два поверхностных антигена и внутренний антиген, представленный белком нуклеокап­сида. В вирионах нет общего антигена единого для всего семейства или рода.

С внутренней стороны в липопротеидную мембрану встроен мембранный или матриксный белок, который ста­билизирует вирусную частицу и является медиатором сборки. Помимо структурных белков, есть по крайней ме­ре один неструктурный с молекулярной массой около 22 • 10 3 .

Ферменты. В составе вируса находятся РНК-поли-мераза (транскриптаза) и два фермента, модифицирую­щих концы транскриптов иРНК: метилтрансфераза и полиаденилаттрансфераза. Другими ферментами являются нейраминидаза и протеинкиназа.

Устойчивость к физическим и химическим факторам.Парамиксовирусы относятся к наименее устойчивым ви­русам. Они чувствительны к эфиру и детергентам, про­греванию, быстро инактивируясь при температуре 50° С, чувствительны к трипсину и к фосфолипазам. В замо­роженном виде при 60°С длительно сохраняют инфекци­онную активность.

Репродукция. Адсорбция вирусной частицы на клетке осуществляется в результате взаимодействия гликопро-теида HN со специфическими рецепторами клетки, кото­рыми являются гликопротеиды и ганглиозиды. Вирус про­никает в цитоплазму путем слияния вирусной мембраны с плазматической мембраной клетки или стенкой эндо-цитарной вакуоли. Репродукция происходит в цито­плазме.

Формирование нуклеокапсида происходит за счет спе­цифического узнавания белками определенных участков на молекуле генома и белок-белкового узнавания, при­водящего к самосборке структуры. Нуклеокапсид подходит

к тем участкам плазматической мембраны,на которых с наружной стороны уже встроены вирусные гликопроте-иды, а с внутренней стороны М-белок.

Семейство Paramyxoviridae (от греч. para — около и myxa — слизь) — группа вирусов, поражающая позвоночных, как правило, млекопитающих и птиц.

Вирионы по размеру и форме неоднородны, однако многие из них имеют округлую или нитевидную форму, диаметр 150нм и более. Вирионы состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются выступы (отростки) длиной 8—12 нм. Геном вируса представлен единой односпиральной линейной минус-РНК с молекулярной массой 5—7 МД, не обладающей инфекционной активностью и составляющей 0,5—1,0 % массы вириона.

В вирионах содержится 70 % белка, 20—25 % липидов и 6 % углеводов. Липиды образуют двойной центральный слой вирусной мембраны и являются ее структурным каркасом. Белки расположены снаружи и изнутри двойного липидного слоя. Гликолипиды составляют наружный белковый слой, образованный двумя гликопротеидами — HN (гемагглютинин и нейраминидаза) и F (белок слияния), а негликолизированный мембранный белок образует внутренний слой, который называют матриксом вириона (М-белок). Липопротеидная мембрана вирионов представляет собой измененную часть клеточной поверхности, в которой белки клетки хозяина заменены на вирусспецифические.

Молекулярная масса вирионов — 500—700 МД, плавучая плотность в CsCl 1,20—1,24 г/см 3 , коэффициент седиментации 1000S.

В вирионах парамиксовирусов содержится шесть полипептидов, из которых три — белки нуклеокапсида (NP, P, L) и три — белки в составе липопротеидной оболочки (HN, F, М).

Белок HN ответственен за гемагглютинирующую и нейраминидазную активности вируса и его адсорбцию на клеточной поверхности. Белок F ответственен за слияние клеток, гемолитическую активность вируса и принимает участие при проникновении вируса в клетку. Белок М участвует в заключительной стадии морфогенеза вируса в зараженной клетке и стабилизирует вирусную частицу. В составе нуклеокапсида вирусов находится фермент РНК-полимераза (транскриптаза).

Изучение белков наружной оболочки вирионов у разных штаммов вируса болезни Ньюкасла показало наличие связи между структурой гликопротеидов и патогенностью вируса. У патогенных штаммов оба поверхностных гликопротеида (HN и F) включаются в вирионы только в расщепленной форме, тогда как у апатогенных штаммов — в виде предшественников F₀ и HN₀. Вирусы с нерасщепленными гликопротеидами обладают очень низкой биологической активностью.

Парамиксовирусы размножаются в цитоплазме, проникают в клетки в основном путем сплавления оболочки вириона с клеточной мембраной, иногда путем виропексиса. В процессе сплавления оболочки вируса с плазматической мембраной внутрь клетки проникает нуклеокапсид.

Одна из особенностей парамиксовирусов — образование телец-включений и синцития с образованием многоядерных гигантских клеток. Инфекция клеток в культуре обычно литическая, но может быть и персистентная, важную роль в установлении которой, возможно, играют ДИЧ (дефектные интерферирующие частицы). Распространение вируса происходит горизонтально, чаще аэрозольно.

В семействе Paramyxoviridae выделено два подсемейства: Paramyxovirinae и Pneumovirinae.

Подсемейство Paramyxovirinae. Включает три рода: Respirovirus, Rubulavirus и Мorbillivirus.

Род Respirovirus. Включает вирус парагриппа 3 крупного рогатого скота, вирусы парагриппа человека 1 и 3, вирус обезьян 10 и вирус Сендай (прототипный вирус). Вирусы данного рода имеют гемагглютинин и нейраминидазу.

Род Rubulavirus. Включает парамиксовирусы птиц (9 типов), в том числе вирус болезни Ньюкасла (парагрипп 1 птиц), несколько типов вирусов парагриппа человека, рубулавирус свиней, вирус обезьян (5 и 41) и вирус эпидемического паротита (свинка) — прототипный вирус. Вирусы данного рода проявляют гемагглютинирующую и нейраминидазную активности.

Род Morbillivirus (от лат. morbillus — корь). Включает вирусы чумы собак, крупного рогатого скота, мелких жвачных, тюленей; морбилливирус китовых и вирус кори — прототипный вирус.

Подсемейство Ptieumovirinae. Включает два рода: Pneumovirus и Metapneumovirus.

Род Pneumovirus. Включает респираторно-синцитиальные вирусы крупного рогатого скота и человека — прототипный вирус и вирус пневмонии мышей.

Род Metapneumovirus. Включает один вид — вирус ринотрахеита индеек — прототипный вирус.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Содержание статьи

К осложнениям парамиксовирусной инфекции относится острый стенозирующий ларинготрахеит при парагриппе, бронхит и пневмония при респираторно-синцитиальной инфекции, отит и энцефалит при кори, орхит и миокардит при паротите. Наличие в составе семейства парамиксовирусов различных родов возбудителей обусловливает большое количество вариантов проявлений. Основным путём распространения является воздушно-капельный.

Причины

Парамиксовирусы принадлежат к РНК-содержащим вирусам и включают несколько родов. Наиболее известными представителями являются:

1. Вирус парагриппа человека.
2. Респираторно-синцитиальный вирус.
3. Вирус кори.
4. Вирус паротита.

Парамиксовирусы не отличаются высокой устойчивостью во внешней среде – они чувствительны к нагреванию, дезинфектантам и способны сохраняться долго только в условиях низких температур. Возбудитель кори инактивируется под воздействием ультрафиолетовых лучей.

В микробиологии парамиксовирусы признают одними из самых нестойких вирусов.

Передаются от больного человека здоровым людям такими путями как:

Все инфекции, вызываемые парамиксовирусами, протекают остро и более характерны для детей, чем для взрослых.

Симптомы

Парагрипп протекает в форме классической ОРВИ и характеризуется слабостью, лихорадкой, насморком, першением и болью в горле при глотании.
У детей часто отмечается сухой кашель, отчётливо слышный на расстоянии, а распространённым осложнением является стеноз гортани.

При респираторно-синцитиальной инфекции пациентов беспокоит слабость, повышение температуры тела, заложенность носа, сухость и першение в горле, а также приступообразный непродуктивный кашель и одышка. У маленьких детей РС-вирус провоцирует развитие бронхиолитов, пневмоний.

Корь характеризуется такими симптомами как:

• слабость, головная боль;
• насморк с обильным выделением серозного секрета;
• чихание, охриплость голоса;
• светобоязнь, слезотечение;
• кашель, сыпь на коже.

Течение кори делится на несколько периодов, среди которых можно назвать катаральный (кашель, явления ринита, фарингита и конъюнктивита), период высыпаний (сыпь в виде пятен и папул, склонная к слиянию и появляющаяся сначала за ушами, затем на лице, шее, груди, туловище и конечностях), период пигментации (исчезновение сыпи, на месте которой остаётся пигментация).

Типичным признаком коревой инфекции является энантема в виде красных пятен неправильной формы на мягком и твёрдом нёбе, а также белесоватые с красной каймой пятна небольшого размера,
локализующиеся на слизистой оболочке щёк, дёсен, губ (пятна Бельского-Филатова-Коплика).

Лечение

Лечение инфекции, вызванной парамиксовирусами, различается при каждом из заболеваний, перечисленных прежде. Общими мероприятиями являются:

• постельный режим во время лихорадки;
• обильное питьё, диета.

В случае парагриппа используют жаропонижающие препараты (парацетамол, нурофен), промывание носа солевым раствором, при необходимости – интерфероны, анаферон.

Терапия респираторно-синцитиальной инфекции заключается в очищении полости носа от скопившейся слизи, использовании В2-агонистов короткого действия (вентолин), рибавирина, глюкокортикостероидов, оксигенотерапии.

Для лечения кори назначают альфа-интерферон, антигистаминные препараты (лоратадин), стимуляторы процессов эпителизации (раствор ретинола в масле), раствор сульфацила натрия в качестве глазных капель. Могут быть показаны также муколитики (лазолван), жаропонижающие средства.

Больным паротитом рекомендуется употребление кислых фруктовых соков, а также воды с лимонным соком, приём витаминов (аскорбиновая кислота, витамины группы В).

Этиотропного лечения нет. При необходимости проводится терапия возникающих осложнений.

Семейства РНК-содержащих вирусов

• Ортомиксовирусы (вирусы гриппа А, В и С).

• Парамиксовирусы (парагриппозные вирусы, вирус эпидемического паротита,
вирус ньюкастлской болезни, вирус кори, респираторно-синцитиальный вирус).

• Пикорнавирусы более 110 серотипов риновирусов, а также некоторые

серотипы вирусов Коксаки А и В и ЕСНО).

• Реовирусы (3-й серотип).

Семейство ДНК-содержащих вирусов

• Аденовирусы (41 серотип, из них 8 являются возбудителями ОРЗ.

Вирусная инфекция характеризуется накоплением вирусных частиц в клетках организма человека и выходом сформировавшихся вирионов из клеток. Лабораторная диагностика проводится в трёх направлениях:

Выявление внутриклеточных включений, вызванных репродукцией вируса.

Внутриклеточные включения формируются в заражённых вирусом клетках — это места синтеза и сборки вирусных структур. Они являются продуктами взаимосодействия вируса и клетки. Внутриклеточные включения могут быть в цитоплазме и в ядрах зараженных вирусом клетках. По форме включения могут быть округлыми, кристаллоподобными, в виде тяжей и т.п. Для идентификации внутриклеточных включений (принадлежности к тому или другому вирусу) часто используют различные серологические реакции (РИФ, ИФА, РИА, ПЦР, метод молекулярной гибридизации, метод иммуноэлектронной микроскопии и др.).

2. Вирусологическая диагностика, включающая накопление вируса в живых системах (куриный эмбрион, лабораторное животное и различные культуры клеток), индикацию накопленного вируса в живых системах и идентификацию выделенного вируса с помощью серологический реакций, позволяющих установить антигенную структуру выделенного вируса.

Вирусы обладают тропизмом к определённой ткани организма и поэтому в одних клетках репродукция вируса сопровождается гибелью клетки (очаговую мелкозернистую деструкцию вызывают вирусы гриппа, клещевого энцефалита, а гроздевидную дегенерацию - аденовирусы) — цитопатическим действием (ЦПД), а в других клетках вирус репродуцируется, а гибели клеток не наблюдается. Поэтому, в первом случае, индикация вируса проводится по ЦПД, бляшкообразующей активности (способность вируса разрушать клетки под слоем агара или на поверхности хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона) или гибели лабораторного животного. Во втором случае, наличие вируса определяют по выявлению поверхностного гемагглютинирующего антигена вируса. Для этого исследуют аллантоисную жидкость куриного эмбриона, культуральную жидкость (питательная среда для роста клеток, в которые был внесён для накопления вирус) и т.п. Гемагглютинирующий антиген вируса определяют с помощью постановки реакции гемагглютинации (РГА).

Принципиальная схема лабораторной диагностики вирусных и риккетсиозных инфекции

I этап – забор исследуемого материала

1) От больного: носоглоточные смывы, испражнения, спинномозговая жидкость, кровь, отделяемое конъюнктивы глаз, содержимое папул, везикул, пустул.

2) От трупа: кусочки органов и тканей, содержимое кишечника, кровь из полости сердца, спинномозговая жидкость.

3) В очаге: трупы павших животных или кусочки органов и тканей от них, кровососущие насекомые, клеши, вода и т.д.

Вирусоскопия	Вирусология	Серодиагностика
Цель - обнаружение вируса в исследуемом материале. Методы: 1. Риноцитоскопия (выявление внутриклеточных включений – косвенное обнаружение вирусов. По Пигаревскому; по Морозову). 2. Прямая РИФ. 3.Простая люминесцентная микро-скопия (обработка препаратов аурамином позволяет дифференцировать РНК-содержащие (красное свечение) и ДНК-содержащие (зеленое свечение) вирусы) 4. Электронная микроскопия для изучения ультраструктуры вирусов. 5. Прямая РИФ (используют специфические антитела, конъюгированные с ФИТЦ).	Цель — накопление вируса и его идентификация. Исследуемый материал обрабатывается антибиотиками для уничтожения сопутствующей микрофлоры или пропускается через бактериальные фильтры. Для репродукции вирусов существует 3 живые системы (модели). II этап — накопление Курин.эмбр. Культ. клеток. Лаб. жив III этап – обнаружение вируса (индикация) РГА или ЦПД Клин. проявл. гибель или гибель I V этап - идентификация (сероидентификация) с помощью диагностических иммунных сывороток РТГА, РСК РН, РП, ИФА, и т. д.	Цель – изучение парных сывороток больного с целью выявления динамики нарастания титра специфических Ig (за положительный титр принимается 4-хкратное нарастание титра антител). РТГА РСК РП РН ИФА РНГА

Если вирус не разрушает клетки, но репродукция его происходит, то репродукцию вируса определяют по феномену гемадсорбции — клетки, продуцирующие вирус, адсорбируют на своей поверхности эритроциты крови различных лабораторных животных. Идентификацию выделенного вируса проводят на основании выявления антигенной структуры выделенного вируса. Для этого используют антитела к различным антигенам вируса и ставят серологические реакции: РСК, РТГА, РН (реакция нейтрализации), РП, РПНА (реакция подавления нейраминидазной активности вируса), ИФА, РИА и др.

3. Серодиагностика — постановка диагноза заболевания на основании иммунобиологической перестройки в организме. Для этого используются различные серологические реакции, позволяющие выявить в крови больных людей или реконвалесцентов циркуляцию различных классов иммуноглобулинов к определённым антигенам вирусной частицы.

При проведении серодиагностики определяют суммарные иммуноглобулины. В этом случае кровь больного (реконвалесцента) исследуют в динамике с интервалом 10-14 дней. Для постановки диагноза заболевания необходимо, чтобы концентрация антител в крови возросла не менее, чем в 4 раза. Кроме этого в крови определяют различные классы иммуноглобулинов к антигенам вирусных частиц. В этом случае используют обычно однократное исследование сыворотки крови больного.

Серодиагностика при гриппе имеет ретроспективное значение и предназначена для подтверждения результатов вирусологических исследований с целью решения вопроса о выборе вакцинного препарата для иммунизации угрожаемых контингентов населения. Определяют подтип вируса гриппа, вызвавшего эпидемию или пандемию.

Достоверное нарастание титров антител к вирусам гриппа отмечается на 2-3 неделе после перенесённого заболевания. В РСК парные сыворотки исследуют одновременно с вирусами трех типов. РСК более чувствительна, чем РТГА, и позволяет диагностировать грипп в очагах до 90% случаев.

РТГА применяется для определения подтипа штамма вируса гриппа, тип которого был определен в РСК. РН применяют в основном для установления штаммовой принадлежности вируса гриппа.

В последнее время для серодиагностики гриппа и др. вирусных инфекций применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, позволяющий выявить и титровать специфические противовирусные антитела в сыворотках людей и ставить диагноз в 75% случаев.

РПНА (реакция подавления нейраминидазной активности) используется для идентификации новых штаммов вирусов гриппа. Для изучения антигенной структуры вирусов гриппа используют реакцию иммуноадсорбции, метод радиоиммунного анализа и иммуноэнзимный метод.

Для диагностики парагриппозной инфекции ставят РТГА с 4 антигенами (типовыми) парагриппозных вирусов. В реакции используют эритроциты морских свинок.

Серодиагностика аденовирусных заболеваний проводится на основании нарастания титра антител в парных сыворотках больных и реконвалесцентов. Применяется реакция нейтрализации вируса в культуре клеток, РСК, РТГА. Комплементсвязывающие антитела появляются с 10-15 дня болезни, носят группоспецифический характер и сохраняются несколько лет. Эту реакцию сложно использовать для выявления свежих случаев заболевания, т.к. многие люди имеют постоянно высокие титры антител к аденовирусам. Это связано с тем, что все аденовирусы имеют единый комплементсвязывающий антиген. РН и РТГА ставят с эталонными типами аденовирусов. Четырехкратное нарастание типоспецифических антител свидетельствует об установлении типа аденовируса.

Дата добавления: 2018-10-27 ; просмотров: 293 ;