Серодиагностика гриппа в ртга

Исследуемый материал: сыворотка крови больного Диагностический препарат: диагностикумы сухие содержащие антигены вирусов (см. таблицу)

Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, 1% суспензия эритроцитов кур

1-я сыворотка (взята в острый период заболевания)

Диагностикумы	Разведения сыворотки	Контроли
1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	сывор	диагностикума
Н₁N₁
Н₂N₂
Н₃N₂
B

2-я сыворотка (взята в период реконвалесценции)

Диагностикумы	Разведения сыворотки	Контроли
1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	сыворотки	диагностикума
Н₁N₁
Н₂N₂
Н₃N₂
B

Результат: титр антител к вирусу гриппа В и H1N1 первой сыворотки 1/20, второй - к вирусу гриппа В увеличился до 1/80, к H1N1=1/20 и не изменился

Вывод: увеличение титра антител в 4 раза к свидетельствует о том , что обследуемый пациент переболел гриппом серотипа В

ДНК ГЕРПЕСВИРУСЫ (воздушно – капельный путь)

Таксономия и классификация: (смотри таблицу ниже)

Форма, размер вириона Крупные сложные вирусы сферической формы диаметром 100-200 нм, нуклеокапсид кубический Наличие суперкапсида имеется Тип НК двухнитевая линейная ДНК

Лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций

Диагностика инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса, вирусом цитомегалии

Исследуемый материал: содержимое пузырьков и герпетических везикул, соскобы роговой оболочки глаз, кровь, ликвор, носоглоточный смыв, моча , сперма, при летальном исходе - мозговая ткань.

Цитоскопия (окраска, характер изменений клеток при заражении ВПГ) Вирусы вызывают слияния пораженных клеток с образованием гигантских много ядерных клеток (синцитиев) с внутриядерными ацидофильными включениями Каудри (окраска по Романовскому-Гимзе)-

Вирусологический метод

Серодиагностика (реакции, особенность постановки) ИФА или РСК в парных сыворотках. Серодиагностика ввиду значительной инфицированности популяции не представляет существенной диагностической ценности.

Общая характеристика семейства Herpesviridae

Подсемейство	Вирусы, обозначения, серотип	Основные заболевания, вызываемые данным типом вируса
Alpha-herpesvirinae имеют короткий цикл репродукции. Вирусы размножаются в эпителиальных клетках, вызывая цитолитическое действие, в нейронах - персистирующую инфекцию.	ГВЧ-1 (Герпес вирусы человека 1) или вирус простого герпеса 1 типа - ВПГ1	1.Поражение слизистых оболочек 2.Поражения кожи 3.Герпетическая экзема 4.Поражения глаз 5. Поражения ЦНС 6.Висцеральный герпес
ГВЧ- 2,(Вирус простого герпеса 2 типа - ВПГ 2)	Генитальный герпес. Герпес новорожденных.
ГВЧ- 3 Вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса (лишая) –herpes zoster	Ветряная оспа. Опоясывающий лишай. Диссеминированная ветрянка
Beta-herpesvirinae Характерна латентная инфекция в клетках эпителия слюнных желез, миндалинах, почках, лимфоцитах. Вирусы оказывают цитомегалическое и лимфопролиферативное действие.	ГВЧ-5 Цитомегаловирус — ЦМВ	Врожденные аномалии. Ретинопатии, гепатиты, пневмонии при иммунодефиците (после пересадки органов и при СПИДе также колит и нейроинфекции .
ГВЧ-6	Внезапная экзантема ( у новорожденных и детей до 3-х лет)
ГВЧ-7	Синдром хронической усталости.
Gamma-herpesvirinae. Вызывают латентную инфекцию в лимфоидной ткани, лимфоцитах, эпителиальных клетках рта и глотки, слюнных желез. ВЭБ вызывает размножение В-лимфоцитов и персистирует в них.	ГВЧ-4 Вирус Эпштейна—Барра	1. Инфекционный мононуклеоз. 2. Лимфома Беркитта. 3. Назофарингеальная карцинома. 4. Лимфомы при иммунодифиците.
ГВЧ-8	Саркома Капоши, ассоциированная с ВИЧ- СПИД.

ДЕМОНСТРАЦИИ

Диагностические, профилактические и лечебные препараты: а)типоспецифические гриппозные и парагриппозные сыворотки; б)люминесцирующие сыворотки к вирусам гриппа А, В, С; в)люминесцирующие сыворотки к аденовирусам; г)гриппозный и парагриппозный диагностикумы; д) диагностикумы аденовирусные живые; е) живая гриппозная вакцина; ж) очищенная инактивированная вакцина для профилактики гриппа - ВАКСИГРИПП; з) живая, аттенуированная вакцина для профилактики эпидемического паротита - ИМОВАКС ОРЕЙОН; и) живая коревая вакцина; к) вакцина для профилактики кори, паротита и краснухи – ТРИМОВАКС.

Цель: определение а/т к вирусу гриппа в сыворотке крови и их нарастание в парных сыворотках.

Компоненты: сыворотка крови, антиген вируса гриппа (гемагглютинин) и эритроциты.

Ход: РТГА это вариант РН, основана на нейтрализации гемагглютинирующих свойств вирусов специфическими а/т находящимися в сыворотки больного, что проявляется отсутствием агглютинации эритроцитов с формированием на дне лунки компактного осадка (точечка, а не зонтик). Сыворотки крови обрабатывают периодатом калия для устранения неспецифических ингибиторов агглютинации, затем к разным разведениям сыворотки добавляют равное кол-во известных вирусных частиц (антигенов) и инкубируют. После чего добавляют, равны объем 1,0% взвеси эритроцитов, инкубируют и читают результат. Диагностическим титром считают наибольшее разведение, в котором тормозится гемагглютинация.

Выявление вируса гепатита А при иммунной электронной микроскопии:

Цель: выявление обнаружение вируса в материале и идентификация:

Компоненты: материал от больного, противовирусной сыворотки, контрастирующее вещество.

Ход: материал содержащий вирусов обрабатывают противовирусной сывороткой содержащей антилела к HAVAg, затем добавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту для контрастирования. Смесь наносят на пленку и высушивают. Затем микроскопируют в электронном микроскопе и находят скопление вирусных частиц.

Экспресс-Ds-ка ротавирусной инфекции в реакции гемадсорбции на твердой основе (РГагТО):

Цель: определение антигенов ротавируса вируса в материале.

Компоненты: противоротавирусная сыворотка (а/т), материал от больного с вирусом и его а/г, сенсибилизированные иммуноглобулином эритроциты.

Ход: лунки полистироловых планшетов обрабатывают противоротавирусной сывороткой, затем вносят в них исследуемый вируссодержащий материал и через 30-60 минут лунки промывают буферным раствором, после чего добавляют взвесь сенсибилизированных специфическим иммуноглобулином эритроцитов и через 30-60 минут читают результат. Если в материале был вирусный антиген, он соединяется с антителами сыворотки адсорбированными на поверхности лунки, а затем с иммуноглобулином на поверхности эпитроцитов и происходит гемагглютинация.

Выявление антигенных маркеров вируса бешенства при помощи РИФ:

Цель: выявление а/г вируса бешенства.

Компоненты: культура клеток инфицированная материалом от больного (с а/г), антирабического иммуноглобулина или моноклинальных антител, меченных флюорохромом (флюорисцином).

Ход: культуру клеток обрабатывают меченым иммуноглобулином и микроскопируют. При наличии вируса в клетке а/т адсорбируются на клетке и наблюдается ее свечение.

Идентификация вируса гриппа в аллантоисной жидкости РКЭ в РТГА:

Цель: идентификация вируса гриппа по известным антителам.

Компоненты: аллантоисная жидкость инфицированного вирусом РКЭ, противогриппозные диагностические сыворотки типа А, В, С и эритроциты кур.

Ход: Р-я основана на нейтрализации гемагглютинирующей активности вируса различных типов вируса гриппа А, В, С соответствующими сыворотками. Смесь соответствующей сыворотки и аллантоисной жидкости смешивают с эритроцитарный взвесью. Отсутствие гемагглютинации с одной из сывороток, указывает на тип вируса.

Идентификация вируса гриппа в аллантоисной жидкости РКЭ в РГА:

Цель: определение вируса или его а/г в материале.

Компоненты: Аллантоисную жидкость РКЭ инфицированного материалом от больного, эритроциты кур.

Ход: Аллантоисную жидкость титруя разводят от 1:10 до 1:52 и вносят по 0,5 мл в лунки планшета, и добавляют по 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов кур, инкубируют 40 минут и читают результат. Гемагглютинация говорит о наличии вируса в аллантоисной жидкости.

Серологическая диагностика кори при помощи РНГА:

Цель: выявление а/т к вирусу кори в сыворотки крови и нарастание их титра.

Компоненты: сыворотка крови больного, эритроцитарный коревой диагностикам.

Ход: Основана на способности эритроцитов с адсорбированными на их поверхности а/г к вирусу кори взаимодействовать с а/т в сыворотке крови и образовании на дне луки в виде фестончатого осадка (зонтик с неровными краями).

Серологический метод диагностики клещевого энцефалита при помощи РСК:

Цель: определение а/т в сыворотки крови и нарастание их титра.

Компоненты: парные сыворотки крови больного, а/г клещевого энцефалита для РСК, гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.

Ход: 1 фага – антитела в сывороточных разведениях взаимодействуют с а/г диагностикума, в результате чего происходит связывание комплимента. 2 фаза – индикаторная – определение в смеси наличия свободного комплемента путем добавления гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка), если комплимент свободен, то происходит гемолиз эритроцитов (РСК отрицательная), а если комплимент связан, то гемолиз не наступает (РСК положительная).

Определение антител к вирусу ВИЧ при помощи ИФА:

Цель: определение а/т в ВИЧ.

Компоненты: антигены ВИЧ, сыворотка крови больного, антиглобулиновую человеческую сыворотку меченую ферментом пероксидазой хрена субстрат для фермента.

Ход: сыворотку крови добавляют в лунки планшета с адсорбированными а/г ВИЧ и инкубируют. Затем лунки отмывают и добавляют антиглобулиновую сыворотку меченую ферментом., затем снова отмывают и добавляют субстрат для фермента с индикатором. Если в сыворотке а/т нет, то адсорбция последующих компонентов реакции и разложение субстрата не наблюдается.

Определение маркеров вируса гепатита В при помощи ИФА:

Цель: выявление а/г HBsAg в сыворотки крови больного.

Компоненты: сыворотка крови, антитела к HBsAg.

Цель: выявление а/т в ВИЧ.

Ход: на полоски наносят сыворотку крови и инкубируют, затем отмывают и наносят меченую антиглобулиновую сыворотку. Образовавшийся комплекс а/г-а/т-анти-а/т выявляют добавлением субстрата, изменяющего окраску при действии фермента.

РТГА относится к реакциям нейтрализации in vitro.

Механизм. У некоторых вирусов (например, вируса гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных в зависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител – антигемагглютининов наблюдается ингибированные гемагглютинирующей активности вирусов (рис.32).

1) исследуемый материал – аллантоисная жидкость куриного эмбриона;

2) диагностические противогриппозные сыворотки с антителами против серотипов вируса гриппа А: А(Н1N1), А(Н2N2), А(Н3N2 и др.;

3) 3,5% взвесь куриных эритроцитов – индикатор реакции;

4) физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

9.8 Реакции связывания комплемена: РСК Борде-Жангу, РСК,

Вассермана, РИБТ – реакции иммобилизации бледной трепонемы

Специфические АТ, обуславливающие лизис (растворение) клеток, носят название лизинов. Эти АТ применительно к бактериям называются бактериолизинами, к эритроцитам – гемолизинами и т.д.

Лизины способны проявить свое лизирующее действие на АГ только в присутствии комплемента, который является составной частью любой свежей сыворотки.

Таким образом, в основе реакции лизиса (РСК) лежит взаимодействие трех компонентов:

1) АГ (бактериальных клеток, эритроцитов, вирусов и др.);

2) специфических АТ иммунной сыворотки (бактериолизинов, гемолизинов и др.);

3) комплемента (сыворотка морской свинки).

В начале реакция идет по типу агглютинации, затем к комплексу АГ-АТ через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент. Наступает активация компонентов комплемента, которая приводит к потери подвижности бактерий (р. иммобилизации трепонем - при сифилисе), изменению формы (набухают), и, наконец, совсем растворяются (р. агглютинации-лизиса при лептоспирозе, р. лизиса - при возвратном тифе).

РСК отличается высокой чувствительностью и специфичностью и применяется для:

1) серологической диагностики (определения противомикробных антител) инфекционных заболеваний (р. Вассермана, Борде-Жангу и др.)

2) идентификации бактерии и др. микробов. Например, реакция бактериолизиса (РСК) применяется при холере с целью идентификации вибрионов.

РСК относится к сложным серологическим реакциям, в которых участвуют, кроме АГ и АТ, ещё гемолитическая система (р. гемолиза), выявляющая результат реакции.

РСК проводится в два этапа при участии двух систем:

первая система (тестовая) – инкубация смеси, содержащей АГ-АТ-комплемент;

вторая система (индикаторная) – гемолитическая сыворотка (гемолизины) + эритроциты – показывает исход реакции в первой системе: в случае положительного результата реакции в первой системе (образования комплекса АГ+АТ+комплемент), во второй системе не произойдет гемолиза ввиду отсутствия комплемента (эритроциты оседают на дно пробирки). В случае отрицательного результата в первой системе вторая сопровождается гемолизом, т. к. образуется комплекс эритроциты + гемолизины + комплемент (рис.33).

Для постановкиРСК Борде-Жангу,которая применяется с цельюопределения антител к гонококку (N. gonorrhoeae) при хронической гонореи требуются следующие компоненты:

1.Компоненты тестовой системы:

1) испытуемая сыворотка неизвестными противогонококковыми антителами (предварительно инактивируют нагреванием при 56°С в течение 30 минут);

2) гонококковый диагностикум– взвесь убитых N. gonorrhoeae; ;

2.Индикаторная (гемолитическая) система:

1) 3% взвесь эритроцитов барана (корпускулярный антиген-агглютиноген);

2) гемолитическая сыворотка;

В качестве комплемента в РСК применяют свежую и высушенную сыворотку морской свинки, т. к. в крови морской свинки комплемент содержится в наибольшем количестве и присутствует постоянно, чем у др. животных. Перед постановкой РСК следует проводить титрование комплемента в реакции гемолиза (эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент, физ. раствор) и определение рабочей дозы.

Титр комплемента – наибольшее разведение комплемента которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки.

Рабочая доза комплемента – количество комплемента, которое выше титра на 25%.

Гемолитическая сыворотка готовится путём иммунизации кроликов 50% взвесью эритроцитов барана. Полученную сыворотку инактивируют нагреванием при 56°С, определяют титр и рабочую дозу.

Титр сыворотки – максимальное разведение сыворотки, которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии комплемента. В качестве рабочей дозы берут гемолитическую сыворотку в тройном титре.

РСК Вассерманаставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения противотрепанемных антител в сыворотке крови, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является применение двух диагностикумов - перекрестнореагирующих антигенов № 1 и № 2:

- диагностикум № 1 – специфический, трепонемный (взвесь убитых Tr. рallidum);

- диагностикум №2 – неспецифический, кардиолипиновый антиген (собой высокоочищенный экстракт бычьего сердца).

Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и заведомо положительной сыворотками.

Первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50% больных реакция становится положительной не ранее чем через 2-3 недели после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса частота положительных реакций достигает 75-90%. После проведенного курса лечения реакция Вассермана становится отрицательной.

Реакция может быть ложноположительной при ряде заболеваний и состояний: беременность, онкопроцессы, туберкулез, после приема жирной пищи и алкоголя и др.

Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса можно ставить реакцию Вассермана, используя спинномозговую жидкость с теми же антигенами, что и в реакции с сывороткой больного.

РИБТ – реакции иммобилизации бледной трепонемыприменяется для серологичекой диагностики сифилиса, то есть определения противотрепанемных антител в сыворотке кров. РИБТ позволяет дифференцировать биологически ложноположительные результаты реакции Вассермана и осадочных реакций от истинных, что делает ее незаменимой при распознавании скрытого сифилиса, диагноз которого может быть поставлен часто лишь на основании серологических исследований.

· испытуемая сыворотка с противотрепанемными антителами (иммобилизины);

· антиген - взвесь бледных трепонем, полученный из яичка кролика зараженного сифилитическим орхитом;

· комплимент – сыворотка морских свинок в рабочей дозе;

\|	следующая лекция ==>
Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта	\|	Иммуноферментный анализ (ИФА)

Дата добавления: 2019-04-03 ; просмотров: 891 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Исследуемый материал: ______________________ Диагностический препарат:___________________________

Дополнительные ингредиенты реакции: ___________________________________________________________

Я сыворотка

Диагностикумы	Разведения сыворотки	Контроли
1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	сывор	диагностикума
Н₁N₁
Н₂N₂
Н₃N₂
B

Я сыворотка

Диагностикумы	Разведения сыворотки	Контроли
1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	сыворотки	диагностикума
Н₁N₁
Н₂N₂
Н₃N₂
B

ГЕРПЕСВИРУСЫ

Таксономия и классификация: ___________________________________________________________________

Форма, размер вириона _________________________________________________________________________

Наличие суперкапсида _________________________________ Тип НК _________________________________

Лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций

Диагностика инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса, вирусом цитомегалии

Цитоскопия (окраска, характер изменений клеток при заражении ВПГ) __________________________________

при заражении ВЦМ ____________________________________________________________________________

Размножение вируса проводят в _________________________________________________________________

Обнаруживают вирус по ________________________________________________________________________

Серодиагностика (реакции, особенность постановки) ________________________________________________

Общая характеристика семейства Herpesviridae

Подсемейство	Вирусы, обозначения, серотип	Основные заболевания, вызываемые данным типом вируса
Alphaherpesvirinae имеют короткий цикл репродукции. Вирусы размножаются в эпителиальных клетках, вызывая цитолитическое действие, в нейронах - персистирующую инфекцию.
BetaherpesvirinaeХарактерена латентная инфекция в клетках эпителия слюнных желез, миндалинах, почках, лимфоцитах. Вирусы оказывают цитомегалическое и лимфопролиферативное действие.
Gammaherpesvirinae. Вызывают латентную инфекцию в лимфоидной ткани, лимфоцитах, эпителиальных клетках рта и глотки, слюнных желез. ВЭБ вызывает размножение В-лимфоцитов и персистирует в них.

ДЕМОНСТРАЦИИ

ТЕМА: ЭНТЕРОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ПИКОРНА- И РЕОВИРУСАМИ. АДЕНОВИРУСЫ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Острые вирусные кишечные заболевания. Этиология. Таксономия основных возбудителей ОКВИ.

2. Классификация, дифференцирующие признаки и сравнительная характеристика родов семейства Picornaviridae.

3. Энтеровирусы. Состав рода. Морфология, биологические свойства, антигенная структура, особенности репродукции. Роль в патологии человека.

4. Эпидемиология, патогенез и клинические формы полиомиелита. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

5. Вирусы Коксаки и ЕСНО (ЭКХО):общая характеристика, серотипы. Особенности патогенеза и клиники заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки и ЭКХО. Схема лабораторной диагностики энтеровирусных заболеваний.

6. Калицивирусы: ультраструктура, особенности, роль в патологии человека.

7. Коронавирусы, общая характеристика, ультраструктура. Эпидемиология и клиника коронавирусных заболеваний.

8. Астровирусы. Строение, серотипы, распространение вирусов, особенности клинических проявлений кишечных заболеваний.

9. Семейство Reoviridae. Классификация. Ультраструктура. Ротавирусы. Эпидемиология, патогенез и клиника ротавирусных гастроэнтеритов. Лабораторная диагностика.

10. Аденовирусы: общая характеристика, культивирование, репродукция, состав семейства, взаимодействие с организмом человека, следствия трансплацентарного инфицирования. Аденовирусные инфекции: вирусологическая диагностика.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-26; Нарушение авторского права страницы

Читайте также: