Статьи из журнала вирусы

Появление тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса (SARS-CoV) и ближневосточного респираторного синдрома (MERS) -CoV подчеркивает угрозу межвидовых трансмиссивных событий, ведущих к вспышкам среди людей. Здесь мы изучаем потенциал заболевания SARS-подобным вирусом, SHC014-CoV, который в настоящее время циркулирует в популяциях китайских подковообразных летучих мышей 1 . Использование системы обратной генетики SARS-CoV 2Авторы создали и охарактеризовали химерный вирус, экспрессирующий пик коронавируса летучей мыши SHC014 в адаптированном для мыши остове SARS-CoV. Результаты показывают, что вирусы группы 2b, кодирующие спайк SHC014 в позвоночнике дикого типа, могут эффективно использовать несколько ортологов человеческого ангиотензин-превращающего фермента II рецептора SARS (ACE2), эффективно реплицироваться в первичных клетках дыхательных путей человека и достигать титров in vitro, эквивалентных эпидемическим. штаммы SARS-CoV. Кроме того, в естественных условияхэксперименты демонстрируют репликацию химерного вируса в легких мыши с заметным патогенезом. Оценка доступных иммунотерапевтических и профилактических методов на основе атипичной пневмонии показала низкую эффективность; подходы как к моноклональным антителам, так и к вакцинам не смогли нейтрализовать и защитить от инфицирования CoV с использованием нового белка с шипами. На основании этих результатов мы синтетически воспроизвели инфекционный полноразмерный рекомбинантный вирус SHC014 и продемонстрировали надежную репликацию вируса как in vitro, так и in vivo . Наша работа предполагает потенциальный риск повторного появления SARS-CoV из вирусов, циркулирующих в настоящее время в популяциях летучих мышей.

Появление SARS-CoV ознаменовало новую эру в межвидовой передаче тяжелых респираторных заболеваний с глобализацией, ведущей к быстрому распространению по всему миру и огромному экономическому воздействию 3 , 4 . С тех пор несколько штаммов, в том числе штаммы гриппа A H5N1, H1N1 и H7N9 и MERS-CoV, появились в популяциях животных, вызывая значительные заболевания, смертность и экономические трудности для пострадавших регионов 5 . Хотя меры общественного здравоохранения смогли остановить вспышку SARS-CoV 4 , недавние исследования в области метагеномики позволили выявить последовательности близкородственных SARS-подобных вирусов, циркулирующих в популяциях китайских летучих мышей, которые могут представлять угрозу в будущем 1 , 6., Однако одни только данные о последовательностях обеспечивают минимальную информацию для идентификации и подготовки к будущим препандемическим вирусам. Поэтому, чтобы изучить потенциал появления (то есть возможность заражать людей) циркулирующих CoV у летучих мышей, мы создали химерный вирус, кодирующий новый, зоонозный белок-шип CoV - из последовательности RsSHC014-CoV, которая была выделена из китайских подковообразных летучих мышей 1 - в контексте SARS-CoV, адаптированной к мышам основной цепи. Гибридный вирус позволил нам оценить способность нового белка шипа вызывать заболевание независимо от других необходимых адаптивных мутаций в его естественном скелете. Используя этот подход, мы охарактеризовали CoV-инфекцию, опосредованную спайком белка SHC014 в первичных клетках дыхательных путей человека и in vivo.и проверили эффективность доступных иммунных терапевтических средств против SHC014-CoV. Вместе эта стратегия переводит данные метагеномики, чтобы помочь предсказать и подготовиться к будущим возникающим вирусам.

Последовательности SHC014 и родственных RsWIV1-CoV показывают, что эти CoVs являются ближайшими родственниками эпидемических штаммов SARS-CoV ( Fig. 1a, b ); однако существуют важные различия в 14 остатках, которые связывают человеческий ACE2, рецептор SARS-CoV, включая пять, которые являются критическими для диапазона хозяев: Y442, L472, N479, T487 и Y491 (ссылка 7 ). В WIV1 три из этих остатков отличаются от эпидемического штамма SARS-CoV Urbani, но не ожидалось, что они изменят связывание с ACE2 ( дополнительная рис. 1a, b и дополнительная таблица 1 ). Этот факт подтверждается обоими экспериментами с псевдотипированием, в которых измерялась способность лентивирусов, кодирующих белки спайка WIV1, проникать в клетки, экспрессирующие ACE2 человека ( дополнительная фиг. 1).) и анализом репликации in vitro WIV1-CoV (ссылка 1 ). Напротив, 7 из 14 остатков взаимодействия ACE2 в SHC014 отличаются от остатков в SARS-CoV, включая все пять остатков, критических для диапазона хозяев ( дополнительная рис. 1c и дополнительная таблица 1 ). Эти изменения в сочетании с неспособностью псевдотипированных лентивирусов, экспрессирующих пик SHC014, проникать в клетки ( дополнительный рисунок 1d ), позволяют предположить, что пик SHC014 не способен связывать человеческий ACE2. Однако сообщалось, что аналогичные изменения в родственных штаммах SARS-CoV позволяют связывать ACE2 7 , 8., предполагая, что для проверки требуется дополнительное функциональное тестирование. Таким образом, мы синтезировали шип SHC014 в контексте компетентного к репликации адаптированного к мышам скелета SARS-CoV (далее мы будем называть химерный CoV как SHC014-MA15), чтобы максимизировать возможность патогенеза и исследования вакцин на мышах ( дополнительная фиг.8). 2а ). Несмотря на предсказания как из структурного моделирования, так и из экспериментов с псевдотипированием, SHC014-MA15 был жизнеспособным и реплицировался до высоких титров в клетках Vero ( дополнительная фиг. 2b ). Подобно SARS, SHC014-MA15 также требовал функциональной молекулы ACE2 для входа и мог использовать ортологов ACE2 человека, циветты и летучей мыши ( дополнительная Рис. 2c, d). Чтобы проверить способность шипа SHC014 опосредовать инфекцию дыхательных путей человека, мы исследовали чувствительность клеточной линии эпителия дыхательных путей человека Calu-3 2B4 (ссылка 9 ) к инфекции и обнаружили надежную репликацию SHC014-MA15, сравнимую с таковой у SARS-CoV Urbani ( рис. 1в ). Чтобы расширить эти результаты, первичные эпителиальные культуры дыхательных путей человека (HAE) были инфицированы и показали устойчивую репликацию обоих вирусов ( Fig. 1d ). Вместе данные подтверждают способность вирусов с шипом SHC014 инфицировать клетки дыхательных путей человека и подчеркивают потенциальную угрозу межвидовой передачи SHC014-CoV.

Фигура 1: SARS-подобные вирусы реплицируются в клетках дыхательных путей человека и вызывают патогенез in vivo

( a ) Полноменные последовательности генома репрезентативных CoV были выровнены и филогенетически картированы, как описано в Online Methods . Масштабная линейка представляет нуклеотидные замены, причем только поддержка бутстрапа выше 70% помечена. Дерево показывает CoV, разделенные на три отдельные филогенетические группы, определяемые как α-CoV, β-CoV и γ-CoV. Классические кластеры подгрупп отмечены как 2a, 2b, 2c и 2d для β-CoV и как 1a и 1b для α-CoV. ( b ) Аминокислотные последовательности доменов S1 спайков репрезентативных β-CoV группы 2b, включая SARS-CoV, были выровнены и филогенетически картированы. Шкала представляет аминокислотные замены. ( с , д) Вирусная репликация SARS-CoV Urbani (черный) и SHC014-MA15 (зеленый) после инфицирования клеток Calu-3 2B4 ( c ) или хорошо дифференцированных первичных воздух-жидкостных интерфейсных культур клеток HAE ( d ) при множественной инфекции (МВД) 0,01 для обоих типов клеток. Образцы собирали в отдельные моменты времени с биологическими повторностями ( n = 3) для экспериментов Calu-3 и HAE. ( e , f ) Потеря веса ( n = 9 для SARS-CoV MA15; n = 16 для SHC014-MA15) ( e ) и репликация вируса в легких ( n = 3 для SARS-CoV MA15; n = 4 для SHC014- MA15) ( ф) 10-недельных мышей BALB / c, инфицированных 1 × 10 4 БОЕ адаптированных к мыши SARS-CoV MA15 (черный) или SHC014-MA15 (зеленый) через интраназальный (in) путь. ( g, h ) Представлены репрезентативные изображения срезов легких, окрашенных на антиген SARS-CoV N от мышей, инфицированных SARS-CoV MA15 ( n = 3 мыши) ( g ) или SHC014-MA15 ( n = 4 мыши) ( h ). Для каждого графика значение в центре представляет среднее по группе, а столбцы ошибок определяют столбцы шкалы полусферы, 1 мм.

Чтобы оценить роль шипа SHC014 в опосредовании инфекции in vivo , мы заразили 10-недельных мышей BALB / c 10 4 блоками, образующими бляшки (pfu), либо SARS-MA15, либо SHC014-MA15 ( рис. 1e – h). ). Животные, инфицированные SARS-MA15, испытывали быструю потерю веса и летальность к 4 дню после заражения (dpi); в отличие от этого, инфекция SHC014-MA15 приводила к значительной потере веса (10%), но без летальности у мышей ( Fig. 1e ). Изучение репликации вируса выявило почти эквивалентные титры вируса в легких мышей, инфицированных SARS-MA15 или SHC014-MA15 ( рис. 1f ). Принимая во внимание, что легкие от мышей, инфицированных SARS-MA15, показали сильное окрашивание как в терминальных бронхиолах, так и в паренхиме легких 2 dpi ( Fig. 1g).), у мышей, инфицированных SHC014-MA15, наблюдалось снижение окрашивания антигена дыхательных путей ( рис. 1h ); напротив, в паренхиме или в общем гистологическом балансе не наблюдалось дефицита окрашивания антигена, что свидетельствует о дифференциальной инфекции легочной ткани для SHC014-MA15 ( дополнительная таблица 2 ). Затем мы проанализировали инфекцию у более восприимчивых, старых (12-месячных) животных. Животные, инфицированные SARS-MA15, быстро теряли вес и умирали от инфекции ( дополнительная рис. 3а, б ). Инфекция SHC014-MA15 вызывала устойчивую и устойчивую потерю веса, но имела минимальную летальность. Тенденции в гистологии и картинах окрашивания антигенов, которые мы наблюдали у молодых мышей, были сохранены у более старых животных ( дополнительная таблица 3). Мы исключили возможность того, что SHC014-MA15 опосредовал инфекцию через альтернативный рецептор, на основании экспериментов с мышами Ace2 - / - , у которых не наблюдалось потери веса или окрашивания антигена после инфекции SHC014-MA15 ( дополнительная фиг. 4a, b и дополнительная). Таблица 2 ). Вместе данные указывают на то, что вирусы с шипом SHC014 способны вызывать потерю веса у мышей в контексте вирулентного остова CoV.

Учитывая доклиническую эффективность терапии моноклональными антителами против вируса Эбола, такой как ZMApp 10 , мы затем попытались определить эффективность моноклональных антител против SARS-CoV против инфекции SHC014-MA15. Ранее сообщалось о четырех широко нейтрализующих человеческих моноклональных антителах, нацеленных на остроконечный белок SARS-CoV, и они являются вероятными реагентами для иммунотерапии 11 , 12 , 13 . Мы исследовали влияние этих антител на вирусную репликацию (выраженную в процентах ингибирования вирусной репликации) и обнаружили, что тогда как SARS-CoV Urbani дикого типа был сильно нейтрализован всеми четырьмя антителами при относительно низких концентрациях антител ( рис. 2a-d)), нейтрализация варьировалась для SHC014-MA15. Fm6, антитело, генерируемое с помощью фагового дисплея и избегания мутантов 11 , 12 , достигало только фоновых уровней ингибирования репликации SHC014-MA15 ( Fig. 2a ). Аналогично, антитела 230.15 и 227.14, которые были получены из В-клеток памяти пациентов, инфицированных SARS-CoV 13 , также не смогли блокировать репликацию SHC014-MA15 ( Fig. 2b, c).). Для всех трех антител различия между аминокислотными последовательностями спайков SARS и SHC014 соответствовали прямым или смежным изменениям остатков, обнаруженным у побежавших мутантов SARS-CoV (fm6 N479R; 230,15 L443V; 227,14 K390Q / E), что, вероятно, объясняет отсутствие антител нейтрализующая активность против SHC014. Наконец, моноклональное антитело 109.8 смогло достичь 50% нейтрализации SHC014-MA15, но только при высоких концентрациях (10 мкг / мл) ( рис. 2d ). Вместе результаты показывают, что широко нейтрализующие антитела против SARS-CoV могут иметь только незначительную эффективность против возникающих SARS-подобных штаммов CoV, таких как SHC014.

Фигура 2: моноклональные антитела против SARS-CoV имеют предельную эффективность против SARS-подобных CoV.

( a - d ) Нейтрализационные анализы, оценивающие эффективность (измеренную как уменьшение количества бляшек) панели моноклональных антител, которые все первоначально были созданы против эпидемии SARS-CoV, против инфекции клеток Vero SARS-CoV Urbani (черный) или SHC014-MA15 (зеленый). Проверенные антитела были fm6 ( n = 3 для Urbani; n = 5 для SHC014-MA15) 11 , 12 ( a ), 230,15 ( n = 3 для Urbani; n = 2 для SHC014-MA15) ( b ), 227,15 ( n = 3 для Урбани; n = 5 для SHC014-MA15) ( с ) и 109,8 ( n= 3 для Урбани; n = 2 для SHC014-MA15) 13 ( d ). Каждая точка данных представляет среднее значение для группы, а столбцы ошибок определяют sem. Обратите внимание, что столбцы ошибок в ячейках Vero, инфицированных SARS-CoV Urbani в b , c , перекрываются символами и не видны.

Чтобы оценить эффективность существующих вакцин против инфекции SHC014-MA15, мы вакцинировали старых мышей двойной инактивированной цельной SARS-CoV (DIV). Предыдущая работа показала, что DIV может нейтрализовать и защитить молодых мышей от заражения гомологичным вирусом 14 ; однако вакцина не защищала старых животных, у которых также наблюдалась патология усиленного иммунитета, что указывает на возможность нанесения вреда животным из-за вакцинации 15 . Здесь мы обнаружили, что DIV не обеспечивает защиту от заражения SHC014-MA15 в отношении потери веса или вирусного титра ( дополнительная фиг. 5a, b ). В соответствии с предыдущим отчетом с другими гетерологичными группами 2b CoVs 15сыворотка от мышей, вакцинированных DIV, в возрасте мышей также не смогла нейтрализовать SHC014-MA15 ( дополнительная фигура 5c ). Примечательно, что вакцинация DIV привела к сильной иммунной патологии ( дополнительная таблица 4 ) и эозинофилии ( дополнительная фиг. 5d – f ). Вместе эти результаты подтверждают, что вакцина DIV не будет защищать от заражения SHC014 и может усиливать заболевание в возрасте вакцинированной группы.

В отличие от вакцинации мышей DIV, использование SHC014-MA15 в качестве живой аттенуированной вакцины показало потенциальную перекрестную защиту от заражения SARS-CoV, но результаты имеют важные предостережения. Мы заразили молодых мышей 10 4 БОЕ SHC014-MA15 и наблюдали их в течение 28 дней. Затем мы заражали мышей SARS-MA15 на 29 день ( дополнительная фиг. 6a ). Предшествующее заражение мышей высокой дозой SHC014-MA15 обеспечивало защиту от заражения летальной дозой SARS-MA15, хотя был только минимальный ответ нейтрализации SARS-CoV от антисыворотки, вызванный через 28 дней после инфекции SHC014-MA15 ( Дополнительный рис. 6б1: 200). В отсутствие вторичного усиления антигена 28 dpi представляет ожидаемый пик титров антител и подразумевает, что со временем будет снижена защита от SARS-CoV 16 , 17 . Аналогичные результаты, демонстрирующие защиту от заражения летальной дозой SARS-CoV, наблюдались у старых мышей BALB / c в отношении потери веса и репликации вируса ( дополнительная фиг. 6c, d ). Тем не менее, доза инфекции SHC014-MA15 10 4 БОЕ вызвала> 10% потерю веса и летальность у некоторых пожилых животных ( рис. 1 и дополнительная рис. 3).). Мы обнаружили, что вакцинация более низкой дозой SHC014-MA15 (100 БОЕ) не вызывала потерю веса, но она также не защищала пожилых животных от заражения SARS-MA15 смертельной дозой ( дополнительная фиг. 6e, f ). В совокупности данные свидетельствуют о том, что заражение SHC014-MA15 может обеспечивать перекрестную защиту от SARS-CoV посредством консервативных эпитопов, но необходимая доза вызывает патогенез и исключает использование в качестве ослабленной вакцины.

Установив, что шип SHC014 обладает способностью опосредовать инфицирование клеток человека и вызывать заболевание у мышей, мы затем синтезировали инфекционный клон SHC014-CoV во всю длину на основе подхода, использованного для SARS-CoV ( рис. 3а ) 2 . Репликация в клетках Vero не выявила дефицита для SHC014-CoV относительно дефицита для SARS-CoV ( Fig. 3b ); однако SHC014-CoV значительно ( P

В 1901 американский военный хирург У.Рид и его коллеги установили, что возбудитель желтой лихорадки также является фильтрующимся вирусом. Желтая лихорадка была первым заболеванием человека, опознанным как вирусное, однако потребовалось еще 26 лет, чтобы ее вирусное происхождение было окончательно доказано.

СВОЙСТВА И ПРОИСХОЖДЕНИЕ ВИРУСОВ.

Наиболее просто устроенные вирусы состоят из нуклеиновой кислоты, являющейся генетическим материалом (геномом) вируса, и покрывающего нуклеиновую кислоту белкового чехла. В состав некоторых вирусов входят также углеводы и жиры (липиды). Таким образом, вирусы можно рассматривать просто как мобильные наборы генетической информации.

Принято считать, что вирусы произошли в результате обособления (автономизации) отдельных генетических элементов клетки, получивших, кроме того, способность передаваться от организма к организму. В нормальной клетке происходят перемещения нескольких типов генетических структур, например матричной, или информационной, РНК (мРНК), транспозонов, интронов, плазмид. Такие мобильные элементы, возможно, были предшественниками, или прародителями, вирусов.

ЯВЛЯЮТСЯ ЛИ ВИРУСЫ ЖИВЫМИ ОРГАНИЗМАМИ?

В 1935 американский биохимик У.Стэнли выделил в кристаллической форме вирус табачной мозаики, доказав тем самым его молекулярную природу. Полученные результаты вызвали бурные дискуссии о природе вирусов: являются ли они живыми организмами или просто активированными молекулами? Действительно, внутри зараженной клетки вирусы проявляют себя как интегральные компоненты более сложных живых систем, но вне клетки представляют собой метаболически инертные нуклеопротеины. Вирусы содержат генетическую информацию, но не могут самостоятельно реализовать ее, не обладая собственным механизмом синтеза белка. Когда особенности строения и репродукции вирусов оказались выясненными, вопрос о том, являются ли они живыми, постепенно утратил свое значение.

РАЗМЕРЫ ВИРУСОВ.

Величина вирусов варьирует от 20 до 300 нм (1 нм = 10 -9 м). Практически все вирусы по своим размерам мельче, чем бактерии. Однако наиболее крупные вирусы, например вирус коровьей оспы, имеют такие же размеры, как и наиболее мелкие бактерии (хламидии и риккетсии), которые тоже являются облигатными паразитами и размножаются только в живых клетках. Поэтому отличительными чертами вирусов по сравнению с другими микроскопическими возбудителями инфекций служат не размеры или обязательный паразитизм, а особенности строения и уникальные механизмы репликации (воспроизведения самих себя).

СТРОЕНИЕ ВИРУСОВ

Вирионы со спиральным типом симметрии, как у вируса табачной мозаики, имеют форму удлиненного цилиндра; внутри белкового чехла, состоящего из отдельных субъединиц – капсомеров, находится свернутая спираль нуклеиновой кислоты (РНК). Вирионы с икосаэдрическим типом симметрии (от греч. eikosi – двадцать, hedra – поверхность), как у полиовируса, имеют сферическую, а точнее, многогранную форму; их капсиды построены из 20 правильных треугольных фасеток (поверхностей) и похожи на геодезический купол.

Встречаются вирусы с еще более сложным строением. Вирионы поксвирусов (вирусы группы оспы) не имеют правильного, типичного капсида: между сердцевиной и наружной оболочкой у них располагаются трубчатые и мембранные структуры.

РЕПЛИКАЦИЯ ВИРУСОВ

ДНК обычно существует в виде двухцепочечных структур: две полинуклеотидные цепочки соединены водородными связями и закручены таким образом, что образуется двойная спираль. РНК, напротив, обычно существует в виде одноцепочечных структур. Однако геном отдельных вирусов представляет собой одноцепочечную ДНК или двухцепочечную РНК. Нити (цепочки) вирусной нуклеиновой кислоты, двойные или одинарные, могут иметь линейную форму или замыкаться в кольцо.

У некоторых ДНК-содержащих вирусов сам цикл репродукции в клетке не связан с немедленной репликацией вирусной ДНК; вместо этого вирусная ДНК встраивается (интегрируется) в ДНК клетки-хозяина. На этой стадии вирус как единое структурное образование исчезает: его геном становится частью генетического аппарата клетки и даже реплицируется в составе клеточной ДНК во время деления клетки. Однако впоследствии, иногда через много лет, вирус может появиться вновь – запускается механизм синтеза вирусных белков, которые, объединяясь с вирусной ДНК, формируют новые вирионы.

Так называемые ретровирусы содержат в качестве генома РНК и имеют необычный способ транскрипции генетического материала: вместо транскрипции ДНК в РНК, как это происходит в клетке и характерно для ДНК-содержащих вирусов, их РНК транскрибируется в ДНК. Двухцепочечная ДНК вируса затем встраивается в хромосомную ДНК клетки. На матрице такой вирусной ДНК синтезируется новая вирусная РНК, которая, как и другие, определяет синтез вирусных белков.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ

Тем не менее система классификации вирусов необходима в практической работе, и попытки ее создания предпринимались неоднократно. Наиболее продуктивным оказался подход, основанный на структурно-функциональной характеристике вирусов: чтобы отличить разные группы вирусов друг от друга, описывают тип их нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК, каждая из которых может быть одноцепочечной или двухцепочечной), ее размеры (число нуклеотидов в цепочке нуклеиновой кислоты), число молекул нуклеиновой кислоты в одном вирионе, геометрию вириона и особенности строения капсида и наружной оболочки вириона, тип хозяина (растения, бактерии, насекомые, млекопитающие и т.д.), особенности вызываемой вирусами патологии (симптомы и характер заболевания), антигенные свойства вирусных белков и особенности реакции иммунной системы организма на внедрение вируса.

В систему классификации вирусов не вполне укладывается группа микроскопических возбудителей болезней, называемая вироидами (т.е. вирусоподобными частицами). Вироиды вызывают многие распространенные среди растений болезни. Это мельчайшие инфекционные агенты, лишенные даже простейшего белкового чехла (имеющегося у всех вирусов); они состоят только из замкнутой в кольцо одноцепочечной РНК.

ВИРУСНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

ЭВОЛЮЦИЯ ВИРУСОВ И ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ.

Хотя вирусы не являются полноценными живыми организмами, их эволюционное развитие имеет много общего с эволюцией других патогенных организмов. Для того чтобы сохраниться как вид, ни один паразит не может быть слишком опасным для своего основного хозяина, в котором размножается. В противном случае это привело бы к полному исчезновению хозяина как биологического вида, а вместе с ним и самого возбудителя. В то же время любой патогенный организм не сможет существовать как биологический вид, если у его основного хозяина слишком быстро и эффективно развивается иммунитет, позволяющий подавлять репродукцию возбудителя. Поэтому вирус, вызывающий острое и тяжелое заболевание у какого-либо вида животных, обычно имеет еще и другого хозяина. Размножаясь в последнем, вирус не наносит ему (как виду) существенного вреда, однако такое относительно безвредное сосуществование поддерживает циркуляцию вируса в природе. Так, например, вирус бешенства в природе сохраняется среди грызунов, для которых заражение этим вирусом не является смертельным.

Природным резервуаром для вирусов лошадиных энцефалитов, особо опасных для лошадей и в несколько меньшей степени для человека, являются птицы. Эти вирусы переносятся кровососущими комарами, в которых вирус размножается без существенного вреда для комара. Иногда вирусы могут передаваться насекомыми пассивно (без размножения в них), однако чаще всего они репродуцируются в переносчиках.

Для многих вирусов, например кори, герпеса и отчасти гриппа, основным природным резервуаром является человек. Передача этих вирусов происходит воздушно-капельным или контактным путем.

Распространение некоторых вирусных заболеваний, как и других инфекций, полно неожиданностей. Например, в группах людей, проживающих в антисанитарных условиях, практически все дети в раннем возрасте переносят полиомиелит, обычно протекающий в легкой форме, и приобретают иммунитет. Если же условия жизни в этих группах улучшаются, дети младшего возраста обычно полиомиелитом не болеют, но заболевание может возникнуть в более старшем возрасте, и тогда оно часто протекает в тяжелой форме.

Возбудители некоторых болезней, в том числе очень тяжелых, не укладываются ни в одну из вышеперечисленных категорий. К особой группе медленных вирусных инфекций еще недавно относили, например, болезнь Крейтцфельда – Якоба и куру – дегенеративные заболевания головного мозга, имеющие очень продолжительный инкубационный период. Однако оказалось, что они вызываются не вирусами, а мельчайшими инфекционными агентами белковой природы – прионами.

ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА.

Репродукция вирусов тесно переплетается с механизмами синтеза белка и нуклеиновых кислот клетки в зараженном организме. Поэтому создать лекарства, избирательно подавляющие вирус, но не наносящие вреда организму, – задача чрезвычайно трудная. Все же оказалось, что у наиболее крупных вирусов герпеса и оспы геномные ДНК кодируют большое число ферментов, отличающихся по свойствам от сходных клеточных ферментов, и это послужило основой для разработки противовирусных препаратов. Действительно, создано несколько препаратов, механизм действия которых основан на подавлении синтеза вирусных ДНК. Некоторые соединения, слишком токсичные для общего применения (внутривенно или через рот), годятся для местного использования, например при поражении глаз вирусом герпеса.

Известно, что в организме человека вырабатываются особые белки – интерфероны. Они подавляют трансляцию вирусных нуклеиновых кислот и таким образом угнетают размножение вируса. Благодаря генной инженерии стали доступны и проходят проверку в медицинской практике интерфероны, производимые бактериями.

К самым действенным элементам естественной защиты организма относятся специфические антитела (специальные белки, вырабатываемые иммунной системой), которые взаимодействуют с соответствующим вирусом и тем самым эффективно препятствуют развитию болезни; однако они не могут нейтрализовать вирус, уже проникший в клетку. Примером может служить герпетическая инфекция: вирус герпеса сохраняется в клетках нервных узлов (ганглиев), где антитела не могут его достичь. Время от времени вирус активируется и вызывает рецидивы заболевания.

Обычно специфические антитела образуются в организме в результате проникновения в него возбудителя инфекции. Организму можно помочь, усиливая выработку антител искусственно, в том числе создавая иммунитет заранее, с помощью вакцинации. Именно таким способом, путем массовой вакцинации, заболевание натуральной оспой было практически ликвидировано во всем мире.

НАКОПЛЕНИЕ ВИРУСОВ.

Для приготовления вакцинных препаратов необходимо накопить вирус. С этой целью часто используют развивающиеся куриные эмбрионы, которых заражают данным вирусом. После инкубирования зараженных эмбрионов в течение определенного времени накопившийся в них вследствие размножения вирус собирают, очищают (центрифугированием или другим способом) и, если нужно, инактивируют. Очень важно удалить из препаратов вируса все балластные примеси, которые могут вызывать серьезные осложнения при вакцинации. Конечно, не менее важно убедиться, что в препаратах не осталось неинактивированного патогенного вируса. В последние годы для накопления вирусов широко используют различные типы клеточных культур.

МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ВИРУСОВ

Работы с бактериофагами способствовали расширению методического арсенала в изучении вирусов животных. До этого исследования вирусов позвоночных выполнялись в основном на лабораторных животных; такие опыты были очень трудоемки, дороги и не очень информативны. Впоследствие появились новые методы, основанные на применении тканевых культур; бактериальные клетки, использовавшиеся в экспериментах с фагами, были заменены на клетки позвоночных. Однако для изучения механизмов развития вирусных заболеваний эксперименты на лабораторных животных очень важны и продолжают проводиться в настоящее время.

В интернете начала массово обсуждаться информация о возникновении бушующего ныне штамма коронавируса - статью британского научного журнала nature , в котором ученые из США опубликовали свои работы по исследованию штаммов коронавируса и, что самое важное, намеренного создания в вирусной лаборатории USAMRIID в штате Мэрилен д , США - разновидности штамма вируса, ранее не существовавшего в природе.

Статья за 2015 год - по сути своей доказательство, в которой и содержится подробности работы по экспериментам и изменению штаммов коронавируса и исследования их влияния на млекопитающих. Статья содержит прямые признания ученых США, что это они синтезировали штамм вируса, который из способного заражать только животных, обзавелся внедрённым в лабораториях белком, на основе ранее проводившихся в США работ по вирусу эболы - и стал способным заражать людей.

11 марта 2020 года. Берлин. Федеральная пресс-конференция Федерального канцлера и министра здравоохранения в сопровождении главы Института Роберта Коха.

Высказывание министра ФРГ , Вилли Виммера

"Коронавирус был запатентован еще в 2015 году в США. В Китай вирус был занесен одним из американских военных, принимавших участие в мероприятиях на территории Китая в конце 2019 года.

Вирус бушует в наших странах, потому что Европа стала жертвой американского "оружия массового уничтожения" , имеющего акционерную ценность с 1990-х годов. Этот вирус не только поражает ослабленные поколения людей, он также поражает и сами закостенелые штаты с полной силой - на американском жгуте эксплуатации.

Вилли Виммер - Г ерманский юрист и политик ( ХДС ), член Бундестага (1976—2009), парламентский статс-секретарь Федерального министерства обороны (1985—1992), вице-президент Парламентской ассамблеи СБСЕ/ОБСЕ (1994—2000).

Оригинальная статья с экономического журнала "Мировая Экономика".

Хотя по факту работа над изучением штаммов вируса и была международной и испытания проводились в 10 лабораториях - но 8 из которых, это лаборатории США ,
1 - Швейцария
1 - Китай
- и вкупе доподлинно известно ключевое участие лаборатории USAMRIID , и именно по этой причине сейчас все внимание аккумулируется на том, что штамм вируса искусственно сделали в США.

Известный список Лабораторий и имен ученых, отмеченных в исследованиях

Department of Epidemiology, University of North Carolina at Chapel Hill, USA.

Vineet D Menachery, Boyd L Yount Jr, Kari Deb-bink, Lisa E Gralinski, Jessica A Plante, Rachel L Gra-ham, Trevor Scobey, Eric F Donaldson & Ralph S Baric.

Department of Microbiology and Immunology, University of North Carolina at Chapel Hill, USA.

Kari Debbink & Ralph S Baric.

National Center for Toxicological Research, Food and Drug Administration, Jefferson, Arkansas, USA.

Sudhakar Agnihothram.

Department of Cell Biology and Physiology, Uni-versity of North Carolina at Chapel Hill, USA.

Scott H Randell.

Cystic Fibrosis Center, Marsico Lung Institute, University of North Carolina at Chapel Hill, USA.

Scott H Randell.

Department of Cancer Immunology and AIDS, Da-na-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School, Boston, Massachusetts, USA.

Wayne A Marasco.

Department of Medicine, Harvard Medical School, Boston, Massachusetts, USA.

United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases USAMRIID, Fort Detrick , Maryland , USA.

Имена ученых - неизвестны.

Key Laboratory of Special Pathogens and Biosafety, Wuhan Institute of Virology, Chinese Academy of Sci-ences, Wuhan, China.

Xing-Yi Ge & Zhengli-Li Shi.

Institute for Research in Biomedicine, Bellinzona Institute of Microbiology, Zurich, Switzerland.

Antonio Lanzavecchia.

USAMRIID - единственная лаборатория Министерства обороны США и крупнейшая в мире вирусная лаборатория, оснащенная для исследования особо опасных вирусов на уровне биобезопасности 4 в костюмах персонала с положительным давлением .
Именно эта военная лаборатория вывела "химерные" штаммы коронавируса, указанные в научной статье.

"chimeric SARS-like CoVs were cultured on Vero E6 cells ( obtained from United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases USAMRIID )."

И хотя и не было известно ни о какой инфекции коронавирусного штамма, способного заразить человека - в это-же время в США активно набирала обороты "другая" инфекция со схожими симптомами.

31 августа 2019 года в той же The New York Times появляется материал о развитии в Америке таинственной эпидемии неизвестной доселе болезни лёгких (на момент выхода статьи – 215 заражённых). В мире эта история обрела известность как "легочное заболевание, вызываемое электронными сигаретами".

Под подозрение врачей и медицинских чиновников попали канабис, электронные сигареты и их жидкостные аналоги (вейп), однако не исключалась и вирусно-бактериальная природа тяжёлого заболевания лёгочной системы - ведь болели и те, кто вообще ничего не курил.

В середине сентября президент Дональд Трамп с подачи Центров по контролю и профилактике заболеваний (Centers for Disease Control and Prevention, CDC) созвал по этому поводу специальное совещание, в то время как власти ряда штатов, не имея какого либо физиологического обоснования, усиленно добивались запрета продажи некоторых видов смесей для электронных сигарет, до полного изучения природы заболевания.

И всё это, повторюсь, произошло непосредственно после закрытия военного объекта в Форте Детрик, с официальным заявлением - из-за "п роблем с утилизацией опасных материалов , тк "не было достаточных систем для обеззараживания сточных вод ."

Связанны ли вспышки пандемии в США с этой халатностью - пока что неизвестно.

На счет того, как инфекция попала в Китай - существует версия, согласно которой уже делал заявление МИД.Китая Чжао Лицзянь

Свою запись дипломат сопроводил видеофрагментом выступления главы американского Центра по предупреждению и контролю заболеваний Роберта Редфилда в палате представителей конгресса США с информацией о том, что несколько американцев скончались вовсе не от обычного гриппа, а именно от коронавируса.

Те самые всемирные военные игры, которые осенью 2019 года прошли именно в Ухане - завершились 27 октября .

На мультиспортивном мероприятии - США представляли около 172 спортсменов-военных, и среди них была как минимум одна офицер из штата Мэрилен д — Бадди Бенасси. Штата, в которой и находится вирусная лаборатория USAMRIID.

Ранее США уже не раз обвинялись в различных случаях и скандалах, в связи с распространением штаммов вирусов и заболеваний.

Скандалы с вирусной лабораторией USAMRIID

В 2001 г. – Рассылка спор сибирской язвы в 2001 году в почтовых конвертах. Микробиолог Брюс Айвинс, подозревавшийся в рассылках, в результате которых погибли пять человек, скончался в 2008 году при невыясненных обстоятельствах.

Скандалы с AFIP

Ученые Института молекулярной патологии армии США (AFIP) , исследуя прошловековую вспышку вируса испанки, в исследованиях 1997 г. извлекли биоматериал жителей Аляски 1918 г. зараженных пандемией испанки и захороненной в вечной мерзлоте.

В США был воссоздан штамм этой болезни H1N1 в 2002 году.
Позже по всему миру возникли вспышки заражения разновидностей этого гри ппа.

По некоторым данным международного центра GlobalResearch , только в 2005-2012 г. в США имели место более 1000 инцидентов, так или иначе связанных с исчезновением или кражей патогенов из их биолабораторий.

Весь ужас ситуации по мимо былых и текущей пандемии и жертвах - еще дополняется и нынешним мировым экономическим и производственным кризисом.
И хоть и запачканы сейчас по самую шею - буквально все участники исследований, и США и Европа и сам Китай, но это не значит что эти страны не начнут искать крайнего. Вероятно скоро все увидят, как представители этих стран начнут агрессивно валить вину друг на друга и требовать возмещение ущерба.
Но насколько это сильно аукнется США с ее научной работой и публикацией в nature , которая фактически является вещь.доком?

• В отчете о деятельности альянса НАТО за 2019 год говорится, что в 2019 году первое место в научно-исследовательской работе альянса заняла тема радиохимической и биологической защиты (29%), сместив казалось бы самую насущную проблему Европы — противодействие терроризму (оно оказалось на 4-м месте по приоритетности).
• Годом ранее, в 2018, ситуация была прямо противоположная - терроризм, был на первом месте (28%), а радиохимическая и биологическая защита на четвертом (13%).