Тест-система на гепатит с эколаб
40.06
Моноклональные антитела к HBsAg
ИФТС для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С.
Комплект №1 (двухпланшетный)
Комплект №1/1 (однопланшетный)
Комплект №2-подтверждающий
(спектр 6 антигенов, включает рекомбинантные и пептидные белки)
Комплект №2/1-подтверждающий
(спектр 4 антигена, рекомбинантные белки)
Комплект №3-подтверждающий
(структурный Core и смесь неструктурных (NS 3, NS 4 , SN 5 ) отдельно)
40.10
Recombinant Hepatitis C Virus Nucleocapsid (core) Genotype-3a (2-79 a.a.)
40.11
Recombinant Hepatitis C Virus NS3 Genotype-1b (1207-1612 a.a.)
40.12
Recombinant Hepatitis C Virus NS3 Genotype-1b (1353-1611 a.a.)
40.13
Recombinant HCV NS4 mosaic Genotype-1,2,3
Hepatitis C Virus artificial NS4 mosaic Recombinant protein contains the HCV NS4 immunodominant regions (1689-1735 aa, 1921-1940 aa, from 1,2,3, genotypes)
03.15
03.15.1
ИФТС для выявления суммарных антител к Treponema pallidum
Двухстадийный вариант.
Комплект №1 (двухпланшетный)
Комплект №2 (однопланшетный)
8х24
8х12
03.15.2
03.15.3
ИФТС для выявления суммарных антител к Treponema pallidum
Одностадийный вариант.
Комплект №1 (двухпланшетный)
Комплект №2 (однопланшетный)
8х24
8х12
Внутрилабораторный контроль-Антипаллидум
ИФА-антипаллидум-скрин
ИФА-антипаллидум-одностадийный
03.21
03.21.1
ИФТС для выявления антител класса М к Treponema pallidum
Комплект №1 (двухпланшетный)
Комплект №2 (однопланшетный)
03.20
03.20.1
ИФТС для выявления антител класса G к Treponema pallidum
Комплект №1 (двухпланшетный)
Комплект №2 (однопланшетный)
03.06
03.09
Диагностикум для определения антител к Treponema pallidum в реакции пассивной гемагглютинации
Комплект №1 (8,5 мл тест. эритр., 8,5 мл контр. эритр. )
Комплект №2 (17 мл тест. эритр., 8,5 мл контр. эритр. )
(Комп. 2 – для определения титра антител)
03.13
03.14
Комплект №1
Комплект №2
Набор реагентов для выявления антител к кардиолипиновому антигену в реакции флоккуляции
100
500
03.22.2
Комплект №1 (конъюгат в концентрате)
Комплект №2 (конъюгат в растворе)
Тест-система для выявления или подтверждения наличия антител к возбудителю сифилиса Treponema pallidum методом иммунного блоттинга с использованием рекомбинантных антигенов.
24
Комплект №1
Комплект №2
Набор для выявления антител класса M к Treponema pallidum методом иммунной флюоресценции.
80
Комплект №1
Комплект №2
Набор для выявления антител класса G к Treponema pallidum методом иммунной флюоресценции.
80
50.99
40.16
Recombinant Treponema pallidum TpN17
40.17
Recombinant Treponema pallidum TpN47
40.18
Recombinant Treponema pallidum TmpA
Описание
Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/09794 от 30.12.10. г. ИФА -ВГС комплект №3
Комплект № 3 для подтверждения наличия антител к антигенам вируса гепатита С
Подтверждение наличия выявленных при скрининге антител классов G и M к отдельным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови и препаратах крови человека, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе.
Базовый вариант комплекта включает:
| Иммуносорбент | рекомбинантные антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS3, NS4, NS5) областями генома ВГС, сорбированные двумя группами – core-антиген и NS (NS3+ NS4 + NS5) в лунках стрипов полистироловых планшетов с плоским дном для ИФА по 6 стрипов, по краю стрипов нанесена маркировка в виде полос: на стрипах с core-Ag – красного цвета, на стрипах с NS-Ag – синего цвета.
Стрипы упакованы раздельно в пакеты из пленки полиэтиленовой. | core – 6 стр.
NS – 6 стр. |
| Контрольный положительный образец (К + ) | инактивированный; прозрачная или со слабой опалесценцией жидкость малинового цвета | 1 фл. (0,5 мл) |
| Контрольный отрицательный образец (К – ) | инактивированный; прозрачная или со слабой опалесценцией жидкость синего цвета | 1 фл. (1,0 мл) |
| Конъюгат | антитела диагностические против IgG и IgM человека с пероксидазой хрена; прозрачная жидкость красного цвета | 1 фл. (1,0 мл) |
| 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином [ФСБ-Т(х25)] | прозрачная или слегка опалесцирующая, бесцветная, пенящаяся жидкость; возможно выпадение осадка солей, растворяющегося при температуре 37 ºС в течение 30 мин | 1 фл. (40 мл) |
| Раствор для разведения образцов (РРО) | опалесцирующая жидкость сине-фиолетового или красного цвета, допускается выпадение незначительного осадка | 1 фл. (12 мл)
1фл. (6,0 мл) |
| Раствор для разведения конъюгата (РРК) | опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком, допускается выпадение незначительного осадка | 1 фл. (13 мл) |
| Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБР) | прозрачная, бесцветная жидкость | 1 фл. (13 мл) |
| Хромоген (ТМБ) | раствор тетраметилбензидина; прозрачная жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком или розового цвета | 1 фл. (1,3 мл) |
| Стоп-реагент | прозрачная, бесцветная жидкость | 1 фл. (12,5 мл) |
Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.
Набор может быть дополнительно укомплектован:
вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.);
одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.);
клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).
Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.
По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.
Базовый вариант комплекта рассчитан на исследование 48 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы используется 6 лунок – по 3 лунки на стрип).
Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:
| Кол-во стрипов
одной группы/всего | 1/2 | 2/4 | 3/6 | 4/8 | 5/10 | 6/12 |
| Число исследуемых образцов | 1-5 | 6-13 | 14-21 | 22-29 | 30-37 | 38-45 |
Основой тест-системы являются раздельно иммобилизованные на поверхности лунок антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS3, NS4,NS5) областями генома ВГС.
Тест-система выявляет антитела к разным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови человека вследствие их взаимодействия с антигенами, иммобилизованными на поверхности лунок планшета. Образующиеся комплексы антиген-антитело обнаруживаются с помощью конъюгата – антител против иммуноглобулинов человека, связанных с пероксидазой хрена.
Диагностическая специфичность и чувствительность 100 % при проверке на сыворотках стандартной панели ОСО 42-28-310-02П.
ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Образцы до исследования могут храниться при температуре от 2 до 8 о С до 7 сут.; более длительное хранение (до трех месяцев) – при температуре не выше минус 20 о С. Повторное замораживание образцов не допускается.
Образцы, содержащие частицы фибрина или иные видимые глазом примеси, перед исследованием осветлить центрифугированием (10-15 мин при 2500-3000 об/мин).
Для исследования образцов иммуноглобулинов человека исходные растворы развести ФСБ-Т в соотношении 1:10, лиофильно высушенные препараты крови предварительно восстановить согласно инструкции по их применению, затем развести ФСБ-Т в соотношении 1:10.
Для исключения ложноположительных результатов не рекомендуется анализировать сыворотки с микробным проростом, гемолизом, повышенным содержанием липидов.
Потенциальный риск применения набора – класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 6 июня 2012 г.).
С контрольными и исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.
Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.
- Оборудование, материалы и реагенты
Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.
Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.
Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.
Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 о С, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.
Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).
70 %-ный раствор спирта этилового или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08.
Все реагенты до начала анализа должны быть выдержаны не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 о С. Иммуносорбент выдерживать в упакованном виде, для того чтобы избежать конденсации влаги внутри лунок.
2.1. Приготовление раствора для отмывки планшетов (ФСБ-Т)
При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) его необходимо прогреть перед разведением в термостате при 37ºС до полного растворения осадка.
ФСБ-Т(х25) развести водой очищенной в 25 раз, используя объемы концентрата и воды очищенной, указанные в табл. 1 для заданного числа стрипов
| Кол-во стрипов | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| ФСБ-Т(х25), мл | 7 | 13 | 20 | 27 | 33 | 40 |
| Вода очищ., мл | до 175 | до 325 | до 500 | до 675 | до 825 | до 1000 |
Раствор хранить при температуре от 2 до 8 о С не более 14 сут.
Раствор готовить за 10-20 мин до внесения в лунки планшета.
Конъюгат развести в РРК, используя объемы конъюгата и РРК, указанные в табл. 2 для заданного числа стрипов. Необходимый объем РРК перенести в одноразовую емкость и добавить конъюгат в указанном количестве, тщательно перемешать.
| Кол-во стрипов | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| РРК, мл | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| Конъюгат, мкл |
Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.
Стабильность рабочего разведения конъюгата при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч.
Готовить непосредственно перед использованием, избегая попадания прямых солнечных лучей.
ТМБ развести в ЦБР, используя объемы ТМБ и ЦБР, указанные в табл. 3 для заданного числа стрипов. Необходимый объем ЦБР перенести в одноразовую емкость и добавить ТМБ в указанном количестве, тщательно перемешать.
| Кол-во стрипов | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| ЦБР, мл | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| ТМБ, мкл | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 | 1200 |
Стабильность раствора хромогена при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч. в защищенном от света месте.
Примечание: Посуду и наконечники пипеток, контактировавшие с раствором хромогена, отмывать без применения синтетических моющих средств.
РРО перед использованием необходимо тщательно перемешать из-за возможного выпадения осадка. Иммуносорбент, К + , К – , стоп-реагент готовы к использованию.
После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.
- Проведение ИФА
3.1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов каждой группы. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.
Расположить стрипы в рамке, чередуя стрипы с core-антигеном и NS-антигеном в соответствии со схемой постановки.
| core | NS | core | NS | core | NS | core | NS | core | NS | core | NS | |
| A | К+ | К+ | №6 | №6 | №14 | №14 | №22 | №22 | №30 | №30 | №38 | №38 |
| B | К- | К- | №7 | №7 | №15 | №15 | №23 | №23 | №31 | №31 | №39 | №39 |
| C | К- | К- | №8 | №8 | №16 | №16 | №24 | №24 | №32 | №32 | №40 | №40 |
| D | №1 | №1 | №9 | №9 | №17 | №17 | №25 | №25 | №33 | №33 | №41 | №41 |
| E | №2 | №2 | №10 | №10 | №18 | №18 | №26 | №26 | №34 | №34 | №42 | №42 |
| F | №3 | №3 | №11 | №11 | №19 | №19 | №27 | №27 | №35 | №35 | №43 | №43 |
| H | №4 | №4 | №12 | №12 | №20 | №20 | №28 | №28 | №36 | №36 | №44 | №44 |
| G | №5 | №5 | №13 | №13 | №21 | №21 | №29 | №29 | №37 | №37 | №45 | №45 |
3.2. В каждую лунку внести по 80 мкл (или 30 мкл) РРО.
3.3 В одну лунку (напр., А) стрипа с каждой группой антигенов внести 20 мкл (или 70 мкл) К + , в две лунки (напр., В и С) – по 20 мкл (или 70 мкл) К – , в остальные лунки – по 20 мкл (или 70 мкл) исследуемых образцов, , т.е. в соответствии с внесенным объемом РРО (п.1.3.2), затем тщательно перемешать пипетированием (не менее 3 раз) или на шейкере на малой скорости в течение 30 с (100об/мин), цвет РРО при этом должен измениться с сине-фиолетового на зеленый или с красного на желтый.
процедура 1 – 30 мин при 37 о С на шейкере (500 об/мин);
процедура 2 – 1 ч при 37 о С в термостате.
3.5. По окончании инкубации аспирировать содержимое лунок и промыть лунки планшета четыре раза, добавляя в каждую лунку не менее 400 мкл рабочего промывочного раствора. Время между заполнением и аспирацией (замачивание) должно быть не менее 30 сек.
Необходимо следить за полной аспирацией после каждого цикла отмывки (остаточный объем в лунках не должен превышать 10 мкл).
Полностью удалить влагу из лунок, перевернув планшет на сухую чистую фильтровальную бумагу.
Сохранность иммуносорбента между операциями 15 минут.
3.6. Перемешать рабочий раствор конъюгата и внести его по 100 мкл в каждую лунку. Планшет закрыть крышкой и выдержать в течение 30 мин в термостате при температуре 37 о С.
3.8. В каждую лунку внести по 100 мкл свежеприготовленного раствора хромогена, выдержать 30 мин при температуре от 18 до 25 о С в защищенном от света месте (планшет не закрывать) или в термостате при температуре 37 о С в течение 20 мин. (планшет закрыть чистой защитной пленкой).
3.9. В каждую лунку (в той же последовательности, в которой вносился раствор хромогена) внести по 100 мкл стоп-реагента и через 2-3 мин, но не позднее чем через 10 мин, учесть результаты.
Результаты ИФА учитывать при соблюдении следующих условий:
оптическая плотность в лунках с К + (ОПК+) – не менее 0,5;
оптическая плотность в лунках с К – (ОПК-) – не более 0,25.
В противном случае исследование повторить
Для каждой группы антигенов рассчитать критическое значение ОП (ОПкрит) по формуле:
где ОПК-ср – значение ОП в лунках с К – соответствующего стрипа.
Результаты учитывать по каждой группе антигенов отдельно.
Образец учитывать как отрицательный (не содержащий антител к ВГС), если значение ОП в лунке с ним ниже ОПКрит для каждой группы антигенов.
Образец учитывать как положительный (содержащий антитела к ВГС), если значение ОП в лунке с ним выше или равно ОПкрит по обоим группам антигенов или только по группе структурных антигенов (core) ВГС.
Для интерпретации результатов исследования сывороток можно использовать коэффициент позитивности (КП), который рассчитывается для каждого антигена по формуле:
Если КП больше 1, исследуемый образец расценивать как положительный. Результат анализа считать отрицательным при КП меньше 1 и неопределенным при КП≥1.
Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.
Набор транспортируют при температуре от 2 до 8 о С. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 о С в течение 10 сут.
ИФА -ВГС комплект №3
Для учреждений здравоохранения.
ИФА -ВГС комплект №3
СВОДНАЯ ТАБЛИЦА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ РЕАГЕНТОВ
| Кол-во стрипов | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| ФСБ-Т | ||||||
| ФСБ-Т(х25), мл | 7 | 13 | 20 | 27 | 33 | 40 |
| Вода очищ., мл | до 175 | до 325 | до 500 | до 675 | до 825 | до 1000 |
| Рабочий раствор конъюгата | ||||||
| РРК, мл | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| Конъюгат, мкл | ||||||
| Рабочий раствор хромогена | ||||||
| ЦБР, мл | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 |
| ТМБ, мкл | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 | 1200 |
Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.
Иммуносорбент – смесь синтетических и рекомбинантных HCV-антигенов, сорбированных в лунках планшета для ИФА 96-луночные разборные или цельные планшеты для ИФА из прозрачного бесцветного полистирола, сорбированные HCV-антигенами
Конъюгат (х51 концентрат) - моноклональные антитела мыши против IgG человека, меченные пероксидазой хрена Прозрачная жидкость сине-зелёного цвета
К+ - контрольный положительный образец инактивированный Прозрачная жидкость красного цвета
К- - контрольный отрицательный образец инактивированный Прозрачная жидкость жёлтого цвета
РИП - разбавитель исследуемых проб Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета
ФСР-Т (х25 концентрат) - фосфатно-солевой буферный раствор с твином-80 Прозрачная или опалесцирующая жидкость бесцветная или жёлтоватого цвета, допускается выпадение бесцветного кристаллического осадка
ЦБ – цитратный буферный раствор, содержащий Н2О2 Прозрачная бесцветная жидкость
ТМБ (х5 концентрат) – раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в димексиде
Стоп-реагент – 1 М раствор кислоты серной
Набор №1 рассчитан на проведение 192 определений, набор №2 рассчитан на проведение 96 определений, включая контрольные.
Набор реагентов предназначен для выявления антител к вирусу гепатита С в сыворотке (плазме) крови человека и препаратах крови.
Принцип метода
В основе метода лежит принцип непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антител класса IgG к антигенам вируса гепатита С.
При внесении исследуемых или контрольных образцов в лунки планшета, антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС), в случае их наличия в образце, связываются с антигенами, иммобилизованными на твердой фазе, образуя иммунный комплекс антиген-антитело. Не связавшиеся антитела удаляют промыванием лунок. Внесение пероксидазного конъюгата моноклональных антител к IgG человека приводит к образованию комплекса антиген-антитело-конъюгат, на поверхности лунок планшета. Избыток конъюгата удаляют промыванием. Для выявления образовавшегося комплекса в лунки добавляют бесцветный субстратный раствор, в состав которого входит водорода перекись и хромоген (ТМБ). В результате
ферментативной реакции из водорода перекиси выделяется кислород, который переводит хромоген в окрашенную форму. Ферментативную реакцию останавливают внесением раствора кислоты серной. Измеряют оптическую плотность (ОП), величина которой зависит от концентрации анти-ВГС в образце.
Подготовка реагентов для ИФА
Все компоненты перед использованием выдержать не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 °C. В случае выпадения кристаллов солей в ФСР-Т (х25 концентрат), прогреть его при температуре 37 °C до полного растворения осадка. Растворы готовить в зависимости от количества используемых стрипов иммуносорбента в соответствии с таблицей.
Рабочий раствор ФСР-Т хранить при температуре от 2 до 8 °C не более 3 сут. Рабочий раствор конъюгата и субстратный раствор готовить непосредственно перед применением. Не хранить. К+, К-, РИП и Стоп-реагент готовы к использованию.
После отбора необходимого количества оставшиеся концентраты реагентов и неиспользованные стрипы хранить плотно закрытыми в пакете в течение срока годности при температуре от 2 до 8 °C.
Подготовка к исследованию препаратов крови
Лиофилизированные препараты крови перед исследованием растворить в дистиллированной воде (если иное не указано в ФСП на препарат) и довести объем до номинального.
Все препараты иммуноглобулинов перед исследованием дополнительно развести рабочим раствором ФСР-Т до конечной концентрации белка:
- 10+1 мг/мл (для иммуноглобулинов внутривенного введения),
- 5+0,25 мг/мл (для иммуноглобулинов внутримышечного введения),
- 5+0,4 мг/мл (для иммуноглобулинов энтерального применения).
Растворенные препараты крови хранению не подлежат.
Проведение ИФА
Иммуносорбент перед использованием промыть 2 раза рабочим раствором ФСР-Т, заполняя лунки до краёв и удаляя промывающий раствор в ёмкость с дезинфицирующим раствором.
Во все лунки внести по 100 мкл РИП, добавить по 20 мкл контрольных или исследуемых образцов и перемешать пипетированием. При этом цвет раствора в лунках (за исключением К+) должен измениться с сине-фиолетового на сине-зеленый. При использовании 1 стрипа иммуносорбента контрольные образцы вносить каждый в 1 лунку. При использовании большего количества стрипов контрольные образцы внести не менее чем в 2 лунки каждый.
Планшет закрыть липкой лентой или крышкой и инкубировать при температуре 37 °C в течение 30-40 мин, затем промыть 5 раз как описано выше.
Во все лунки внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, планшет закрыть липкой лентой или крышкой и инкубировать при температуре 37 °C в течение 30-40 мин, затем промыть 5 раз как описано выше.
Во все лунки внести по 100 мкл субстратного раствора, выдержать в течение 10-15 мин при температуре от 18 до 25 °C в защищённом от света месте, затем добавить по 50 мкл стоп-реагента и не позднее чем через 5 мин учесть результаты ИФА.
Учет и интерпретация результатов
Провести измерение оптической плотности (ОП) раствора в лунках иммуносорбента с помощью анализатора иммуноферментного при двух длинах волн. Тест-фильтр – 450 нм, референс-фильтр – 620-680 нм. Допускается одноволновое измерение при 450 нм.
Результаты оценивать, если среднее значение ОП в лунках с К- (ОПср.К-) не превышает 0,150, в лунках с К+ - не менее 1,000.
Исследуемые образцы, ОП которых не выше критического значения ОПкрит., оценивать как отрицательные. Образцы, ОП которых выше ОПкрит., оценивать как положительные. Значение ОПкрит. вычислять по формуле:
ОПкрит. = ОПср.К- + 0,150
Входящие в набор реагентов контрольные образцы инактивированы. Однако исследуемая сыворотка и плазма крови людей, а также растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ним следует осторожно: при работе использовать резиновые перчатки; оборудование, находившееся в контакте с биологическими образцами и реагентами, дезинфицировать до и после работы спирта этилового раствором 70 %; все использованные материалы обеззараживать водорода перекиси раствором 6 % или хлорамина Б раствором 3 % в течение 2 ч, или автоклавированием при (2,0±0,1) кгс/см2 ((0,20±0,01)МПа), температуре (132±2) °C в течение 60 мин; при работе с растворами ТМБ и кислоты серной не использовать пипетки с металлическими частями и избегать попадания этих растворов на кожный покров. Загрязненные участки кожи и слизистые оболочки обильно промывать водой.
ВИЧ-инфекция – медленно текущая ретровирусная инфекция, характеризующаяся пандемическим распространением, развитием синдрома приобретенного иммунодефицита и летальным исходом. Поэтому своевременная и точная лабораторная диагностика этого заболевания имеет важное значение. Она основана прежде всего на идентификации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и выявлении специфических противовирусных антител. (3, 6, 8, 9)
При массовом скрининге доноров крови и групп риска с целью выявления специфических противовирусных антител используется метод иммуноферментного анализа (ИФА). Метод основан на иммобилизации вирусных антигенов на твердой фазе, сорбции на них антител и выявлении комплексов антиген-антитело с помощью конъюгата антивидового иммуноглобулина с ферментом (8). Преимущества данного метода: можно анализировать большие партии образцов при массовом обследовании населения, возможность автоматизации, использование оборудования, доступного для большинства лабораторий.
Основными показателями качества иммуноферментной тест-системы являются чувствительность и специфичность. Чувствительность – доля больных, для которых получен положительный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных больных. Специфичность – доля здоровых, для которых получен отрицательный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных здоровых (2, 10). Понятия “чувствительность” и “специфичность” тесно связаны с понятиями “ложноотрицательный” и “ложноположительный” результат. Таким образом, более чувствительной является та система, которая дает меньше ложноотрицательных результатов, а более специфичной – та, которая дает меньше ложноположительных результатов (4, 10, 11) .
Причинами ложноположительных результатов могут быть наличие у пациентов аутоиммунных, онкологических и инфекционных заболеваний. Сыворотки беременных женщин и пожилых людей при постановке ИФА также могут давать серопозитивные результаты (1, 2, 5, 7). Ложноотрицательные результаты возможны в случаях раннего инфицирования, когда уровень антител очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся глубоким поражением иммунной системы (3).
Целью данной работы является сравнительная оценка чувствительности и специфичности 8 иммуноферментных тест-систем для обнаружения антител к ВИЧ, используемых при скрининге.
В работе были использованы следующие диагностикумы: “ЭКОлаб-Вироностика IV” (“ЭКОлаб”), “ЭКОлаб-ЖЕНЕЛАВИЯ-Микст” (“ЭКОлаб”), “КомбиБест-анти-ВИЧ-1+2” (ЗАО “Вектор-Бест”), “ВИЧ-1, ВИЧ-2-ИФА-Авиценна” (СПб “Авиценна”), “СКРИН-ВИЧ” (ЗАО ПКБ им. И.И.Мечникова), “ПЕПТОСКРИН-2” (ООО “АмерКарД”), “ЭКОлаб-ТЕСТ-ВИЧ-1,2” (ЭКОлаб”), “Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К” (ООО АмерКард”). Характеристика тест-систем представлена в таблице 1. Постановку ИФА и учет результатов проводили согласно инструкциям по применению тест-систем. Все образцы были протестированы в реакции иммунного блоттинга с использованием систем “БЛОТ-ВИЧ” (ЗАО “Биосервис”) и “ВЕСТЕРН БЛОТ ВИЧ-1” (“Organon”).
Табл.1 Характеристика ИФА-тест-систем для выявления антител к ВИЧ.
| тест-система | антиген | параметры тест-системы | субстрат | ||
| ВИЧ 1 | ВИЧ 2 | тип ИФА | |||
| Вироностика | рекомбинантный, вирусный лизат, пептиды | р 24gp 160 | env-антиген ВИЧ-2 | сэндВИЧ | ТМБ |
| Женелавия | пептиды, рекомбинантный | gp 41 gp 160 | gp 36 | непрямой | ОФД |
| Комби-бест | рекомбинантный | __ | __ | сэндВИЧ | ТМБ |
| АВИЦЕННА | синтетические пептиды | р 24 gp 120 gp 41 | gp 36 | непрямой | ТМБ |
| СКРИН-ВИЧ | рекомбинантный | р 24 р 17 gp 41 gp 120 | gp 110 gp 38 | непрямой | ОФД |
| ПЕПТОСКРИН-2 | пептиды | gp 41 gp 120 | gp 32 | непрямой | ОФД |
| ЭКОлаб-ТЕСТ ВИЧ 1,2 | рекомбинантный | р 24 р 17 gp 41 gp 120 | gp 38 | непрямой | ОФД |
| АМЕРКАРД | рекомбинантный | gp 41 р 55 | gp 32 | непрямой | ОФД |
Материалом для исследования служили 168 образцов сыворотки крови, включающие в себя сыворотки от ВИЧ - инфицированных (n=48), сыворотки от больных вирусными гепатитами В и С (n=35), а также сыворотки от пациентов, в крови которых не обнаружены антитела к ВИЧ (n=85) . Контрольная группа составила 20 здоровых доноров.
Учет результатов ИФА проводили на оборудовании фирмы Sanofi (Франция) – на ридере PR 2100 измеряли оптическую плотность (ОП) исследуемых образцов сыворотки крови. Уровень “среза” (ОП критическое) для каждой тест-системы рассчитывался согласно инструкциям. За “серую зону” принимали значения ОП в интервале + 10% от уровня “среза”. Образцы считали положительными, если значения их ОП были выше “серой зоны”. Образцы считали сомнительными, если значения их ОП находились в пределах “серой зоны”. Образцы считали отрицательными, если значения их ОП были ниже “серой зоны”.
Показатели специфичности в нашем исследовании варьировали от теста к тесту. Так, для здоровых доноров крови этот показатель составил 100%. При исследовании сывороток, полученных от больных вирусными гепатитами В и С специфичность изменялась от 3% (“Скрин-ВИЧ”) до 97% (“КомбиБест-анти-ВИЧ-1,2”) (таблица 2). Данный факт может быть объяснен, с одной стороны, недостаточной специфичностью оцениваемых диагностикумов, а с другой – наличием перекрестных реакций неспецифических факторов в сыворотках с компонентами тест-систем.
Табл. 2 Процент специфичности тест-систем для диагностики ВИЧ-инфекции.
| Диагностикум | доноры | ВИЧ-негативные в иммуноблоте | больные гепатитом В и С |
| “Вироностика” | 100 % | 75 % | 88 % |
| “Женелавия” | 100 % | 84,3 % | 88 % |
| “Комби-Бест” | 100 % | 90 % | 97 % |
| “Авиценна” | 89,5 % | 52,5 % | 60 % |
| “Скрин-ВИЧ” | 100 % | 17,5 % | 3 % |
| “Пептоскрин-2” | 93,8 % | 62,5 % | 74 % |
| “ЭКОлаб-тест ВИЧ 1,2” | 89,5 % | 28,3 % | 26 % |
| “АмерКард” | 87,3 % | 55,8 % | 74 % |
При оценке ложноположительных результатов нами были получены следующие данные (табл.3)
Табл.3 Процент ложноположительных результатов в ИФА-системах.
| Тест-Система | ВИЧ-негативные в иммуноблоте | больные гепатитом В и С | ||
| серая зона, % | ложнополо-жительные результаты, % | серая зона, % | ложнополо-жительные результаты, % | |
| “Вироностика” | 10 | 16,7 | 2,8 | 8,6 |
| “Женелавия” | 8,3 | 11,7 | 2,8 | 8,6 |
| “Комби-Бест” | 4,2 | 5,8 | 2,8 | * |
| “Авиценна” | 5,0 | 24,2 | 8,6 | 34,3 |
| “Скрин-ВИЧ” | 4,2 | 45,8 | 2,8 | 97,1 |
| “Пептоскрин-2” | 8,3 | 24,2 | 14,3 | 14,3 |
| “ЭКОлаб-тест ВИЧ 1,2” | 9,2 | 32,5 | 17,1 | 60,0 |
| “АмерКард” | 7,5 | 36,7 | 20,0 | 5,7 |
* таких результатов нет
Таким образом, наибольшей специфичностью обладают тест-системы “Комби-Бест”, “Женелавия” и “Вироностика”. Остальные тест-системы дают высокий процент ложноположительных результатов, которые не подтверждаются в иммуноблоте.
Процент выявления антител к ВИЧ в серопозитивных образцах практически во всех ИФА-системах составил 100%. В тест-системах “ЭКОлаб-Женелавия-Микст” и “Авиценна” чувствительность была 97,9%. Наименьшая чувствительность из исследуемых диагностикумов была в тест-системе “Пептоскрин-2” – 89,6%. Эти результаты могут свидетельствовать о недостаточной чувствительности перечисленных тест-систем и о высокой вероятности получения ложнонегативных результатов.
Результаты проведенного исследования позволяют сделать выводы о том, что для массового тестирования на ВИЧ-инфекцию наиболее подходят такие высоко специфичные и чувствительные тест-системы, как “Комби-Бест-анти-ВИЧ-1,2”, “ЭКОлаб-Вироностика IV” и “ЭКОлаб-Женелавия-Микст”. Остальные диагностикумы могут давать высокий процент как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов.
В заключении необходимо отметить, что при тестировании сыворотки крови на ВИЧ-инфекцию следует принимать во внимание неодинаковую чувствительность и специфичность различных тест-систем и использовать несколько диагностикумов с различным принципом постановки реакции, особенно для сывороток крови с низким уровнем антител к ВИЧ и для тестирования донорской крови.
Читайте также:
- Форвет р-р для инъекций 5мл противовирусное иммуномодулирующее ср-во
- Секс с училкой без вирусов
- На весь экран вирус лечение
- Avg не видит вирусов
- Штамм вируса гриппа а что это такое