Вакцина на основе вируса ньюкасла

Болезнь Ньюкасла (ньюкаслская болезнь, НБ, NDV) — одно из самых распространенных инфекционных заболеваний, поражающих сельскохозяйственную птицу и иные виды птиц. НБ представляет глобальную угрозу для коммерческого птицеводства во всем мире.

Возбудители болезни — вирусы серотипа парамиксовируса птиц типа 1 PMV-1, относящегося к семейству Paramyxoviridae. Патогенность этого покрытого оболочкой вируса варьирует от умеренной до высокой. Заражение обычно происходит в результате непосредственного физического контакта с инфицированными птицами.

Вирус может присутствовать и в помете, и в окружающем воздухе, и на подстилке. Источниками инфекции становятся также загрязненное оборудование, трупы птиц, вода, корм и персонал фермы. Между птичниками вирус переносят люди и транспортные средства. У человека он не вызывает выраженной клинической картины, проявляясь лишь конъюнктивитом в легкой форме.

У заболевшей птицы отмечают нарушения работы желудочно-кишечного тракта (непрекращающаяся диарея), респираторной и/или нервной системы (от искривления шеи и патологии моторной функции до пареза и паралича), а также снижение яйценоскости. Тяжелые формы болезни сопряжены с высокой летальностью. Степень тяжести зависит от штамма вируса, вида птицы и состояния здоровья всего стада.

Изоляты вируса болезни Ньюкасла сгруппированы по следующим четырем патотипам в зависимости от симптомов заболевания, проявляющихся у инфицированных восприимчивых цыплят:

• велогенные нейротропные штаммы, высоковирулентные. Заболевание протекает с респиратор-

ными и неврологическими симптомами. Смертность высокая;

• мезогенные штаммы со средней вирулентностью, вызывающие острые респираторные заболевания и неврологические нарушения у некоторых особей, что приводит к снижению яйценоскости на 50%. Процент смертности небольшой;

• лентогенные штаммы, имеющие низкую вирулентность и вызывающие легкие или слабо выраженные респираторные симптомы. Летальность низкая;

• бессимптомные авирулентные кишечные штаммы. Не вызывают клинических симптомов заболевания, реплицируются главным образом в кишечнике.

Такое распределение нельзя назвать однозначным и четким, поскольку патологические и клинические признаки могут проявляться при заражении различными штаммами, не будучи при этом специфичными для конкретного штамма. Разработанные в последние годы методы молекулярной биологии позволяют намного точнее определять антигенную структуру и патогенность возбудителей болезни Ньюкасла. Усовершенствованные методы секвенирования нуклеотидов и доступность данных о секвенировании большего количества вирусов НБ дают возможность получить значимые результаты при филогенетическом анализе.

Клинические и анатомо-патологические проявления

Болезнь Ньюкасла — очень заразное заболевание многих видов домашней птицы, экзотических и диких птиц. НБ в зависимости от тропизма вируса характеризуется заметными различиями в заболеваемости, летальности, симптомах и поражениях. Морфологические признаки носят ярко выраженный висцеротропный или нейротропный характер.

Инфекция передается в основном оральным путем, реже воздушным или контактным способом. Вертикально не передается. Вирус, содержащийся в инкубационном яйце, приводит к гибели эмбриона, а затем гибнет сам. Важным фактором распространения полевых вирусов могут быть дикие птицы, особенно перелетные.

Нейротропная форма заболевания клинически проявляется атаксией, опистотонусом, кривошеей, парезом и параличом ног, часто сопровождается респираторными симптомами и приводит к высокой летальности (70–100%). При этой форме болезни диагностируют увеличение цекальных желез и кровоизлияния (фото 1). Источником инфекции становятся содержащие вирус экскременты больной птицы. Они загрязняют корм, воду и окружающую среду.

При висцеротропной форме болезни Ньюкасла возникают геморрагические дифтерийные поражения пищеварительного тракта от клюва до клоаки. Патогномоничны и кровоизлияния в эпителий желудка. Слизистая оболочка отечна, покрыта густым налетом с пятнами (одно или несколько кровоизлияний) в основном в железистой части желудка и/или в пищеводе (фото 3).

Изменение цвета скорлупы от стандартного к значительно более светлому может быть первым признаком болезни Ньюкасла, вызванной лентогенным или мезогенным вирусом. Симптомы очень изменчивы: снижение уровня яйценоскости от почти незаметного до умеренного и легкие респираторные признаки. Летальность низкая. Болезнь Ньюкасла — преимущественно респираторное заболевание, встречающееся у птицы в любом возрасте. Сначала вирус поражает дыхательные пути (фото 4).

Гуморальный иммунитет не обеспечивает их защиту. Для адекватной защиты жизненно важен сильный местный иммунный ответ. Штаммы вируса болезни Ньюкасла локализуются в определенных органах-мишенях (тропизм), например в дыхательных путях (респираторные штаммы) и желудочно-кишечном тракте (кишечные висцеротропные штаммы). Производители вакцин против болезни Ньюкасла выбирают штаммы с высоким респираторным тропизмом (LaSota, VH, Clone 30, Hitchner B1) для формирования в дыхательных путях хорошего местного иммунитета, что служит мощной первой линией защиты от инфекции НБ. Кишечные штаммы, напротив, не локализуются в дыхательных путях и размножаются в кишечном тракте, вызывая там локальную реакцию.

Способов лечения болезни Ньюкасла не существует. В большинстве стран поголовье уничтожают (предусмотрен обязательный убой зараженных особей и контактировавшей с ними птицы, а также утилизация продукции птицеводства). Обо всех случаях заболевания поголовья на фермах необходимо сообщать во Всемирную организацию здравоохранения животных (OIE), что негативно сказывается на импорте и экспорте продукции птицеводства.

Вирус быстро погибает под воздействием дезинфицирующих средств, но сохраняет жизнеспособность в помете (около 2 месяцев) и в тушках мертвой птицы (до 12 месяцев). Эффективная профилактика заключается в принятии продуманных мер по обеспечению биологической безопасности и в иммунизации поголовья. Вакцинация коммерческих стад бройлеров и несушек от болезни Ньюкасла обязательна во многих странах мира.

Сегодня существуют различные способы предотвращения заноса инфекции на предприятия. В одних государствах, как было уже отмечено, предусмотрен обязательный убой инфицированной птицы, в других используют живые вакцины, изготовленные из лентогенных штаммов (иногда применяют и более вирулентные штаммы — Roakin, Mukteswar и Komarov). Кроме того, в некоторых странах сохраняется циркулирующий высоковирулентный вирус, который не вызывает явных симптомов заболевания, что обусловлено обязательной вакцинацией. В связи с тем, что при заражении НБ из-за снижения общего иммунного фона возникают секундарные инфекции, хозяйства применяют антибиотики для контроля заболеваемости.

Штаммы, используемые при изготовлении коммерческих вакцин на основе живых вирусов, делят на три группы: бессимптомные (VH, C2, VG/GA, V4), лентогенные (Hitchner B1, LaSota, F) и мезогенные (Roakin, Mukteswar и Komarov). Все эти штаммы были подвергнуты селекции и клонированию, чтобы обеспечить соответствие различным критериям при их производстве и применении.

Особенности вакцинации против НБ

Иммунитет к болезни Ньюкасла обеспечивается главным образом циркулирующими (гуморальный иммунитет) и секретируемыми антителами, создающими мукозный (локальный) иммунитет. Вирус болезни Ньюкасла, обладающий низкой вирулентностью, вызывает аналогичные высоковирулентному вирусу иммунные реакции, но к тяжелому заболеванию не приводит. Цыплята, которые выживают при заражении вирулентным штаммом вируса НБ, приобретают устойчивый иммунитет к инфекции. В целом иммунизация основывается на применении следующих вакцин:

• живых, изготовленных из живого вируса (используют штаммы с вирулентностью от низкой до средней, которые имитируют естественную инфекцию и вызывают оба вида иммунного ответа), способного инфицировать клетки;

• инактивированных, при производстве которых вирус убивают с помощью химических веществ, гамма-излучения или высокой температуры (такие вакцины вызывают только гуморальный ответ);

• векторных, представляющих собой конечный продукт генетических модификаций между соответствующими антигенами двух разных микроорганизмов — векторов и доноров. В этом случае индуцируется иммунитет к антигенам как векторов, так и доноров (этот тип вакцин способствует формированию только гуморального иммунитета против болезни Ньюкасла).

Независимо от прочих мер цель профилактики — либо предотвратить заражение восприимчивой птицы, либо уменьшить ее количество. Защиту от болезни Ньюкасла обеспечивают, используя живые, векторные и инактивированные вакцинные штаммы. Вакцинация предотвращает инфицирование птицы путем выработки в ее организме антител на локальном, системном уровне или на обоих уровнях одновременно. При иммунизации клеток слизистой оболочки верхних дыхательных путей аттенуированным живым вирусом формируется как системный, так и местный иммунитет. Введение птице родительских стад инактивированной вакцины обычно приводит к выработке системного иммунитета с незначительной локальной защитой.

Принято считать, что мукозный противовирусный иммунитет зависит от локально продуцируемых антител, которые через эпителий попадают на поверхность слизистой оболочки. Иммуноглобулин А (IgA) в основном продуцируется локально и транспортируется при помощи секреторного компонента через эпителиальные клетки, ограничивая активность (репликацию) вируса.

Штаммы B1, LaSota и VH индуцируют выработку NDV-специфичного IgA в верхних дыхательных путях. При этом штамм VH также индуцирует выработку IgA в желудочно-кишечном тракте.

Продолжение в следующем номере

Keshelava V.V.
Federal State Enterprise “Russian Scientific Center of Roentgenoradiology of Russian Health and Social Development Ministry”.

Abstract
The progress in oncological diseases treatment is due to significant achievements of molecular biology, immunology and development of immunotherapy methodology. One of the most perspective methods is known to be antitumor vaccination with vaccines containing intact tumor cells (autologic and allogenic), autologic hit shock proteins, Newcastle disease virus (NDV).
Antitumor vaccines generation methods and their role in cancer prophylaxis and treatment has been worked out and recognized. Wide experience of these vaccines usage has been collected by clinical oncologists and their effectiveness has been recognized by many clinics over the world.
Autologic vaccine consists of tumor cells exposed during the tumor extraction.
The interclinical prospective nonrandomized research of vaccines’ effectiveness and toxicity held in 2004–2006 included 46 patients with skin melanoma (9 patients), breast cancer (21 patient), large intestine cancer (7 patients), cervix cancer (5 patients), ovarian cancer (1 patient), uveal melanoma (2 patients), vagina cancer (1 patient). Medium age of the patients was 54,2.The majority of patients suffered disseminated tumor process with multiple metastasis affecting several organs and resistant to radial and chemotherapy. Almost all patients were treated on an outpatient basis. So they were leading their common life during the treatment. There were no complications noticed. At the end of the first course of treatment pain and metastasis were reduced, the patients rejected narcotics and anaesthetics, became active, their appetites and weight improved. Due to low toxicity it became possible to continue treatment up to one year and even longer to get stable results.

За последние годы в онкологии сделано много, но решающего прорыва не произошло. Все чаще в отечественной и зарубежной литературе появляются сообщения несколько сенсационного плана, свидетельствующие о переломном моменте в лечении больных раком. Прогресс в лечении онкологических заболеваний связан с существенным прорывом в молекулярной биологии, иммунологии, развитии методов иммунотерапии, из которых наиболее перспективным представляется создание противоопухолевых вакцин: на основе цельных опухолевых клеток (аутологичных и аллогенных); ДНК или РНК – вакцины; рекомбинантные вирусные или бактериальные вакцины; вакцины на основе аутологичных белков теплового шока и др. (1,2,7.8).

Клиническая онкология имеет большой опыт использования противоопухолевых вакцин эффективность применения которых доказана во многих клиниках мира. При этом разработаны и общепризнанны методы получения противоопухолевых вакцин и определено их место в профилактике и лечении рака (2.3.5.7.8.).

Клетки собственных опухолей, полученные при операции или биопсии, широко используются в мировой онкологической практике для получения иммунотерапевтических препаратов для того же самого пациента. Основной задачей при такой терапии является повышение иммуногенности собственных опухолевых клеток с помощью химической обработки - гаптенизации, генетической модификации - трансфекцией генов кодирующих стимулирующие иммунитет молекулы и вирусной модификации. Последний подход является наиболее технологичным при использовании вируса селективно заражающего опухолевые клетки. Таковым является вирус болезни Ньюкасла (ВБН) - псевдочумы птиц, точнее его вакцинные штаммы – генетически стабильные, апатогенные для млекопитающих, живые вирусные препараты, повсеместно используемые для профилактики заболевания у кур. Преимущественное размножение этого вируса в опухолевых клетках млекопитающих было продемонстрировано более 40 лет назад. С этого времени большим количеством экспериментов на опухолях животных доказана безвредность ВБН для млекопитающих и его достаточно высокая терапевтическая эффективность, особенно в случае сочетания онколитического действия с иммунизирующим воздействием зараженных вирусом опухолевых клеток

Существует множество различных штаммов ВБН, все они классифицированы как литические (лизирующие клетки: МТН-68,73-Т, Roakin, PV701) и нелитические (Ульстер) для человеческих клеток и изучались как противораковые агенты(4-8).

Исследователи при этом предполагают три клеточных механизма взаимодействия. Первый механизм – литические штаммы вируса напрямую уничтожают опухоли. Второй – с помощью нелитических штаммов белки вируса проникают в мембрану опухолевых клеток, вызывая иммунную реакцию. И, наконец, сам вирус может стимулировать организм носителя вырабатывать цитокины: интерфероны и фактор некроза опухоли (TNF), что ведет в свою очередь к активации естественных клеток-убийц, макрофагов и сенсибилизированных Т-клеток.

Вместе с тем есть много вопросов в клеточном механизме взаимодействия вируса с организмом. Не совсем ясно, какой из штаммов более эффективен, а также что эффективнее - собственные опухолевые клетки пациента или опухолевые клеточные линии.

Экспериментальные исследования на животных показали, что ВБН и зараженные ВБН раковые клетки могут стимулировать большое разнообразие иммунных ответов, что способствует успешной терапии рака. Доказано - ВБН безопасен, лечение считается безвредным. Эффективность метода в той или иной мере подтверждена клиническими наблюдениями на пациентах с различными злокачественными новообразованиями (II – III фазы испытаний) проведенными в США, Европе и Китае. Представлены результаты исследований использования онколизатов (штамм ВБН 73-Т для лечения метастатической меланомы, а так же рака почки, молочной железы и яичников), цельноклеточных вакцин (штамм ВБН Ульстер для лечения колоректального рака, рака яичников почки, шейки матки) и заражение пациентов литическим штаммом ВБН МТН-68 для лечения рака толстой кишки, желудка, поджелудочной железы, легких и др. (6.7.8)

Во всех случаях отмечен положительный эффект применения, как чисто вирусной терапии, так и аутологичной вакцинации вирус модифицированными опухолевыми клетками. Некоторые противоопухолевые вакцины в настоящее время завершают III фазу клинических испытаний и по мнению большинства исследователей уже в недалеком будущем активная иммунотерапия станет стандартным методом и частью комплексного лечения рака (4-8).

Нами проанализированы результаты и возможности вакцинотерапии большинства клиник, обобщен опыт работы общепризнанных специалистов и с 2003 года начаты экспериментальные и клинические исследования по данной проблеме в рамках допустимых и принятых медицинских программ с учетом мирового опыта в процессе клинических испытаний, в том числе и России.

Была поставлена задача оптимизации и совершенствования имеющихся технологий получения аутологичных и модифицированных ВБН вакцин, а также онколитического ВБН для использования у пациентов с различными злокачественными заболеваниями.

Применяемый нами вирус Болезни Ньюкасла, живая вакцина для птицеводства, апатогеный штамм Ла-Сота выращивается в свободных от патогенной микрофлоры куриных эмбрионах. Для внесения в человеческие опухолевые клетки и для инъекций пациентам вирус очищали ультрацентрифугированием и проверяли на стерильность и безвредность. Оценка токсичности препарата (вакцины) проводилась в соответствии с критериями, рекомендованными ВОЗ. Препарат при необходимости может быть лиофилизован, сохраняя при этом свои свойства в течение одного года.

Для приготовления аутологичной вакцины используют опухолевые клетки, выделенные непосредственно в ходе удаления опухоли. Технология приготовления вакцины общеизвестна и предполагает дезагрегацию образцов опухоли, культивирование клеток, облучение клеток с целью блокады их пролиферативной активности и различные приемы модификации с целью повышения ее эффективности. Этап создания культуры опухолевых клеток представляет собой сложный и неоднозначный процесс. По мнению абсолютного большинства исследователей, существуют значительные трудности и особенности в создании условий, благоприятных для индивидуальных первичных культур опухолевых клеток. Выживание клеток и их пролиферация возможны только лишь при воссоздании всех внешних условий, которые клетки имели in vivo. Разработанные и применяемые нами оригинальные технологии выделения и культивирования клеток позволяют получить пролиферирующие первичные культуры более чем 70% случаев для таких опухолей как меланома кожи, рак почки, толстой кишки, яичников и молочной железы, а клеточные линии – не менее чем в 50% случаев.

Не менее специфичным в процессе приготовления клеточных вакцин является необходимость инактивировать их способность к размножению с одновременным сохранением их метаболической активности и повышения иммуногенности собственных опухолевых клеток с помощью вирусной модификации. На данном этапе клетки инактивировали гамма-излучением (дозы облучения подбирали индивидуально), замораживали в жидком азоте и использовали для вакцинации в дозах 10 – 50 млн. после обработки 10 - 100 ID₅₀ вируса (ВБН) на клетку.

Более специфическую аутовакцину получали из размножающихся in vitro клетках – перевиваемых опухолевых линиях. Такие линии могут быть получены из операционного или биопсийного материала и могут размножаться бесконечно долго, обеспечивая необходимое для вакцинации количество гомогенных опухолевых клеток. Эти линии также замораживали, инактивировали гамма-излучением и обрабатывали вирусом перед введением пациентам.

Известно, принцип действия противоопухолевых вакцин основан на усилении противоопухолевой защиты, заложенной в природе иммунитета здорового человека. Недостаточность противоопухолевого иммунитета обусловлена растущей опухолью и/или прогрессированием с возникновением множества метастазов и иммунодепрессивным эффектом противоопухолевой химиотерапии и облучения.

Усиление эффективности противоопухолевых вакцин путем повышения иммуногенности опухолевых антигенов нами достигалась модификацией вакцины непатогенным вирусом (ВБН) и использованием человеческого рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ). Основное биологическое действие Г-КСФ – гемопоэтическое, главным образом нейтрофилопоэтическое. Его введение в организм приводит к увеличению содержания в крови функционально активных нейтрофилов. Кроме этого препарат повышает биохимическую (синтез протеаз), фагоцитарную, хемотаксическую активности, усиливает в организме синтез других цитокинов (интерферонов, трансформирующего фактора роста β и др.). Тем самым активизируются различные неспецифические и специфические механизмы защиты организма.

Предварительная клиническая и иммунологическая оценка эффективности вакцинотерапии в сочетании с Г-КСФ, а так же наличие клеточных линий полученных на этапах создании позволили пересмотреть принципы и подходы химиотерапии в данном комплексе лечения. Правильный подбор препаратов избирательно действующих на опухолевые клетки, выбор оптимальной дозы, режима и способа применения позволяли проводить курсы химиотерапии длительно без каких-либо осложнений в течение всего курса вакцинотерапии.

Предполагая данную комплексную методику лечения рака, мы учитывали те слабые сторон аутовакцин, где результат зависит от индивидуальных особенностей противоопухолевого иммунитета, а опухоль характеризуется не только множественностью антигенов, но и повышенной мутационной активностью с дальнейшим усилением признаков злокачественности.

Проведенные медико-биологические исследования показали высокую эффективность предлагаемой модели патогенетической терапии и позволили с учетом в рамках допустимых и принятых медицинских программ провести клинические испытания на определенной группе больных с различными злокачественными новообразованиями.

Цель данного исследования: оценить объективный непосредственный эффект и его продолжительность, время до прогрессирования, выживаемость, качество жизни больных с различными злокачественными заболеваниями при использовании как аутологичных, облученных вакцин модифицированных ВБН (группа А), так и получивших онколитический вирус ВБН в чистом виде (группа В) в плане комплексного лечения.

Для отбора больных были использованы общепринятые в клинической практике критерии.
Критерии включения:

Гистологически верифицированный диагноз опухолевого очага
Возраст старше 18 лет
Общее удовлетворительное состояние (индекс Карновского не менее 70%)
Отсутствие противоопухолевого эффекта лечения на фоне ранее проводимого лечения или наличие признаков прогрессирования после их проведения.
Возможность визуальной или инструментальной оценки динамики изменений
Согласие больного на участие в данном исследовании.

Критерии исключения:

Поражение центральной нервной системы
Активный аутоиммунный процесс
Возраст старше 70 лет
Больные с одной из перечисленных инфекций: HIV, HBV, HCV.
Наличие инфекционных или тяжелых заболеваний сердечно-сосудистой, нервной, дыхательной или эндокринной систем; беременность или лактация
Нарушение функции печени и/или почек (билирубин >1,5хN, креатинин >1,5хN), показатели крови: лейкоциты 9 /Л, Hb

Список использованной литературы
1. Гриневич Ю.А. Фильчаков Ф.В. Адаптивная иммунотерапия и ее влияние на эффективность лечения онкологического профиля. Онкология 2003 т.5 №2 с. 90-95.
2. Хансон К.П., Моисеенко В.М. Биотерапия злокачественных новообразований. Проблемы клинической медицины №3 2005г.с.10-15.
3. Steiner, H. H., Bonsanto, M. M., Beckhove, P., Brysch, M., Geletneky, K., Ahmadi, R., Schuele-Freyer, R., Kremer, P., Ranaie, G., Matejic, D., Bauer, H., Kiessling, M., Kunze, S., Schirrmacher, V., Herold-Mende, C. (2004). Antitumor Vaccination of Patients With Glioblastoma Multiforme: A Pilot Study to Assess Feasibility, Safety, and Clinical Benefit. J Clin Oncol 22: 4272-4281
4. Washburn, B., Weigand, M. A., Grosse-Wilde, A., Janke, M., Stahl, H., Rieser, E., Sprick, M. R., Schirrmacher, V., Walczak, H. (2003). TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Mediates Tumoricidal Activity of Human Monocytes Stimulated by Newcastle Disease Virus. J Immunol 170: 1814-1821
5. Pecora, A. L., Rizvi, N., Cohen, G. I., Meropol, N. J., Sterman, D., Marshall, J. L., Goldberg, S., Gross, P., O'Neil, J. D., Groene, W. S., Roberts, M. S., Rabin, H., Bamat, M. K., Lorence, R. M. (2002). Phase I Trial of Intravenous Administration of PV701, an Oncolytic Virus, in Patients With Advanced Solid Cancers. J Clin Oncol 20: 2251-2266
6. Nakaya, T., Cros, J., Park, M.-S., Nakaya, Y., Zheng, H., Sagrera, A., Villar, E., Garcia-Sastre, A., Palese, P. (2001). Recombinant Newcastle Disease Virus as a Vaccine Vector. J. Virol. 75: 11868-11873
7. Csatary, L. K., Csatary, E., Moss, R. W. (2000). Re: Scientific Interest in Newcastle Disease Virus Is Reviving. J Natl Cancer Inst 92: 493-493
8. Nelson, N. J. (2000). RESPONSE: Re: Scientific Interest in Newcastle Disease Virus Is Reviving. J Natl Cancer Inst 92: 493a-494 .
СОСТАВ И ФОРМА ВЫПУСКА
Изготовлена из вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости СПФ-куриных эмбрионов, инфицированных вирусом болезни Ньюкасла с добавлением в качестве стабилизатора обезжиренного молока. В одной иммунизирующей (назальной) дозе содержится не менее 10 6,7 ЭИД ₅₀ вакцинного вируса. Препарат по внешнему виду представляет собой сухую пористую белую массу с однородной и мелкозернистой структурой, хорошо растворимую в воде без образования хлопьев и осадка. Выпускается в стеклянных ампулах и флаконах, содержащих от 50 до 6000 назальных доз, которые упаковывают в пластиковые коробки.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
У птиц, привитых вакциной, формируется иммунитет к возбудителю болезни Ньюкасла через 6-8 суток после иммунизации, напряженность которого должна составлять не менее 3 месяцев. Вакцина лечебными свойствами не обладает.

ПОКАЗАНИЯ
Для профилактики болезни Ньюкасла птиц в благополучных и неблагополучных хозяйствах различного направления выращивания.

ДОЗЫ И СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Вакцину применяют птице интраназально (окулярно), перорально, методом мелкодисперсного (аэрозольно) и крупнокапельного распыления (спрей-методом). Вакцинации полежит клинически здоровая птица, независимо от ее возраста, породы, продуктивности (яйценоскости) и периода линьки. За 3-4 дня до вакцинации и в течение 5 дней после нее исключают дачу птице антибиотиков, сульфаниламидных и нитрофурановых препаратов. Оптимальные сроки вакцинации определяют по результатам РТГА или ИФА, исследуя не менее 25 проб сывороток крови от птиц, находящихся в птичнике (зале). Первое серологическое исследование проводят у цыплят в 7-10-суточном возрасте. Птицу вакцинируют, если в 20% и более проб сыворотки крови титр антигемагглютинов в РТГА будет ниже 1:8 или в ИФА — меньше двух минимальных положительных значений, установленных инструкцией по применению используемого диагностического набора. Если в 80% и более проб сывороток крови титр материнских антител к вирусу болезни Ньюкасла в РТГА 1:8 и выше, а в ИФА — больше двух минимальных значений, то птицу исследуют повторно через каждые 3-5 дней и при напряженности иммунитета менее 80% птицу прививают. Ревакцинацию цыплятпроводят, если более чем в 20 % проб сыворотки крови титр антител в РТГА меньше 3 log ₂ (1:8) или в ИФА — меньше двух минимальных положительных значений, предусмотренных инструкцией по применению используемого диагностического набора. При использовании интраназального или интраокулярного метода введения вакцину разводят из расчета на 1 иммунизирующую дозу препарата 0,1 мл стерильного 0,9% физиологического раствора (рН 7,2-7,4). Разведенную вакцину закапывают глазной пипеткой в ноздрю в объеме 0,1 мл (по 2 капли), другую при этом закрывают пальцем, чем достигается более глубокое проникновение вакцины в носовую полость. В случае закупорки носовой щели вакцину в том же объеме можно нанести на конъюнктиву глаза. После интраокулярного введения голову птицы держат в горизонтальном положении в течение 1-2 секунд. При использовании энтерального метода (выпаивание с водой) необходимо использовать свежую, чистую, свободную от ионов железа и хлора, охлажденную до комнатной температуры питьевую воду. За сутки до применения вакцины определяют объем воды, выпиваемой птицей в течение 1-1,5 ч. и рассчитывают ее объем на все прививаемое поголовье. Птиц вакцинируют из расчета 10 иммунизирующих (назальных) доз на голову. Требуемое количество доз вакцины, соответствующее числу цыплят прививаемой партии, разводят в установленном объеме воды и разливают в заранее вымытые без применения дезсредств поилки. Количество поилок должно обеспечивать свободный доступ к препарату всего иммунизируемого поголовья. При иммунизации птиц мясного направления объем воды для растворения вакцины необходимо увеличить на 50%. Для предотвращения потери активности вакцинного штамма, в воду, предназначенную для разведения вакцины, добавляют один из следующих стабилизаторов: 5% (по весу) сухого обезжиренного молока, 25% (по объёму) пастеризованного молока (обрата), 2,5% (по весу) пептона ГОСТ 13805-70, 2,5% ферментативного гидролизата мышечного сухого (ФГМ-С) – ТУ 46-12-20-80. Перед вакцинацией птицу выдерживают без воды и корма в течение 2-4 ч. Дача корма и воды птице разрешается через 1,5-2 ч. после вакцинации. При применении аэрозольного метода используются специальные генераторы, создающие мелкодисперсный аэрозоль. При аэрозольном методе иммунизации рабочее разведение препарата определяют по формуле: P.р. = (C х V х T х A)/D, где Р.р. — рабочее разведение вакцины; С — концентрация аэрозоля вируса (в мг/л) в помещении, величина, которой составляет: 0,1 — в недостаточно герметизированных птичниках (щели в окнах и дверях, небольшая тяга через приточную вентиляцию) и 0,2 — в удовлетворительно герметизированных помещениях (щели в окнах, недостаточно подогнанные окна, двери, люки вентиляционных шахт), 0,3 — в хорошо герметизированных условиях (тщательно подогнанные окна, двери, люки вентиляционных шахт, отсутствие щелей). В плохо герметизированных птичниках аэрозольную вакцинацию не проводят. V — легочной объем, л/мин. Его рассчитывают по формуле: V = 0,78 х m – 16/1000, где 0,78 см 3 /мин. на 1 г — объем дыхания, приходящийся на 1 г массы птицы; m — средняя масса птицы (среднюю массу определяют взвешиванием 30 птиц, взятых из отдельных мест птичников), г; 16 — постоянный коэффициент; 1000 — перевод см 3 в литры. Далее по 1 первой формуле: Т — время воздействия аэрозоля на птиц, которое не должно превышать 20 минут. Экспозиция иммунизации отсчитывается через 2-3 мин. с начала работы аэрозольных генераторов. В жаркие дни иммунизацию птиц проводят в ранние утренние часы при температуре воздуха в птичнике не более 20-22 ºС, а экспозицию сокращают до 10 мин., уменьшая при этом степень разведение вакцины в 2 раза; А — инфекционная активность вакцинного вируса (lg ЭИД ₅₀ /см 3 ), которая должна быть определена предварительно перед проведением иммунизации и пересчитана в lg ЭИД ₅₀ /мг; D — иммунизирующая доза штамма Ла-Сота составляет для цыплят в возрасте до 30 суток — 600 ЭИД ₅₀ , для птиц старше месячного возраста: 1000-1200 ЭИД ₅₀ . Пример: инфекционная активность вируса 9,0 lg ЭИД ₅₀ /см 3 или 6,0 lg ЭИД ₅₀ /мг (1.000.000 ЭИД ₅₀ /мг). Концентрация аэрозоля в птичнике 0,1 мг/л. Экспозиция: 20 мин. Легочный объем — 0,2 л/мин. Доза вируса для цыплят старше 30-суточного возраста: 1000 ЭИД ₅₀ . Р. р. = 0,1 х 0,2 х 20 х 1000000/1000 = 400, т. е. 1 см 3 вакцинного вируса необходимо развести 1:400. Общий объем лиофилизированного вируса, который необходимо взять для приготовления рабочего разведения в конкретном птичнике определяют, исходя из его объема (см 3 ) и рабочего разведения вируса. Пример: объем птичника 5000 м 3 , рабочее разведение вируса 1:400. Расход рабочего разведения вируса составляет 1 см 3 на 1 м 3 птичника. Таким образом, для данного птичника потребуется 5250 см 3 рабочего разведения вируса (5000 + 5% на остаток в генераторе аэрозолей). Количество лиофилизированного вируса составит 13,1 см 3 (5250:400). Для приготовления рабочего разведения, берут вакцину не менее чем из трех ампул или флаконов, взятых из разных коробок (даже, если по расчету требуется один флакон или ампула), но используют то количество вируса, которое требуется для распыления в птичнике данного объема. Вакцину растворяют в чистой дистиллированной или кипяченой, охлажденной до комнатной температуры воде с 5% (по весу) пастеризованного сухого обезжиренного молока или 10% (по объему) химически чистого глицерина. Аэрозольную вакцинацию проводят с помощью генераторов аэрозолей, которые заправляют приготовленным разведением вируса посредством мерного цилиндра. Размещение генераторов и режим работы определяют в соответствии с руководством (наставлением) по их эксплуатации. До подключения генератора аэрозолей к источнику сжатого воздуха поднимают брудера, закрывают окна, двери и вентиляционные люки, продувают шланги, выключают приточно-вытяжную вентиляцию. Время с момента выключения приточной и вытяжной вентиляции до начала работы генераторов не должно превышать 5 мин. По истечении времени вакцинации генераторы аэрозолей выключают, птичники проветривают (открывают люки вентиляционных систем, а в теплое время года — еще окна, двери и включают приточно-вытяжную вентиляцию). Входить в птичник можно не ранее, чем через 10 мин. от начала проветривания. Метод крупнодисперсного распыления вакцины (спрей-метод) рекомендуется при угрозе раннего инфицирования поголовья вирусом болезни Ньюкасла. Цыплят иммунизируют, начиная с суточного возраста, независимо от уровня материнских антител. Вакцину растворяют в чистой прохладной воде, свободной от ионов железа и хлора из расчета 1000 доз препарата на 0,25-0,5 л воды. Вакцинацию проводят при помощи специальных распылителей, генерирующих монодисперсные частицы диаметром 0,2-0,3 мм. Для исключения погрешностей в иммунизации рекомендуется предварительно определить производительность используемого распылителя путем разбрызгивания расчетного количества чистой воды без вакцины. В птичнике уменьшают яркость освещения, что успокаивает птицу и способствует ее скучиванию, отключают систему вентиляции. Цыплят суточного возраста помещают в спрей-кабины или ящики, которые плотно устанавливают в один ряд. Вакцину разбрызгивают над соответствующим количеством цыплят с расстояния 30-40 см. Показателем правильно проведенной иммунизации является равномерное увлажнение перьевого покрова у цыплят. Включают систему вентиляции и восстанавливают уровень освещения через 30 мин. после окончания иммунизации. Следует избегать нарушений схем проведения вакцинации, поскольку это может привести к снижению эффективности иммунопрофилактики против болезни Ньюкасла. В случае пропуска очередного введения вакцины необходимо провести иммунизацию как можно скорее.

ПОБОЧНЫЕ ДЕЙСТВИЯ
В случаях передозировки вакцины, применяемой аэрозольным методом, на 4-5 день у молодняка могут наблюдаться недомогание, одышка, снижение аппетита, может увеличиваться падеж. Эти явления исчезают к 10-12 дню после вакцинации. У взрослых птиц поствакцинальная реакция, как правило, не проявляется.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ
Не допускается вакцинация больной, подозрительной в заболевании и истощенной птицы. Не следует проводить вакцинацию совместно с другими живыми иммунобиологическими препаратами (кроме спрей-вакцинации совместно с вакциной против инфекционного бронхита кур), а также иммунизацию цыплят другими вакцинами в течение 7 суток после очередной прививки.

ОСОБЫЕ УКАЗАНИЯ
Продукция, полученная от вакцинированных птиц, реализуется без каких-либо ограничений. Белковые компоненты вакцины особенно при аэрозольном применении обладают индивидуальным аллергизирующим действием, поэтому лица, участвующие в проведении вакцинации, должны использовать спецодежду (резиновые сапоги, халат, брюки, головной убор и резиновые перчатки), а также очки закрытого типа. К участию в проведении вакцинации не допускаются лица с признаками респираторных, желудочно-кишечных, кожных и аллергических заболеваний. Во время вакцинации запрещается принимать пищу, пить и курить. После работы следует принять душ, тщательно вымыть руки с мылом и переодеться. При попадании вакцины на кожу и слизистые оболочки, их рекомендуется промыть большим количеством водопроводной воды. В случае разлива вакцины, участок пола или почвы в этом месте заливают 5% раствором хлорамина или едкого натрия.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
В сухом, темном, недоступном для детей и животных месте, в упаковке производителя. Отдельно от пищевых продуктов и кормов при температуре от 4 до 8 ºС. Срок годности — 12 месяцев. Флаконы или ампулы с вакциной без этикеток, с истекшим сроком годности, с нарушением целостности, с измененным цветом и консистенцией содержимого, с наличием посторонних примесей, а также остатки вакцины, не использованные в течение 4 часов после вскрытия, подлежат выбраковке и кипячению в течение 30 минут или обработке 2% раствором щелочи, или 5% раствором хлорамина (1:1) в течение 30 минут с последующей утилизацией.

Читайте также: