Ветеринарная экспертиза при бешенстве

Острая вирусная болезнь животных и человека, характеризующаяся передачей вируса при укусе со слюной и признаками тяжелого поражения ЦНС. (Л. Пастер, 18811889 г.; В. Бабеш, 1887 г.; А. Негри, 1903 г.)

Возбудитель: РНК-содержащий вирус сем. Rhabdoviridae род Lyssavirus. Вирус устойчив по отношению к низким температурам. В слюне сохраняется до 24 ч, в гниющем трупе — 2—3 нед. Мгновенно разрушается под действием кипячения и 70°С. Под действием солнечных лучей инактивируется через 5—7 дней. При высушивании погибает через 10—14 дней. К действию дезинфицирующих средств вирус неустойчив: 1— 5%ные растворы формалина убивают его за 5 мин, 5%ный раствор фенола — за 5—10 мин, 10%ный раствор иода — за 5 мин. Быстро инактивируется при рН меньше 3 и больше 11.
Эпизоотология. Течение и симптомы. Восприимчивы: все виды с/х, промысловых животных, плотоядные, в т. ч. дикие хищники.

Инкубационный период: от нескольких суток до 12 мес.
Носительство возбудителя у диких плотоядных.

Симптомы: у собак — неуравновешенность поведения, нарушение акта глотания, слюнотечение, агрессивность. У крупного рогатого скота — чаще параличи, реже агрессивность, слюнотечение, нарушение акта глотания. Близкая картина у овец и верблюдов. У лошадей и свиней — чаще буйная форма.
У человека инк. п. от 10 дней до 1 года. Болезнь начинается с предвестников: возникает отечность кожи, повышается температура тела до 38°С, появляется страх, тревога, головная боль. Этот период продолжается 1—3 дня.
Период выраженного возбуждения: слюнотечение, галлюцинации, бред, бессвязная речь, беспокойство.

Лечение: не проводится.
Исход: летальный.

Патолого-анатомические изменения. У крупного рогатого скота отмечают переполнение преджелудков кормовыми массами вследствие их атонии, обезвоживание организма, истощение, мелкие кровоизлияния в слизистой сычуга и под брюшиной. Печень и почки наполнены кровью. Брыжеечные лимфоузлы набухшие. В головном мозге гиперемия, отек мозгового вещества и мягкой мозговой оболочки.

Диагностика

В лаборатории проводят микроскопию ткани головного мозга с целью обнаружения телец Бабеша-Негри, иммунолюминесцентная микроскопия, РП. в агаровом геле, идентификация вируса реакцией нейтрализации; проводят биопробу. В лабораторию направляют свежий труп (мелкого животного) или голову, головной мозг.
Дифференциальная диагностика. Необходимо дифференцировать от болезни Ауески, листериоза, злокачественной катаральной горячки, инфекционного энцефалита.
Для болезни Ауески: сильнейший зуд, особенно в области головы и более острое течение, однако параличей не бывает, агрессивность не проявляется.
При нервной форме листериоза нет агрессивности и параличей нижней челюсти.
В случае злокачественной катаральной горячки признаки возбуждения выражены довольно редко.
При инфекционном энцефалите отмечают сильную желтушность слизистых оболочек, отсутствие агрессивности.

Профилактика и лечение. Лечение не эффективно. Для профилактики используют:

1)жидкую антирабическую вакцину Алма-Атинского ЗВИ;

2)сухую антирабическую вакцину Алма-Атинского ЗВИ с разбавителем;

3)сухую инактивированную этанолвакцину ВГНКИ против бешенства;

Ветеринарно-санитарная экспертиза. При установлении у животных бешенства убой на мясо запрещен. Если бешенство установлено во время убоя и разделки туш, то все продукты убоя подлежат уничтожению сжиганием.

Убойных животных, покусанных бешенными животными, но не имеющих клинических признаков заболевания, разрешается убивать непосредственно в хозяйстве. Места укуса зачищают и уничтожают, а ВСЭ продуктов убоя проводят на общих основаниях.

Животных, привитых против бешенства антирабической вакциной, разрешается убивать на мясо спустя 3 месяца после вакцинации. Дезинфекцию помещения, где находились больные животные, а также оборудования проводят горячим 10% раствором едкого натра или 4% раствором формальдегида. Деревянные предметы ухода и остатки корма сжигают. Загрязненную выделениями больных животных почву перекапывают на глубину 30 см с сухой известью и заливают дезинфицирующим раствором. Работники лаборатории, проводя исследования, должны соблюдать установленные меры предосторожности.

Существующими правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов запрещается убой на мясо животных больных и подозрительных по заболеванию сибирской язвой, эмфизематозным карбункулом, чумой крупного рогатого скота, чумой верблюдов, бешенством, столбняком, злокачественным отеком, брадзотом, энтеротоксемией и скрейпи овец, губкообразной энцефалопатией, катаральной лихо- дадкой крупного рогатого скота и овец (синий язык) африканской чумой свиней, мелиоидозом (ложный сап), миксоматозом и геморрагической болезнью кроликов, гриппом, орнитозом и ньюкаслской болезнью птиц, чумой мелких животных, лихорадкой долины Рифт, гидроперикардитом, артритом, контагиозным метритом и случной болезнью лошадей.

При некоторых инфекционных болезнях животных убой разрешен, но продукты убоя, согласно существующим ветеринарным правилам, разрешено выпускать с предприятия только после обеззараживания (проварка).

Наиболее распространенным и эффективным методом обеззараживания считается температурная обработка. Мясо проваривают в кусках толщиной до 8 см и массой не более 2,5 кг в закрытых котлах с давлением пара 19,6 -10 4 Па (2 атм) в течение 2,5 ч и в открытых котлах в течение 3 ч, температура в толще куска должна быть не ниже 80 °С. Такое мясо оставляют для переработки внутри мясоперерабатывающего предприятия, и оно идет только на производство отдельных видов вареных колбас. В сыром виде такое мясо и субпродукты выпускать в реализацию категорически запрещается. В ряде случаев мясо животных вынужденного убоя разрешается использовать для изготовления консервов.

БОЛЕЗНИ, КОТОРЫЕ МОГУТ ПЕРЕДАВАТЬСЯ ОТ ЖИВОТНЫХ ЧЕЛОВЕКУ С ПРОДУКТАМИ ЖИВОТНОВОДСТВА

Остро протекающая болезнь всех теплокровных животных и человека, которая вызывается нейротропным вирусом и характеризуется поражением центральной нервной системы.

В естественных условиях заражение происходит через укусы бешеными животными. Вероятность заболевания и особенности его течения зависят от числа укусов, их локализации, вирулентности вируса.

Возбудитель. Болезнь вызывает фильтрующийся нейротропный РНК-содержащий вирус. Возбудитель локализуется в головном мозге, цереброспинальной жидкости, слюнных железах и выделяется со слюной. Хорошо переносит низкую температуру, малоустойчив к высокой температуре, при 70 °С погибает мгновенно.

Предубойная диагностика. В течение болезни различают три стадии: продромальную, возбуждения, параличей. В продромальной стадии повышается чувствительность животных и шуму, свету, извращается аппетит, повышается температура тела. В стадии возбуждения у животного начинаются приступы буйства, ярости, судороги, появляется водобоязнь (животное не может принимать воду вследствие пареза жевательных мышц и глотки), учащается мочеиспускание. В последней стадии развиваются параличи, температура тела резко понижается и животное погибает.

При лабораторном исследовании находят тельца Бабеша-Негри в 68. 86 % случаев бешенства, но если у подозрительных в заболевании животных этих телец нет, необходимо провести реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), реакцию иммунодиффузии (РИД), поставить биопробу.

Послеубойная диагностика. Специфических признаков нет, но у крупного рогатого скота находят переполнение преджелудков кормовыми массами, истощение. Кроме того, выявляют отек головного мозга и мягкой мозговой оболочки, гиперемию почек.

При микроскопическом исследовании подтверждают отек головного мозга, обнаруживают тельца Бабеша-Негри в цитоплазме ганглиозных клеток гиппокампа (аммонов рог). В ряде случаев бешенство требуется дифференцировать от болезни Ауески и листе- риоза.

Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка качества мяса и продуктов убоя. Убой животных при признаках бешенства запрещен. С особями, покусанными бешеными животными, поступают в соответствии с действующими правилами ветеринарно-санитарной экспертизы. Животных, привитых в неблагополучных местностях против бешенства антирабической вакциной, можно направлять на убой на мясо через 14 сут после вакцинации.

Выгуливая питомца, можно заразиться различными заболеваниями. Одно из таких – бешенство. При появлении малейших симптомов болезни, необходимо сдать анализ на бешенство у собак.

Как собака может заразиться

Бешенством называется заболевание, имеющее инфекционную этиологию и протекающее остро. Вызывается вирусом, поражающим центральную нервную систему, внутри организма происходят серьезные нарушения.

Возбудитель болезни – рабдовирус (РНК-содержащий вирус), поражающий всех животных. Он бывает искусственным и естественным

Инфекция способна передаваться от животного к человеку.

Заразиться можно от инфицированных хищников путем непосредственного контакта (после укуса, при попадании в открытую рану слюны). Слюна содержит в себе вирус. В организме он проходит по нервным путям в головной и спинной мозг, размножается в слюнных железах.

В слюне оказывается за неделю до возникновения первоначальных симптомов. В этот период животное является носителем рабдовируса и может заразить человека и других домашних питомцев.

Симптомы бешенства – стадии

Инкубационный (латентный) период может длиться несколько недель. На выраженность симптомов влияет возраст питомца, состояние иммунной системы, концентрация вируса. Болезнь как правило наблюдается в тихой, буйной или атипической форме.

Обычно наблюдается буйная форма, длится от шести до десяти дней. Выделяются несколько стадий данной формы.

1. Продромальная (протекает двое суток) – изменяется поведение животного: оно выглядит угнетенным, подавленным, сидит в тихих уголках, избегает общения, неадекватно реагирует на раздражители.
2. Маниакальная (три-четыре дня) – стадия возбуждения. Животное ведет себя агрессивно по отношению к животным и людям. Агрессивное поведение меняется на ласковое. Питомец бродяжничает, ест все подряд.
3. Паралитическая (до шести дней) – депрессивная. Проявляются следующие симптомы: паралич гортани, спазмы, судороги. Собака не может глотать, слюна постоянно вытекает. Панические состояния при громких звуках, изменяется координация движения. Наступает паралич сначала задних, затем передних конечностей. Питомец оказывается в коме, из которой не выходит (гибнет от истощения, нарушения дыхания и сердечной деятельности).

Больная собака может укусить, не предупредив об этом лаем.

При тихой форме (длится не более пяти суток) отсутствует стадия возбуждения. Животное угнетено, не реагирует на внешние раздражители. Гибнет от паралича мышц тела, глотки.

Болезнь не лечится, обязательно наступает летальный исход.

Атипичная форма (очень редкая). Она характеризуется следующими признаками: изменяется поведение, нарушается работа центральной нервной системы и желудочно-кишечного тракта.

Анализ крови на бешенство – как и где сдать

При появлении нехарактерных признаков у животных, рекомендуется срочно обратиться в ветеринарную клинику и проверить собаку на наличие вируса.

Перед тем как поставить первичный диагноз, учитывается история болезни, симптоматика, эпизоотологическая ситуация. Проводят несколько лабораторных и других анализов, экспресс анализ, биологический материал изучается под микроскопом. Проводится разграничивающая диагностика, с целью исключения инфекций со схожими симптомами.

Если человека укусила собака, ее изолируют на 10 дней. Пока готовятся анализы, за ней ведется наблюдение. При подтверждении заболевания, собаку усыпляют.

Точный диагноз можно поставить после смерти: получают патматериал и исследуют его при помощи различных методик.

Самый эффективный метод – изучение биоматериала под микроскопом на наличие телец Бабеша-Негри. Чтобы обнаружить специфический антиген в мозге, применяется реакция диффузной преципитации, иммунофлуоресцентный анализ отпечатка роговицы. Иммунофлуорисцентный метод способен обнаружить антиген в 93% случаев.

Из-за того, что вирус движется по нервным путям, его сложно обнаружить в крови. Обычно исследуется спинномозговая жидкость. Тем не менее проводят общий и биохимический анализ крови собаки, чтобы изучить изменение лейкоцитоза, олигурии и других показателей. Кровь берут из вен, которые расположены там же, где и у человека. Иногда берут анализ слюны животного.

Тест на наличие антирабических антител в крови можно сделать в аккредитованных лабораториях (реже в ветеринарных клиниках). Стоимость ее высокая, результаты готовы после двух-трех недель. Существует два вида теста RFFIT (быстрого торможения фокуса флюоресценции) и FAVN (определяет титр антител в МЕ/мл).

Обычно тест проводится при перевозе животного заграницу (некоторыми государствами запрещено завозить животных, которых не прививали от бешенства). Анализ на антитела к бешенству сдается только после выработки в крови антител к данной инфекции. Иммунитет к болезни развивается не раньше, чем через 30 дней после проведения вакцинации. По истечении этого срока питомец может сдавать тест на бешенство.

Если количество антирабических антител не достигает 0,50 МЕ/мл – животное ревакцинируют, спустя месяц сдают еще один анализ. На воспроизведение защитных антител оказывают влияние: порода, возраст питомца, индивидуальные особенности. Врачи рекомендуют проводить наблюдение за количеством антител после вакцинации.

Что делать, если результат положительный

Лечение от данной болезни не разработано. При подтверждении подозрений собаку усыпляют. Единственный выход – вакцинация. Если хозяин не сделал укол от бешенства – питомец гибнет от любого вируса, который влияет на его поведение.

Во время инкубационного периода болезнь не дает о себе знать. Тем не менее, как было сказано, собака уже заразна. После появления первых признаков болезни (боязнь воды, неспособность пить, агрессивное поведение), сроки жизни питомца составляют не более 11 дней, после чего умирает.

Что делать, если человека укусила собака

Люди заражаются через укус больного животного. Для человека характерны те же симптомы, что и для животных: судороги, паралич, боязнь воды, спазм глотки, смерть. После укуса первые признаки заболевания проявляются через неделю и до одного года (зависит от места поражения). Сразу после укуса (не позднее десятого дня) нужно обратиться к специалисту и сделать серию уколов (они помогут избежать летального исхода).

Первые действия при укусе собаки:

• промыть место укуса под сильной струей воды (можно под краном или воспользоваться бутылкой); постараться вымыть грязь и слюну;
• кожу тщательно вымыть хозяйственным мылом – не менее двух раз;
• наложить чистую сухую повязку;
• обратиться в травмпункт или поликлинику;
• в экстренных случаях (при больших и глубоких ранах) вызвать неотложную помощь.

Врач устанавливает график вакцинации, дает рекомендации относительно питания во время лечения.

Профилактика заражения

Существует один способ профилактики от бешенства – своевременная вакцинация. Выбирается подходящий препарат, каждый год (при некоторых вакцинах раз в три года) проводят ревакцинацию (схему подбирает врач ветеринар. Цена прививки около 1400 рублей за отечественный препарат, 1600 за импортный.

Без прививки от бешенства запрещено вывозить питомца в некоторые страны, принимать участие в выставках. Прививка в некоторых государственных клиниках может проводиться бесплатно, она гипоаллергенная и безопасная.

Первый раз прививку нужно делать щенкам в возрасте трех-четырех месяцев, затем делается каждый год. До процедуры питомца обрабатывают от гельминтов и паразитов, она должна быть здорова. По желанию делают моноукол или комбинированным препаратом (от всех болезней).

Привитая собака тоже может заразится, если:

• вакцина была просроченная или неправильно хранилась;
• во время прививки животное было заразно, болезнь находилась в инкубационном периоде.

После прогулок с другими собаками (или поездок в лес) питомца нужно осмотреть на предмет укусов, ссадин и царапин.

Выгуливая питомца лучше не контактировать с незнакомыми и бродячими собаками. Особенно опасны стаи бездомных собак, которые могут не только покусать и заразить бешенством, но и нанести серьезный вред здоровью. Своевременная прививка от бешенства гарантирует здоровье и долгую жизнь четвероногому любимцу.

Особо опасная вирусная болезнь различных видов животных, а также человека, характеризуется в основном острым течением, тяжелыми поражениями центральной нервной системы. Болезнь обычно заканчивается гибелью животного.

Источником возбудителя инфекции являются зараженные животные (больные, вирусоносители), у которых за 1-2 недели до проявления клинических признаков заболевания вирус появляется в слюне. Поэтому такие животные, находящиеся в инкубационном периоде болезни, опасны для людей и других животных.

Для бешенства наиболее типичным является контактный способ заражения; оно происходит через инфицированную слюну больных животных, которая попадает при укусах в раны или на слизистые оболочки и поврежденную кожу (эрозии, ссадины и др.). Инкубационный период при бешенстве составляет 14- 60 дней, но иногда достигает 6-12 месяцев.

Симптомы. Клинические признаки заболевания бешенством появляются чаще всего через 3-8 недель после заражения.

У животных клинически различают несколько форм болезни: буйную (агрессивную), тихую (паралитическую) а также атипичную (абортивную) форму.

Буйная форма проявляется последовательно сменяющимися тремя стадиями: первая — продромальная, вначале заболевания отмечают изменения поведении собак и кошек: животное необычайно ласково или, напротив, капризно, настороженное, не выполняет команды. У больных бешенством диких животных (лисицы, волки и др.) также наблюдают атипичное поведение: они теряют чувство осторожности и страха, приходят в населенные пункты и могут нападать на животных и людей. Такие животные очень опасны.

Вторая — возбуждения, животное агрессивно, температура повышена до 40-42

0С, наблюдаются рвота, параличи отдельных групп мышц(глотки, гортани, конечностей).

Третья — паралитическая, характеризуется резким истощением животного, прогрессирующими параличами задних конечностей, затем туловища, передних конечностей; животное погибает.

Тихая форма бешенства у собак и кошек клинически характеризуется общей депрессией, без стадии возбуждения. Быстро наступают параличи мышц конечностей и туловища. Болезнь длится всего 2-4 дня, и животное погибает.

Атипичная форма проявляется различными нетипичными для бешенства признаками. В последние 10 лет атипичные формы бешенства стали отмечать сравнительно часто. Болезнь характеризуется подострым или хроническим (до 2-3 месяцев) течением. При этом наблюдают вялость и безучастность животных, расстройства нервной, пищеварительной и других систем организма.

Лечение при бешенстве не разработано! Больных и подозрительных по заболеванию животных уничтожают, так как их содержание и лечение связано со смертельным риском заражения людей и других животных.

Бешенство относится к группе особо опасных болезней животных и человека. Поэтому обо всех случаях бешенства необходимо обязательно сообщать в ветеринарную службу города и района. Животных, покусавших людей, немедленно изолируют и содержат под строгим ветеринарным наблюдением в течение 10 суток. Если за этот период у них не появились признаки бешенства, они считаются здоровыми, а пострадавший человек – не зараженным.

Для специфической иммунопрофилактики животных используют различные отечественные и зарубежные ассоциированные и моновакцины против бешенства в соответствии с наставлениями по их применению.

Невакцинированных собак запрещается использовать для службы, охраны, охоты, племенного дела, а также перевозить их и участвовать с ними в выставках, выводках и других мероприятиях.

С целью предупреждения заражения бешенством охотникам рекомендуется получить курс профилактических прививок против бешенства, воздержаться от снятия шкур и разделки тушек животных до получения результатов исследования убитых животных на бешенство из ветеринарной лаборатории.

Ветеринарный врач 1-категории Сальского филиала

Бешенство (гидрофобия) – медленная вирусная инфекция поражающая теплокровных животных, птиц и человека. Это одно из наиболее тяжелых заболеваний, неизбежно приводящее к смертельному исходу.

Бешенство встречается на всех континентах, но более 95% случаев смерти людей происходит в Азии и Африке. В мире ежегодно погибает от этой инфекции свыше 55 тысяч человек, 40% людей, подвергшихся укусам предположительно бешеным животным – это дети в возрасте до 15 лет.

Бешенство - природно-очаговая инфекция, которая регистрируется в более 150 странах мира и является десятой по значимости причиной смерти людей в структуре инфекционных заболеваний.

Ежегодно на территории Московской области регистрируются случаи заболевания и гибели животных от бешенства, в том числе это домашние животные - собаки и кошки, владельцы которых ( москвичи) не захотели провести профилактические прививки против бешенства своим животным .В Московской области в 2017 г. наиболее неблагополучными районами по бешенству у животных являлись Лотошинский, Ногинский, Раменский , Истринский, Клинский, Наро – Фоминский, Одинцовский, Щелковский районы. Среди животных, погибших от бешенства лисицы, собаки, кошки, а также бешенство регистрировалось среди енотовидных собак, лосей, ежей и белок.

Положение усугубляется тем, что владельцы не прививают от бешенства домашних питомцев, вывозят их на территории, неблагополучные по этому заболеванию, либо привозят в Москву подобранных больных безнадзорных животных. При этом они подвергают риску свою жизнь и жизнь людей, которые контактируют с больным животным. Кроме того, подвергаются риску заражения бешенством другие животные, которые выгуливаются и контактируют вблизи места жительства с больными животными до их гибели. Опасность представляет и приобретение животных через различные сайты в сети интернет. Как правило, такие животные не прошли ветеринарное освидетельствование и представляют опасность для людей и животных. Так, в апреле 2017 года по объявлениию товарах и услугах от частных лиц и компаний на интернет-сайт объявлений Avito, московской семьей была приобретена кошка, которая через 1,5 месяца заболела бешенством. В контакте с заболевшим животным находились 5 человек, в т.ч. двое детей. Все они были покусаны и поцарапаны заболевшей кошкой и получают курс прививок против бешенства.

Основной источник бешенства в природе – дикие плотоядные животные. Есть природные очаги бешенства, которые поддерживаются представителями собачьих (волки, лисы, енотовидные собаки, песцы), а также дикими кошками, рысью, плотоядными и насекомоядными летучими мышами.

К бешенству восприимчивы все теплокровные животные, но чаще инфекцию распространяют такие животные как лисы, волки, енотовидные собаки, кошки и собаки. Также бешенство может регистрироваться среди коров, лошадей, мелкого рогатого скота, кабанов, ежей.

От диких животных инфекция может переходить на домашних. Так возникает городской очаг, который поддерживается бродячими собаками и кошками.

Заболеваний от животных человеку передается через укусы, ссадины, царапины, ослюнения кожных покровов, слизистую оболочку глаз, полости рта, носа и при соприкосновении с каким-либо предметом или одеждой, загрязненной слюной бешенного животного.

Инкубационный период (время от укуса до заболевания), зависит от локализации укуса и длится от 10 дней до 3-4 (но чаще 1-3) месяцев, может удлиняться до года и более. Наиболее опасны укусы в голову, кисти рук. Болезнь начинается с появление болей по ходу нервов в месте укуса, тошноты, рвоты. Больные теряют сон, возникает чувство тоски, беспокойство. В дальнейшем на фоне подъема температуры, возникает возбуждение и чувство страха. Несмотря на жажду, появляется водобоязнь, судороги. Смерть наступает на 4-6 сутки. Срочная вакцинация после попадания вируса в организм позволяет предупредить развитие симптомов и заболевание человека.

Средств лечения бешенства нет. При наличии клинических проявлений у человека болезнь заканчивается летальным исходом.

Основными причинами заболеваний людей являются: отсутствие настороженности и знаний об опасности заражения бешенством при укусах, оцарапывании, ослюнении животными и несвоевременное обращение за медицинской антирабической помощью.

За 2017 год в травматологические пункты ЗАО обратились за антирабической помощью 1982 человека. Пострадали от укусов владельческими животными 48,8% обратившихся за антирабической помощью, от укусов безнадзорными животными – 42,2% пострадавших.

Антирабическая помощь людям, пострадавшим от укусов, оцарапывания, ослюнения животными в ЗАО г.Москвы оказывается в травматологических пунктах, расположенных по адресам:

Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.

Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результа­тов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении те­лец Бабеша - Негри и биопробе на белых мышах.

В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.

Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мел­ких животных, от крупных животных - голову или головной мозг. В некоторых случаях до­пускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг - в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницае­мую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологи­ческим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.

Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).

Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша - Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.

Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматрива­ют в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша - Негри (при окраске по Селлерсу - четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплаз­ме, при окраске по Муромцеву - светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша - Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.

Наиболее характерная особенность телец Бабеша - Негри - их внутренняя структура, по­зволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки - базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.

Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша - Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами иден­тификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравле­ния змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша - Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследу­ется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).

ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном вы­полнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микро­скопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в ви­де ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаружи­вают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.

Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод по­давления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфиче­скими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого голов­ного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресци­рующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким обра­зом препаратах флюоресценции не должно быть.

Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предвари­тельно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования по­дозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, по­кусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все прави­ла личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим ве­ком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для кон­троля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в тече­ние 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.

В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубаци­онного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера - от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного - не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более кле­ток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здо­ровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.

Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постанов­ке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период забо­левания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря матери­ал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса нерав­номерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.

Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или лате­ральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них де­лают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с дан­ными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корре­ляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.

РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге жи­вотных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микро­методом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой ме­тодике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А - аммонов рог (правая сторона); В - кора головного мозга (правая сторона); С - мозжечок (правая сторона);
Д - продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) - положительный контроль; - (минус) - отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 - лунки с разведе­нием специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно

Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастооб­разную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм ге­лем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.

РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в ис­следуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полу­ченного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в иссле­дуемом материале телец Бабеша - Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.

Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша - Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказыва­лась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.

Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции ис­пользуют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скун­сов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хо­мячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.

РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового от­дела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнат­ной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.

ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.

В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА - наиболее перспективный лабораторный метод обнару­жения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является тех­ника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно пре­восходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.

РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.

Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термола­бильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и "утиных" штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.

Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, исполь­зуя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реаги­руют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии компле­мента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ исполь­зовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT ис­пользуют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксиро­ванный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выяв­лении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.

РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за на­личия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствите­лен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувстви­тельностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращен­ный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугирова­нием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активно­стью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.

Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гу­синых эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавле­нием 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, оконча­тельный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус - через 1-1,5 ч.

Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связы­ваться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммун­ной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие ре­зультаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.

Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сы­воротке и гибридомных супернатантах.

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при кото­рой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломие­лите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.