Вирус алеутской болезни норок

Алеутская болезнь (вирусный плазмоцитоз) норок, Morbus Aleutica Lutreolarum-контагиозная, иммунокомплексная, преимущественно хронически протекающая болезнь норок и хорьков, сопровождающаяся кахексией и появлением кровоточащих язв на слизистых оболочках губ и десен, артериитом, гепатитом, анемией.

Историческая справка. Впервые об алеутской болезни стало известно после сообщения Дж.Хартсафом и И. Горемом в 1956 году, не смотря на то , что они наблюдали эту болезнь еще в 1946 году в Северной Америке у норок алеутской мутации сразу после их выведения (алеутская норка темно-голубого окраса, но бывают и черные). Падеж от этой болезни регистрировали в норководческих хозяйствах не только в Америке, но и в Скандинавских странах. Первоначально предполагали, что эта болезнь специфична для алеутского гена, но сейчас стало известно, что алеутская болезнь поражает норок разных окрасов.

Интенсивное разведение норок, выведение зверей разных цветных вариаций, обмен племенными зверьками способствовали распространению алеутской болезни среди норок в других странах- Дания, Англия, Канада, Голландия, Германия, Россия.

В СССР алеутская болезнь впервые была описана Бузиновым с соавторами в 1967, хотя Панков зарегистрировал болезнь у норок в звероводческих хозяйствах Европейской части СССР в 1965 году после ввоза в страну цветных норок.

В настоящее время болезнь широко распространена в странах занимающихся клеточным звероводством (США, Канаде, Англии, Польше, Скандинавских странах и др.). В России алеутская болезнь норок распространена повсеместно, поражая в отдельных хозяйствах до 70% поголовья.

Экономический ущерб. Экономический ущерб от болезни большой за счет снижения плодовитости, гибели щенков в первые дни жизни, ухудшения качества пушнины, большого падежа (до 60% поголовья), больших затрат при проведении ограничительных и ветеринарно-санитарных мероприятий.

Этиология. Возбудитель болезни –Aleutian mink disease parvovirus относится к семейству парвовирусов, размер 20-27нм, коэффициент седиментации 110S, градиент плотности 1,32-1,44 г/см³. Геном вируса представлен однонитчатой молекулой ДНК с молекулярной массой 7,4 МД. Вирус стабилен при рН 2,8-10,0, прогревание при 80°С-1 час. Вирус устойчив к воздействию формалина, эфира. Формальдегид в 0,3%-ной концентрации,при экспозиции 2 недели не инактивирует вирус. Растворы щелочей и йода (0,5%), глутарового альдегида (2%-ный), ультрафиолетовые лучи действуют на вирус губительно. При низких температурах он не теряет активности в течение 1 года.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях к вирусу алеутской болезни, восприимчивы норки, независимо от возраста, пола и цветных вариантов, особенно чувствительны алеутская и сапфировая. Норок можно заразить внутрибрюшинно. Вирус может бессимптомно персистировать в организме пушных зверей и диких животных.

Источником возбудителя инфекции служат больные норки и вирусносители, в организме которых он содержится во всех паренхиматозных органов и тканях и выделяется в окружающую среду со слюной, фекалиями и мочой, молоком, околоплодной жидкостью и передается вертикальным и горизонтальным путями. Заражаются чаще при спаривании, реже алиментарными и аэрогенными путями, не исключена передача кровососущими насекомыми (в их организме вирус сохраняется до 40 суток) и внутриутробно.

Основной причиной распространения болезни в благополучных хозяйствах являются завоз и перемещение инфицированных норок, не выявленных при диагностике.

В распространение болезни имеют значение механические переносчики (обслуживающий персонал, инвентарь и др.), а также плохо проваренные тушки убойных норок. Для алеутской болезни норок, характерны стационарность и очаговость. На течение и исход болезни оказывают влияние природно-климатические факторы. Симптомы болезни разные в зависимости от стационарности очага. Вначале они протекают почти незаметно. По мере накопления больных или действия стрессовых факторов болезнь может принять эпизоотический характер с отходом до 70-80% из числа заболевших норок. В стационарном очаге преобладает атипичная форма болезни (протекает около года).

В сыворотке крови, внутренних органах и мозге больных животных вирус персистируется в течение всей жизни животного, несмотря на то, что находится в составе иммунного комплекса.

Патогенез. Внедрившись в организм вирус вызывает интенсивную пролиферацию лимфоидных клеток (которые вырабатывают антитела) в лимфатических узлах, печени, селезенке, почках и других паренхиматозных органах, вследствии чего развивается гипергаммаглобулинемия. В крови появляются специфические антитела и формируется иммунный комплекс вирус-антител. В зависимости от места, где происходит выпадение иммунного комплекса, у больного животного в клинике преобладают те или иные симптомы. При фагоцитирование иммунных комплексов РЭС вирус освобождается в ядрах макрофагов печени, селезенки и других органов. Наиболее характерным гистологическим изменением является пролиферация плазматических клеток, происходящая в лимфатических узлах, костном мозге, печени, почках. В течении и исходе алеутской болезни важное значение имеют поражения почек, которые проявляются склерозирующим гломерулонефритом. Одновременно с плазмоклеточной инфильтрацией тканей и тяжелым гломерулонефритом идет поражение сосудов (тяжелый артериит) почти во всех органах.

Клинические признаки. Инкубационный период от месяца до 2лет. Клинические признаки появляются незадолго до гибели зверя и сопровождаются отказом от корма, угнетением, истощением, изъязвлением слизистой оболочки рта, губ, десен, прогрессирующей анемией, почечной недостаточностью. Фекалии приобретают дегтеобразный цвет и консистенцию. Норки заразившиеся до гона, абортируют. У щенков симптомы болезни наблюдаются редко, чаще они погибают при бессимптомном течении болезни. В этом случае вирус находится в крови, паренхиматозных органах и регионарных лимфатических узлах. При низком уровне специфических антител повышается содержание гамма-глобулинов. Летальность зависит от течения болезни. Болезнь длится от 2 недель до 3-4 месяцев. Звери погибают от кахексии. У отдельных зверей наблюдаются признаки поражения нервной системы, звери не могут сохранять равновесие, у них нарушается координация движений, развиваются парезы и параличи (чаще тазовых конечностей). Возможно осложнение вторичными инфекциями. Бессимптомная форма болезни обуславливается наличием колостральных специфических антител и проявляется невысокой летальностью в течение первого года после заражения.

Прогноз. Прогноз болезни неблагоприятный. При бессимптомной форме погибает до 20% норок. При прогрессирующей в течение первого года после заражения более 50%, а на второй год до 80%. Гибель зверей наступает через 2-7 месяцев, иногда через 2года.

Патологоанатомические изменения зависят от формы и течения болезни, при остром и подостром течении они более выражены, чем при латентном и хроническом. У павших зверей, как правило, устанавливаем признаки истощения, множественные мелкие изъязвления и кровоизлияния в ротовой полости. Наиболее характерные патологоанатомические изменения обнаруживаем в почках. На поверхности коркового слоя хорошо выделяются точечные кровоизлияния и мелкие серо-белого цвета очажки. Создается впечатление, что почки как бы обсыпаны песком. Граница между корковым и мозговым слоями сглажена. В почках явления нефрозонефрита. При хроническом течении болезни почки уменьшены в объеме, сморщенные, серо-желтого цвета, капсула снимается легко. Печень увеличена в объеме в два раза, имеет вид красного цвета или мускатного ореха. Селезенка резко увеличена в размере в 2-5 раз, часто пятнистая. Лимфатические узлы туловища и паренхиматозных органов сочные, увеличены в 2-4 раза. В прямой кишке иногда сгустки крови. При гистоисследование паренхиматозных органов обнаруживаем плазмоцитарную метаплазию. В печени, почках, селезенке, костном мозге, лимфатических узлах, особенно вокруг кровеносных сосудов находим расположенные диффузно или очагово скопление большого количества плазматических клеток.

Диагноз на алеутскую болезнь ставим на основании анализа эпизоотологических, клинических данных, результатов патологоанатомических и цитоморфологических изменений и результатов лабораторных исследований (йодная проба по методу Меллони, реакция иммуноэлектроосмофореза). Ветспециалистам необходимо иметь в виду, что на определенной стадии течения болезни уровень специфических антител настолько снижен, что результаты РИОЭФ становятся отрицательными. Частота недиагностируемой стадии болезни в стационарных очагах алеутской болезни достигает 20-25%.

К неспецифическим методам диагностики относят тимоловую пробу и электрофоретическое разделение белков сыворотки крови, но они малочувствительны и позволяют выявлять не более 50% зараженных алеутской болезнью норок. В настоящее время для диагностики болезни широко применяют ИФА и ПЦР.

Дифференциальная диагностика. Болезнь дифференцируем от жировой дистрофии печени алиментарного происхождения, а также псевдомоноза.

При жировой дистрофии печени отсутствуют характерные изменения в почках и отрицательны результаты серологических исследований. Специалисты регистрируют массовое распространение жировой дистрофии печени не только среди норок. Необходимо учитывать доброкачественность скармливаемого животным корма (дистрофия часто связана с использованием в корм выбракованной рыбы, рыбьих голов, несвежих субпродуктов). Жировая дистрофия печени сопутствует некоторым инфекционным заболеваниям (туберкулез, чума, микотоксины). Жировая дистрофия сопровождается поносом, в котором кал имеет зеленый или серо-зеленый цвет с примесью крови, слизи и газа. Видимые слизистые оболочки желтушны, у больного животного наблюдаются судороги, эпилептические припадки; температура тела нормальная. У самок перед щенением кровотечение из половых органов, рассасывание плода, аборты. При патвскрытии — желтушность слизистых оболочек, печень — дряблая, серо-желтого или охряно-желтого цвета, кусочки печени не тонут в воде. Почки увеличены, серо-желтого цвета.

Псевдомоноз (геморрагическая пневмония, синегнойная инфекция). К псевдомонозу более восприимчив молодняк норок и голубых песцов. Предрасполагают к болезни стрессы, применение антибиотиков в завышенных дозах и др. Болезнь стационарная, контагиозная. Возникает в любое время года. Протекает остро с выделением из носа кровянистой жидкости, которая затрудняет дыхание, появляются хрипы, норки стараются голову поднять вверх. У щенков регистрируем понос, в каловых массах пузырьки газа. Головы большие (большеголовость) кости черепа расходятся, заметна флюктуация мозга. При патвскрытии павших норок регистрируем геморрагичнеское воспаление легких. Печень и селезенка сухие, светло-коричневого цвета. Головной мозг представляет собой гноевидную жидкость. При бактериологическом исследовании находим синегнойную палочку.

Иммунитет и специфическая профилактика. Все инфицированные алеутской болезнью норки погибают, поэтому говорить о естественном иммунитете против алеутской болезни норок не приходится. В ряде стран (США, Китай и др.) были предложены формолвакцины против алеутской болезни норок. Применение этих вакцин вызывает непрочный иммунитет у норок, но позволяет повысить резистентность животных и прервать распространение болезни.

Профилактика. Основана на охране хозяйств от заноса вируса, систематическом исследовании проб крови с целью выявления и убоя зараженных норок, замены их здоровыми, проведением ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на уничтожение вируса во внешней среде. При диагностировании болезни сыворотки крови исследуют в три этапа: перед комплектованием основного стада, за 15-25 дней до начала гона и летом самцов и самок, оставшихся без приплода.

Серопозитивных зверей изолируют, проводят систематическое лечение и убивают после созревания меха. Норок завозят только из благополучных хозяйств после исследования сыворотки крови по РИЭОФ и получения отрицательного результата. Завезенных норок содержат в профилактическом карантине 30 дней и исследуют по РИЭОФ. При отрицательном результате РИЭОФ всех клинически здоровых зверей переводят на ферму. В случае обнаружения животных с положительными серологическими реакциями срок карантинирования животных продлевают до их выздоровления.

С целью контроля эпизоотической обстановки в благополучном хозяйстве проводят исследование сыворотки крови подозрительных по заболеванию и павших норок, а также подлежащих продаже на племя.

Лечение. Специфических средств лечения на сегодняшний день не разработано. Ветспециалисты хозяйств применяют симптоматическое лечение- антибиотиками, витаминами, белковыми гидролизатами, гормонами и применением иммунодепрессоров. Особенно интенсивно необходимо проводить лечение больных норок до созревания меха. Лечение больных норок проводим в изолированном помещении, где имеется отдельный обслуживающий персонал и свой инвентарь.

Для лечения используют: витамин В-12 по 10мкг в сочетании с фолиевой кислотой по 0,3 мг, витамин К, гидролизаты – амидопептид (в корм -5-10мл). С целью предотвращения дистрофии печени применяют: липокаин, холин; для нормализации солевого обмена – физиологический раствор с 5% глюкозой (5мл, подкожно) или с кормом (0,3-0,5г); назначают имунномодулятор –левамизол; имуннодепресанты –метотрексан (0,5 мг/кг) 6 мериптурин (5мг/кг). Курс лечения должен быть длительным и регулярным. В период курса лечения больным животным в рацион вводят творог, печень, хорошего качества рыбу, мясо, свежедробленные кости.

Меры борьбы.

При подтверждении диагноза на алеутскую болезнь в хозяйстве (на ферме) Постановлением Губернатора области вводятся ограничения и проводятся мероприятия в соответствии с инструкцией по профилактике и ликвидации заболевания норок алеутской болезнью. Утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 14 ноября 1985 года.

Согласно данной инструкции в хозяйстве запрещаются выставки норок, вывоз норок в благополучные хозяйства, скармливание всем видам зверей тушек убойных норок, норкового жира и остатков несъеденного корма.

На основании плановых и вынужденных исследований проб крови в РИЭОФ проводится изоляция и выбраковка животных, давших положительную реакцию, специалистами хозяйства проводится строгая регламентация перегруппировки зверей, проводятся дезинфекционные работы. В хозяйстве проводят исследование зверей 3 раза в год: осенью все племенное поголовье перед комплектованием стада; в январе-феврале все поголовье перед гоном; июне-июле самок оставшихся без приплода и самцов с низкой активностью или тех, которые покрыли самок, но у них регистрировали пропустование, появление мертворожденных щенков, гибель молодняка. Кроме того, исследуют норок с клиническими признаками алеутской болезни.

К подозреваемым, в заражении относят (без исследований) всех щенков, полученных от положительно реагирующих или клинически больных матерей; щенков тех пометов, в которых зарегистрирован положительный результат в серологических реакциях; отрицательно реагирующих матерей, в потомстве которых имеются подсаженные щенки от положительно реагирующих матерей.

Переболевших норок выбраковывают.

Текущую и вынужденную дезинфекцию клеток проводят 4%-ным горячим раствором формалина или 2%-ным раствором глутаральдегида, а деревянные и неметаллические части шедов 2%-ным горячим раствором (70-80°С) едкой щелочи или 4%-ным раствором формалина. Перед этим в шедах проводят механическую очистку и обязательный вывоз навоза из под клеток. Дезинфекцию при минусовой температуре воздуха можно проводить огнеметом только с разрешения МЧС. Халаты, рукавицы, предметы ухода дезинфицируют в параформалиновой камере, автоклаве, а также 4% -ном растворе формалина, 5%-ном растворе кальцинированной соды или в 2%-ном растворе едкой щелочи не реже 1 раза в неделю и после работ, связанных с массовой ловлей зверей (при вакцинациях, инъекциях витаминов и др.).Во время ловли зверей рукавицы сменяют на дезинфицированные при переходе из одного шеда в другой. Для этих целей в неблагополучном хозяйстве у каждого зверовода должно иметься по 2-3 пары рукавиц. После завершения убоя больных и подозрительных по заболеванию норок проводят дезинфекцию убойного пункта с использованием указанных дезсредств.

Персонал, работающий на убойном пункте, а также на транспортировке и переработке тушек убойных животных, обеспечивают специальной одеждой, выносить которую с территории убойного пункта строго запрещено.

Хозяйство считается благополучным по алеутской болезни после получения 3-кратного отрицательного результата плановых исследований сыворотки крови основного стада и ремонтного поголовья норок по РИЭОФ. В таких хозяйствах плановые исследования крови норок на алеутскую болезнь проводят в соответствии с п. 3.4. инструкции по профилактике и ликвидации заболевания норок алеутской болезнью.

Чума плотоядных(болезнь Карре) – остро протекающая болезнь собак, волков, лисиц, шакалов, норок, соболей, енотов и других плотоядных, характеризующаяся лихорадкой, острым катаральным воспалением слизистых оболочек, пневмониями, кожной экзантемой и поражениями нервной системы.

Болезнь проявляется несколькими клиническими признаками, поэтому выделяют ее несколько форм. При легочной форме отмечают развитие пневмоний. Кишечная форма характеризуется рвотой, запорами или поносами с примесью крови. Кожная форма сопровождается появлением на бесшерстных участках пустулезной сыпи, наполненной зеленоватым содержимым. Нервная форма проявляется сильным возбуждением животного, судорогами и параличами конечностей. При всех формах болезни отмечают поражение глаз в виде конъюнктивита, светобоязни, опухания век и кератита.

Возбудителем чумы плотоядных является вирус из семейства Paramyxoviridae, подсемейства Paramyxovirinae, рода Morbillivirus. Кроме указанного возбудителя данный род также включает возбудителей кори человека, чумы крупного рогатого скота, между которыми и вирусом чумы плотоядных установлено антигенное, а в случае с вирусом кори человека – и иммунобиологическое родство. Возбудитель вызывает заболевание у млекопитающих главным образом семейства волчьих – чума кошек не родственна чуме плотоядных. Человек и приматы к вирусу не восприимчивы.

В антигенном отношении возбудитель однороден, однако в одних случаях специфические антитела нейтрализуют вирус в высоких концентрациях, а в других способны нейтрализовать только низкие концентрации антигена. В этой связи первые штаммы условно называются классическими, а вторые – вариантными, хотя иммунобиологических различий между ними нет.

При попадании в организм вирус проходит первичную репликацию в лейкоцитах миндалин, лимфоузлов и крови. Эта стадия на уровне организма характеризуется инкубационным и продромальным периодами и длится обычно в течение первых 6 дней. Выделение вируса из патматериала на этой стадии крайне затруднено. С 6-9-го дня начинается репликация вируса в эпителиальных клетках различных органов и тканей, а также глиальных клетках центральной нервной системы. Обычно в это время проявляются симптомы болезни – диарея, конъюнктивит и конвульсии.

Лабораторная диагностика. Многообразие симптомов болезни обычно затрудняет своевременную постановку диагноза, поэтому решающее значение имеет лабораторная диагностика. Изоляция вируса из патматериала затруднена, поэтому часто диагноз ставят на основании результатов первичного обнаружения вируса в патматериале.

Отбор патматериала. При жизни животного отбирают пробы крови в первые 6 дней болезни, когда вирус реплицируется в лейкоцитах, а также мазки из носа и конъюнктивы для гистологического и серологического исследований. От трупов берут кусочки легких, трахеи, селезенки, почек, головного мозга и обязательно мочевой пузырь. При этом отбирают материал как для вирусологического, так и для гистологического исследования. Во втором случае пробы консервируют в 10%-ном нейтральном формалине.

Подготовка материала заключается в приготовлении мазков, препаратов-отпечатков и приготовлении суспензии для выделения вируса.

Мазки готовят из слизистой оболочки мочевого пузыря. Для этого на предметном стекле в капле физиологического раствора равномерно распределяют соскоб со слизистой и с помощью шлифовального стекла делают мазок. Препараты-отпечатки готовят из печени, почек, желчного пузыря, желудка, легких и мозга. В дальнейшем препараты из материала, присланного для вирусологического исследования, исследуют в РИФ, а для гистологического – на обнаружение специфических телец-включений.

Первичное обнаружение вируса при чуме плотоядных имеет большое значение, так как успешное выделение вируса из патматериала не всегда удается. Вирус обнаруживают в патматериале по результатам РИФ и гистологического исследования. В РИФ можно исследовать препараты, полученные как после смерти животного, так и при жизни (из конъюнктивы и носовых ходов). Положительный результат характеризуется специфическим свечением пораженных клеток.

Гистологический метод менее чувствителен, чем серологический для первичного обнаружения вируса в патматериале, поэтому рекомендуют их сочетанное использование при постановке диагноза. С этой целью приготовленные мазки, отпечатки или гистосрезы окрашивают смесью красок метиленового синего и фуксина в течение 1 мин и исследуют под микроскопом. Ядра эпителиальных клеток окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, цитоплазма – в светло-сиреневый цвет, а вирусные тельца – в ярко-красный или малиновый. При этом включения располагаются в цитоплазме клеток или внутри их; округлой, овальной или полиморфной формы, имеют четкие края, количество их колеблется от единичных до десяти и более в одной клетке.

Выделение вируса проводят на развивающихся куриных эмбрионах или культурах клеток. В первых пассажах вирус вызывает лишь слабое помутнение ХАО и гибель эмбрионов в 5-10% случаев. О предполагаемом присутствии вируса судят при постановке РГА с эритроцитами цыпленка.

Из культур клеток для выделения вируса чаще используют клетки почек хорька и альвеолярных макрофагов. ЦПД характеризуется формированием круглых многоядерных гигантских клеток, на месте которых в последующем образуется синцитий неправильной формы. Возможно также проводить культивирование уже зараженных клеток почек, полученных от больных исследуемых собак.

Идентификацию изолированного вируса проводят с помощью серологических реакций, использование которых зависит от способа изоляции возбудителя. В случае выделения вируса на РКЭ используют РТГА с 1%-ной взвесью куриных эритроцитов, при этом гемагглютинирующий титр может достигать высоких значений (1:2560 и выше).

В случае выделения культурального вируса используют РН на культурах клеток. Для этого к зараженной культуре добавляют питательную среду 5% специфической сыворотки сразу же после контакта вируса с клеточным монослоем. По подавлению ЦПД вируса судят о специфичности поражения клеточного монослоя.

Парвовирусный энтерит плотоядных - контагиозная вирусная болезнь щенков моложе 5-месячного возраста, проявляющаяся рвотой, геморрагическим гастроэнтеритом, миокардитом, лейкопенией, дегидратацией и гибелью.

Выделяют три формы болезни: сердечная (у собак 3-8-недельного возраста), кишечная (с 8-недельного до 9-месячного возраста), а также комбинированная (6-16-недельного возраста). Развитие того или иного синдрома обусловлено необходимостью размножения возбудителя только в активно делящихся клетках, поражение органов зависит от возраста животного. Возбудителем парвовирусной инфекции собак является вирус из семейства Parvoviridae, рода Parvovirus. Данный род также включает возбудителей панлейкопении кошек, алеутской болезни норок, энтерита норок, парвовирусы свиней, крупного рогатого скота и других животных.

Общим свойством всех вирусов семейства Parvoviridae является наличие односпиральной линейной молекулы ДНК. Данное семейство включает автономные (недефектные) вирусы, требующие для своей репликации только чувствительную клетку, а также дефектные вирусы, которые требуют присутствия вируса-помощника, чаще аденовируса или герпесвируса. К автономным вирусам относят все вирусы родов Parvovirus и Erythrovirus. Все дефектные вирусы объединены в род Dependovirus.

Вирионы парвовирусной инфекции собак представляют собой безоболочечные частицы с кубической симметрией, капсид которых состоит из 32 капсомеров. Парвовирусы являются самыми мелкими вирусами животных и имеют размер 18-26 нм. Вирион представляет собой односпиральную линейную молекулу ДНК, окруженную белковым капсидом. У всех штаммов имеются три типа полипептидов, обозначаемых как VP67, VP70, VP85. Присутствие липидов, углеводов и ферментов в составе вирионов не обнаружено. Простое химическое строение придает вирусу большую устойчивость во внешней среде как к температурным фактору – устойчив в течение 1 часа при 60ºС, так и химическому воздействию. Данное свойство обусловливает постоянное присутствие вирусов во внешней среде и контаминацию биологических препаратов.

В антигеном отношении парвовирусы собак родственны парвовирусам энтерита норок и панлейкопении кошек, поэтому они объединены в одну серологическую подгруппу парвовирусов.

Парвовирусы способны размножаться только в высоко активных, интенсивно пролиферирующих клетках, поэтому культивирование возбудителя в первично-трипсинизированных клетках неэффективно. С этой целью используют перевиваемые линии, наиболее высокочувствительными из которых является культура клеток А-72, получаемая из подкожной опухоли собак. Однако реплицирующийся вирус развитие ЦПД в культуре клеток не вызывает, а его присутствие обнаруживается только по результатам РИФ.

Вирус обладает гемагглютинирующей активностью к эритроцитам многих видов животных, однако наиболее часто с этой целью используют эритроциты свиней. Все парвовирусы собак по гемагглютинирующей активности могут быть разделены на две подгруппы: штаммы первой подгруппы агглютинируют эритроциты в широких температурных диапазонах – от 4ºС до 37ºС, а второй подгруппы – только при 4ºС. В этой связи постановку реакции с парвовирусами собак рекомендуется проводить при низкой температуре – 2-4ºС.

В организме зараженного животного вирус репродуцируется в клетках эпителия кишечника, лимфоидной ткани миндалин, лимфоузлов, селезенки, пейеровых бляшек и миокарда.

Отбор и подготовка материала. В лабораторию направляют от больных животных пробы фекалий, взятые в первые дни болезни, и сыворотку крови для серологической диагностики. От погибших животных отбирают сердечную мышцу и тонкий кишечник. Материал отправляют в термосе со льдом.

Лабораторная диагностика парвовирусной инфекции собак может проводиться по следующим направлениям:

- обнаружение гемагглютинирующего вируса в патматериале с последующей идентификацией вируса в РТГА или ИФА;

- обнаружение специфических антител в сыворотке крови собак.

Обнаружение вируса в патматериале постановки РГА. С этой целью из проб фекалий, отобранных в первые четыре дня болезни, готовят на забуференном физиологическом растворе 20%-ную суспензию, после чего ее центрифугируют при 3-5 тыс. об/мин (при возможности 8-10 тыс. об/мин). Образовавшуюся надосадочную жидкость используют в РГА. Реакцию гемагглютинации проводят при 2-4ºС с 0,5-1%-ной взвесью эритроцитов свиней. Учет реакции проводят через 1-1,5 часа. При наличии гемагглютинирующего вируса в материале проводят его идентификацию.

Идентификацию вируса в патматериале проводят при помощи РТГА или ИФА. Постановку РТГА осуществляют общепринятыми методом микро- и макровариантов с 4-8 ГАЕ вируса при 4ºС. Используемые в реакции иммунные сыворотки инактивируют 1 час при 56ºС, после чего их обрабатывают эритроцитами свиней и раствором каолина. При отсутствии гемагглютинации с разведениями вируса 1:8 и 1:16 результат считают положительным

Для постановки ИФА используют кошачьи антитела к вирусу панлейкопении кошек.

Серодиагностику парвовирусной инфекции собак осуществляют в РТГА, где в качестве антигена используют штамм вируса SP-80, получаемый в культуре легочных клеток кошек. В реакции используют эритроциты свиней, фиксированные 3%-ным раствором формальдегида. Исследуемую сыворотку инактивируют прогреванием при 56ºС в течение 30 минут и адсорбируют свиными эритроцитами с целью удаления неспецифических агглютининов. Сыворотки считают положительными при наличии специфических антител в разведении 1:160 и выше.

Алеутская болезнь норок (плазмоцитоз норок) – контагиозная, медленно развивающаяся инфекционная болезнь, характеризующаяся распространенной плазмоклеточной пролиферацией (плазмоцитозом), гипергаммаглобулинемией, явлениями геморрагического диатеза, анемией и прогрессирующим истощением зверей.

К болезни восприимчивы норки всех пород, независимо от пола и возраста, однако животные определенных пород (алеутские, сапфировые, голубые) генетически предрасположены к более тяжелому проявлению болезни. Как было установлено, они являются гомозиготными носителями рецессивного гена аа. Болезнь протекает остро, подостро, хронически (чаще) и латентно. Различают бессимптомное развитие болезни (непрогрессирующая форма), которое развивается у норок без генетической предрасположенности, а также зараженных вертикальным путем от инфицированных матерей. Эта форма отличается невысокой летальностью и непостоянным наличием клинических и патологоанатомических изменений. Обычно через один год после заражения непрогрессирующая форма переходит в прогрессирующую.

Прогрессирующая стадия болезни характеризуется специфическим симптомокомплексом болезни. Первоначальными признаками болезни является снижение привеса, исхудание, затем отмечают кровотечения из ротовой полости, развитие анемии, менингита, парезы и параличи. Смертность при этой форме достигает 70-80%. У животных всегда отмечают изменения в почках, печени, лимфоузлах, селезенке, а также геморрагический диатез во внутренних органах. Возбудителем алеутской болезни норок является вирус из семейства Parvoviridae, рода Parvovirus. Возбудитель относится к группе автономных дефектных парвовирусов и содержит однонитевую молекулу ДНК. Как и все парвовирусы, вирус алеутской болезни норок является чрезвычайно устойчивым во внешней среде как вне клеток патматериала, так и в нем.

Внутри организма вирус находится в связанном с клеткой состоянии, а также вне клетки. Внутри клетки-мишени, в качестве которой могут быть клетки периферической крови, селезенки, тимуса, лимфоузлов и костного мозга, вирус связан с клеточными ядрами и различными органеллами, в частности рибосомами. Установлена способность к длительной персистенции внутри организма вследствие интеграции генома вируса с геномом клетки хозяина. Обычно такое состояние соответствует непрогрессирующей бессимптомной форме болезни, которая недоступна для клинической, биохимической (в ЙАТ) и иногда серологической (в РИЭОФ) диагностике. В последующем вирус стимулирует систему лимфоидных клеток к интенсивной пролиферации, в результате чего лимфоциты и плазматические клетки инфильтрируют многие органы и синтезируют повышенное количество иммуноглобулина сначала М, а затем G класса. Специфические антитела связываются с вирусом и присоединяют фракцию комплемента (С3), в результате чего образуется комплекс антиген-антитело-комплемент. Однако в образованных комплексах вирус сохраняет свою инфекционность и после поглощения комплекса макрофагами высвобождается и проходит дальнейшую репликацию. Кроме того, нефагоцитированные комплексы, присутствующие в крови в больших количествах, оседают в сосудах кровеносной системы, печени, почечных канальцах, обусловливая развитие характерного симптомокомплекса. Данный этап в патогенезе соответствует прогрессирующей стадии болезни, длительность которого различна. Однако в любом случае характер течения обычно хронический с появлением клинических признаков незадолго до смерти.

В составе вириона обнаружено несколько белков, некоторые из которых являются антигенами, но в патогенезе болезни также определенную роль играют антитела к ДНК вируса. Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства у вируса не установлены. Антигенной вариабельности и родства с другими вирусами не обнаружено. Хотя аналогичное заболевание регистрируется также у хорьков, штаммы вируса алеутской болезни норок и хорьков биологически различны.

Лабораторная диагностика. Диагноз на алеутскую болезнь норок ставят комплексно с учетом эпизоотологических, клинических и лабораторных данных. Лабораторная диагностика основана на обнаружении характерных патоморфологических изменений во внутренних органах павших животных, а также серологического исследования при жизни животного. Присутствие вируса в зараженном организме в комплексе с антителами не дает возможности культивировать, индицировать и идентифицировать вирус, поэтому лабораторная диагностика основана на обнаружении специфических антител в сыворотке крови больных животных, либо на выявлении повышенного количества гамма-глобулинов (косвенный неспецифический метод диагностики).

Отбор патматериала. Для серологического исследования в лабораторию направляют сыворотки крови от норок, для патоморфологического исследования – кусочки внутренних органов. Патматериал направляют в термосе со льдом.

Диагноз на алеутскую болезнь норок устанавливают на основании:

- обнаружения характерных гистологических изменений во внутренних органах (посмертная диагностика);

- выявления повышенного количества гамма-глобулинов и специфических антител в сыворотке крови больных норок (серодиагностика).

Гистологическое исследование основано на обнаружении диффузного плазмоцитоза во внутренних органах. При этом обнаруживают обширные клеточные пролифераты, состоящие из плазматических клеток, по ходу кровеносных сосудов, вокруг канальцев и клубочков почек; по ходу внутридольковых капилляров печени; красной пульпы селезенки; синусах лимфатических узлов.

Серологическая диагностика включает специфические реакции для обнаружения специфических антител в сыворотке крови, а также неспецифические методы для выявления повышенного содержания гамма-глобулинов в сыворотке крови.

Наиболее широко распространенным из неспецифических методов является йодагглютинационный тест (ЙАТ), основанный на свойстве йода осаждать гамма-глобулины при повышенном их количестве в сыворотке крови. Недостатком метода является невысокая чувствительность (40-60% инфицированных животных), а также отсутствие возможности выявлять зараженных норок в бессимптомный период.

Для постановки теста на обезжиренное стекло наносят одну каплю сыворотки крови и добавляют равное количество йодного реактива. Реакцию учитывают через 2 минуты. Положительный результат характеризуется образованием темно-коричневых хлопьев различной интенсивности. Йодный реактив готовят за сутки до исследования по следующей прописи: йода кристаллического 2 г, калия йодистого 4 г, дистиллированной воды 30 мл.

Тимоловая проба также является неспецифическим тестом, основанным на выявлении нарушения физико-химического состояния коллоидных растворов вследствие поражения печени. В тимоловом буфере белки выпадают в осадок и вызывают помутнение раствора. Результаты теста выражают в единицах экстинкции, умноженных на сто. У здоровых норок пробы колеблются от 0 до 4 ед., показатели 4,1-7 ед. считаются сомнительными, величина выше 7 ед. свидетельствует о болезни у исследуемого животного.

Изменение белкового состава крови при болезни можно также обнаружить методом электрофореза сывороточных белков. Установлено, что при алеутской болезни норок уровень гамма-глобулина превышает 14,9%. Недостатками неспецифических тестов диагностики алеутской болезни норок является невозможность диагностирования бессимптомной стадии болезни, а также получение положительных результатов в случае других неинфекционных поражений печени, желчного пузыря и почек.

К специфическим серологическим реакциям относят реакцию иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ), где в качестве антигена используют фреоновые экстракты внутренних органов экспериментально зараженных норок, а в качестве антитела – исследуемую сыворотку больных животных. РИЭОФ является основной для прижизненной диагностики алеутской болезни норок и широко используется в зверохозяйствах, где ежегодно в мае-июне исследуют всех самок без приплода, а также всех вновь поступающих в благополучные хозяйства норок.

Также для выявления антител разрабатывается ELISA- метод, который позволяет диагностировать зараженных животных в бессимптомную непрогрессирующую стадию.