Вирусное загрязнение питьевой воды

Как известно, патогенные для человека инфекционные агенты могут широко циркулировать в водных объектах, попадая в питьевую воду и создавая высокий риск заражения людей. При этом наиболее опасным является загрязнение воды вирусами, более устойчивыми по сравнению с другими микроорганизмами к обеззараживающим реагентам, применяемым на сооружениях водоподготовки.

Поверхностные водоисточники наиболее подвержены микробному загрязнению в результате сброса в них сточных вод и других продуктов жизнедеятельности человека. Проведенные в 1997 году исследования на речных водозаборах г. Минска и г. Гомеля, используемые в настоящее время технологии обеззараживания воды не являются эффективными в отношении ликвидации вирусного загрязнения. Так, уровень вируспозитивных проб речной воды г. Минска составил в феврале-ноябре 11,8%. При этом нестандартных проб по бактериальным показателям не обнаружено. Полученные данные находятся в соответствии с ранее опубликованными сведениями и указывают на тот факт, что осуществляемая очистка воды эффективна только в отношении бактериального загрязнения и не может гарантировать ее эпидемическую безопасность в отношении вирусных агентов.

Не менее актуальной в настоящее время является проблема качества воды, подаваемой из головных сооружений подземных водозаборов, которая также может быть контаминирована вирусами. Распространенными причинами такой контаминации являются загрязнение подземных водоносных горизонтов при инфильтрации поверхностных вод через зоны аэрации, "гидрогеологические окна" в водопроницаемой кровле эксплуатируемого горизонта и дефекты скважин, а также загрязнение резервуаров чистой воды в результате различных технических и технологических нарушений. Проведенные санитарно-вирусологические исследования воды насосных станций II подъема двух подземных водозаборов г. Минска в течение 1997 года выявили наличие ее вирусного загрязнения, которое менялось в течение года и было максимальным в марте (периоде интенсивного таяния снегов) и июне (периоде ливневых дождей). При этом среднегодовой уровень вируспозитивных проб по данным выделения вирусов на культурах клеток составил 12,1%, а по результатам обнаружения энтеровирусной РНК - 30%.

Особую важность в последние годы приобрела проблема качества питьевой воды в распределительной сети, которое зависит от целого ряда особенностей ее устройства, режима работы и эксплуатации, степени аварийности, своевременности проведения ремонтных и профилактических работ и т.д. Возможность загрязнения питьевой воды непосредственно в водопроводной сети неоднократно доказана рядом исследователей при ее исследовании в очагах вирусных инфекций. В этих условиях необходимость осуществления своевременного и адекватного санитарно-вирусологического контроля воды на всех этапах ее движения - от источника до потребителя - не вызывает никаких сомнений. Данный контроль имеет важное значение не только для изучения степени вирусного загрязнения воды с целью оценки ее безопасности для здоровья в конкретный момент времени но и для прогнозирования связанной с водным фактором вирусной заболеваемости на более длительный период. Игнорирование этого положения, как показывает реальность, может привести к серьезным осложнениям эпидемической обстановки. Именно такая ситуация возникла в июле-ноябре 1997 года в г. Гомеле, где попадание энтеровирусов в питьевую воду осталось незамеченным вследствие несовершенства осуществляемого контроля ее качества. Как показали проведенные там санитарно-вирусологические и эпидемиологические исследования, энтеровирусное загрязнение питьевой воды стало основной причиной возникновения крупной вспышки серьезного менингита, охватившей более 600 человек.

Доминирующим эпидемическим штаммом оказался вирус ECHO-30, который был выделен из клинического материала больных, а также из питьевой воды в очагах инфекции, что подтвердило этиологическую роль водного фактора при данном заболевании. Проведенные далее углубленные санитарно-вирусологические исследования позволили установить присутствие ECHO-30 наряду с другими реже обнаруживаемыми энтеровирусами (ECHO-2, -12, -16, Коксаки В2, Коксаки А23) как в воде распределительной сети, так и в воде водоисточников. При этом вирусное загрязнение обнаруживалось не только в питьевой воде, поступающей после очистки из речного водозабора, но и в воде, подаваемой из головных сооружений трех подземных водозаборов. Степень вирусной контаминации питьевой воды коррелировала с уровнем заболеваемости серозным менингитом и была максимальной в августе (85,7%), что явилось пиком вспышки.

В связи с вышеизложенным решение проблемы загрязнения воды диктует необходимость совершенствования технологий водоочиски, повышения санитарно-технического уровня эксплуатации систем водоснабжения, а также дальнейшей разработки нормативно-методической базы.

Т. В. АМФРОСЬЕВА, А. Д. ГУРИНОВИЧ, П. А. АМВРОСЬЕВ

Гигиеническая оценка питьевой воды

Содержание химических веществ в водных объектах хозяйственно-питьевого водопользования нормируется в соответствии со следующими принципами: химические вещества не должны придавать воде посторонних запахов и привкусов, изменять ее цвет, вызывать появление пены, т.е. ухудшать ее органолептические свойства и потребительские качества; оказывать неблагоприятное воздействие на организм человека и процессы самоочищения (санитарный режим) водоемов.

Нормирование содержания химических и радиоактивных веществ в окружающей среде, в том числе и в воде, базируется на принципе пороговости, т.е. в пределах определенных доз (концентраций) присутствие этих веществ считают безопасным (безвредным) для организма. При этом обязательно должны учитываться возможные отдаленные последствия.

В СанПиН 2.1.4.1074-01 нормативы состава питьевой воды учитывают не те ингредиенты, которые должны в ней присутствовать, а, наоборот, вещества, присутствие которых в воде нежелательно и допустимо лишь в определенных пределах.

Следует отметить, что приведенная в документе совокупность гигиенических нормативов являет собой не эталон качества питьевой воды, а федеральный банк данных, который используется при создании программы контроля качества питьевой воды конкретного водопровода. При этом принимается принцип регионального подхода к регламентации состава питьевой воды.

Для России с ее громадной территорией, разнообразием санитарных ситуаций, зависящих от региональных природных и социально-экономических условий, региональный подход особенно важен. Он позволяет на каждом водопроводе создать такую рабочую программу контроля, которая будет отражать реальный состав воды этого водопровода.

Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения

В СанПиН 2.1.4.1074-01 представлены нормативы бактериологических, химических и органолептических показателей качества воды.

Безопасность питьевой воды в эпидемическом отношении определяется ее соответствием микробиологическим и паразитологическим нормативам.

В качестве основного теста (первого показателя эпидемической безопасности воды) выбрано определение термотолерантных кишечных палочек, по многим признакам наиболее близких к истинной кишечной палочке — Escherichia coli. Термотолерантные кишечные палочки, кроме роста на среде Эндо и ферментации лактозы, способны переносить температуру инкубации 43-44 С.

Присутствие в воде термотолерантных кишечных палочек является верным признаком свежего фекального загрязнения и, следовательно, эпидемической опасности воды.

Есть данные, что общие колиформы могут размножаться на дефектных стенках резервуаров чистой воды, труб распределительной сети при нарушении режимов их эксплуатации, в сальниках центробежных насосов.

Особенно важен тест на общие колиформы для оценки безопасности воды после хлорирования, когда свежее фекальное загрязнение исключено.

Отсутствие общих и термотолерантных колиформных бактерий, определяемых по лактозному и температурному признакам, в 100 мл питьевой воды — основной критерий эпидемической безопасности воды.

Третий показатель эпидемической безопасности воды — общее микробное число (ОМЧ). Под ним понимают количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (не более 50 в 1 мл). Этот показатель используется для контроля эффективности обработки воды на очистных сооружениях водопровода и должен рассматриваться в динамике.

Четвертый показатель эпидемической безопасности — колифаги — вирусы Escherichia coli, постоянно присутствующие в местах обитания кишечной палочки во внешней среде. Колифаги по биологическому происхождению, размерам, строению, свойствам, механизму репликации наиболее близки к кишечным вирусам, но более устойчивы к факторам окружающей среды, чем патогенные для человека вирусы. Колифаги введены в СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода.

Пятый показатель эпидемической безопасности воды — споры сульфитредуцирующих клостридий, которые являются косвенным показателем освобождения воды в процессе, ее очистки (фильтрации) от устойчивых к обеззараживанию кишечных вирусов и паразитарных простейших. Клостридии определяют в воде из поверхностных источников для оценки эффективности обработки воды. Определение сульфитредуцирующих клостридий в воде распределительных сетей водопровода нецелесообразно. Данные показатели не должны обнаруживаться в пробе обработанной питьевой воды объемом 20 мл.

Для контроля безопасности питьевой воды в паразитарном отношении в СанПиН введено определение цисты лямблий. В норме они должны отсутствовать в пробе воды объемом 50 л при прямом микроскопировании после фильтрации через мембранный фильтр.

Приоритетность микробиологических критериев безопасности перед химическими обусловлена тем, что химическое загрязнение питьевой воды может вызвать нарушение здоровья человека, но популяционный риск химического загрязнения во много раз меньше, чем микробиологического.

Безопасность химического состава питьевой воды определяется ее соответствием нормативам по содержанию:
- обобщенных показателей3: водородного значения рН (6-9); общей минерализации (сухого остатка) — 1 000 мг/л; жесткости общей (7,0 ммоль/л); перманганатной окисляемости по кислороду (5,0 мг/л); содержания нефтепродуктов (0,1 мг/л), поверхностно-активных веществ — ПАВ (0,5 мг/л); фенольного индекса (0,25 мг/л);
- вредных химических веществ, поступающих и образующихся в воде в процессе ее обработки в системе водоснабжения;
- вредных химических веществ, поступающих в источники водоснабжения в результате хозяйственной деятельности человека. Этот список включает нормативы более чем для 1000 ингредиентов воды.

Радиационная безопасность воды оценивается по общей альфа-радиоактивности не более 0,1 Бк/л и бета-активности не более 1,0 Бк/л. При превышении нормативов общей активности питьевой воды необходимо определить радионуклиды и измерить индивидуальные уровни их радиоактивности.

Цветность, под которой понимают окрашенность воды природными гуминовыми соединениями, нормируется на уровне 20° (условных единиц имитационной платиново-кобальтовой шкалы). Такая цветность не воспринимается потребителем при толщине слоя воды 20 см (обычный слой воды в кастрюле, графине и т.п.).

Аннотация научной статьи по биотехнологиям в медицине, автор научной работы — Недачин Александр Евгеньевич, Дмитриева Р.А., Доскина Т.В., Долгин В.А.

В работе представлены данные литературы и собственных исследований по проблеме индикаторов и маркеров вирусного загрязнения воды. Обсуждается возможность использования в качестве индикаторов вирусного загрязнения воды следующих показателей: колиформные бактерии, клостридии, мутность воды, колифаги, вирусные антигены, РНК и ДНК вирусов , определяемые в ПЦР. Установлено, что на сегодняшний день наиболее адекватными показателями вирусного загрязнения воды являются колифаги и РНК, и ДНК вирусов , которые должны использоваться в практике санитарно-вирусологического контроля водных объектов.

The Illustrative value of separate indices and markers for viral contamination of water

In the work there are presented the data of literature and our own research on the issue of indices and markers of viral contamination of water. There is discussed the possibility of the use as indices of viral contamination of water following indices: coliform bacteria, clostridium, water turbidity, coliphages, viral antigens, viral RNA and DNA, determined by PCR. For the present day coliphages and viral RNA and DNA established to be the most appropriate indices of viral contamination of water and be used in the practice of sanitary and virological monitoring of water bodies.

9. СП 3.1.2. 2626-10. Профилактика легионеллеза: санитарно-эпидемиологические правила. М.: МЗ РФ; 2010.

10. СНиП 41-01-2003. Отопление, вентиляция и кондиционирование воздуха: строительные нормы и правила. М.: Госстрой России; 2012.

11. ГОСТ 26670-91. Методы культивирования микроорганизмов. М.: Комитет стандартизации и метрологии СССР; 1991.

12. Методические рекомендации. Биохимическая активность родов Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Hafnia. Харьков: Харьковская медицинская академия последипломного образования; 2002.

13. ГОСТ Р ИСО 16000-1-2007. Воздух замкнутых помещений. Отбор проб. Общие положения. М.: Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии; 2007.

16. Тихомиров В.К., Павловский Г.М., Тарасенко В.М. Экспериментальное сравнение методов отбора проб воздуха в санитарно-гигиенических исследованиях при бактериологических исследованиях. Гигиена и санитария. 1986; 4: 68-70.

1. SNiP 23-02-2003. Thermal protection of buildings: building codes. Moscow: upravlenie tekhnicheskogo normirovaniya, stan-dartizatsii i sertifikatsii v stroitel'stve i ZhKKh Gosstroya Rossii; 2003. (in Russian)

2. Kozulya S.V., Pavlenko A.L., Akimenko V.Ya., Atlanderova I.V., Seitova R.S., Moskvina G.N. Justification of the necessary multiplicity of cleaning and disinfection of split systems. Dezinfekt-sionnoe delo. 2014; 1: 47-52. (in Russian)

3. Kolyada V.V. Air Conditioning. The Principles of Operation, Installation, Maintenance. Recommendations for Repair. [Kon-ditsionery. Printsip raboty, montazh, ustanovka, ekspluatatsiya. Rekomendatsii po remontu]. Moscow: SOLON-Press; 2002. (in Russian)

4. Akimenko V. Ya. Improving the sanitary and epidemiological criteria evaluation of chemical contamination of indoor air of residential and public buildings. Dovkillya ta zdorov'ya. 2011; 2: 26 - 33. (in Ukrainian)

5. Nesvizhskaya I.I., Gritsay I.M. Physical methods of disinfection of air. In: Materials of Conference "Recent Issues of Complex Works Disinfection and Disinfestation Facilities for Transport" [Materialy konferentsii "Aktual'ni pitannya zdiysnennya kom-pleksu robit z dezinfektsii, dezinsektsii, deratizatsii na ob'ektakh transportu"]. Khar'kov; 2010. (in Russian)

6. Gvelesiani G.A. Cleaning and disinfection of ventilation systems and air conditioners. Sanepidemkontrol'. 2009; 4: 55-6. (in Russian)

7. Dvoryanov V.V. Sanitary evaluation of HVAC systems of public buildings. Gigiena i sanitariya. 2012; 1: 16 - 9. (in Russian)

8. Order CGSEN in Moscow from 12.08.2004 №107. On the organization of control over cleaning and disinfection of ventilation and air-conditioning. Moscow: MZ RF; 2004. (in Russian)

9. SP 3.1.2. 2626-10. Prevention of Legionnaires' disease: the sanitary-epidemiological rules. Moscow: MZ RF; 2010. (in Russian)

10. SNIP 41-01-2003. Heating, ventilation and air conditioning: building codes. Moscow: Gosstroy Rossii; 2012. (in Russian)

11. GOST26670-91. Methods of cultivation of microorganisms. Moscow: Komitet standartizatsii i metrologii SSSR; 1991. (in Russian)

12. Guidelines. Biochemical Activity birth Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Hafnia [Metodicheskie rekomendatsii. Biokhimi-cheskaya aktivnost' rodov Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Hafnia]. Khar'kov: Khar'kovskaya meditsinskaya akademiya poslediplomnogo obrazovaniya; 2002. (in Russian)

13. GOST R ISO 16000-1-2007. Indoor air. Sampling. General. Moscow: Federal'noe agentstvo po tekhnicheskomu reguliro-vaniyu i metrologii; 2007. (in Russian)

14. Directory "Pharmaceutical Activities in the Republic of Uzbekistan"[Spravochnik "Farmatsevticheskaya deyatel'nost'v Respublike Uzbekistan"]. Tashkent: Izdatel'stvo imeni Abu Ali ibn Siny; 2003. (in Russian)

15. Franciskovic I., Bastian I., Marchesi V.V., Rukavina T. Lung Klebsiella pneumonia infection in anti-LPS protected and unprotected mice - Survival, bacterial load and histopathological differences. Eur. J. Med. Res. 2007; 12: 67.

16. Tikhomirov V.K., Pavlovskiy G.M., Tarasenko V.M. Experimental comparison of sampling air in the sanitary research at bacteriological research. Gigiena i sanitariya. 1986; 4: 68-70. (in Russian)

О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 613.777-078

Недачин А.Е., Дмитриева Р.А., Доскина Т.В., Долгин В.А.

ПОКАЗАТЕЛЬНОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ ИНДИКАТОРОВ И МАРКЕРОВ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ВОДЫ

В работе представлены данные литературы и собственных исследований по проблеме индикаторов и маркеров вирусного загрязнения воды. Обсуждается возможность использования в качестве индикаторов вирусного загрязнения воды следующих показателей: колиформные бактерии, клостридии, мутность воды, коли-фаги, вирусные антигены, РНК и ДНК вирусов, определяемые в ПЦР. Установлено, что на сегодняшний день наиболее адекватными показателями вирусного загрязнения воды являются колифаги и РНК, и ДНК вирусов, которые должны использоваться в практике санитарно-вирусологического контроля водных объектов.

К л юче вые слова : вирусы; индикаторы; маркеры; вирусное загрязнение; санитарно-вирусологический контроль.

Для цитирования: Гигиена и санитария. 2015; 94 (6): 54-58.

Nedachin A.E., Dmitrieva R.A., Doskina T. V., Dolgin V.A. THE ILLUSTRATIVE VALUE OF SEPARATE INDICES AND MARKERS FOR VIRAL CONTAMINATION OF WATER

A.N. Sysin Research Institute for Human Ecology and Environmental Health, Moscow, Russian Federation, 119991

In the work there are presented the data of literature and our own research on the issue of indices and markers of viral

contamination of water. There is discussed the possibility of the use as indices of viral contamination of water following

indices: coliform bacteria, clostridium, water turbidity, coliphages, viral antigens, viral RNA and DNA, determined by

PCR. For the present day coliphages and viral RNA and DNA established to be the most appropriate indices of viral

contamination of water and be used in the practice of sanitary and virological monitoring of water bodies.

Key w ords : viruses; indicaotors; markers; viral contamination; sanitary virological control.

For citation: Gigiena i Sanitariya. 2015; 94(6): 54-58. (In Russ.)

For correspondence: Nedachin Aleksandr E., microblab@list.ru

Вопросы обеспечения эпидемической безопасности хозяйственно-питьевого водопользования в настоящее время крайне актуальны. Постоянно регистрируемые вспышки кишечных вирусных инфекций (вирусные гепатиты, энтеровирусные менингиты, рота-, астро- и норовирусные гастроэнтериты и др.), распространяющиеся водным путем свидетельствуют о необходимости совершенствования санитарно-вирусологического контроля воды различного вида водопользования [3].

Принятая в нашей стране и в международной практике система рутинного санитарно-микробиологиче-ского контроля воды основана на использовании индикаторных микроорганизмов, способных в той или иной степени адекватно отражать потенциальную опасность возникновения эпидемической ситуации в условиях хозяйственно-питьевого водопользования.

В 1970-х годах сформулированы основные требования, предъявляемые к индикаторным и санитарно-пока-зательным микроорганизмам:

1) единый с патогенными микроорганизмами источник поступления в окружающую среду;

2) одинаковую с патогенными микроорганизмами устойчивость к факторам окружающей среды и обеззараживающим агентам;

3) количественное преобладание индикаторных микроорганизмов над патогенными;

4) индикаторные микроорганизмы должны иметь устойчивое соотношение с патогенными, чтобы по количеству первых предположить количественное содержание последних;

5) индикаторные микроорганизмы не должны размножаться в окружающей среде;

6) простота и экспрессность методов выделения индикаторных микроорганизмов;

7) непатогенность индикаторных микроорганизмов.

По мере развития науки велась постоянная дискуссия в отношении различных микроорганизмов и показателей, которые можно было бы использовать в качестве индикаторов вирусного загрязнения воды: кишечные палочки, колифаги, клостридии, вирусные антигены и РНК и ДНК вирусов, мутность воды и др. (табл. 1).

Для корреспонденции: Недачин Александр Евгеньевич; microblab@list.ru.

Соответствие различных показателей требованиям,

предъявляемым к индикаторам вирусного загрязнения воды

Индикаторы, показатели, маркеры Соответствие требований индикаторам*

Колиформные бактерии + 0 ± 0 0 + +

Клостридии 0 0 0 0 0 + 0

Антигены капсида вирусов + 0 + + + + +

РНК или ДНК вирусов + 0 + + + + +

Мутность 0 0 0 0 0 + +

Примечание. *) цифры 1-7 соответствуют пунктам требований, предъявляемым к индикаторам; + - отвечает требованиям; - не отвечает требованиям; ± - данные противоречивы.

Как видно из табл. 1, колиформные бактерии, E.coli, не могут выполнять функцию индикаторных микроорганизмов в отношении вирусного загрязнения, так как по данным отечественных и зарубежных ученых, вирусы обладают более высокой устойчивостью по сравнению с бактериями к воздействию химических и физических факторов окружающей среды и обеззараживающим агентам, используемым в практике водоподготовки [2, 12, 13]. В литературе описаны вспышки вирусных гепатитов, связанные с употреблением питьевой воды, стандартной по бактериологическим показателям [13, 15]. Особую актуальность эта проблема представляет для подземных водоисточников, когда кишечные вирусные инфекции (ротавирусные, энтеровирусные, вирусы гепатитов А и Е и др.) возникали при употреблении воды из этих водоисточников, причем вода в них отвечала стандартам качества по бактериологическим показателям. Так, H.J. Randall [19] при исследовании 48 проб воды, стандартных по бактериологическим показателям, было установлено, что 50% этих проб в ПЦР были положительными в отношении вирусов. Ранее нами также было показано, что во время вспышки вирусного гепатита А в Подмосковье подземные воды, стандартные по бактериологическим показателям, содержали РНК вируса гепатита А.

Дискуссионным является вопрос о возможности внедрения в рутинный санитарно-вирусологический контроль в качестве индикаторного микроорганизма клостридий [17]. В отличие от колиформных бактерий клостридии обладают более высокой устойчивостью по сравнению с кишечными вирусами к различным факторам и средствам обработки воды. В связи с этим для обеззараживания воды требуется применение значительно более высоких доз хлора, озона и других де-зинфектантов, что может способствовать резкому повышению образования тригалометанов, галоформных соединений, свободных радикалов, альдегидов и т. п., оказывающих неблагоприятное влияние на здоровье населения и вызывающих отдаленные биологические эффекты. Кроме того, клостридии не отвечают требованиям, предъявляемым к индикаторным микроорганизмам и по многим другим параметрам (см. табл. 1).

В качестве альтернативы бактериальным индикаторам для контроля вирусного загрязнения воды в нашей стране научно обосновано использование колифагов [5, 7, 9, 10]. С 1981 г. колифаги регулярно включаются в различные документы водно-санитарного законода-

тельства в качестве индикаторов вирусного загрязнения воды. С изменением регламента на питьевую воду в РФ с 1996 г. [11] нормируемая группа колифагов расширена и включает определение в воде как соматических, так и РНК-содержащих колифагов, что повышает надежность санитарно-вирусологического контроля. По мнению ряда зарубежных ученых [14, 16], наиболее адекватно отражают ситуацию в отношении вирусного загрязнения воды три группы бактериофагов: соматические ко-лифаги, F-специфические бактериофаги и бактериофаги Bacteroides fragШs. С 2012 г. бактериофаги, так же как и прямое обнаружение вирусов в воде, включены в рекомендации ВОЗ по контролю качества воды в отношении вирусного загрязнения.

Однако бактериофаги, также как и любой индикатор, не являются абсолютными показателями вирусного загрязнения. В связи с этим до настоящего времени ведется поиск более адекватных показателей.

В 1970-х годах широкое развитие получило использование прямого определения вирусных антигенов определяемых радиоиммунным (РИА) и иммунофер-ментным методами (ИФА). Эти методы, особенно ИФА, широко используют в клинической практике для определения антигенов вирусов гепатитов А и В, ротавирусов и других вирусов в фекалиях, слюне и других клинических материалах. Исследования по совершенствованию ИФА в направлении повышения экспрессности, чувствительности, специфичности и эффективности позволили использовать этот метод для определения вирусов в сточных водах. С внедрением иммуноферментного анализа (ИФА) в практику контроля вирусного загрязнения воды появилась возможность использовать его для определения антигенов различных вирусов, циркулирующих в воде. Особенно это актуально для вирусов, не культивируемых или трудно культивируемых на клеточных культурах (вирус гепатита А, ротавирусы и др.), что позволило расширить возможности санитарно-вирусо-логического контроля. Недостатком иммуноферментно-го метода является: 1) низкий порог чувствительности [6]; 2) метод позволяет выявлять антиген не только инфекционного, но и инактивированного вируса (например, после обеззараживания воды), который не имеет эпидемического значения; 3) метод часто дает ложнопо-ложительные результаты. Все это создает определенные трудности в трактовке полученных результатов и определении степени безопасности воды в отношении вирусного загрязнения. Тем не менее использование ИФА возможно в качестве скринингового метода, особенно для сточных вод, не подвергавшихся обеззараживанию, тем более что результаты исследований с использованием ИФА в большинстве случаев достоверно коррелируют с заболеваемостью населения гепатитом А и острыми кишечными инфекциями неустановленной этиологии на изучаемых территориях, а также с обнаружением колифагов и энтеровирусов в воде [8].

С развитием молекулярных методов исследования появилась возможность в качестве маркеров вирусного загрязнения использовать РНК или ДНК вирусов, которые фактически представляют генетическую структуру вириона. В отличие от колифагов, обнаружение которых в воде свидетельствует о возможном присутствии в ней вирусов, РНК и ДНК вирусов показывают наличие определенных вирусов в воде. В настоящее время в клинической вирусологии и санитарной практике за рубежом широко используют полимеразно-цепную реакция (ПЦР), которая с 1990-х годов применялась также

нами для анализа проб воды при санитарно-вирусоло-гическом мониторинге различных водных объектов. Как показали исследования, чувствительность ОТ-ПЦР при определении РНК вирусов в воде в тысячу раз выше по сравнению в ИФА и позволяет быстро (в течение 12-24 ч) обнаружить в исследуемом материале вирусную РНК, а также обладает высокой специфичностью, что чрезвычайно важно, учитывая низкую концентрацию вирусов в воде [1, 6]. К сожалению, при использовании ПЦР определяется РНК или ДНК как живого, так и инактивированного вируса. РНК и ДНК вирусов, также как и антиген, обладают более высокой устойчивостью к обеззараживающим агентам по сравнению с живым вирусом.

Тем не менее, учитывая более высокую чувствительность и специфичность метода, ПЦР в настоящее время широко используют в санитарно-вирусологи-ческой практике во всем мире. Параллельно проводятся исследования по поиску методов определения РНК только живых вирусов. Рядом исследователей было предложено использовать метод ПЦР, интегрированный с клеточными культурами (ИКК ОТ-ПЦР), для первоначального инфицирования последних и последующего определения (через 2 сут) в них РНК или ДНК вирусов. ИКК ОТ-ПЦР обладает высокой чувствительностью, позволяет определять живой вирус, сократить сроки проведения анализа до 3 сут и менее в условиях реального времени. Этот метод в России регламентирован водно-санитарным законодательством (МУК 4.2.2029-05 и МУК 4.3.2030-05), используют его при расшифровке случаев вспышечной заболеваемости кишечными вирусными инфекциями. Однако в повседневной практике он не получил широкого развития, так как не все эпидемически значимые вирусы могут культивироваться в перевиваемых культурах, а также в связи с определенными трудностями работы с клеточными культурами. Поэтому поиски наиболее простых и доступных методов определения живых и инактиви-рованных вирусов в ОТ-ПЦР продолжаются. Так, 8. Ра^Ыошгаг и соавт. [18] предложили для этих целей использовать Propidium мonoazide, который в настоящее время применяют для выявления жизнеспособных и нежизнеспособных бактерий, грибов, цист лямблий. Разработка этого метода является весьма перспективной для последующего внедрения в практику санитар-но-вирусологического контроля водных объектов в качестве основного маркера вирусного загрязнения воды.

Несмотря на трудности, возникающие при разграничении живых и инактивированных вирусов, метод ПЦР и ОТ-ПЦР очень эффективен и широко используется в настоящее время как за рубежом, так и в нашей стране. В табл. 2 приведены выборочные данные собственных исследований по определению колифагов и РНК в ОТ-ПЦР в различных водах.

Как видно в табл. 2, в сточных водах постоянно определяются колифаги и РНК, и ДНК различных вирусов, как правило, циркулирующих на исследуемой территории. Например, РНК ВГА определялась в сточных водах (пробы 14 и 17) на территории, неблагополучной по вирусному гепатиту А. Чаще всего в сточных водах определяют нуклеиновые кислоты энтеро-, астро- и норовирусов. Две последние группы вирусов являются возбудителями гастроэнтеритов, часто регистрируемых на всех территориях. Что касается более чистых вод (вода из рек, водохранилищ, прудов), то колифаги, РНК и ДНК вирусов встречаются реже. Чаще всего -

Санитарно-вирусологическая характеристика различных вод

Читайте также: