Выделение вируса гриппа набор

• Форма выпуска: вариант 1: индивидуальная упаковка / 1 исследование; вариант 2: набор / 10 исследований
• Назначение: тест иммунохроматографический для выявления вирусов гриппа А и В в респираторных выделениях

Инструкция по применению

Регистрационное удостоверение: №ФСР 2012/13624 от 29.06.2012

Возбудителем гриппа является вирус, который поражает, главным образом, верхние дыхательные пути – нос, горло, бронхи, реже – лёгкие. Заболевание обычно длится одну-две недели и характеризуется высокой температурой, миалгией, головной болью, недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и ринитом.

Для детей, пожилых людей и людей, страдающих заболеваниями лёгких, почек, сердца, диабетом, раком, грипп представляет серьёзную опасность. Эта инфекция может вызвать осложнения основных заболеваний, пневмонию и смерть.

Заболевание человека вызывают, как правило, два типа гриппа – тип А (подтипы H3N2 и H1N1) и тип В. Причиной смертей от гриппа чаще всего является вирус А подтипа H3N2.

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце вируса гриппа А и/или вируса гриппа В они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А и специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа B, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В соответствующих аналитических зонах тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А и/или вируса гриппа В, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенных иммунных комплексов.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале вируса гриппа А и/или вируса гриппа В.

В том случае, если в анализируемом образце присутствует вирус гриппа А и вирус гриппа В, на тест-полоске образуются три параллельные окрашенные линии (красная и синяя аналитические, обозначенные буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа по вирусам обоих типов. В случае отсутствия в анализируемом образце вируса гриппа А и вируса гриппа В на тест-полоске образуется одна зелёная контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа по вирусам обоих типов.

Кассеты с тест-полосками и одноразовые пластиковые пипетки упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силика-гелем.

• одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
• часы или таймер.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Свежесобранный биологический материал (респираторные выделения из носовой полости человека), не содержащий консерванты.

Образцы респираторных выделений до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 8 ч.

Перед анализом образцы респираторных выделений должны быть доведены до комнатной температуры.

1. Ввести стерильный ватный тампон на зонде приблизительно на 3 см в одну ноздрю и, вращая его, взять мазок со стенок носового хода (рис. 1-1).

2. Внести в одноразовую пластиковую пробирку из флакона с крышкой-капельницей 15 капель буфера для растворения образца (рис. 1-2).

1. Взять мазок со стенок носового хода	2. Внести 15 капель раствора для образца	3. Вращать тампон в пробирке, выжать жидкость

3. Поместить тампон с образцом в пробирку, смыть образец, вращая тампон по стенкам пробирки минимум 10 раз. Выдавить жидкость из тампона, сдавливая его стенками пробирки (рис. 1-3). Выбросить тампон.

1	2

6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа по обоим типам вируса, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце респираторных выделений вирусов гриппа А и В (рис. 3-1).

Выявление в тестовом окошке кассеты трёх параллельных окрашенных линий (зеленой, красной и синей) свидетельствует о положительном результате анализа по обоим типам вируса, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вирусов гриппа А и В (рис. 3-2). Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (зеленой и красной) свидетельствует о положительном результате анализа по вирусу гриппа А, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вируса гриппа А и отсутствие вируса гриппа В (рис. 3-3). Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (зеленой и синей) свидетельствует о положительном результате анализа по вирусу гриппа В, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вируса гриппа В и отсутствие вируса гриппа А (рис. 3-4). Интенсивность окраски красной и синей аналитических линии может меняться в зависимости от концентраций, соответственно, вируса гриппа А и вируса гриппа В в образце.

Таблица 106 - Обозначения серотипов вируса гриппа А птиц

Таблица 105 - Номенклатура субъединиц вирусов гриппа рода А

Согласно Международной номенклатуре любой штамм вируса гриппа рода А обознача­ется по следующей схеме: род/источник изоляции/место изоляции/ собственный номер изолята/год изоляции/формула вида - серотипы ГА и нейраминидазы. Для штаммов, изолиро­ванных от человека, источник изоляции не пишется; для всех других штаммов год изоляции обозначается 2-мя последними цифрами. Семейство ортомиксовирусов (от греч. orthos -правильный, прямой и mуха - слизь) включает три рода: вирусы гриппа А и В, вирусы гриппа С и тоготоподобные вирусы.

Типичным представителем рода вирусов гриппа А и В является вирус гриппа A/PR/8/34(H1N1). Вирионы представляют собой частицы плеоморфной, чаще округлой формы, диаметром 80-120 нм. Они состоят из фрагментированного нуклеокапсида спираль­ной симметрии диаметром 9-15 нм и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной 10,0-13,5 нм. Мол. м. вирионов 250 МД,

Геном состоит из 8-и неодинаковых по размеру (900-2350 нуклеотидов) фрагментов 1-спиральной минус-РНК. Вирионная РНК ортомиксовирусов не об­ладает инфекционностью. В вирионах обнаружено 7 белков, 4 из которых (РВ1, РВ2, РА, NP) связаны с нуклеокапсидом, а 3 (НА, NA, Ml) входят в состав липопротеидной оболоч­ки, причем 2 из них (НА и NA) являются гликопротеинами. Гликопротеины образуют 2 ви­да выступов наружной оболочки вирионов. Выступы 1-го вида образованы гемагглютинином (НА) с мол.м. 75-80 кД (около 500 а.к.). Каждый выступ состоит из 3-х молекул НА, ко­торые организованы в палочкообразную структуру. Каждая молекула НА в свою очередь состоит из 2-х субъединиц (НА 1-330 а.к., НА 2-22 - а.к.), соединенных дисульфидной свя­зью. НА ответственен за адсорбцию и проникновение вирионов в клетку и ГА-активность вируса. AT к НА нейтрализуют инфекционность вируса и подавляют его ГА-активность. Выступы 2-го типа образованы нейраминидазой (NA) с мол.м. 60-70 кД (450-470 а.к.). Все подтипы НА и NA вируса гриппа А обозначают последовательными номерами независимо от происхождения вируса. Установ­лено 14 АГ подтипов по НА и 9 подтипов по NA. Вирус гриппа В не под­разделяют на АГ подтипы. Синтез вирусспецифических белков происходит в цитоплазме клетки.

В естественных условиях вирус гриппа А поражает человека, свиней, лошадей и птиц, а вирус гриппа В - только человека. Передаются вирусы аэрогенным путем.

Типичный представитель рода вирусов гриппа С - вирус гриппа C/Taylor/1233/47. Вирус гриппа С обнаружен у человека и свиней.

В состав рода тоготоподобные вирусы входят вирусы Тогото (прототипный вирус) и Дори, переносимые клещами и иногда поражающие человека. Морфологически они сходны с другими ортомиксовирусами и содержат 6-7 фрагментов 1-спиральной минус-РНК.

Грипп кур (классическая чума птиц, грипп птиц А1, подтип 7, экссудативный тиф) - острая контагиозная вирусная болезнь, характеризую­щаяся общим угнетением, отеками, поражением органов дыхания и пищеварения.

В настоящее время грипп птиц в форме КЧП регистрируется редко. Чаще инфекция проявляется эпизоотическими вспышками, вызываемыми штаммами других АГ подтипов с более низкой, чем вирус КЧП, патогенностью. Такие вспышки зарегистрированы в США, Италии, Англии, ФРГ, СССР и других странах. Вирусы гриппа птиц (ВГП) выделены от кур, индюков, уток, перепёлок, фазанов, глухарей, длиннохвостых попугаев, цесарок и др.

Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время вирусы гриппа А птиц на основании их поверхностных АГ - ГА (Н) и нейраминидазы (N) - разделены на 13 по Н-АГ и 9 вариантов по N-АГ (табл. 106). Штаммоспецифические АГ-связи определяются с по­мощью: РТГА - для определения сходства по ГА; РТНА - для определения сходства или различия по НА; теста двойной диффузии - для определения сходства ГА и НА. У штаммов вируса гриппа А птиц, имеющих АГ характеристику H1N1, выявлено не менее 4 АГ детер­минант нейраминидазы. Четкие различия выявлены также у НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ формулой H3N8, следовательно, НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ харак­теристиками H1N1 и H3N8 имеет на своей поверхности не менее 4-х АГ различных детер­минант: 1 общую для вирусов, имеющих одинаковый сероподтип, 2 - перекрестно реаги­рующих и 1 - штаммоспецифическую.

Серовариант	Наименование штамма	Формула
1.	А/утка/ Ал ьберта/3 5/7 6/	H1N1
2.	А/утка/Германия/ 1215/73	H2N3
3.	А/утка/Украина 1/63	H3N8
4.	А/угка/ЧССР/56	H4N6
5.	А/крачка/Ю . Африка/6 1	H5N3
6.	А/индюк/Массачусетс/3 740/65	H6N2
7.	А/вирус чумы птиц/Росток/34	H7N1
8.	А/утка/Онтарио/б 1 1 8/68	H8N4
9.	А/индюк/Висконсин( 1 /66)	H9N2
10.	А/цыпл енок/Германия/4 9	H10N7
11.	А/Утка/ Англ ия/5 6	H1IN6
12.	А/утка/ Альберта/60/ 1 6	H12N5
13.	А/черноголовый хохотун/ Астрахань/ 142/7	H13N2

Кроме 13 подтипов ГА, все штаммы ВГП содержат в своей структуре НА или птичьего, или человечьего, или лошадиного происхождения. Собственно птичьей НА известно 6 ти­пов, Подтиповая классификация ВГП продолжается и по сегодняшний день, т.к. новые факты выделения их от птиц различных видов регистрируются ежегодно в различных регионах земного шара. В 1971 г. была опубликована номенклатура вирусов гриппа А, рекомендо­ванная группой экспертов ВОЗ. Согласно этой рекомендации каждый штамм обозначается по месту и времени выделения, а в скобках указывается его АГ формула. Эта номенклатура себя оправдала, однако накопившиеся за последние годы данные требуют ее пересмотра В 1980 г. ВОЗ предложила новую номенклатуру ВГП. Предложено обозначать серотипы ГА и НА последовательными номерами, независимо от происхождения вирусов. Таблица эталон­ных штаммов ВГП свидетельствует о том, что изменения нуклеотидной последовательности и, как следствие, замена аминокислотных остатков сопряжено с изменением патогенности вируса гриппа в отношении птиц и КЭ. Так, например, изолят А/индюк/Висконсин/68

(H5N9) ВГП состоит из 2-х популяций вируса, имеющих разные гены NS и вызывающих разные биологические реакции. Анализ АГ свойств методами ИФА и РТГА свидетельствует о родстве внутренних белков "человеческих" и "птичьих" вирусов гриппа и различиях в структуре поверхностного гликопротеина - ГА.

Спектр патогенности в естественных условиях. Он неоднороден и зависит от АГ подтипа. Известны 2 подтипа ВГП; А5 и А7, вызывающих заболевание типа КЧП. Грипп А7 КЧП чаще поражает птиц семейства куриных, менее восприимчивы водоплавающие птицы.

Дикие утки и др. виды водоплавающей птицы также чувствительны даже к самым сла­бопатогенным штаммам ВГП и являются не только переносчиками инфекции, но и резер­вуаром. Сезонные миграции диких птиц вызывают сезонные заболевания болотных птиц.

Из 14 подтипов вируса гриппа А только 3 обнаруживаются у человека (Н1, Н2 и НЗ). Прошло уже 25 лет с тех пор как из человеческой популяции исчез подтип Н2 вируса гриппа. Однако ген ГА Н2 циркулирует среди птичьих штаммов вируса гриппа.

Поставить диагноз на грипп птиц можно путём выделения вируса и идентификации его в РСК, РН и РТГА, а также выявления специфических AT в процессе эпизоотии или по прошествии её (ретроспективная диагностика). В нашей стране биопромышленность выпус­кает 2 диагностических набора:

а) набор специфических АГ и сывороток к ним для диагно­стики гриппа птиц 13-и серотипов;

б) диагностический набор для идентификации вируса НБ и Ш (актуального эпизоотического типа).

Выделение вируса.Взятие и подготовка материала. В качестве вируссодержащего материала используют се­лезёнку, головной мозг, синусы, трахею, лёгкие, воздухоносные мешки, кишечник от боль­ной птицы или свежих трупов. Материал в лабораторию доставляют в замороженном виде в термосе со льдом. Инфекционные титры вируса в назальных смывах бывают максимальны­ми через 2-4 дня после заражения птицы и достигают 10 5 -10 7 ЭИДзо/мл смыва. Изолировать вирусы из клоачных смывов удаётся чаще всего на 5-8-й день после экспериментально­го заражения птицы.

Заражение куриных эмбрионов. Испытуемую суспензию инокулируют 9-10-дн КЭ (не менее 5 на одну пробу) в аллантоисную или амниотическую (лучше) полости общепринятым методом и инкубируют в течение 72 ч. Экстраэмбриональную жидкость каждого эмбриона раздельно проверяют на ГА-активность капельной РГА с 1 %-ной взвесью эритроцитов кур. При отсутствии положительной РГА проводят еще 3-5 слепых пассажей, используя для за­ражения КЭ эмбриональную жидкость предыдущего пассажа. Если титры ГА низкие, про­водят таким же образом еще 2-3 дополнительных пассажа. Проба испытуемого материала считается отрицательной, если в 3-5 слепых пассажах не будет обнаружено ГА и патогенно­го действия вируса (гибели КЭ). При положительной РГА проводят идентификацию выде­ленного вируса.

Заражение культуры клеток. Вирус после 2-5 пассажей хорошо развивается в культуре фибробластов КЭ. ЦПД обыч­но проявляется через 24-48 ч (в зависимости от дозы и адаптации). Присутствие его уста­навливают при помощи РГА и РГАд. Предложен ускоренный метод титрования инфекционности вируса гриппа в культуре клеток путем подсчета гемадсорбирующих клеток. Метод позволяет получить результат через 8 ч после заражения.

Биопроба на цыплятах. Испытуемую суспензию инокулируют цыплятам 2-3-месячного возраста. Летальную инфекцию у цыплят можно вызвать при любом методе заражения (подкожно, внутримышечно, в мозг, конъюнктиву) подтипами А1, А7 и А5. Заражение per os с кормом и водой удается непостоянно, лишь в случае высокой патогенности эпизоотиче­ского изолята гриппа. Зараженные цыплята, как правило, гибнут через 36-72 ч в зависимо­сти от дозы и вирулентности возбудителя.

Индикация и идентификация вируса. Для этой цели широко используют методы ИФ, цитоскопию, биопробу (на птице и КЭ) и серологическую идентификацию. С помощью монАТ можно идентифицировать не только разные группы вирусов (ВГП и ПМВ), но и опре­делять подтипы ВГП и серотипы ПМВ птиц, и даже штаммы внутри одного подтипа, а так­же локализацию компонентов вириона в зараженных клетках (МРВГП - МА клонов 1С6, 5С10, N:2 - МА клоны 303 и т.д.). На основе монАТ можно готовить диагностические пре­параты для выявления АГ и AT в РТГА, НИФ, РСК, ИФА и др. реакциях.

РГА. Для индикации вируса в патологическом материале можно использовать РГА. Надосадочную жидкость после центрифугирования суспензии проб из органов и тканей боль­ной птицы, а также смывов исследуют в капельной или пробирочной РГА с 1%-ной суспен­зией эритроцитов кур или 0,5%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Реакцию учиты­вают через 20 мин и 1 ч. Специфичность определяют в РТГА.

Цитоскопия. Метод заключается в исследовании тканевых элементов в отпечатках, по­лученных со слизистой оболочки верхних дыхательных путей (лучше) и органов. Препараты высушивают и окрашивают одним из методов: по Романовскому, Пигаревскому, Быковско­му и т. п. При окраске по Быковскому и Пигаревскому в цитоплазме клеток при гриппе обычно обнаруживают тельца-включения ярко-красного цвета; при окраске по Романовско­му - фиолетового цвета. Внутриклеточные включения находят не только в клетках цилинд­рического эпителия, но и в цитоплазме макрофагов, лейкоцитов и плоского эпителия. В на­стоящее время этот принцип исследования используется с применением люминесцентной микроскопии.

Метод простого флюорохромирования. На мазки-отпечатки из органов и смывов на­носят 1-2 капли рабочего раствора акридина оранжевого (1:10000), покрывают покровным стеклом и свежий препарат (в течение 10 мин после приготовления) рассматривают в лю­минесцентном микроскопе. Ядра клеток выявляются по изумрудно-зеленому свечению, РНК плазмы клеток - в виде не резко ограниченных гранул красного или оранжевого цвета. В препарате, имеющем вирус гриппа, выявляются включения в виде четко отграниченных яр­ко-красных гранул в цитоплазме клеток.

Грипп - болезнь очень коварная и чревата серьезными осложнениями. Чем раньше установлен диагноз "грипп", тем быстрее и эффективнее его лечение.
От подруги в Москве услышала, что существуют такие тест-полоски, кстати, с ними московские педиатры посешают пациентов. Врачи проводят анализ в случае подозрения на грипп. И назначают соответствующее лечение.

В феврале этого года у дочки слегка поднялась температура, и начался лёгкий кашель. А днём ранее заболел гриппом ребёнок, с которым дочь была в контакте.

При первых же симптомах мы вызвали врача. Всё, что он увидел: лёгкий кашель и температура 38, не повод паниковать. Однако, по моей просьбе он на всякий случай расписал лечение гриппа, если диагноз подтвердится.

Сомнений в том, что это именно грипп было мало, но стоило всё-таки подтвердить диагноз. Мы взорвали весь интернет, обзвонили не одну аптечную сеть, и на другом конце города мужу удалось купить тест-полоски.

Набор для проведения самостоятельного анализа очень прост в использовании.

Инструкция по проведению анализа:

1. Вскрывается стерильная ватная палочка, затем необходимо пошкрябать ей в носике у ребёнка, при этом в инструкции чётко написано, что надо не только слизь но именно с кожи снять то, что сидит непосредственно на слизистой.
2. Ватную палочку с содержимым носа поместить во флакончик со специальным раствором, тщательно перемешать и максимально отдать;
3. 4 капли раствора аккуратно аккуратно накапать в круглое окошко тест-кассеты;
4. Через 10 минут оценить результат:
На упаковке всё хорошо схематично изображено:
- Зеленая полоска - тест сработал;
- Наличие красной полоски говорит о том, что имеется вирус гриппа A;
- Наличие зелёной полоски говорит о том, что присутствует грипп типа B.
- Отсутствие полос вообще - тест недействителен

У нас не с первого раза удалось пошкрябать в носу у дочки, она маленькая и сильно сопротивлялась. Пришлось достать палочку из другого набора. По-этому родителям маленьких детей рекомендую в аптеке взять по запас ещё парочку стерильных палочек.

Тест-полоска показала результат: зелёная и красная полоска, значит вирус гриппа типа А (болели в феврале, к сожалению, фотографию найти не смогла). С одной стороны страшно, с другой стороны мы уже знаем с чем имеем дело, и лечение от врача у нас уже расписано. Зная, что у дочери грипп, я уже не падала в обморок, когда видела на градуснике температуру 40,2. (Днём ранее подруга писала, что у них температура поднималась до 40,7).
Вылечить ребенка от гриппа удалось очень быстро, но иммунитет был убит, после этого болели практически без перерыва.

По неволе пришлось опробовать на одном и том же вирусе разные препарата.
Педиатр назначил ребёнку Тамифлю - мой отзыв об особенностях данного препарата.
Терапевт назначил Арбидол - отзыв о препарате.

Преимущества:
1. Цена. Несмотря на то, что тест дорогой, это дешевле чем в лаборатории и намного дешевле, чем вызвать сотрудника лаборатории на дом;
2. Скорость: результат готов в течении 10 минут;
3. Хорошая инструкция достаточно прост в использовании.

Недостатки:
1. Очень трудно раздобыть: обзвонила очень много аптечных сетей, тест-полос нет, а некоторые даже не знают о существовании таких.

Вывод:
Необходимо иметь такой набор, если в доме есть беременные и дети.
Взрослые и крепкие мужчины от гриппа лежат в бреду, беременным женщинам грипп крайне опасен. Чем раньше начать лечение, тем эффективнее и безболезненно оно пройдёт.

PS когда дочь болела, я была беременна, к счастью, срок позволил пропить "Арбидол" по схеме профилактики при контакте с больным и не заболеть.

PPS Будьте здоровы, берегите себя и близких.

Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы английские

Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
• Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.
• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) и носа не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не закапывать капли/спреи в нос, не жевать жевательную резинку, не курить. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.

Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих "быстрых" диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.

Многие прямые лабораторные тесты, разработанные для идентификации Influenza, основаны на выявлении белковых компонентов наружной оболочки вируса: гемагглютинина (H) и нейраминидазы (N). Эти белки являются основными факторами, определяющими степень болезнетворности вируса, а также используются для диагностики и классификации выявляемого вируса гриппа. Они обладают выраженной изменчивостью (известно 16 разновидностей N и 9 разновидностей H серотипа Influenza A) (чем вызваны ежегодные сезонные вспышки гриппа), а также создает определенные трудности при идентификации вируса гриппа с помощью этих методов. Структурное разнообразие антигенов H и N приводит к тому, что чувствительность большинства прямых лабораторных тестов (таких как прямая иммунофлюоресценция и ELISA) составляет около 65-75 %. Исследование РТ-ПЦР основано на выявлении консервативной последовательности ДНК, общей для разных штаммов вируса гриппа серотипов А и В, что обуславливает максимальную чувствительность этого теста (98-100 %).

В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.

В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.

Идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов. Тем не менее взятие отделяемого носо/ротоглотки для исследования с помощью РТ-ПЦР должно быть произведено не позднее чем через 72-96 часов (оптимально в первые 48-72 часа). Это связано с тем, что интенсивная репликация Influenza при поражении верхних дыхательных путей происходит в течение первых 4 суток заболевания. У пациентов с вовлечением нижних отделов дыхательных путей вирусная нагрузка сохраняется высокой более длительный период. Исследование отделяемого носоглотки и мокроты дает лучшие результаты по сравнению с исследованием отделяемого ротоглотки.

При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.

Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

• острой респираторной вирусной инфекции (внезапное острое начало болезни, лихорадка, боль в горле, боль в мышцах, головная боль, светобоязнь, сухой кашель, боль в грудной клетке, одышка);
• острой энцефалопатии в период эпидемии гриппа (судороги, атаксия, нарушение сознания).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

• отсутствие Influenza-ассоциированной инфекции.



• Положительный результат исследования не означает, что пациент остается заразным для окружающих.
• Анализ не позволяет выявлять Influenza серотипа С.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

• Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
• Wang R, Taubenberger JK. Methods for molecular surveillance of influenza. Expert Rev Anti Infect Ther. 2010 May;8(5):517-27.
• Schuchat A, Bell BP, Redd SC. The science behind preparing and responding to pandemic influenza: the lessons and limits of science. Clin Infect Dis. 2011 Jan 1;52 Suppl 1:S8-12.
• Pregliasco F, Mensi C, Camorali L, Anselmi G. Comparison of RT-PCR with other diagnostic assays for rapid detection of influenza viruses. J Med Virol. 1998 Oct;56(2):168-73.
• WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.