Высокопатогенные штаммы вируса гриппа

Грипп птиц — (Grippus avium; высокопатогенный грипп птиц, классическая чума птиц, грипп кур А, экссудативный тиф, голландская чума кур) — высококонтагиозное, остро протекающее вирусное, поражающее сельскохозяйственных, синантропных и диких птиц заболевание с поражением респираторного и желудочно-кишечного трактов.

Грипп птиц способен протекать в форме эпизоотий, вызывая массовый охват поголовья и имея широкое распространение-район, область, страна.

Историческая справка. Заболевание впервые было описано в Италии в 1880г. Перрончито, который отдифференцировал его от холеры птиц и назвал экссудативным тифом кур. Наиболее сильная эпизоотия произошла в 1925г. на севере страны, во время которой погибло 200 000 кур. В дальнейшем заболевание распространилось на Австрию, Германию, Швецию, Чехословакию и Румынию. Болезнь встречалась в странах Азии, Южной и Северной Америки, Африки. В Россию впервые грипп был занесен в 1902г. Вирусная природа вируса была установлена итальянским ученым Гентании в 1902г.

Экономический ущерб от гриппа птиц чрезвычайно велик и связан с массовой гибелью заболевшей птицы, затратами при проведение жестких карантинных и ветеринарно-санитарных мероприятий, включая уничтожение больной птицы. К примеру панзоотия птичьего гриппа в мире в 2005году нанесла материальный ущерб, который оценивается в 4млр. евро.

Возбудитель болезни – РНК-содержащий вирус относится к семейству ортомиксовирусов, который подразделяется на три серологических типа: А,В и С. Вирусы типа А вызывают заболевание у животных и человека. Величина вирусных частиц 80-120нµ. Вирусы гриппа на основании типирования по основным антигенам (поверхностным белкам) -гемагглютинину (Н) и нейраминидазе (N) классифицируются соответственно на 15 и 7 субтипов. Все они имеют определенное родство, но у разных видов животных заболевания вызывают различные серотипы. Для птиц наиболее патогенны вирусы подтипов Н5 и Н7, имеющие молекулярно-биологические характеристики высокопатогенных вирусов. Наибольшую озабоченность вызывает вирус Н5N1 в связи с его возможной опасностью для человека.
В организме птиц вирус индуцирует выработку вируснейтрализующих и комплементсвязывающих антител.

Устойчивость вируса во внешней среде варьируется в зависимости от серотипа. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, нагреванию и кислой среде (рН 3,0). При температуре 55°С он инактивируется в течение одного часа, при 60° С за 10минут, при 65-70°С- за 2-5 мин. При глубоком замораживании (температура -70°С) в мясе вирус остается вирулентными свыше 300дней. Высушивание субстрата, содержащего вирус, консервирует его.

Обычные дезинфектанты: хлорная известь, гидрооксид натрия, фенол, соляная кислота, карболовая кислота и другие быстро инактивируют вирус.

Эпизоотология. Грипп регистрируется у многих видов домашних и диких птиц. Патогенность вируса не ограничивается только тем видом птиц, от которого он выделен. Вирус подтипа Аj выделен от кур, индеек, голубей, уток, гусей являясь при этом патогенным для кроликов, мышей, морских свинок и человека, у которого в случае возникновения осложнений возникает атипичная пневмония.
Среди диких и домашних птиц могут одновременно циркулировать несколько антигенных разновидностей вируса, свойственным человеку, птицам и домашним животным. Стрессовые реакции, возникающие у птиц во время их длительных перелетов и изменяющиеся климатические условия, приводят к обострению инфекции.

В хозяйствах промышленного типа в появлении заболевания определенную роль играет занос возбудителя инфекции с кормами, оборудованием, инвентарем при этом особую опасность представляет не продезинфицированная мясная и яичная тара.

Первые случаи заболевания, как правило, регистрируются у цыплят и взрослой ослабленной птицы на фоне их неполноценного кормления, транспортных перевозок, переуплотненной посадки. Пассажи вируса через ослабленный организм кур повышают его вирулентность и способствуют последующему заболеванию птицы, которая содержится в нормальных условиях.

Вся восприимчивая птица в хозяйстве, обычно переболевает гриппом в течение 30-40 дней. Это объясняется высокой контагиозностью вируса и высокой концентрацией птицы в птичниках.

Источником возбудителя инфекции служит переболевшая птица (в течение 2мес.). Вирус гриппа вызывает заболевание птиц при респираторном, пероральном, интраперитонеальном, подкожном и внутримышечном заражении. В промышленных предприятиях при клеточной системе содержания птицы основное значение в распространение возбудителя имеет аэрогенный путь, а также алиментарный (передача с питьевой водой). Из организма больной птицы вирус выделяется с экскрементами, секретом, пометом, инкубационным яйцом. В разносе вируса гриппа внутри птицеводческого хозяйства могут принимать участие грызуны, кошки и особенно свободно живущая дикая птица, проникающая в птичники или гнездящаяся в них.

Наличие кур-вирусносителей поддерживает эпизоотический очаг в хозяйстве при воспроизводстве новой популяции восприимчивой птицы, которая во время выращивания заболевает и поддерживает стационарное неблагополучие. Заболеваемость птицы варьирует от 80 до 100%, смертность от 10 до 90% в зависимости от вирулентности вируса и условий содержания птицы. В неблагополучных хозяйствах грипп у цыплят и кур часто осложняется возбудителями респираторного микоплазмоза, инфекционного ларинготрахеита, колисептицемией. Взрослая птица в течение 2-х месяцев после переболевания на 40-60% теряет свою яичную продуктивность. Птица после переболевания гриппом частично или полностью теряет иммунитет против болезни Ньюкасла, инфекционного ларинготрахеита, бронхита, оспы.

Патогенез. В зависимости от вирулентности, тропизма вируса, естественной резистентности птицы развивается генерализованная или респираторная форма болезни.

В результате попадания вируса на слизистые оболочки дыхательных путей он начинает активно размножаться и проникает в кровеносную систему. Все это происходит в течение 4-12 часов. Вирус в большом количестве содержится в сыворотке крови, а также в эритроцитах. В развитии болезни принято различать четыре фазы: активного размножения вируса и накопление его в паренхиматозных органах, вирусемия — вирус в эту фазу можно обнаружить в крови, затем начинается процесс синтезирования антител, что свидетельствует о прекращении дальнейшей репродукции вируса. Последняя стадия сопровождается активным образованием антител и формированием у птицы иммунитета.

Исходя из того, что вирус в процессе своей жизнедеятельности выделяет токсические продукты, у птицы в стадии вирусемии происходит интоксикация и гибель птицы. Это обычно происходит при остром течении болезни.

Все высоковирулентные штаммы вируса независимо от принадлежности к тому или иному подтипу вызывают у птицы генерализованную форму инфекции. При гриппе птиц, вызванном подтипом А происходит гипоплазия лимфоидных органов, лимфоцитопения и подавление защитных механизмов, что способствует вирусемии и репликации вируса в клетках различных органов и тканей. Вследствие нарушения порозности стенок кровеносных сосудов и нарушения гемодинамики у больной птицы отмечаются явления геморрагического диатеза.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет 3-5 дней. Грипп может протекать остро, подостро и хронически.
При остром течении — птица отказывается от корма (анорексия), оперение становится взъерошенным, глаза закрытые, голова опущена, куры теряют яйценоскость. Видимые слизистые оболочки гиперемированы и отечны, у отдельной больной птицы из слегка приоткрытого клюва вытекает тягучий слизистый экссудат, носовые отверстия заклеены воспалительным экссудатом.

У некоторых больных кур отмечается отечность лицевой части сережек вследствие застойных явлений и интоксикации организма. Гребень и сережки имеют темно-фиолетовый цвет. Дыхание становится учащенным и хриплым, температура тела поднимается до 44°С, а перед падежом падает до 30°С. Если заболевание у кур вызвано высокопатогенными вирусами гриппа, то как правило 100% кур погибает.

Подострое и хроническое течение гриппа длится от 10 до 25 дней; при этом исход болезни находится в зависимости от резистентности заболевшей птицы. Смертность достигает 5-20%. При данной форме гриппа у больной птицы наряду с респираторными симптомами возникает диарея, помет становится жидким, окрашенным в коричнево-зеленый цвет. Кроме вышеуказанных признаков у больной птицы отмечается атаксия, судороги, некрозы, манежные движения, в предагональную стадию тоникоклонические судороги мышц шеи и крыльев.

В случаях заражения низкопатогенными штаммами возможны случаи хронического течения болезни без выраженных клинических признаков.

Патологоанатомические изменения. В зависимости от течения болезни патологоанатомические изменения варьируют в широких границах. Наиболее типичным для гриппа признаком является картина геморрагического диатеза, сопровождающаяся подкожными отеками в области глотки, гортани, шеи, груди, ног в которых содержится желатинозный экссудат. Данные отеки у птиц возникают в результате нарушения функции органов кровообращения. Отмечаются как массовые, так и единичные кровоизлияния под кожу, в мышцы, в паренхиматозные органы и слизистые оболочки; у кур-несушек – кровоизлияния в яичник и яйцевод.
Постоянными патологоанатомическими признаками гриппы являются гастроэнтерит, бронхит, перикардит, перитонит, аэросакулит, отек легких, застойные явления во внутренних органах.

Особенно характерны для гриппа патологоанатомические изменения в головном мозге: геморрагический менингит, диффузные кровоизлияния, очаги отека в размягчении мозгового вещества.

При гистологическом исследование птиц павших на 3-4-й день болезни, наряду со стазом и геморрагиями находим дегенеративные изменения нейронов и множественные ареактивные некробиотические очажки в сером и белом веществе головного мозга.

Диагноз. На основании эпизоотических особенностей течения болезни, характерных острых клинических признаков респираторной болезни и патологоанатомических изменений можно поставить предположительный диагноз. Для постановки окончательного диагноза необходимо провести комплекс лабораторных вирусологических исследований.

В лабораторию направляют патологический материал (печень, легкие, головной мозг и др.) от птиц павших в острую стадию болезни. Патматериал должен быть свежим, допускается его замораживание до -60°С с целью консервации вируса или сохранение в 50%-ном растворе глицерина. Для серологических исследований от кур берут парные сыворотки крови в различные периоды болезни.

В лаборатории для выделения вируса применяют методы заражения куриных эмбрионов, для идентификации выделенного вируса — РГА, РТГА и РСК. Биологическая проба ставится на цыплятах 60-120-дневного возраста.
Для ретроспективной диагностики используют РТГА, РДП, ИФА и ПЦР.

Диагноз на грипп птиц считают подтвержденным, если:

• выделен и идентифицирован высокопатогенный вирус;
• выделен и идентифицирован любой вирус подтипов Н5 или Н7;
• установлено наличие рибонуклеиновой кислоты (РНК), специфичной для высокопатогенного вируса любого подтипа или РНК вирусов подтипов Н5 или Н7, любого уровня патогенности в пробах патологического материала;
• обнаружены антитела к гемагглютининам подтипов Н5 и Н7, когда достоверно известно, что они не связаны с вакцинацией.

Дифференциальный диагноз. Генерализованную септицемическую форму гриппа дифференцируем от болезни Ньюкасла. Респираторную форму -от инфекционного бронхита, микоплазмоза, ларинготртахеита и других респираторных заболеваний птиц.

Грипп птиц, в отличие от ньюкасловской болезни, поражает все виды птиц в любом возрасте и вызывает выраженные отеки, катарально-геморрагический энтерит. Для респираторной формы гриппа характерно преимущественное поражение верхних дыхательных путей, заболевают все виды птицы, а при инфекционном бронхите — только птица отряда куриных. Для респираторного микоплазмоза кур и инфекционного синусита индеек характерны хроническое течение болезни, отсутствие острых воспалительных процессов и развитие фибринозно-дифтеритического аэросакулита.

Иммунитет и специфическая профилактика. Переболевшая птица приобретает нестерильный иммунитет, который продолжается до 6месяцев. Для профилактики высокопатогенного гриппа птиц в России применяются инактивированные вакцины как самые эпизоотологически безопасные. Для специфической профилактики применяют инактивированную гидроокисьалюминиевую гидроксиламиновую эмбрионвакцину типа А, жидкую и сухую инактивированные вакцины против гриппа птиц. Вакцины вводят внутримышечно, инактивированные –двукратно с интервалом в 14дней. С профилактической целью в угрожаемых хозяйствах прививают только клинически здоровую птицу (кур, уток, индеек). Через 14-21 день после вакцинации птица приобретает напряженный иммунитет длительностью до 6 месяцев.

Для профилактики гриппа необходимо обеспечить до отлета перелетной водоплавающей птицы исключительно подворное содержание птицы в ЛПХ граждан, где при выгульном содержании не исключен контакт с дикой водоплавающей птицей.

Вакцинация птиц, содержащихся в ЛПХ, проживающих в населенных пунктах, вблизи которых расположены гнездопригодные водоемы для диких водоплавающих и околоводных птиц.

Проведение мероприятий по созданию неблагоприятных гнездовых условий для водоплавающих птиц на водоемах вблизи населенных пунктов.
Задачей этих мер является отпугивание птиц от мест гнездования. С этой целью могут применяться технические помехи — установка звуковых и световых ограждений и устройств, укрытие локальных мест гнездования сетями, выкашивание, а также отстрел водоплавающих, околоводных и синантропных птиц на гнездопригодных водоемах.

Срок проведения мероприятий- с момента прилета птиц до завершения периода гнездования (апрель—июнь), а также с момента начала отлета до его завершения (сентябрь—ноябрь).

В случае появления в птицеводческих хозяйствах (на фермах) заболевания птиц гриппом, вызванным высокопатогенными вирусами, утверждают специальную комиссию по борьбе с птичьим гриппом, которая вводит жесткий санитарный режим работы хозяйства; разрабатывает комплекс мер, направленных на ликвидацию и недопущение распространения болезни, которая включает уничтожение переносчиков (перелетной и водоплавающей птицы); решается вопрос о проведении вакцинации в угрожаемых пунктах и зонах; устанавливает сроки санации и комплектования таких хозяйств птицей, исходя из конкретных условий хозяйства; решает вопросы возможной защиты людей от заражения и их вакцинацию против гриппа человека.

Карантин в неблагополучном пункте может быть отменен не ранее 21 суток со дня уничтожения (утилизации) всего восприимчивого поголовья или убоя и переработки условно здоровых птиц, находившихся в неблагополучном пункте и проведения заключительной дезинфекции.
Карантин в организации в которой проводили убой птицы, подозреваемой в заражении гриппом птиц или перерабатывали и хранили продукты и сырье от такой птицы отменяют не ранее 21 суток после окончания переработки мяса птицы и проведения заключительной дезинфекции помещений организации, ее территории, инвентаря, производственного оборудования.

После отмены карантина в течение 3 месяцев для всех владельцев птиц следует ограничивать вывоз инкубационного яйца и живой птицы всех видов и возрастов в другие хозяйства.

Вакцинацию птицепоголовья против гриппа птиц после отмены карантина следует проводить на территории неблагополучного пункта на протяжении того периода времени, пока результатами лабораторного мониторинга не будет подтверждено отсутствие циркуляции вируса среди вакцинированного поголовья.

Мероприятия по защите персонала.

Всем лицам, занятым в проведении специальных мероприятий по ликвидации заболевания птиц гриппом, рекомендуется проходить ежедневный медицинский осмотр.

Для работы с больными птицами специалисты должны быть обеспечены спецодеждой (халатами или комбинезонами, полотенцами, шапочками), сменной обувью, резиновыми перчатками, респираторами, мылом и другими средствами индивидуальной защиты, а также необходимыми инструментами и посудой. По окончанию работы одежду и обувь обеззараживают или уничтожают. После клинического обследования животных или отбора проб патматериала необходимо умыться и вымыть руки с мылом.

Для личной дезинфекции работников, инструментария и посуды используют средства и методы, предписанные для обеззараживания различных объектов, зараженных патогенными микроорганизмами.

К работе с больными птицами не следует допускать лиц, перенесших тяжелые заболевания, имеющих болезни дыхательной системы, лиц в возрасте 65 лет и не достигших 18-летнего возраста, беременных женщин.

Последняя вспышка птичьего гриппа в Германии, Нидерландах и Великобритании заставила поднять несколько вопросов о том, что такое штамм H5N8 и как с ним бороться. Всемирная организация здравоохранения животных (МЭБ) в статье резюмировала актуальные знания о развитии этого высокопатогенного штамма вируса птичьего гриппа.

Что такое птичий грипп?

Вирусы птичьего гриппа могут поражать, хотя и реже, млекопитающих, включая крыс, мышей, ласок, хорьков, свиней, кошек, тигров, собак, лошадей и человека.

В чем смысл характеристики "слабопатогенный" - "высокопатогенный"?

Существует множество штаммов вируса птичьего гриппа, которые обычно подразделяют на две категории в зависимости от тяжести заболевания домашней птицы:

• Слабопатогенный - как правило, при заражении этим гриппом клинические признаки у птиц малозаметны или не проявляются совсем;
• Высокопатогенный - эти вирусы приводят к серьезным клиническим признакам и возможной высокой смертности у птицы.

Различают низко- и высокопатогенный птичий грипп на основе результатов лабораторных испытаний, описанных в Руководстве диагностики МЭБ.

Характеристика вирусов птичьего гриппа по степени тяжести заболевания специфична для домашних и других птиц, но не для других видов (включая человека), восприимчивых к этим вирусам.

Что такое H5N8?

Этот штамм вируса обнаружен в начале 2014 года в Азии в зараженном мясе птицы в Республике Корея, Японии и Китае. В январе 2014 года власти Республики Корея сообщили о первых случаях заболевания птицы, вызванном инфекцией с высокопатогенным штаммом вируса птичьего гриппа H5N8.

Всего тогда было зарегистрировано 29 вспышек, связанных с гусями, курами и утками, было забито около 600 000 птиц - полностью этот очаг был ликвидирован к сентябрю 2014 года.

В сентябре 2014 года страна сообщила о новой вспышке гриппа среди мясных уток. Погибло 1200 птиц, а 19 800 были отобраны для контроля заболевания.

В октябре 2014 Китай сообщил о двух вспышках птичьего гриппа с участием того же штамма вируса - пробы были взяты в рамках национального плана наблюдения за заболеванием.

Ранее вирус H5N8 был обнаружен в Айдахо (США) в 2008 году в виде низкопатогенного птичьего гриппа, а затем шесть лет спустя, в 2014 году в Калифорнии.

Немецкие власти подтвердили вспышку высокопатогенного H5N8 в полузакрытой системе выращивания и откорма индеек на территории Мекленбурга - Передней Померании в начале ноября. Был зарегистрирован один случай; все восприимчивые птицы, в количестве 1731 присутствующие на ферме, были уничтожены.

Девять дней спустя, ветеринарная служба Нидерландов обнаружила вирус на ферме закрытого разведения в Утрехте, где содержалось 150 000 кур. Было подтверждено 1000 случаев заболевания; всех восприимчивых животных в зараженном помещении забили.

Одновременно с этим случаем в Великобритании также был зарегистрирован высокопатогенный вирус H5N8 - в 60-недельном племенном стаде уток. Здесь забито около 6000 птиц.

Эти данные взяты из WAHIS, информационной системы здравоохранения животных МЭБ.

Откуда пришел птичий грипп H5N8?

Специалисты, изучившие часть геномной последовательности вируса, сообщают, что немецкий, голландский и британский случаи тесно связаны с первичной вспышкой H5N8 в Республике Корея. Поиски источника продолжаются.

Дикие птицы могут быть носителями вируса гриппа H5N8?

В пищеварительной и дыхательной системах дикие птицы могут переносить вирус птичьего гриппа, но они обычно не заболевают. Они исторически известны как резервуары и переносчики разных типов вирусов птичьего гриппа. Во всем мире введено наблюдение для мониторинга возникновения и характеристики вирусов птичьего гриппа у диких птиц.

На данный момент вирус птичьего гриппа подтипа H5N8 обнаружен у диких птиц в Китае (на первом месте), Корее (на втором) и Японии (на третьем). Большинство вирусов птичьего гриппа не вызывают заболевания у диких птиц, но очень вероятно, что перелетные птицы в процессе сезонной миграции могут распространять вирус по планете.

Как H5N8 передается и распространяется среди птиц?

Все вирусы птичьего гриппа распространяются среди птиц в результате прямого контакта с выделениями инфицированных птиц, особенно пометом, через загрязненный корм, воду, оборудование, а также переносятся на одежде и обуви человека.

Вирус легко перемещается от фермы к ферме благодаря передвижению между ними живых птиц, людей (особенно на обуви и одежде), загрязненных машин, оборудования, кормов и клеток. Высокопатогенные вирусы могут выживать в окружающей среде долгое время, особенно при низких температурах.

Распространению всех вирусов птичьего гриппа способствуют в том числе: перемещение людей и товаров, рынки живой птицы, некоторые методы агротехники и наличие вируса у перелетных птиц.

Каковы требования к отчетности по гриппу H5N8?

Как указано в Санитарном кодексе МЭБ по наземным животным, обо всех случаях высокопатогенного птичьего гриппа, выявленных у любой домашней или дикой птицы, должно быть сообщено представительству МЭБ в стране.

Низкопатогенные вирусы птичьего гриппа подтипов H5 и H7 у домашних птиц также подлежат регистрации в МЭБ, поскольку эти штаммы легко могут мутировать в высокопатогенные вирусы или заразить других животных.

Может ли быть использована выбраковка в качестве контрольного мероприятия?

Если у птиц обнаружена инфекция, то, как правило, политика забоя используется для контроля и искоренения болезни.

Мероприятия, которые необходимо предпринять на зараженной ферме (из кодекса МЭБ по наземным животным):

• Гуманное уничтожение всех инфицированных и зараженных животных (в соответствии со стандартами защиты животных МЭБ);
• Правильная утилизация туш и всех продуктов животного происхождения;
• Отслеживание и наблюдение за потенциально зараженной или подверженной заражению птицей
• Строгий карантин и контроль передвижения домашней птицы и любых потенциально загрязненных транспортных средств, персонала;
• Тщательное обеззараживание инфицированных помещений;
• До нового пополнения запасов необходимо выдержать как минимум 21 день.

Какие рекомендации дает МЭБ по торговле птицей со странами, зараженными вирусом H5N8?

У каждой страны-импортера существует собственная сложная система анализа рисков, защищающая территории от патогенных штаммов. Эти системы основаны на длинном списке стандартов МЭБ.

В случае вспышек высокой птичьего гриппа штамма H5 в потенциальных странах-экспортерах, применяемые торговые рекомендации можно найти в Санитарном кодексе наземных животных МЭБ (глава 10.4; 2014). Эти рекомендации выработаны на научной основе и не приводят к неоправданным барьерам в торговле; мероприятия включают в себя зонирование и тестирование популяций животных.

Как фермерам должны компенсировать потери?
Системы финансовой компенсации фермеров и производителей, потерявших своих животных в результате обязательной выбраковки по просьбе государственных властей, во всех странах разные. В некоторых странах они вообще не существуют. МЭБ призывает национальные власти разработать и ввести работающие схемы компенсации, поскольку они являются ключом к раннему выявлению и прозрачности в отчетности возникновения большинства болезней животных, в том числе птичьего гриппа.

Каковы рекомендации по безопасности пищевых продуктов?

Животных, отобранных в результате контрольных мероприятий по выявлению и ликвидации вспышки птичьего гриппа, нельзя употреблять в пищу.

Существует ли риск для здоровья, связанный с птичьим гриппом?

Вирусы птичьего гриппа имеют высокую видоспецифичность, но изредка они преодолевают видовой барьер, заражая людей. Это заболевание не следует путать с сезонным гриппом человека, довольно общей болезни человека (как правило, вызванной штаммами вирусов H1 и H3). Птичий грипп может передаваться человеку при тесном контакте с инфицированными птицами или сильно загрязненной средой. Однако сегодня нет никаких прямых доказательств заражения человека от вируса гриппа H5N8.

Меры профилактики на уровне фермерских хозяйств

Для птицеводов крайне важно поддерживать биобезопасность для предотвращения заноса вируса в стадо:

• Держать птицу подальше от мест, часто посещаемых дикой птицей;
• Убрать с фермы все предметы, которые могут привлечь диких птиц;
• Постоянно контролировать доступ людей к птичникам и перемещение оборудования;
• Регулярно дезинфицировать птичники и оборудование;
• Не помещать в стадо птиц, если неизвестно их состояние здоровья;
• Сообщать о болезни и смерти птиц в ветеринарные службы;
• Правильно утилизировать помет и мертвую домашнюю птицу;
• Вакцинировать животных, когда это необходимо.

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей

Временные методические рекомендации

Москва
2009

4.2.МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей

Временные методические рекомендации

Список сокращений

Содержание

3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА ………………………………………….. ………….

4. Правила сбора клинического (секционного) материала ………….

5. Упаковка и транспортирование образцов…………………….………

6. Порядок проведения лабораторных исследований …………………..

7. Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований ………………………………………….

8. Библиографические источники ………………………………………

Приложение 1 (обязательное). Координаты референс-лаборатории, осуществляющей дополнительное подтверждающее тестирование ВГА ……………………………………………………………………….

Приложение 2 (обязательное).Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики ВГА ………………………………………………………

Приложение 3 (обязательное). Перечень вирусологических лабораторий и лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора, проводящих первичный скрининг на ВГА ……….

Приложение 4 (справочное).Стабилизирующая среда для хранения и транспортирования материала

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Дата введения: с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей

Временные методические рекомендации

1.1. В настоящих методических рекомендациях определены порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных (и умерших) пациентов при лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА).
1.2 Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы лечебно-профилактическими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы.

2. Общие требования

3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА

4 Правила сбора клинического (секционного) материала

• смывы из полости носа и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);
• мазки из полости носа (для ОТ-ПЦР-анализа) и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);
• носоглоточное отделяемое (для выделения вируса, ОТ-ПЦР-анализа).

5. Упаковка и транспортирование образцов

6. Порядок проведения лабораторных исследований

6.1 При отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории лабораторные исследования с целью диагностики ВГА следует проводить у пациентов с респираторными заболеваниями тяжелого течения и неясной этиологии при наличии как минимум двух из перечисленных симптомов:
- фебрильная лихорадка с температурой тела выше 380C;
- насморк или заложенность носа;
- боль в горле;
- кашель;
- затрудненное дыхание или дыхательная недостаточность.
в комбинации хотя бы с одним из следующих эпидемиологических признаков в период 1-7 дней перед появлением симптомов :
- посещение мест регистрации заболевания ВГА у людей;
- тесный контакт (в радиусе 1 метра) с лицом, являющимся подозрительным, вероятным или подтвержденным случаем ВГА;
- контакт с погибшими или больными свиньями, уход, убой, разделка, подготовка к употреблению свинины, или контакт с их останкам или объектами окружающей среды на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГА у животных или людей;
- манипуляции с образцами клинического материала (от животных или людей), подозрительным на зараженность ВГА в лаборатории или в иной обстановке;
- употребление сырых или недостаточно приготовленных продуктов из свинины на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГА у животных или людей.
- тесный контакт с лабораторно подтвержденными инфицированными ВГА животными. Данный случай расценивается как подозрительный случай ВГА.
Вероятный случай ВГА - лицо, умершее от необъясненного острого респираторного заболевания, которое расценивается как эпидемиологически связанное по времени, месту и экспозиции с вероятным или подтвержденным случаем ВГА, а также лицо, отвечающее критериям для подозрительного случая, и одному из дополнительных критериев:

• инфильтраты или признаки острой пневмонии на рентгенограмме грудной клетки плюс признаки дыхательной недостаточности (гипоксемия, выраженное тахипноэ) или
• положительный результат лабораторного подтверждения инфекции, вызванной вирусом гриппа А, но недостаточное лабораторное подтверждение инфекции.

6.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГА на данной территории показанием к обследованию являются клинические симптомы, приведенные в п.6.1. Дополнительные эпидемиологические признаки являются необязательными.
6.3. Исследование секционного материала от умерших на наличие вируса ВГА проводят при:
- сходстве клинической картины заболевания, приведшего к летальному исходу, с описанной в п. 6.1 или невозможности исключения такой клинической картины в анамнезе и при наличии в анамнезе хотя бы одного из перечисленных в п.п. 6.1 дополнительных эпидемиологических признаков.
6.4. Исследования проводят с использованием диагностических тест-систем, разрешенных к применению в установленном порядке.
6.5. При проведении первичного тестирования на наличие вируса ВГА должны исследоваться не менее 2 видов клинического материала (например: мазки из полости носа и из ротоглотки) с использованием метода - ОТ-ПЦР.
6.6. При получении отрицательных результатов исследования всех образцов выдается окончательный отрицательный ответ.
При отсутствии регистрации заболевания людей, вызванных ВГА, на данной территории при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается предварительный положительный ответ и образцы направляют для подтверждающего тестирования в референс-лабораторию.
В период регистрации заболевания людей, вызванных ВГА на данной территории, обязательное подтверждающее тестирование не проводят, и при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается окончательный положительный ответ.
6.7. При подтверждении в референс-лаборатории положительного результата первичного тестирования, при исследовании хотя бы одного вида клинического материала выдается окончательный положительный ответ.
При получении в референс-лаборатории отрицательных результатов исследования двух видов клинического материала проводится повторное тестирование. При получении аналогичного результата выдается окончательный отрицательный ответ.

7. Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований

8 Библиографические источники:

Приложение 1 (обязательное)

РЕФЕРЕНС-лаборатории, осуществляющие ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ подтверждающее тестирование ВГА

По этим телефонам можно получить любую дополнительную разъясняющую информацию.

Приложение 2 (обязательное)

Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики ВГА

1. МАЗКИ ИЗ РОТОГЛОТКИ

1.1. Сбор материала

Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.

1.2. Предобработка проб

1.3. Метод исследования

1.4. Условия хранения материала

При температуре от 2 до 8°С – в течение трех суток.
При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается.

1.5. Условия транспортирования материала

В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом:

• при температуре 0-4 0С – не более трех суток;
• при температуре минус 700С или в жидком азоте – длительно.

Температура транспортировки минус 200С допускается только с учетом однократного замораживания и транспортировки без размораживания не более 4 дней.

2. Мазки из полости носа

2.1. Сбор материала

Мазки (слизь) берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.
Для ПЦР-анализа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.