Выявление у донора гепатита с

Гепатит С — опасное вирусное заболевание, которое поражает клетки печени. Может иметь острую или хроническую форму. Патология часто протекает без симптомов, и носитель вируса даже не догадывается, что болен. Диагноз подтверждается во время профилактического обследования и сдачи анализов. Многие люди интересуются, можно ли быть донором с гепатитом С, особенно если болезнь удалось победить. Для донорства имеются противопоказания, включая острые, хронические и перенесенные вирусные заболевания, к которым относятся гепатиты.

Можно ли быть донором, если вы болели гепатитом С

Этот тип заболевания считается наиболее тяжелым, поскольку нередко вызывает цирроз, рак печени и приводит к летальному исходу. Переболев один раз, человек может повторно заразиться. После острой формы только 20% людей выздоравливает, а у остальных болезнь становится хронической. Передается вирус через кровь.

До 1992 года частой причиной заражения гепатитом С было переливание донорской крови. Более 10% пациентов, которые регулярно получали препараты крови, в результате оказывались инфицированы. После расширения спектра выявляемых антител врачи практически полностью исключили риск инфицирования реципиента во время переливания.

После перенесенного гепатита С нельзя быть донором. Это заболевание входит в список абсолютных противопоказаний.

Трансплантация органов также запрещена. Этот запрет связан с хронизацией болезни и присутствием вируса в крови. Даже когда лабораторный анализ показал, что человек здоров, ему донором все равно быть нельзя. Также сдавать кровь не разрешается больным туберкулезом, ВИЧ и другими вирусными болезнями.

Врач при подозрении на гепатит направляет человека на обследование. Кровь всех доноров обязательно тестируется на антитела к вирусам гепатита В, С, ВИЧ. Они вырабатываются в ответ на вирус, сохраняются в организме даже после полного выздоровления. Даже если донор переболел много лет назад, этот факт можно определить. Кровь такого человека не подходит для трансфузии.

Если после переливания произошло инфицирование, такой случай заражения рассматривается как уголовное преступление

При каких гепатитах донорство возможно

Зарубежные врачи разрешают людям, перенесшим гепатит А минимум 5 лет назад, быть донорами. Они полагают, что данный тип полностью излечивается, не становится хроническим, поэтому донорство они не запрещают. После пирсинга, прокалывания ушей, татуажа, кровь можно начинать сдавать минимум спустя год. В течение этого времени можно определить точно, произошло инфицирование или нет.

Носитель антител может быть донором без риска для здоровья реципиента. Запрещено прямое переливание. Несмотря на то, что донор не является вирусоносителем, все равно есть риск навредить реципиенту. Антитела могут принять за инфекцию здоровые клетки и начать с ними бороться. В этом случае есть риск серьезных последствий и необратимых поражений клеток печени.

Гепатиты типа В и С в анамнезе являются абсолютным противопоказанием. Даже если лабораторно подтверждено, что человек здоров, ему в донорстве отказывают.

В России запрещено быть донорами при любых типах заболевания. Гепатит А нередко путают с другими, более опасными типами болезни, поскольку вирус тщательно маскируется. Разрешено сдавать кровь с гепатитом А не для переливания, а для других целей. Собранный материал выдерживается в течение инкубационного периода, стерилизуется. После из него получают:

• иммуноглобулин;
• альбумин человеческий;
• лейкоцитарную, эритроцитарную и тромбоцитарную массу;
• раствор протеина;
• препараты, которые повышают свертываемость крови при гемофилии.

Врачи доказали, что донорство является оздоровительной процедурой:

• Можно омолодить свой организм за счет стимуляции кроветворной функции.

• Сокращается уровень холестерина.

• Быстрее обновляются эритроциты. Обычно у мужчин этот процесс занимает 4 года, у женщин — 3.

• Иммунная система начинает работать более активно.

Перед тем, как стать донором, переболевшим гепатитом А необходимо как минимум месяц придерживаться здорового образа жизни и питания. Кроме полного обследования, необходимо отказаться за несколько дней от приема алкоголя, тяжелой еды, прекратить принимать лекарства, влияющие на свертываемость крови. Донором можно быть раз в 3 месяца.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Зайцева Г. А., Вершинина О. А., Киселева А. Н.

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИтом X, № 4, 2014

Цель. Модификация масс-спектрометричес-ких методов для клинической протеомики и поиск отдельных белковых биомаркеров для диагностики возникновения патологии и развития заболевания.

Материалы и методы. Анализ собственных и литературных доанных по проблеме.

Результаты. Данная задача сводится к выявлению различий в белковом составе биологического материала, полученного от пациентов, с помощью протеомных методов — например, посредством проведения двумерного электрофореза с последующим выделением целевых белков. Для большинства заболеваний отличия сводятся к изменениям концентрации белков какого-либо пула. Вследствие этого возникает техническая задача выявления изменения концентраций отдельных белков — биомаркеров заболеваний. Таким образом, модификация масс-спектрометрических методов для клинической протеомики должна сочетать в себе возможность идентификации и количественного определения индивидуальных белков. Масс-спектрометрическая идентификация белков осуществляется по классической схеме: проводят гидролиз индивидуальных белков с помощью набора специфических протеаз; измеряют с высокой точностью массы полученных пептидов и проводят поиск наиболее близкого к полученному экспериментально набору молекулярных масс из баз данных, содержащих все возможные теоретически продукты специфического протео-лиза всех транслированных ш вШсо с известных открытых рамок считывания геномов аминокислотных последовательностей. Возможно также получение спектров фрагментации отдельных пептидов, которые позволяют определить их точную аминокислотную последовательность. По этой последовательности в базах данных можно провести идентификацию исходного белка.

Оптимальным вариантом является совместное применение двух описанных способов идентификации. Для характеристики пула белков, которые могут быть использованы в качестве маркеров отдельных патологий, необходимо провести выделение исследуемого белка, идентифицировать его и количественно измерить. Идентификацию можно провести совместно с количественным определением. Интенсивности сигналов при масс-спектрометрических измерениях, в силу особенностей метода, не пропорциональны исходной концентрации белка в образце, и не воспроизводимы между различными сериями экспериментов. Воспроизводимым в таких сериях является соотношение интенсивностей в изотопном распределении каждого соединения — в силу присутствия в нём изотопа 13С. На основании этого свойства разработаны подходы, которые предполагают добавление к исследуемому образцу в качестве внутреннего стандарта аналогичных соединений с искусственно введенными стабильными изотопами — такими как Б, 180,Недостатком метода является необходимость в получении стандарта для каждого соединения в отдельности.

Выводы. В данной работе нами продемонстрированы оригинальные подходы, позволяющие исключить стадию фракционирования при работе с биологическим материалом. В их основе лежит использование функциональных свойств интересующих нас объектов. Предлагаются также оригинальные способы введения изотопов в соединения, которые могут быть получены в лабораторных условиях и использованы в качестве стандартов. Возможности предлагаемых подходов продемонстрированы на примере количественного анализа биомаркеров некоторых заболеваний легких у человека, а также при испытании нового препарата в модельных экспериментах на мышах, инфицированных вирусом гриппа.

Зайцева Г. А., Вершинина O.A., КиселеваА. Н.

ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ МАРКЕРОВ ПОСТТРАНСФУЗИОННЫХ ГЕПАТИТОВ У ПЕРВИЧНЫХ ДОНОРОВ

Введение. Важнейшей проблемой современной трансфузиологии являются гемотрансмис-сивные инфекции (ГТИ). Оценка риска и разработка мер их профилактики рассматриваются как обязательные условия при проведении ге-мокомпонентной терапии. Ведущее место среди

возбудителей гемотрансмиссивных инфекций безусловно занимают вирусы, особенно в связи с тем, что распространена скрытая форма течения вызванного ими заражения. Наиболее важную роль в числе ГТИ отводят посттрансфузи-онным гепатитам (ПГТ), риск возникновения

Санкт-Петербург 13-14 ноября 2014 г.

которых во многом определяется общей эпидемической ситуацией и частотой инфицирования доноров. Считают, что наибольшую опасность в отношении передачи инфекций представляют первичные доноры, составляющие заметную часть среди донорского контингента : по нашим данным, от 7 до 19%.

Цель. Сопоставить частоту выявления маркеров посттрансфузионных гепатитов у первичных и повторных доноров, проанализировать факторы, влияющие на частоту инфицирования.

Результаты. Среди лиц с положительными результатами тестирования на HBsAg 87,9% составили первичные доноры (против 12,1% повторных), с положительными результатами на НВс — 45,1% и 54,9%, с положительными результатами на анти-HCV — 78,1% и 21,9% соответственно. Среди инфицированных первичных доноров преобладали мужчины: наличие HBsAg антигена зарегистрировано у 68,1 %, анти-НВс — у 61,6%, анти-HCV — у 60,5%. Анализ частоты выявляемое™ маркеров посттрансфузионных гепатитов в зависимости от воз-

раста доноров показал, что у первичных доноров в возрасте 30-39 лет обнаружение HBsAg реже всего является причиной постоянного медотвода от донаций: 4,9 % среди всех постоянных отводов (при 19,0% в возрастной группе 18-29 лет; 9,2% — 40-49 лет; 14,5% — 50-62 лет). Доля лиц с анти-HCV во всех возрастных группах варьировала незначительно (28,0-31,4%), частота выявления анти-НВс колебалась от 36,0% среди первичных доноров младшей возрастной группы с положительными тестами до 48,4% — в старшей. При сравнении результатов тестирования на маркеры гепатитов В и С у первичных и повторных доноров установлено, что HBsAg в 52 раза чаще выявлялся у первичных, анти-HCV — в 26 раз, анти-НВс в 3,1 раза, чем у повторных. Полученные данные совпадают с литературными сведениями о значительной разнице в частоте регистрации маркеров гепатитов среди первичных и повторных доноров, причем, чем совершеннее система отбора и обследования доноров, тем больше разница в показателях. Например, в Германии маркеры гепатита В у первичных доноров выявлялись в 75 раз чаще, чем у сдававших кровь второй раз, и в 150 раз чаще, чем у кадровых; маркеры гепатита С — в 100 раз чаще. То же самое касается частоты обнаружения всех декретированных маркеров ГТИ в целом: ин-фицированность первичных доноров, по нашим данным, достигает 6,76%, против 0,74% у повторных. Среди всего донорского контингента она составила 1,49%, что значительно выше, чем среди доноров США (0,9% донаций с выявленными маркерами).

Выводы. Наиболее безопасными в плане заражения гепатитами при гемотрансфузионной терапии являются многократно обследованные доноры. Напротив, первичные доноры несут потенциальный риск заражения; наиболее высокие показатели инфицированности вирусами гепатитов В и С зарегистрированы у доноров-мужчин в возрасте 18-29 лет.

Злотникова М. В., Новикова И. А.

ПРОЦЕССЫ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ДИНАМИКЕ РЕЦИДИВИРУЮЩЕЙ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

Введение. В последние годы во всем мире от- инфекцией (РГИ). Рецидивирование заболева-мечается тенденция к увеличению количества ния и дальнейшее его прогрессирование напря-пациентов с рецидивирующей герпетической мую связано с нарушениями иммунной реактив-

Гепатиты представляют собой серьезные заболевания, которые при неблагоприятном стечении обстоятельств могут приводить к раку печени, циррозу или печеночной недостаточности. В основе патологии лежат воспалительные процессы, обусловленные инфекционными или токсическими поражениями печени. Распространению гепатитов в обществе способствуют наркомания, алкоголизм, беспорядочные половые связи и низкое качество медицинских услуг.

Ключевым фактором в успешном лечении заболевания является его ранняя и точная диагностика при помощи лабораторных исследований крови. Рассмотрим основные виды анализов, которые необходимо сдать, чтобы подтвердить или опровергнуть наличие гепатита.

Какой анализ сдать? Маркёры вирусных гепатитов

Анализ может сдать любой желающий. Также пройти обследование рекомендуется лицам, у которых наблюдаются желтушность, изменение цвета экскрементов, слабость, тошнота, утрата аппетита, лихорадочные состояния, суставно-мышечные боли, тяжесть в правом подреберье. Если клинические симптомы вирусного гепатита отсутствуют, основанием для анализов являются повышенные концентрации внутриклеточных ферментов АсАт и АлАт, холестаз (уменьшение выделения желчи в двенадцатиперстную кишку) и контактирование с инфицированными гражданами. Обязательно сдавать кровь должны сотрудники медицинских учреждений, больные, которым предстоят операции, доноры крови и беременные женщины.

Гепатит A (болезнь Боткина) передается через жидкости организма, продукты питания, воду и предметы быта. Патология может протекать в острой, подострой и субклинической (бессимптомной) формах. Она считается самой доброкачественной из всех форм инфекции и практически не вызывает хронических поражений печени. Смертность составляет менее 0,4%. Чаще всего симптомы патологии исчезают за 2 недели, а период восстановления функций печени не превышает 1,5 месяцев. Заболеваемость в странах СНГ составляет 20–50 человек на 100 000 населения.

Для диагностики проводятся следующие качественные методы исследования сыворотки крови:

• определение специфичных участков РНК вируса в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени – обеспечивает 100% точность результата;
• иммуноглобулины класса М–IgM обнаруживаются при первых клинических симптомах и далее 90–180 дней вплоть до полного выздоровления;
• антитела класса G–IgG начинают вырабатываться во время болезни и остаются в организме навсегда. Исследование сыворотки крови на данные маркёры гепатита А может проводиться в целях контроля проведенной вакцинации, поскольку эти антитела показывают наличие иммунитета к заболеванию.

Гепатит B вызывается вирусом Hepadnaviridae, передается половым путем или через кровь. Протекает в острой и хронической формах. Он приводит к значительному поражению печени, а нередко – к циррозу или раку. В данный момент около 300 млн людей на планете являются носителями этой инфекции. Для уточнения диагноза следует сделать такие тесты:

• качественные или количественные анализы на антиген HBsAg, а также антитела Anti-HBc IgG, которые есть у больных, выздоровевших лиц и здоровых носителей. Содержание HBsAg в плазме крови у здорового человека не превышает 0,05 МЕ/мл;
• качественные тесты на белок HBeAg и антитела Anti-HBc IgM, свидетельствующие об остром течении болезни;
• определение ДНК вируса методом ПЦР в режиме реального времени.

Гепатит C считается самым распространенным и наиболее опасным среди всех разновидностей заболевания. Часто он протекает бессимптомно на начальных стадиях и обнаруживается только при появлении таких серьезных осложнений, как цирроз или карцинома. Вирус передается преимущественно через жидкости организма и плохо поддается лечению. Его носителями в настоящее время считаются 500 млн людей.

Положительный анализ на гепатит С предполагает наличие соответствующего РНК-вируса в крови больного. Присутствие Anti-HCV и HCV IgG в организме, выявляемое качественными методами тестирования, говорит об острой стадии болезни. Количественные методы определения РНК методом ПЦР используются для оценки результативности терапии. Для генотипирования вируса и выбора тактики лечения необходимо исследование на интерлейкин-28-бета. Для проверки скрининговых анализов при положительном результате используется тест на антитела – рекомбинантный иммуноблот для выявления IgG-антител к различным антигенам вируса гепатита С.

Гепатиты D, G . Активность вируса гепатита D зависит от наличия в организме вируса типа B. Заболевание протекает очень тяжело. Если заражение двумя типами вируса происходит одновременно, то у больного диагностируется патология в острой стадии, если же дельта-вирус (гепатит D) развивается на фоне уже имеющейся печеночной инфекции, то отмечается обострение заболевания. Гепатит G предположительно активизируется при наличии других типов инфекции, сам же он не вызывает активную форму болезни.

Лабораторное тестирование предусматривает выявление РНК-цепочек вирусов, а также выявление антител класса IgM, позволяющих отличить острую форму заболевания от хронической. Эти исследования являются качественными.

Гепатит E по своему течению имеет сходство с вирусом типа А. Он передается через жидкости организма, сопровождается выраженным болевым синдромом и может принимать молниеносные формы. Эта патология особенно опасна для беременных женщин. У них болезнь может осложниться острой печеночной недостаточностью и энцефалопатией. В 20–30% случаев заболевание заканчивается смертью беременной. Если при лабораторном тестировании у пациента обнаруживаются антитела класса IgG и IgM, то это свидетельствует о патологии в острой стадии.

Биоматериал необходимо сдавать строго натощак. Также в течение суток перед посещением лаборатории следует воздерживаться от употребления жирной пищи и алкоголя. Результаты качественных тестов в большинстве случаев готовы уже через четыре часа после забора крови. На проведение количественного исследования может уйти до одного рабочего дня, не считая дня сдачи анализов.

Особенности расшифровки ответов зависят от типа исследования. Качественный тест позволяет установить факт наличия или отсутствия инфекции, а количественный дает возможность определить конкретную концентрацию исследуемого вещества. В некоторых случаях позитивным знаком является полное отсутствие антигена или белка, а в некоторых – содержание вещества в количестве ниже установленного уровня.

Если результаты оказались положительными, то пациенту рекомендуется повторно пройти обследование, так как в некоторых случаях ложноположительный ответ может объясняться нарушением техники проведения тестирования, некачественными реактивами, неправильной подготовкой к процедуре (проведением теста после приема пищи), чувствительностью и специфичностью метода исследования, точностью анализаторов. Позитивный результат также может наблюдаться у человека, который некоторое время назад переболел острой формой вируса или является его здоровым носителем.

Согласно постановлениям Главного государственного санврача РФ от 22.10.2013 г. № 58 и от 28.02.2008 г. № 14, а также приказу Управления Роспотребнадзора по г. Москве от 01.10.2008 г. № 122 сведения о положительных результатах исследований на маркёры вирусных гепатитов передаются в ОРУИБ центров Госсанэпиднадзора.

Для того чтобы пройти обследование, нужно предъявить сотруднику диагностической лаборатории паспорт или документ, заменяющий его. Документ должен содержать информацию об адресе регистрации больного, а также его фотографию. При желании пациент может пройти тестирование анонимно, но подобные результаты не принимаются для оказания медпомощи.

При получении положительного ответа больной должен обратиться к врачу-инфекционисту, который назначит дополнительные исследования с целью подтверждения диагноза. Во время терапии тестирование может проводиться раз в 3 дня с целью отслеживания динамики состояния больного и эффективности лечения. При хроническом гепатите анализы сдаются каждые 6 месяцев с целью контроля состояния пациента.

Полное излечение возможно при своевременном проведении и правильно выбранной тактике терапии. Эффективность лечения зависит от конкретной инфекции, стадии болезни и общего состояния больного. Необходимость госпитализации определяется индивидуального для каждого пациента, в зависимости от тяжести его состояния. После выздоровления у человека сохраняются антитела, обеспечивающие ему пожизненный иммунитет либо устойчивый иммунный ответ на несколько лет, что зависит от многих факторов: возраста, индивидуальных особенностей организма и других.

Ошибочные результаты нередко фиксируются при использовании некачественных реактивов, проведении исследования на устаревшем оборудовании или нарушении технологии тестирования. Иногда точность метода исследования предполагает определенный процент ошибки. Ложноотрицательный ответ возможен при тестировании на слишком ранней стадии заболевания, когда антитела еще не начали вырабатываться в нужном количестве, ложноположительный – на последней стадии острого гепатита, в период выздоровления.

В государственных клиниках по направлению врача можно сдать анализ на гепатит бесплатно. Исследование на платной основе проводится в большинстве крупных городов страны. Цена зависит от конкретной лаборатории, используемого оборудования, сроков проведения, типа теста, региона и ряда других факторов.

Качественный тест на антитела к РНК- и ДНК-вирусу можно сделать в Москве и Санкт-Петербурге по цене 550–900 рублей. Стоимость количественного исследования варьируется в пределах 1200–10 000 рублей в зависимости от конкретного антигена, метода исследования, класса медицинского оборудования. Например, оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени, необходимая для определения эффективности лечения гепатита С, обойдется в 17 000–22 000 рублей. Выявление антигенов качественным методом в таких городах, как Новосибирск, Мурманск, Кострома, Махачкала, Симферополь будет стоить 300–800 рублей.

Сдача анализа на гепатит позволяет оперативно выявить заболевание и начать его лечение. А своевременно проведенная терапия в большинстве случаев обеспечивает полное выздоровление пациента или подавление активности вируса. Одним из главных способов профилактики гепатита B (наряду с соблюдением правил гигиены, а также с избеганием беспорядочных половых связей и отказом от приема наркотиков) является вакцинация. Ее обязательно нужно проводить тем, кто находится на гемодиализе, часто меняет сексуальных партнеров, работает с кровью или проживает в одной квартире с лицами, страдающими хронической формой болезни. Самые эффективные вакцины – отечественные. Они прицельно рассчитаны на те штаммы (генотипы) вируса, которые преобладают в нашей стране. Кроме того, современные российские вакцины производят без консерванта, в основе которого содержится ртуть.

Если кли­ни­чес­кие симп­то­мы ука­зы­ва­ют на функ­ци­о­наль­ные на­ру­ше­ния пе­че­ни, но ис­сле­до­ва­ние сы­во­рот­ки кро­ви на ви­рус­ные ге­па­ти­ты да­ло от­ри­ца­тель­ный ре­зуль­тат, до­пол­ни­тель­но сле­ду­ет прой­ти УЗИ пе­че­ни и жел­че­вы­во­дя­щих пу­тей, а так­же сдать ана­ли­зы на внут­рик­ле­точ­ные фер­мен­ты АлАт и АсАт. Вы долж­ны ис­клю­чить не толь­ко ин­фек­ци­он­ную, но ме­ха­ни­чес­кую при­ро­ду по­вреж­де­ния пе­че­ни, на­при­мер, ге­па­то­зы раз­лич­ной этио­ло­гии.

Маркеры вирусного гепатита B у доноров крови и в группах сравнения

Хронический гепатит C: (1)

Латентные формы вирусных гепатитов B и C у лиц молодого возрастa

Латентные формы вирусных гепатитов B и C у лиц молодого возрастa: (1)

Выявление РНК вируса гепатита С у доноров крови

В .С. Малышев, А .Г. Тоневицкий, А .М. Ведяков, О .Е. Потехин, Н .А. Арефьева, Ю .В. Сергеев, В.Г. Лунин.

Центральная клиническая больница Медицинского центра УД Президента РФ, Институт трансплантологии и искусственных органов МЗ РФ, Институт аллергологии и клинической иммунологии, Москва.

При обследовании доноров на трансмиссивные инфекции на первое место по распространенности за последние годы вышел вирусный гепатит С (ВГС). Серопозитивные к ВГС лица составляют, по нашим данным, 1,7 % среди первичных доноров. Тесты иммуноблотта на анти-ВГС, применяемые в качестве подтверждающих при положительных/сомнительных результатах ИФА, при исследовании доноров отличаются высоким процентом неопределенных результатов. В группе доноров, отведенных от кроводач по наличию анти-ВГС (18 человек), с сомнительными результатами в иммуноблотте LiaТek HCV III на анти-ВГС (1 человек) или по эпидемиологическим показателям провели повторный анализ на РНК ВГС с помощью двухстадийной (nested) ПЦР (разработка НИИТиИО) и в тесте "Amplicor HCV-test" (Roche) спустя 6-24 месяцев после отвода. Обнаружено наличие РНК ВГС у 5 доноров (25%). Отмечено полное совпадение результатов, полученных в двухстадийной ПЦР и в "Amplicor HCV-test".

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: вирус гепатита С, РНК, доноры крови, ПЦР.

Вирус гепатита С (ВГС) является причиной большинства случаев гепатитов "ни А, ни В" с парентеральным механизмом передачи. ВГС относится к семейству флавивирусов с одноцепочечным РНК- геномом . ВГС-инфекция представляет серьезную проблему для здравоохранения из-за высокой частоты развития хронического гепатита С (хронизация у 75-80 %), с риском развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [ 3 ].

Заражение ВГС индуцирует выработку антител к ВГС (анти-ВГС), которые, ввиду высокой хронизации инфекции, рассматриваются в качестве маркера инфицирования. Уровень анти-ВГС позитивных лиц колеблется от 0,2 - 0,6 % в Северной Европе до 4 - 20 % в Африке. В России анти-ВГС выявляется у 1 - 3 % населения, с более высокими показателями в Сибири и на Дальнем Востоке. При этом наблюдается дальнейший рост числа инфицированных [1]. При скрининге донорской крови определяют антитела к вирусу гепатита С. Однако данный подход не в полной мере предотвращает случаи посттрансфузионных гепатитов [6]. В связи с этим в некоторых странах Западной Европы с 1999г. введено обязательное тестирование донорской крови на РНК ВГС, основанное на полимеразной цепной реакции (ПЦР) и широко применяемое в диагностике и мониторинге ВГС-инфекции [ 2].

Оценка актуальности тестирования доноров крови на РНК ВГС с помощью различных ПЦР-методик: двустадийной (nested) и теста Amplicor hepatitis C virus test (Roche).

Материалы и методы. В работе рассмотрены результаты исследования, выполненного в Центральной клинической больнице МЦ УД Президента РФ и в НИИТиИО МЗ РФ. Было обследовано 20 доноров отделения "Банк крови" с положительными/сомнительными данными при тестировании на анти-ВГС. Данные по биохимическим показателям (активность трансаминаз АЛТ и АСТ) и маркеры вирусного гепатита В (антитела к HBs и к HBc) получены при рутинном обследовании доноров. Подробная характеристика доноров представлена в таблице 1.

Определение антител против вируса гепатита С. Скрининг сыворотки крови доноров проводили при каждой кроводаче с помощью иммуноферментной тест-системы UBI HCV EIA 4.0 (United Biomedical Inc. USA). Данная тест-система содержит сорбированные синетические пептиды , соответствующие основным антигенным участкам белков ВГС: Сor, NS3, NS4 и NS5, что позволяет выявлять антитела класса IgG соответствующей специфичности в сыворотке крови. Анализ спектра специфичности антител к белкам ВГС проводили в тесте иммуноблотта с помощью тест-системы LiaТek HCV III (Organon Тeknika), позволяющей раздельно учитывать следующие специфичности антител: Сor ( 2 специфичности), Е2/NS1, NS3, NS4 и NS5. Данные до 1996 г. получены при использовании более ранней версии тест-системы LiaТek, включавшей аналогичные пептиды, за исключением Е2/NS1 и NS5.

Детекция РНК ВГС с помощью тест-системы Аmplicor hepatitis C virus test. Детекцию РНК вируса гепатита С проводили согласно инструкции, прилагаемой фирмой. Амплификацию осуществляли на амплификаторе Perkin Elmer 2400.

Детекция РНК ВГС методом двустадийной (nested) ПЦР с использованием фермента Tth-ДНК -полимеразы. Для выделения РНК использована модифицированная методика, описанная ранее[5]. РНК выделяли из 200 мкл плазмы. Полученную РНК растворяли в 15 мкл буфера для элюции РНК. Для синтеза кДНК и 1 раунда ПЦР 10 мкл полученной РНК. Реакцию обратной транскрипции (RT) и 1-й раунд ПЦР проводили в объеме 25 мкл в одной пробирке с использованием фермента Tth-полимеразы с высокой степенью RT-активности (ВНИИ СБ РАСХН , Россия). Реакционная смесь для 1-раунда ПЦР состояла из 1Х Tth one tube RT-PCR буфера, 2,5 Ед Tth-днк- полимеразы 0,2 мM каждого из 4, дезоксинуклеозидтрифосфатов (дАТФ, д ЦТФ, дТТФ, дГТФ), 10 мкл РНК и по 10 пмоль внешних праймеров [8 ]:

5'-3' - ctg tga gga act act gtc tt- прямой

5'-3' - tat cag gca gta cca caa gg-обратный

Для 2 раунда ПЦР брали 0,5 мкл продукта 1 раунда амплификации. 2-й раунд ПЦР проводили с помощью Taq ДНК-полимеразы в объеме 25 мкл. ПЦР проводили в объеме 25 мкл. Стандартная реакционная смесь включала: 67 мМ Трис-НCl (рН 8,4),16 мМ сульфата аммония, 2,5 mM MgCl2 0,125 мг/мл бычьего сывороточного альбумина, 8% глицерин, 0,001% ксиленцианол, 2,5 Ед Taq-ДНК-полимеразы (ВНИИ СБ РАСХН, Россия), 0,2 мМ каждого из четырех дезоксинуклеозидтрифосфатов и по 8 пкмоль внутренних праймеров [8]:

5'-3' - ttc acg cag aaa gcg tct ag - прямой

5'-3' -acc caa cac tac tcg gct ag - обратный

RT-ПЦР проводили на многоканальном амплификаторе "Терцик" МС-2 (ДНК-технология, Россия) по следующей программе:

RT + 1 раунд ПЦР:

75 0С - 5 мин., 560С - 35 мин., 940 С - 2 мин.,

По оценкам экспертов в России с диагнозом гепатит С сейчас живут от 3,5 до 4,7 млн человек

Что вы знаете о гепатите С? Если бы меня остановили на улице и задали этот вопрос, вряд ли бы я ответила что-то членораздельное. Да, слышала, кажется, что-то связанное с печенью. Этим и ограничивались мои скромные познания. Недавно мне представилась возможность восполнить свой образовательный пробел. Ликбез для журналистов провели московские и самарские эксперты: Владимир Чуланов, руководитель Референс-центра по мониторингу за вирусными гепатитами Роспотребнадзора и Елена Стребкова, координатор региональной программы по лечению хронических вирусных гепатитов.

Что такое гепатит?

Гепатит – воспаление ткани печени, в результате чего нарушаются функции этого жизненно важного органа. Болезнь страшна своими последствиями – вызывает цирроз и рак печени.

Существует несколько типов вирусных гепатитов: A, B, C, D, E. Подробнее всего эксперты остановились на гепатите С. Почему? Этим заболеванием страдают около 160 миллионов человек во всем мире. А уровень знаний об этой болезни минимальный.

Как и любое заболевание, гепатит имеет острую и хроническую формы. В первом случае недуг длится менее шести месяцев, после чего человек выздоравливает. Если же болезнь продолжается больше полугода, речь идет о хронической форме. Гепатит С переходит в хроническую форму в 60-80% случаев.

Пути передачи

Вирус гепатита С попадает в организм человека через кровь и реже половым путем. Риску подвержены люди, перенесшие операцию, употребляющие наркотики, получившие донорскую кровь, практикующие беспорядочные половые связи, а также медицинские работники и дети, родившиеся от инфицированных матерей. Людям, которые любят татуировки, пирсинг и даже маникюр, стоит задуматься.

Риск перинатальной передачи гепатита С — 1-5%. Это случается чаще, если у мамы положительный ВИЧ-статус или она употребляет наркотики.

Зависит от организма

В среднем период от заражения вирусом гепатита С до его последствий — цирроза и рака печени — составляет 20 лет. Многое зависит от организма человека. Предсказать время течения болезни пока не может никто. Однако существуют факторы, ускоряющие болезнь. Она развивается быстрее, как правило, у мужчин и пожилых людей. Быстрому прогрессированию способствует употребление алкоголя и наличие других заболеваний (гепатит В, ВИЧ-инфекция).

Без симптомов

У этого гепатита нет никаких специфических симптомов. Иногда человек может почувствовать дискомфорт, боли в животе, в мышцах и суставах, недомогание. Как правило, в таких случаях мы к врачу не обращаемся. В результате больной узнает о своем диагнозе случайно. Например, на обследовании в стационаре. Или после сдачи крови на станции переливания. Гепатит С проявляет себя, когда болезнь уже запущена.

Предположим, вы сдали анализ на гепатит С. Наличие вируса в организме на первом этапе определяется с помощью специальных маркеров – антител. Положительный результат теста может означать наличие острого или хронического гепатита. Или свидетельствовать о том, что вы перенесли острый гепатит С, вылечили его – антитела к различным видам инфекций остаются в нашем организме длительное время. Это даже может быть и ложно-положительный результат — существующие тест-системы тоже имеют определенную погрешность.

Если антитела все-таки выявили, обязательно нужен дополнительный подтверждающий тест. Кроме антител должно быть подтверждено наличие самого вируса (методом ПЦР – полимеразная цепная реакция). Если ПЦР — анализ отрицателен, тогда человек на протяжении двух лет должен наблюдаться у врача и раз в полгода сдавать анализ на наличие вируса. С чем связана эта необходимость? Уровень вируса в организме человека колеблется. Иногда он может быть ниже порога, при котором его можно обнаружить. Чтобы избежать ошибок, лучше сдать анализ повторно.

Важность преемственности

С начала регистрации заболевания в России выявлено около 2,5 миллиона человек. Из них на диспансерном учете состоят только 500 тысяч человек (18%). Это показательная для нашей страны характеристика – отсутствует преемственность между скринингом (выявлением заболевания) и программами наблюдения и лечения: поликлиники перегружены, не хватает врачей-инфекционистов и гепатологов.

Недоступно

Хронический гепатит С излечим. Существуют различные схемы лечения. Недавно были разработаны препараты с почти 100% эффективностью. Однако доступность таких программ остается очень низкой. Классическая схема стоит 500-700 тысяч рублей. Государство пока не в состоянии покрывать всем нуждающимся стоимость лечения. Трудно поверить, что у обычного человека найдутся такие средства.

Две беды

Какие пациенты могут получать лечение? Существует несколько вариантов: программа льготного лекарственного обеспечения (для людей, имеющих федеральные льготы, например, инвалидов). Для медицинских работников действует своя программа лечения.
Клинические протоколы также позволяют лечить людей, причем, самыми современными препаратами. Главная проблема — количество граждан, участвующих в этих программах, ограничено.

Своими глазами

Люди, которым поставлен диагноз гепатит С, часто это скрывают. Бытует мнение, что все заразившиеся гепатитом или ВИЧ-инфекцией – наркоманы. Даже среди медиков мало кто знает, что хронический гепатит С излечим. Однако нашелся человек, готовый рассказать свою историю.

Потом начались мытарства – бесконечные поездки в Самару, Казань, наконец, в Москву. Никакого результата. Реальную помощь и совет Ирина нашла в своем городе, в Тольятти, – там встретился замечательный доктор.