Анализ кала на кишечные инфекции методом пцр
Рolymerase Сhain Reaction (PCR), иначе полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это прогрессивный метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний обнаружения генетических патологий, выявления неопластических клеток в начальной стадии рака.
ПЦР относится к генно-молекулярным исследованиям, что обеспечивает высокую точность показателей, минимизирует риск ложноположительных результатов. Для анализа используется биологический материал – кровь, моча, мазок, экскременты, ликвор (спинномозговая жидкость).
Специфика исследования методом ПЦР
Анализ кала на ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний и дифференцирует их разновидность на генно-молекулярном уровне. В ходе исследования оцениваются макромолекулы ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, простейших паразитов, глистов или РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов. Для идентификации достаточно небольшого фрагмента патогена, обнаруженного в экскрементах.
В задачи молекулярной диагностики входит:
- обнаружение инфекционного агента;
- идентификация разновидности микроорганизма (вирус, бактерия, простейший и т. д.);
- дифференциация типа, рода, семейства и т. д.;
- определение тактики лечения, в соответствии с диагностированным заболеванием.
Образец биоматериала помещают в реактор (амплификатор), добавляют реакционную смесь. При последовательной смене температурного режима разрываются водородные цепи дезоксирибонуклеиновой кислоты, образуются комплексы матрицы с праймерами – короткими генетическими фрагментами.
Реагенты достраивают матричную цепь и в ходе реакции амплификации формируют множественные копии возбудителя. При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю.
Макромолекулы РНК и ДНК являются носителями уникальной информации, характерной для определенного вида, поэтому точность результатов ПЦР-диагностики максимально приближена к 100%.
Спектр инфекций, определяемых методом PCR по образцу кала
Полимеразную цепную реакцию используют для диагностики кишечных бактериальных и вирусных инфекций, различных видов гельминтозов, заражения организма простейшими паразитами.
Бактерии | ||
Helicobacter pylori | хеликобактер пилори | язв желудка и двенадцатиперстной кишки, гастрит, дуоденит, рак желудка |
Salmonella species | сальмонелла | сальмонеллез |
Campylobacte | кампилобактерия | кампилобактериоз |
Escherichia coli | кишечная палочка (энтеротоксигенные штаммы) | коли-инфекция |
Shigella | шигелла | дизентерия |
V. cholerae, Ber | холерный вибрион | холера |
Yersinia pseudotuberculosis | иерсиния | псевдотуберкулез (кишечный иерсиниоз) |
Вирусы | ||
Rotavirus | ротавирус | ротавирусная инфекция |
Adenovirus | аденовирус | кишечный грипп |
Astrovirus | астровирус | астровирусная инфекция, гастроэнтерит |
Norovirus | норовирус | норовирусная инфекция |
Гельминты и простейшие паразиты | ||
Giardia lamblia | лямблии | лямблиоз |
Enterobius | острицы | энтеробиоз |
Ascaris lumbricoides | аскариды | аскаридоз |
Trichocephalus trichiurus | власоглав | трихоцефалез |
Opisthorchis felineus и Opisthorchis viverrini | описторхи (печеночные сосальщики) | описторхоз |
Taenia solium | свиной цепень | тениоз |
Taenia saginata | бычий цепень | тениаринхоз |
Echinococcus | эхинококки | эхинококкоз |
Entamoeba histolytica | амеба дизентерийная | амебиаз |
В большинстве случаев, анализ ПЦР кала назначают для выявления кишечных вирусов, бактерии хеликобактер пилори, лямблий и дизентерийных амеб. Определение глистной инвазии, как правило, проводят посредством обычного исследования экскрементов на яйца глистов. Бактериальные инфекции диагностируют с помощью анализа на дизгруппу.
Во многих клиниках существует стандартный ПЦР-скрининг на кишечные инфекции, вызванные бактериями и вирусами. Профиль включает определение восьми возбудителей (сальмонелла, шигелла, кампилобактерия, кишечная палочка, ротавирус, аденовирус, астровирус, норовирус).
ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других исследований. Анализ кала методом полимеразной цепной реакции могут назначить:
- гастроэнтеролог (взрослый или детский);
- инфекционист;
- гепатолог;
- педиатр;
- терапевт.
- проктолог;
- онколог;
- диетолог.
По желанию сдать анализ можно самостоятельно на возмездной основе в любом диагностическом центре Москвы и других городов РФ.
Ключевые достоинства PCR-диагностики
Метод полимеразной цепной реакции обладает значительными преимуществами, в сравнении с иными анализами:
- Подлинность идентификации возбудителей. Определение генно-молекулярной структуры патогенного микроорганизма обеспечивает высокую точность результата.
- Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Для выявления патогена достаточно его молекулярного присутствия в образце кала.
- Оперативность проведения анализа. Исследование в условиях лаборатории занимает 1-3 дня.
- Комплексность. Одного образца кала достаточно для проведения анализа на несколько патогенных микроорганизмов.
- Универсальность. С помощью Рolymerase Сhain Reaction возможно определить практически любых инфекционных агентов. Кроме того, анализ обнаруживает не только активные патогены, но и неактивные (погибшие под воздействием лекарственных препаратов).
- Специфичность. В отличие от серологических методов, ПЦР не допускает перекрестных реакций иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами. Такая особенность исключает получение ложноположительных результатов анализа.
Ошибочные результаты PCR фиксируются при редком явлении генной мутации бактерий и вирусов.
Подготовка к сдаче биоматериала на анализ
Стандартные правила подготовки перед сбором экскрементов для ПЦР-диагностики включают:
При назначенной рентгенографии желудка с использованием бария обследование нельзя проходить до сдачи образца кала. Грудным детям за 3-4 дня не рекомендуется вводить новый прикорм.
Сбор биоматериала на анализ
Сбор и транспортировка биоматериала на исследование методом полимеразной цепной реакции допускается только в стерильном контейнере, который необходимо заранее приобрести в аптеке. Аптечный контейнер имеет герметичную крышку и снабжен специальной ложечкой. Сдать образец кала в лабораторию необходимо утром. Максимальный интервал доставки составляет 3 часа.
При сборе кала следует придерживаться алгоритма:
- Провести гигиену аноректальной зоны без использования мыла (геля).
- Опорожнить мочевой пузырь.
- Произвести дефекацию в судно (использовать бумагу или полиэтилен). Если собирать образец из унитаза, неизбежно попадание микробов.
- Заполнить аптечную емкость на 1/3 часть фрагментами фекалий (для этого использовать ложечку).
- Герметично закрыть крышку контейнера.
- Оперативно доставить биологический материал в лабораторию медицинского учреждения.
Если незамедлительная транспортировка кала к месту исследования невозможна, плотно закрытый контейнер нужно поместить в холодильнике не более, чем на 12 часов. Хранение экскрементов в морозильной камере или при комнатной температуре делает их непригодными к молекулярному исследованию.
При сборе каловых масс с подгузника грудного ребенка важно следить, чтобы в контейнер не попали фрагменты гигиенической ткани. Женщинам не рекомендуется собирать кал для ПЦР-диагностики в первую неделю фолликулярной фазы менструального цикла.
Возможные примеси менструальной крови помешают исследованию. При необходимости проведения экстренного анализа влагалище необходимо закрыть гигиеническим тампоном. Молекулярная диагностика чувствительна к попаданию любых примесей.
Во время процедуры сбора биоматериала нельзя касаться внутренней стороны емкости, ложечки и крышки. Реакция амплификации может создать копии ДНК, случайно попавшей с рук. Итоговые данные будут ложными.
Результаты анализа
В указанное время пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:
Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации.
Итоги
ПЦР – один из самых информативных диагностических методов. Реакция амплификации базируется на определении ДНК и РНК возбудителей инфекционных заболеваний, что обеспечивает высокую точность результатов.
ПЦР анализ кала позволяет выявить вирусные и бактериальные кишечные инфекции, обнаружить инвазии простейших паразитов и гельминтов, а также на 100% идентифицировать патогенные микроорганизмы. Время выполнения исследования – 1-3 суток, в зависимости от загруженности лаборатории.
Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.
Синонимы английские
Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.
Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.
Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев "бактериологически неподтвержденной дизентерии", особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.
Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.
Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).
В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является "золотым стандартом" в клинической диагностике норовирусных инфекций.
Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.
Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.
Для чего используется исследование?
- Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
- для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).
Когда назначается исследование?
- При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
- при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
- при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
- присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus).
Причины отрицательного результата:
- отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus.
- Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
- Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).
Кто назначает исследование?
Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.
Литература
- Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
- Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.
Все чаще в современной лабораторной диагностике прибегают к ПЦР методу, вместо привычных бактериологических или клинических анализов. В основе полимеразной цепной реакции лежит принцип многократного увеличения мельчайших частиц фрагментов ДНК возбудителя в пробе пациента, проводимого в лабораторных условиях.
Показания к проведению анализа
Преимущество метода ПЦР диагностики в высокой точности анализа, позволяющей выявить возбудителей при небольших концентрациях. Кал исследуют на патогенные микроорганизмы, простейшие, гельминты.
- В таблице ниже перечислены микроорганизмы, идентифицируемые при ПЦР диагностике, и вызываемые ими заболевания:
- ПЦР методом выявляются простейшие - Giardia lamblia, возбудители лямблиоза. Цисты лямблий не выделяются с фекалиями постоянно. Чтобы их обнаружить обычным методом флотации, с последующей микроскопией, необходимо сдавать образцы в течение 5-7 дней. Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить лямблии с одной пробы биологического материала.
- Также эта методика применяется для обнаружения различных гельминтов: нематод (острицы, аскариды), трематод (паразитирующих в печени, поджелудочной железе и ЖКТ), цестод (ленточные черви).
Результаты анализа после сдачи готовы в течение суток. ПЦР анализ кала указывает на наличие или отсутствие инфекционного возбудителя, простейших или гельминтов.
Справка. При методе полимеразной цепной реакции выявляется наличие возбудителя по следам его жизнедеятельности. Поэтому в представленном биоматериале, например, может не быть гельминтов, или их яиц, но ПЦР анализ покажет положительный результат, обнаружив ДНК паразитов.
В лабораториях предлагают комплексное обследование сразу на несколько возбудителей, так называемые профили. Одинаковые расстройства со стороны ЖКТ – тошнота, рвота, диарея, могут быть вызваны и патогенными микроорганизмами, и гельминтами. Комплексный ПЦР анализ позволяет ускорить постановку диагноза.
Подготовка к сдаче анализа
Противопоказаний для сдачи анализа кала для ПЦР диагностики не существует. Следует соблюсти некоторые требования перед забором биологического материала:
- Допускается для анализа кал, полученный естественным путем. Материал после клизмы непригоден.
- Не допускается сдача анализа после проведения рентгеновского обследования, с использованием контрастных веществ.
- Образец собирается до начала лечением антибиотиками.
- Следует прекратить прием препаратов, влияющих на работу ЖКТ, за 3-4 дня.
- Необходимо отменить введение ректальных свечей за несколько дней до сдачи биологического материала и препаратов, окрашивающих кал (висмут, железо).
Важно! Анализ кала для ПЦР диагностики сдается только в специальной таре. Необходимо заранее получить контейнер у лечащего врача, в лаборатории или приобрести в аптеке.
Инструкция по забору
Правила сбора биологического материала для анализа простые. Их соблюдение обеспечит точность результата:
- Необходимо собрать кал, полученный в день исследования.
- Нельзя нарушать стерильность транспортного стаканчика.
- Кал переносится из судна в емкость для транспортировки с помощью ложечки.
- Следует на треть заполнить контейнер биологическим материалом.
- Не допускайте попадание мочи в контейнер.
- Образец доставляется в лабораторию в течение трех часов после сбора.
- Нужно обеспечить охлаждение емкости с материалом во время транспортировки, если нет возможности доставить пробу в течение трех часов.
- Допускается хранение биологического материала в холодильнике (2-8° С) до 24 ч.
Важно! Нельзя прикасаться руками к внутренней поверхности контейнера, крышки, ложечки, во время сбора анализа.
Стоимость процедуры можно посмотреть в прайс-листе лаборатории.
Запись на прием
Для записи на сдачу анализов заполните форму ниже и отправьте заявку. С Вами свяжется администратор клиники и уточнит желаемое время визита и все необходимые данные.
Получение результатов
Результаты анализов можно получить непосредственно в клинике при личном визите пациента либо заранее оставить администратору свой адрес электронной почты и мы вышлем их на этот email.
дерматовенеролог / Стаж: 23 года
Дата публикации: 2019-07-05
гинеколог / Стаж: 26 лет
По анализу кала можно заподозрить множество патологий, связанных с пищеварительной системой и не только. Опираясь на полученные данные, врач назначает соответствующее лечение. Анализ кала на ПЦР один из наиболее информативных способов получения информации о состоянии здоровья пациента.
Анализ кала на ПЦР позволяет определить с высокой степенью точности большую часть микроорганизмов, обитающих в кишечнике, как патогенных, так и условно-патогенных. Этот отдел пищеварительной системы наиболее заселен бактериями, вирусами, простейшими.
Показания к анализу
Причин, по которым может потребоваться анализ кала на ПЦР достаточно много. Это и некоторые виды наследственных заболеваний, и наличие кишечных инфекций и последствия приема некоторых медикаментозных средств, соблюдение диет, отрицательно влияющих на организм, наличие вредных привычек.
Все эти факторы создают условия для возникновения различных видов заболевания кишечника, в том числе и сопровождающихся нарушением микрофлоры. В этом случае полезные микроорганизмы вытесняются заменяющей их патогенной флорой.
Данный тип обследования врачи назначают пациентам, которые жалуются на:
- Приступы тошноты.
- Сильные боли в области живота.
- Отрыжка.
- Диарея.
- Частые запоры.
- Метеоризм.
Помимо этого, может повышаться температура, появляться сыпь на кожных покровах, или будет изменяться оттенок кожи и склер глазных яблок.
Все эти симптомы являются общими для многих кишечных заболеваний. Например, боли в животе при разных кишечных заболеваниях всегда присутствуют, но носят различный характер, локализацию и время возникновения, поэтому без анализа кала не обойтись при постановке диагноза, иначе вероятность ошибки будет высока.
Подготовка к процедуре
К сдаче кала необходимо соответствующим образом подготовиться.
- За семь дней до исследования необходимо прекратить прием всех медикаментов, особенно тех, которые влияют на перистальтику кишечника.
- Накануне сбора материала нельзя использовать ректальные свечи и ставить клизму.
- Полностью исключаются из рациона питания продукты, окрашивающие кал.
- Биологический материал собирают в стерильный контейнер.
- На образец для исследования не должна попасть моча и выделяемое из половых органов.
Наиболее информативными будут те фрагменты кала где будут посторонние включения, имеется кровь и слизь.
Причины ложных результатов
Не всегда полученные результаты будут отражать истинную картину процессов, происходящих в кишечнике. Это происходит в следующих случаях:
- При нарушении правил сбора материала, особенно если пациент продолжал принимать антибиотики и противовоспалительные препараты до момента сдачи кала.
- При несоблюдении требований к употребляемым продуктам.
- Результат исследования будет ложноположительным в том случае, если инфекции нет, а полученные данные свидетельствуют об обратном. Такое становится возможным, если в кишечнике имеются микроорганизмы, находящиеся в близком родстве с возбудителем.
Положительное значение может быть получено по вине лаборанта, в материал попадет ДНК микроорганизмов, оставшееся после предыдущего материала.
Изменение полученных данных может произойти, если будут использованы просроченные реагенты.
Как проводится анализ
Используя метод ПЦР, в кале можно выявить хеликобактер пилори, лямблии, присутствие простейших, грибов и глистов. Данный способ выявления инфекций существует не так давно, около тридцати лет. В его основу положена способность обнаружения в материале участков ДНК возбудителей.
Для этого структуры образца многократно увеличивают с помощью создания специальных условий, при которых из одной молекулы ДНК получается две. На образование одной цепочки уходит до трех минут. После того как образуется достаточно число молекул, проводят их визуальное опознание.
Нормы и расшифровка результата
В ходе исследования проводится прямое определение возбудителя, в то время как другие виды диагностики имеют дело лишь с продуктами их жизнедеятельности, которые только косвенно свидетельствуют о присутствии патогенного микроорганизма.
ПЦР анализ имеет высокий уровень специфичности, так как каждый организм имеет ДНК, свойственное только его виду. Исследование обладает высокой степенью чувствительности, так как позволяет найти даже единичные клетки возбудителя в материале.
Так как РНК И ДНК у организмов состоят из одинаковых наборов белков, то подобный принцип исследования универсален и обнаруживает практически все виды возбудителей.
С помощью ПЦР метода удается определить микроорганизмы, которые не поддаются культивации и поэтому не идентифицируются с помощью других, уже ставших традиционными методов.
У этого метода существуют и недостатки. С его помощью невозможно изучать возбудителей, чьё ДНК еще не было обнаружено и исследовано. Так как возбудители под действием различных факторов часто мутируют, результат анализ становится ложноположительным.
Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.
Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.
Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий.
К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии).
Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев "бактериологически неподтвержденной дизентерии", особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.
Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.
Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).
В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является "золотым стандартом" в клинической диагностике норовирусных инфекций.
Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита.
Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.
Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.
Для чего используется исследование?
- Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
- для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).
Когда назначается исследование?
- При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
- при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
- при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
- присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus).
Причины отрицательного результата:
- отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus.
Что может влиять на результат?
Факторы, искажающие результат:
- длительное хранение материала до его поступления в лабораторию;
- замораживание материала или его термическая обработка;
- несоблюдение правил взятия биоматериала и его загрязнение.
Читайте также: