Антинуклеарный фактор при инфекции

Суть метода

Биологическим материалом для исследования является кровь. При проникновении в организм любого патогенного микроорганизма иммунная система начинает вырабатывать специфические антитела, задачей которых является уничтожение чужеродных антигенов. Суть метода и заключается в обнаружении и количественном определении этих веществ в жидкой соединительной ткани.

Врачи утверждают, что АНФ-анализ крови - это лабораторный вид исследования, имеющий высокую степень информативности. С его помощью возможно выявить любые аутоиммунные патологии даже на ранней стадии их развития.

Специфические антитела также нередко выявляются у людей, страдающих от тяжелой формы гепатита, онкологии и некоторых инфекционных заболеваний. Данные вещества могут быть обнаружены и у здоровых людей. Подобная ситуация требует комплексного подхода для выявления причины.

АНФ-анализ иногда подразумевает оценку количественного содержания иммуноглобулинов. Их наличие может свидетельствовать о развитии коллагенозов и заболеваний ревматического характера.

Показания

Важно знать, что АНФ-анализ крови - это исследование, которое назначается с целью подтверждения или исключения наличия аутоиммунных патологий, а также для оценки эффективности проведенного лечения.

Заподозрить недуг врач может по следующим симптомам:

• Длительно сохраняющееся состояние лихорадки без явных причин.
• Болезненные ощущения в суставах.
• Повышенная степень утомляемости.
• Ломота в мышцах и суставах.
• Кожные проявления без явных причин.
• Частые эпизоды мышечных судорог.
• Повышенная температура тела.
• Уменьшение массы тела.
• Регулярные эпизоды тошноты.
• Головная боль.
• Нарушение слуха.
• Диарея.

Кроме того, АНФ-анализ назначается при подозрении на наличие ревматического заболевания. Исследование проводится после получения результатов лабораторной диагностики, в которых увеличены показатели СОЭ, ЦИК и С-реактивного белка.

Что показывает

АНФ-анализ крови позволяет выявить патологии аутоиммунного характера. Исследование информативно в отношении следующих заболеваний:

• Системной красной волчанки.
• Острого рассеянного энцефаломиелита.
• Болезни Шегрена.
• Ревматоидного артрита.
• Очаговой алопеции.
• Болезни Аддисона.
• Анкилозирующего спондилита.
• Антифосфолипидного синдрома.
• Аутоиммунной гемолитической анемии.
• Буллезного пемфигоида.
• Аутоиммунного гепатита.
• Глютеновой болезни.
• Аутоиммунных патологий внутреннего уха.
• Болезни Чагаса.
• Синдрома Черджа-Стросса.
• Хронической обструктивной болезни легких.
• Дерматомиозита.
• Болезни Крона.
• Сахарного диабета I типа.
• Синдрома Гудпасчера.
• Тиреоидита Хашимото.
• Базедовой болезни.
• Синдрома Гийена-Барре.
• Болезни Кавасаки.
• Гнойного гидраденита.
• Первичной нефропатии.
• Идиопатической тромбоцитопенической пурпуры.
• Интерстициального цистита.
• Эритематозной волчанки.
• Синдрома Шарпа.
• Кольцевидной склеродермии.
• Рассеянного склероза.
• Нарколепсии.
• Нейромиотонии.
• Обыкновенной пузырчатки.
• Псориаза.
• Феномена Рейно.
• Васкулита.
• Гранулематоза Вегенера.

Это неполный список заболеваний. Важно, что анализ АНФ показывает развитие аутоиммунных патологий на самой ранней стадии их течения. Это позволяет врачу определиться с тактикой лечения, а в дальнейшем оценить его эффективность.

Подготовка

Забор биоматериала осуществляется в утренние часы. Сдавать кровь необходимо натощак. Последний прием пищи должен быть совершен минимум за 4 часа. При этом пить воду допустимо в любое время и в любых количествах. Под запретом употребление алкоголя.

За 1 день до исследования показан покой. Физические и психоэмоциональные нагрузки нередко приводят к ложному результату. За полчаса до сдачи крови запрещено курить.

Необходимо поставить в известность врача о принимаемых медикаментах во время назначения им анализа АНФ. Это обусловлено тем, что активные компоненты некоторых препаратов провоцируют выработку антител и также могут стать причиной лекарственной волчанки. Ложноотрицательные результаты нередко являются следствием приема глюкокортикостероидов.

Если пациенту были назначены физиопроцедуры или инструментальные обследования, их необходимо проводить только после сдачи крови.

Забор биоматериала

Он осуществляется в утренние часы. Биологическим материалом является венозная кровь. Ее забор проводится согласно стандартному алгоритму. Как правило, кровь берется из вены, расположенной на локтевом сгибе.

После того как жидкая соединительная ткань будет получена, из нее выделят сыворотку. Именно она необходима для проведения анализа.

Виды исследований и их описание

В настоящее время обнаружить антитела в биоматериале возможно несколькими способами:

1. С помощью непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии. Если специфические вещества присутствуют в крови, они начнут связываться с особыми ядерными антигенами. В лабораториях используются элементы, которые способны светиться в отдельном спектре. Затем биоматериал тщательно изучается под микроскопом. Заболевание можно заподозрить по типу свечения. Данный способ признан самым информативным в отношении определения значения антинуклеарных антител. Одной из разновидности методики является исследование с использованием клеток НЕр. Анализ АНФ в этом случае подразумевает забор биоматериала и с гортани. Процесс не сопряжен с возникновением болезненных и иных дискомфортных ощущений. Важно знать, что анализ крови АНФ НЕр-2 - это в настоящее время самое точное исследование. Эпителиальные клетки с гортани инкубируют с сывороткой, после чего их также соединяют с флуоресцентными веществами.
2. С помощью иммуноферментного анализа. Его суть заключается в том, что когда происходит взаимосвязь антител и антигенов, цвет раствора меняется. Наличие того или иного оттенка позволяет заподозрить наличие определенной патологии.

Расшифровкой АНФ-анализа должен заниматься лечащий врач. При наличии положительных результатов исследований назначаются дополнительные тесты. Окончательный диагноз не ставится на основании заключения одного анализа.

Нормальные значения

Наилучшим результатом является тот, при котором антинуклеарные антитела отсутствуют. Однако стоит помнить о том, что они могут обнаружиться и у совершенно здоровых людей. В этом случае показано проведение повторного исследования.

Норма анализа АНФ - титр не более 1:160. При этом данный показатель актуален как для взрослых, так и для детей.

Во время расшифровки АНФ-анализа крови важно учитывать следующую информацию:

• Низкие титры не являются гарантией того, что патологии аутоиммунного характера нет. Согласно статистике, у 5% пациентов с системной красной волчанкой результаты исследования отрицательные.
• Если у человека налицо все симптомы аутоиммунного заболевания, а анализ при этом свидетельствует об обратном, врач не исключает наличие недуга. В подобных ситуациях дополнительно проводится иммуноферментное исследование.

Анализ АНФ, осуществленный с помощью клеток НЕр-2, считается нормальным, если титр не выше 1:160. Результат более 1:640 свидетельствует об обострении ревматических патологий. В период ремиссии заболевания титр снижается до 1:320. При этом только врач сможет выявить тот факт, о чем говорит такой низкий показатель, основываясь на данных анамнеза и индивидуальных особенностях здоровья пациента.

АНФ повышен

Антинуклеарные антитела, связываясь с антигенами, образуют иммунный комплекс. Последний, в свою очередь, является пусковым фактором развития воспалительного процесса в стенках сосудов. В результате у человека появляются первые тревожные симптомы системных заболеваний. Анализ же показывает высокие титры.

В этом случае патологию можно выявить, определив тип свечения. Интерпретация результатов:

• Гомогенное. Подобное свечение может свидетельствовать о наличии системной красной волчанки, хроническом гепатите и склеродермии.
• Периферическое. Всегда говорит о развитии системной красной волчанки.
• Гранулярное. Возможные заболевания: синдром Шегрена, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, смешанная патология соединительной ткани.
• Ядрышковое. Данный тип свечения характерен для системной красной волчанки, полимиозита, синдрома Шегрена и склеродермии.
• Центромерное. Возможные патологии: кальциноз кожи, эзофагеальная дисфункция, синдром Рейно, телеангиэктазия, склеродактилия.
• Цитоплазматическое. Подобное свечение говорит об аутоиммунных заболеваниях печени или о полимиозите.

АНФ понижен

Уменьшение уровня антинуклеарных антител имеет клинически важное значение исключительно при прогнозировании и мониторинге имеющихся и ранее выявленных системных заболеваний.

Показатель АНФ напрямую зависит от интенсивности патологического процесса. В связи с этим его уменьшение - это благоприятный признак, свидетельствующий о том, что лечение было проведено успешно, а болезнь перешла в стадию ремиссии.

Лечение

Каждая патология аутоиммунного характера требует определенного терапевтического подхода. Цель проведения исследования крови на АНФ - выявить в жидкой соединительной ткани антитела и оценить характер их взаимодействия со специфическими антигенами. На основании результатов диагностики врач может предварительно поставить диагноз. Для его подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований. И только после этого врачом составляется схема лечения. Выбор медикаментозных средств напрямую зависит от того, какая патология выявлена у человека.

Стоимость

Сдать анализ АНФ можно в независимой лаборатории, частной клинике или государственном медицинском учреждении. Важно знать о том, что не во всех бюджетных поликлиниках подобная услуга предоставляется. Относительно ее наличия необходимо уточнять в регистратуре.

Исследование является платным даже в государственных медицинских учреждениях. Стоимость анализа напрямую зависит от ценовой политики клиники, складывающейся из множества факторов. Минимальная цена составляет 1000 рублей, максимальная не превышает 1700 рублей. Кроме того, необходимо дополнительно оплатить забор крови. Стоимость данной услуги, как правило, не превышает 200 рублей.

В заключение

Аббревиатура АНФ расшифровывается как антинуклеарный фактор. В норме он не должен присутствовать в крови здорового человека или же его концентрация должна быть менее 1:160. Анализ на АНФ назначается для того, чтобы выявить у пациента патологии аутоиммунного характера на самой ранней стадии их развития.

Суть метода: при проникновении в организм провоцирующих агентов защитной системой начинают вырабатываться антитела. Их задача - атаковать антигены и уничтожить их. Для выявления данной реакции у пациента осуществляется забор венозной крови с последующим отделением сыворотки. В последнюю добавляют специфические антигены и оценивают дальнейшие реакции.

Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний

журнал "Terra Medica nova" № 3 (15) 2007

С. В. Лапин,кандидат медицинских наук
А. А. Тотолян, доктор медицинских наук
Научно-методический центр по молекулярной медицине;
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова

Залогом эффективного лечения многих аутоиммунных заболеваний и предотвращения инвалидизации больного является тщательное лабораторное обследование. Его основу составляет выявление аутоантител в сыворотке крови и биологических жидкостях. В обзоре представлены принципиальные подходы к использованию аутоантител в качестве диагностических маркеров, описаны основные семейства аутоантител и применение конкретных серологических тестов в диагностике широкого спектра аутоиммунных заболеваний.

Заболевания, в патогенезе которых лежит патологическая реакция иммунной системы против собственных антигенов организма, относят к аутоиммунным. Врачам практически всех специальностей приходится сталкиваться с аутоиммунными процессами. Аутоиммунные состояния преобладают в ревматологии, нефрологии, дерматологии, часто отмечаются в гастроэнтерологии, неврологии, пульмонологии и многих других терапевтических специальностях (табл. 1). Распространенные аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, инсулинзависимый сахарный диабет, системные заболевания соединительной ткани, ускоряют течение атеросклероза и приводят к сердечно-сосудистой патологии. В основе атеросклероза, как полагают многие исследователи, лежит аутоиммунная реакция в отношении компонентов соединительной ткани сосудистой стенки и компонентов плазмы крови.

Таблица 1. Частота основных аутоиммунных заболеваний в США (данные за 1996 г.)

Механизмы нарушения иммунологической толерантности при аутоиммунных заболеваниях изучены плохо. Очевидно, что важную роль играет генетическая предрасположенность, обусловленная набором генов системы HLA, которые определяют направление иммунного ответа. На фоне предрасположенности определенное сочетание факторов внешней среды, включающее тканевое воспаление, вирусные и бактериальные инфекции, разрушение ткани или нарушение функций гематотканевых барьеров, приводит к сенсибилизации по отношению к собственным антигенам.

Хотя клеточный иммунный ответ лежит в основе аутоиммунных заболеваний, однако до сих пор не существует надежных и стандартизованных методов определения клеточных реакций против собственных антигенов. В то же время гуморальные иммунные ответы, характеризующиеся появлением аутоантител, широко используются в диагностике аутоиммунных заболеваний.

Аутоантитела представляют собой иммуноглобулины классов IgG, IgA, IgM, специфически связывающиеся с антигенными эпитопами молекул человеческого организма, хотя в лабораторных методах иногда используются близкие или идентичные человеческим антигены лабораторных животных. Известно, что аутоантитела, реагирующие с человеческими антигенами, изредка могут отмечаться на фоне нормального функционирования иммунной системы. Характерно, что в норме или на фоне неиммунных заболеваний аутоантитела выявляются в низких титрах, т. е. обладают низкой аффинностью. Среди аутоантител, которые чаще других отмечаются в норме, выделяют антинуклеарные антитела, небольшое содержание которых может быть выявлено у 2–3% здоровых лиц, несколько чаще — у пожилых, а также ревматоидный фактор, встречаемость которого в пожилом возрасте может достигать 10% популяции. Сравнительно часто на фоне неиммунных заболеваний выявляются антикардиолипиновые антитела, антитела к тиреопероксидазе и тиреоглобулину. Причина появления аутоантител на фоне нормального функционирования иммунной системы неизвестна, однако, как полагают, аутоантитела в норме могут играть определенную роль в осуществлении аутотолерантности и предотвращении развития аутоиммунных процессов.

Антинуклеарный фактор и антинуклеарные антитела

Антинуклеарные антитела (АНА) представляют собой семейство аутоантител, насчитывающее около 200 разновидностей, которые способны связываться с нуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками. Они встречаются более чем у 90% пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка, склеродермия, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена, аутоиммунные заболевания печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве инфекционных, воспалительных и онкологических заболеваний. Все это обусловливает большое клиническое значение серологического обследования больных с подозрением на системное аутоиммунное заболевание. Действительно, тесты по определению АНА являются наиболее часто выполняемыми лабораторными анализами во всех клинических иммунологических лабораториях.

Результат метода выражается в титре, который указывает на содержание и аффинность аутоантител. Норма составляет менее 1/80, причем низкие титры АНФ 1/80–1/160 изредка могут отмечаться у клинически здоровых лиц. Обнаружение высоких титров АНФ более 1/320 с большей вероятностью указывает на системное ревматическое заболевание. Кроме определения титра, АНФ на перевиваемой клеточной линии НEр-2 позволяет описать тип свечения ядра клетки, который указывает, с какими антигенными мишенями взаимодействуют аутоантитела. Определяются 6 основных типов свечения и около 20 минорных типов свечения, описание которых самостоятельного диагностического значения не имеет. Гомогенный и периферический типы свечения ядра наиболее характерны для системной красной волчанки; гранулярный отмечается при синдроме Шегрена, смешанном заболевании соединительной ткани и артритах; ядрышковый и центромерный типы свечения характерны для склеродермии и ее разновидностей. Цитоплазматический тип свечения клетки отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени.

После обнаружения АНФ или антител к экстрагируемым ядерным антигенам необходимо установить клеточную мишень АНА, так как определение спектра АНА тесно связано с конкретным диагнозом. Минимальный набор обычно включает определение антител к Sm, RNP, SS-A и SS-B антигенам, а также Scl-70, CENT-B и Jo-1. Такой спектр обобщает наиболее часто встречающиеся мишени АНА, а также основные ревматические заболевания.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

Основные понятия, характеризующие СЗСТ

Как уже описывалось выше, патогенез данных патологий берет свое начало со сбоев функционала иммунной системы, и выработке защитных антител к определенным компонентам собственных клеток. Такие клетки за особенность своего происхождения имеют второе название – аутоантитела. В процессе иммунного сбоя они вступают в контакт с белковыми соединениями ядра, нуклеиновыми кислотами и антигенами цитоплазмы, что приводит к появлению симптомов воспалительных заболеваний, таких как:

• структурные изменения тканей и органов;
• выраженное необоснованное утомление;
• болевые ощущения в мышцах и суставах;
• поражение кожных покровов;
• снижение веса тела и другие.

Антинуклеарные антитела (АНА) могут образовываться при довольно обширном спектре аутоиммунных патологий, но наибольшая вероятность их появления при системной красной волчанке (СКВ).

Справка! По статистике, более чем у 90% пациентов, страдающих СЗСТ, определяется патологическая выработка подобных антител. На текущий момент изучено около 200 их видов, которые получили обобщенное название – антинуклеарный фактор. В основном они представлены иммуноглобулинами класса G, но иногда встречаются М или А.

Суть анализа крови на антинуклеарный фактор

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века. Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования. В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

• склеродермия;
• дерматомиозит;
• узелковый периартериит;
• хронический активный гепатит и т. д.

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция. Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами. Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата. Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

Какие группы антигенов используются при исследовании?

При расшифровке материалов всегда необходимо брать во внимание, что в спектр АНА входит довольно большая группа аутоантител к нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гистонам, ДНК и другим структурным единицам ядра. Из этого следует, что функционал теста направлен на выявление антител к составляющим ядра и цитоплазмы, которые изначально были определены при СКВ.

Позже диагностические возможности исследования были расширены, что обусловлено определением подобных антител при других СЗСТ. В скрининговых методиках для обнаружения суммарных АНА, как правило, применяется определенный набор антигенов, принятых за основные маркеры аутоиммунных ЗСТ.

К ним относятся антитела класса IgG:

• SS-A (Ro) – ядерные рибонуклеопротеины;
• SS-B (La) – ядерные белки;
• Scl-70 – белок-фермент (топоизомераза-1);
• нативная двухцепочная ДНК;
• RNP/Sm – комплекс антигенов;
• Jo-1 – фермент РНК – синтетаза;
• CENP-B (центромера)
• Hep-2 клетки;
• митохондрии (PDC).

АНА практически безвредны для организма – они не способны проникать в живые ткани. Но в отдельных случаях могут соединяться в комплексы антиген-антитело, что в результате приводит к структурным разрушениям тканей. Одним из таких примеров является поражение паренхимы почек при СКВ. Так как при СЗСТ в процесс вовлечено несколько органов, то выявление АНА не является первостепенно важным для диагностики, а считается лишь подтверждением определенной симптоматики.

Изучение полученных результатов

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов. Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160. К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

• Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
• Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
• Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
• Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
• Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
• Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
• Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
• Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
• Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

Факторы, способные исказить результаты

На достоверность полученных в ходе исследования данных могут повлиять всего несколько факторов, способных показать и ложноположительный и ложноотрицательный результат. Так, неправдоподобные ответы со сдвигом вверх наблюдаются у пожилых пациентов в возрасте от 60 лет (по статистике в 10–37% случаях) и при приеме медпрепаратов, вызывающих лекарственную волчанку (некоторые антибиотики, контрацептивы, сульфаниламиды, тиазидные диуретики).

Отмечено, что у 5–55% особ женского пола, имеющих грудные имплантаты, повышается уровень концентрации АНА. К ошибочной диагностике со сдвигом вниз может привести употребление глюкокортикоидных препаратов – Преднизолона, Метипреда или Дексаметазона.

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является "золотым стандартом" выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U₃RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
• Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
• Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
• Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

• При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
• При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Титр: Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

• cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
• дерматомиозит/полимиозит,
• системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
• синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
• смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
• синдром Рейно,
• дискоидная волчанка,
• лекарственная волчанка,
• ревматоидный артрит,
• некротизирующий васкулит,
• инфекционный мононуклеоз,
• лейкемия,
• злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
• тяжелая миастения,
• инфекционный эндокардит,
• хронический аутоиммунный гепатит,
• первичный билиарный цирроз печени,
• туберкулез,
• пневмокониоз,
• интерстициальный фиброз легких.

Тип свечения

Для чего он характерен

Для СКВ, лекарственной волчанки, системной склеродермии, хронического активного гепатита

Для СКВ, синдрома Шегрена, смешанной болезни соединительной ткани, ревматоидного артрита

Для полимиозита/дерматомиозита, склеродермии, синдрома Шегрена, СКВ

Для CREST-синдрома (кальциноза кожи, синдрома Рейно, эзофагеальной дисфункции, склеродактилии, телеангиоэктазии)

Для дерматомиозита/полимиозита, аутоиммунного заболевания печени, первичного билиарного цирроза

Что может влиять на результат?

• Ложноположительному результату способствует:

• • возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
  • применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).

• Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.



• В 5 % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
• Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13 % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
• Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
• При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

• Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
• Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
• Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
• Антистрептолизин О
• С-реактивный белок, количественно
• Ревматоидный фактор
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
• С3 компонент комплемента
• С4 компонент комплемента

Кто назначает исследование?

Литература

• Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed Normal, Illinois, 2007: 55-57 pp.
• Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011 Jan;63(1):191-200.
• Kumar Y, Bhatia A, Minz RW. Antinuclear antibodies and their detection methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited. Diagn Pathol. 2009 Jan 2;4:1. PMID: 19121207 [PubMed].