Что точнее метод пцр или кровь на инфекции

ПЦР и ИФА два метода диагностики, заслужившие признание среди медицинских работников. Оба исследования из разряда молекулярной биохимии – точные и достоверные. Имеется разница между ПЦР или ИФА, что лучше и правдивей характеризует патологии? Для ответа на вопрос стоит понять суть методик, обозначить сходства и отличия диагностических способов.

Что такое ПЦР?

ПЦР высокочувствительная полимеразная цепная реакция, которая обнаружит возбудителя болезни (вирусы, бактерии, хламидии) в организме. Методика основана на определении специфической структуры ДНК, имеющейся у инфекции. ПЦР проводится при подозрении на скрытое хроническое течение инфекционного процесса в организме, пребывающего в латентной форме. К особенностям и достоинствам ПЦР относят:

• высокую 100% чувствительность к возбудителям любого типа с наличием уникальных фрагментов нуклеиновых кислот,
• быстроту получения результата,
• возможность определения численности одного вида возбудителя,
• одновременное диагностирование нескольких возбудителей.

Лаборанты без труда с помощью полимеразноцепной реакции определяют ДНК структуру одиночного возбудителя, что дает возможность отслеживать и оценивать результаты лечения после назначения медикаментозной терапии. ПЦР, как новый метод исследования, незаменим для постановки диагноза при таких заболеваниях:

• туберкулез,
• дифтерия,
• сальмонеллез,
• ВИЧ,
• СПИД,
• гепатит С независимой стадии,
• бактериоз.

Точность ПЦР как методики достигает 99% с выявлением возбудителей на начальном этапе поражения организма при отсутствии особой симптоматики у пациентов. Это гарантирует быстрое излечение от болезней, достижение устойчивой ремиссии в ряде случаев.

Что такое ИФА?

ИФА – иммунный метод исследования и точный анализ для выявления патологий в организме, вызванных инфекционными возбудителями. Исследование назначается при подозрении на:

• сифилис,
• гепатиты B, C,
• хламидиоз,
• токсоплазмоз,
• цитомегаловирус,
• вирусный герпес,
• уреаплазмоз,
• женский микоплазмоз.

Иммунофера позволяет выявить онкологию на раннем этапе. ИФА назначают для выявления уровня гормонов в крови, диагностики заболеваний эндокринной системы путем обнаружения онкомаркеров. Иммуноферментное исследование имеет множество достоинств:

• простота и быстрота проведения,
• высокая чувствительность при реакциях антиген-антитело даже на фоне незначительной концентрации возбудителя в организме,
• высокий уровень специфичности анализа, что позволяет быстро обнаружить и установить комплекс антиген-антитело, используемый фермент послужит меткой, способной точно зафиксировать сигнал взаимодействия между ними, распознать иммуноглобулины (антитела igm, igg) в крови.

В случае инфицирования организма на начальном этапе преобладают иммуноглобулины класса М. По мере прогрессирования инфекционного процесса присоединяются антитела класса А. Если заболевание переходит в запущенную стадию, то начинается выработка иммуноглобулина класса G. Ферментная реакция иммуноглобулина выявит степень тяжести заболевания и стадию развития патологии.

Чем отличается ИФА от ПЦР?

ПЦР и иммуноферметный (ИФА) анализы одинаково востребованы в целях диагностики. Оба исследования имеют плюсы и минусы, сходства и различия.

1. ИФА. Основное направление – обнаружение продуктов жизнедеятельности маркерных белков или установление контактов между возбудителем и иммунной системой. Опровержение либо подтверждение факта распространения инфекции в органах. Отличие ИФА от метода ПЦР – пригодность любого биоматериала для анализа: образца ткани, слюны, мочи, крови.
2. ПЦР позволяет выявить конкретного возбудителя, относящегося к группе грибков, вирусов, бактерий. Полимеразный способ диагностики обнаружит патогенный организм в исследуемом материале: жидкость, ткань, орган. Для получения масштабной картины происходящих внутри организма патологических процессов врачи назначают сразу 2 вида анализа в комплексе. Это важно для выявления ЗПППА (патологий, передающихся при половом акте).

Чтобы с точностью установить инфекционное заболевание, передающееся половым путем, и уровень антител в крови, сначала проводится ПЦР, ведь результаты ИФА исследования неразумно брать за основу без получения первичных данных.

При выявлении антител в организме по одному ИФА нельзя сказать однозначно: протекает ли патологический процесс в организме или нет. Возможно, контакты с возбудителем были, но далеко в прошлом, и анализ может выдать ложный результат.

Нельзя делать однозначные выводы о ПЦР или ИФА, и что на самом деле достовернее. ИФА – эффективный метод диагностики, но вероятность развития заболевания может подтвердить только ПЦР, поэтому разумно проводить оба исследования совместно. ПЦР – более точный метод исследования, но в образце материала ткани и на отдельном участке тела. Несмотря на точность методики погрешности случаются нередко, ведь инфекционный процесс может быстро распространяться по организму.

Уследить за продвижением, например: хламидий по каналу шейки матки, бывает затруднительно. Инфекция может отсутствовать в яичниках и маточных трубах, когда тест на ИФА дает положительный ответ, а тест на ПЦР – отрицательный. Бывает, что наоборот. Для получения 100% результата оба теста на ПЦР и ИФА лучше проводить совместно.

Бывает, что результаты ПЦР или анализа ИФА не совпадают, что случается при длительном хроническом протекании инфекции или привыкании организма к ее влиянию. В данном случае ИФА – отрицательный, а ПЦР – положительный. Если в мазке немного микробов, но формируются антитела и титры долго сохраняются в крови даже после проведенного лечебного курса, то ИФА будет положительным, а ПЦР – отрицательным.

Нередко методы дают ложноположительные недостоверные ответы, когда, например: ИФА положительный, ПЦР положительный. В учет берется симптоматика пациентов, проходили ли они лечение от инфекций. Ведь бывает, что ПЦР отрицательно и ИФА отрицательно.

Разные клинические случаи требуют индивидуального подхода. Поэтому, какой анализ лучше к проведению и что точнее: ПЦР или ИФА – решение принимает лечащий врач.

Проверяться на наличие скрытых половых инфекций и сдавать анализы желательно с партнером. Ведь бывает, что у одного явно выражено течение воспалительного процесса, а у другого нет даже подозрений, что негативно отражается на половой жизни и вызывает недоверие. Всегда лучше пройти консультацию у врача и пролечиться обоим партнерам, чтобы повысить эффективность лечебного курса и сократить сроки терапии.

Например: при уреаплазмозе и микоплазмозе хорошие результаты от лечения воспалительных процессов в малом тазу можно получить только в случае прохождения совместного лечебного курса.

С учетом особенностей можно сделать вывод, что ПЦР-диагностика и ИФА отличие имеют, но оба способа способны достоверно определить наличие патологий. Однако только специалистам под силу выявить разницу между методами, выбрать реальные и правильные методы для диагностики, более точно дать расшифровку полученным результатам анализов.

Узнать подробнее о методе ПЦР можно из видеоролика:

ПЦР или полимеразная цепная реакция (Рolymerase Сhain Reaction) – это высокоинформативный метод диагностики, предназначенный для выявления генетических отклонений и дифференциации инфекционных заболеваний.

Клинико-лабораторная оценка биоматериала (крови, мочи и т.п.) основана на определении генно-молекулярной структуры возбудителя инфекции, что нивелирует риск ложноположительного результата анализа. За научно-медицинскую ценность метода его разработчик Кэри Мюллис был удостоен Нобелевской премии в 1993 г.

Специфика метода ПЦР крови на инфекции

Анализ крови на ПЦР (PCR) обнаруживает активных инфекционных агентов и неактивных патогенов, погибших под воздействием медицинских препаратов, на любом этапе развития болезни. Такая способность обусловлена выявлением не просто возбудителя инфекции, а его генома:

• ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, паразитов, грибков;
• РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов.

Пробирку с образцом крови, взятой у пациента, размещают в амплификаторе – реакторе, обеспечивающем последовательное нагревание и охлаждение образца. К биоматериалу добавляют реакционную смесь. В амплификаторе производится более 30 циклов смены температурного режима, каждый из которых включает 3 этапа (денатурацию, отжиг праймеров, элонгацию).

В ходе многократной реакции амплификации:

• разрываются водородные цепи макромолекул (ДНК и РНК);
• образуются комплементарные комплексы матрицы с короткими фрагментами РНК и ДНК (праймеры);
• термостойка ДНК-полимераза достраивает матричную цепь, и формирует множественные генетические копии возбудителя.

При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю. Таким образом, молекулярная диагностика решает три задачи одновременно:

• обнаруживает инфекционного агента;
• дифференцирует его принадлежность (вирус, бактерия и т. д) и разновидность;
• определяет дальнейшую тактику лечения и выбор медикаментов (в соответствии с установленным заболеванием).

ПЦР крови применяют для определения вирусов и бактерий либо тяжелых паразитарных внекишечных инвазий. Генная информация является уникальной, поэтому точность исследования ПЦР практически 100%. Рolymerase Сhain Reaction определяет инфекцию даже при отсутствии активности возбудителя и выраженных симптомов болезни.

Области применения анализа

В настоящее время в медицине и криминалистике, а также для клонирования генов и установления родственных связей применяют более десятка разновидностей амплификации. В ежедневной практике кровь на ПЦР назначают медицинские специалисты:

• педиатр;
• гинеколог;
• уролог;
• дерматовенеролог;
• инфекционист;
• фтизиатр;
• пульмонолог.

Генно-молекулярная диагностика успешно применяется в неонатологии. С помощью полимеразной цепной реакции выявляют возможное заражение младенцев внутриутробно и сразу после появления на свет. Для детей с риском инфицирования анализ проводят в первые 48 часов после рождения и повторно в возрасте 3-6 месяцев.

Кроме инфекционных заболеваний, Рolymerase Сhain Reaction помогает диагностировать наследственные аномалии и мутации. В перинатальный период методом ПЦР у будущего малыша можно обнаружить:

• гемофилию – нарушение свертываемости крови;
• болезнь Хантера – патологии обменных процессов;
• мусковидоз – нарушение внешнесекреторной функции желез;
• нервно-мышечную миодистрофию Дюшенна-Беккера;
• первичный иммунодефицит;
• синдром Альпорта – патологию почек.

PCR используют для определения мутантных генов и их РНК-продуктов в диагностике онкологических заболеваний. Высокая чувствительность молекулярного метода обеспечивает выявление онкопатологий в доклинической стадии, когда очаг опухоли не превышает 0,01 см 3 в размерах.

По обнаруженным онкогенам, биологическим канцерогенам и антионкогенам диагностируют исходную стадию:

• онкогематологических болезней (рака крови и лимфатической системы);
• злокачественных образований молочных желез;
• аденокарциномы толстой кишки;
• меланомы;
• рака ротоглотки;
• наследственных форм рака.

Высокой онкогенностью обладают штаммы 16, 18, 31, 33, 35 ВПЧ (вируса папилломы человека). В 50% случаев вызывают карциному шейки матки у женщин – раковую опухоль эпителиальных клеток. Обнаружение неопластических клеток в доклинической стадии рака значительно повышает шансы на успешное лечение болезни.

Особую ценность ПЦР имеет для Службы крови. Метод позволяет определить заражение гепатитами, ВИЧ, сифилисом в бессимптомный инкубационный период. На этой стадии иммунная система еще не продуцирует антитела к возбудителям, и выявить заболевания с помощью серологических исследований невозможно.

Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций

Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.

Вирусы
герпесовирус	1 тип	обычный герпес
	2 тип	генитальный герпес
	3 тип	краснуха
	4 тип (цитомегаловирус)	цитомегалия
	5 тип (Эпштейн-Барр)	инфекционный мононуклеоз
папилломы человека (21 штамм)		папилломатоз
HAV, HBV, HCV		гепатит А, В, С
иммунодефицита		ВИЧ, СПИД
Бактерии
бледная трепонема		сифилис
гарднереллы		гарднереллез
гонококки		гонорея
уреаплазма		уреаплазмоз
сальмонелла		сальмонеллез
палочка Коха		туберкулез
листерия		листериоз
стрептококки и стафилококки		сепсис, пневмония, менингит
Паразиты, прокариоты, простейшие
описторхи (печеночные сосальщики)		описторхоз
плазмодий		малярия
токсоплазма		токсоплазмоз
лямблии		лямблиоз
хламидии		хламидиоз
трихомонада		трихомониаз
микоплазма		микоплазмоз
эхинококки		эхинококкоз
шистосомы		шистосомоз
цестоды		альвеококкоз

• хламидиоз;
• гонорея;
• трихомониаз;
• сифилис;
• ВИЧ;
• обычный и генитальный герпес;
• цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
• папилломатоз;
• гепатиты В, С.

А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).

Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:

• длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
• увеличение лимфатических узлов;
• кожная сыпь;
• зудящие высыпания в области наружных половых органов;
• поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
• боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
• диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
• лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.

ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.

Основные достоинства PCR

Метод полимеразной цепной реакции применяется в совокупности с другими исследованиями или заменяет:

• Микроскопию (обычную и люминесцентную) – изучение крови под микроскопом (люминесцентным микроскопом).
• Бактериологический посев – высаживание биоматериала на питательные для паразитов, бактерий и т. д. среды, и выращивание в лабораторных условиях колоний болезнетворных микроорганизмов.
• Серологические тесты – основаны на выявлении специфических антител (иммуноглобулинов) к антигену (инфекционному агенту): реакция иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других анализов. Прерогативы ПЦР-диагностики:

• Высокая точность типизации возбудителей. Оценка уникальных для каждого микроорганизма фрагментов ДНК и РНК дает возможность распознать конкретный штамм вируса, разновидность паразитов, грибков и бактерий.
• Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Чтобы обнаружить инфекцию, для ПЦР достаточно молекулярного присутствия патогенного микроорганизма.
• Оперативность проведения анализа. В отличие, к примеру, от бакпосева для выполнения которого требуется 7-14 дней, результаты PCR можно получить через 24 часа (в платных диагностических центрах интервал ожидания может быть сокращен до 5-7 часов).
• Универсальность. Диагностические возможности метода в области инфекционных болезней практически не ограничены.
• Комплексность. Одного образца крови достаточно для проведения исследования на несколько патогенных микроорганизмов.
• Специфичность. При проведении ПЦР исключены перекрестные реакции иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами, следовательно, невозможен ложноположительный результат исследования.

О недостатках Рolymerase Сhain Reaction можно говорить в свете высоких требований к оснащению лаборатории и квалификации медицинского персонала. Анализ проводится в условиях абсолютной стерильности, со строгим соблюдением температурного режима. Присутствие посторонних ДНК в воздухе может исказить результаты исследования.

Подготовка к анализу крови методом полимеразной цепной реакции

Подготовительные мероприятия обеспечивают максимальную объективность результатов исследования. Правила подготовки к ПЦР анализу крови включают:

• отказ от приема медикаментов за 5-7 дней до сдачи крови;
• ограничение жирной пищи и исключение из рациона спиртных напитков за 2 дня;
• сокращение физической активности накануне забора крови;
• соблюдение режима голодания 8-12 часов (сдавать кровь необходимо натощак).

За час до процедуры рекомендуется отказаться от никотина (не курить). Забор крови производится из вены, в утренние часы. В современных лабораториях, имеющих условия для проведения ПЦР-диагностики, биоматериал берут при помощи стерильных вакутейнеров. Кровь пациента хранится в течение двух недель, что делает возможным проведение дополнительных тестов.

О результатах и ценах

Результаты исследования можно получить на следующий день. Количественный показатель, иначе, число полученных копий инфекционного агента, указывается редко. В большинстве случаев пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:

Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации. Исследование относится к средней ценовой категории.

В клиниках Москвы и других крупных городов стоимость определения одного вида инфекции варьируется от 300 до 500 руб. Комплексный анализ ПЦР-12, как правило, обходится дешевле, чем проверка на каждый возбудитель отдельно.

Итоги

Полимеразная цепная реакция (реакция амплификации) – современное клинико-диагностическое исследование крови и других биожидкостей человека. Анализ основан на обнаружении и дифференциации молекулярного фрагмента вируса, бактерии и т. д. для определения инфекции или поврежденного гена для выявления мутаций, анормальных отклонений в развитии, наследственных патологий.

Ключевые преимущества ПЦР перед иными лабораторными тестами:

• диагностика заболеваний в исходном периоде (при отсутствии психосоматических проявлений);
• обнаружение нескольких патогенов, атакующих организм по одному биообразцу;
• чувствительность практически ко всем инфекционным агентам;
• определение начальных (доклинических) форм рака;
• определение генетических патологий во внутриутробном периоде развития ребенка.

Исследование является высокоинформативным, доступным и оперативным по времени выполнения. Результаты можно получить на следующий день после анализа.

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

• ВИЧ;
• герпеса;
• различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
• кандидоза;
• гепатитов;
• мононуклеоза;
• листериоза;
• цитомегаловируса;
• туберкулеза;
• вируса папилломы человека;
• клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

ПЦР – искусственная методика амплификации ДНК.

Способна обнаружить различные воспалительные и инфекционные заболевания на самом раннем сроке развития, до появления первых клинических признаков.

ПЦР представляет собой особый диагностический способ, который делится на несколько этапов:

• Денатурация (плавление)
• Гибридизация праймеров (отжиг праймеров)
• Элонгация

Денатурация

Во время денатурации термоблок нагревают до 94-96 °С, чтобы растворить двойные спиральные цепи водородных связей.

В конце фазы денатурации последовательности ДНК и праймеры должны присутствовать в виде отдельных цепей.

Отжиг праймеров

После денатурации блок охлаждают в течение 30 секунд, это позволяет праймерам связаться с одноцепочечной матрицей.

Дальнейший отжиг проводят при температуре, которая составляет от 55 до 65 ° C.

Элонгация

После того, как была синтезирована новая цепь, температуру снова повышают.

В этом случае до определенной рабочей температуры ДНК-полимеразы (между 68 и 72 ° C), которая теперь начинает амплифицировать ДНК.

Продолжительность этой фазы, в свою очередь, зависит от длины воспроизводимой цепи, обычно длиться от 6 до 11 минут.

На сегодня существует более 10 разновидностей полимеразной реакции.

Однако в лабораторной практике чаще прибегают к качественному определению ПЦР и Real-time PCR.

• Как подготовиться к ПЦР крови
• ПЦР крови в диагностике гепатита
• ПЦР крови на герпетическую инфекцию 1-2 типа
• Анализ крови ПЦР методом на туберкулез
• Анализ крови на ВИЧ методом ПЦР
• Обнаружение Staphylococcus методом ПЦР
• Анализ ПЦР на паразитарные инфекции
• ИФА или ПЦР: что лучше?

Как подготовиться к ПЦР крови

Подготовка является достаточно важным момент в исследовании любого биологического материала.

Соблюдая простые рекомендации, пациент повышает шансы получения максимального точного результата.

Подготовка к ПЦР и правила сдачи крови, следующие:

• Взятие биологического материала — крови, проводится в утреннее время, до 11-12 часов, на пустой желудок.
• За час до посещения лаборатории разрешается выпить стакан очищенной воды без газа.
• За 5-7 дней необходимо исключить прием медикаментозных средств. В случае невозможности отмены приема лекарства, об этом следует сообщить до взятия крови.
• Забор материала для диагностики ПЦР желательно проводить до начала других исследований.

ПЦР крови в диагностике гепатита

В последнее время анализ крови на гепатиты методом полимеразной реакции (ПЦР) все чаще назначается пациентам с подозрением на заболевание.

Анализ крови на гепатит методом ПЦР дает возможность решить такие задачи:

• Выявить протекающий инфекционный процесс на раннем сроке развития, в период сероконверсионного окна — до появления в организме антител.
• Уточнить отсутствие вирусной патологии, когда другие иммуноферментные анализы предоставили неоднозначные результаты.
• Обнаружить вирусоносителя среди серопозитивных пациентов.
• Дает возможность точно определить тип гепатита.

Полимеразная реакция определяет ДНК вируса путем исследования образца венозной крови или пунктата печени.

Диагностика может определить гепатит как количественно, так и качественно.

Количественный анализ крови способом ПЦР дает понять врачу о вирусной нагрузке на организм, определяя количество частиц вируса.

Интерпретация (расшифровка) ПЦР крови на гепатит В или С может быть следующей:

Положительный результат

Отрицательный результат

• На данный момент инфицирование вирусом отсутствует.
• Пребывание острой формы вируса в инкубационном периоде.
• Период восстановления/выздоровления.

Исследование крови на гепатит методом ПЦР рекомендуется в случае:

• Повышения уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартат-аминотрансферазы (АсАТ), выявленного в ходе биохимического анализа крови.
• Как часть обследования перед подготовкой к зачатию или хирургическому вмешательству.
• Когда пациент регулярно подвергается инъекциям внутривенного характера.
• Если у пациента был незащищенный сексуальный контакт, особенно при наличии подозрений о протекающем вирусе у партнера.
• Если у пациента присутствуют клинические признаки заболевания.

Анализ крови на гепатит С и другие типы методом ПЦР проводится с использованием метода Real-Time.

Провести диагностику уже можно спустя 14 дней после предполагаемого инфицирования.

ПЦР крови на герпетическую инфекцию 1-2 типа

Основные показания к сдаче ПЦР крови на герпес следующие:

• Наличие острой стадии инфекционного процесса, выраженные клинические признаки.
• Как часть исследования при подготовке к беременности или экстракорпоральному оплодотворению.
• Обнаружение плацентарной недостаточности или признаков герпетического заражения плода.
• При наличии у больного острых иммунодефицитных состояний, в том числе ВИЧ, при диагностировании заболеваний, имеющих клетки лимфоидной природы.
• В качестве дифференциального исследования инфекций урогенитального тракта.
• При появлении высыпаний в виде пузырьков неясной этиологии, без присутствия других клинических признаков заболевания.

Герпес первого и второго типа являются наиболее распространенными формами инфекции.

Оба типа рассматриваются как контагиозные заболевания, способные передаваться от одного человека к другому.

Герпетическая инфекция, вызванная первым типом, проявляется в виде пузырькового высыпания на губах.

Второй тип представляет собой инфекцию генитального характера, где основная локализация высыпаний — внешние половые органы.

В данном случае основной путь передачи — половой контакт, при этом, использование презерватива не дает гарантию защиты.

Расшифровка анализа полимеразной реакции на герпес:

• Положительно: в организме имеется инфекция Herpes simplex.
• Отрицательно: в организме отсутствует инфекция Herpes simplex.

Следует обратить внимание, что в редких случаях анализ крови методом ПЦР может предоставить ложноположительный результат.

Как правило, подобное случается при прохождении противовирусной терапии, что способствует снижению концентрации вируса в образце крови.

Анализ крови ПЦР методом на туберкулез

Туберкулез (ТБ) — это инфекционное заболевание, вызываемое бактериями из семейства микобактерий, которое насчитывает более 160 различных типов.

Безусловно, самой распространенной причиной туберкулезных инфекций у людей является микобактерия туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), обнаруженная Робертом Кохом.

Есть также несколько других видов бактерий, которые могут вызвать туберкулез, среди них, M. bovis и М. аfricanum.

Инкубационный период, то есть период до появления признаков туберкулеза после заражения занимает от шести до восьми недель.

Диагностика туберкулеза может быть осложнена из-за отсутствия выраженной клинической картины или присутствия неспецифических симптомов.

Длительный кашель, особенно в сочетании с ночным потоотделением и отхаркиванием, может указывать на туберкулез, особенно при наличии определенных факторов риска.

Прорывов в диагностике Mycobacterium tuberculosis является полимеразная реакция.

Она позволяет определить инфекцию на самой ранней стадии развития, когда патоген только начинает атаковать организм.

Суть методики ПЦР — выделить ДНК Mycobacterium tuberculosis из образца крови пациента, классифицируя микроорганизм.

Кроме того, анализ может выявить стадийность инфекционного процесса, что позволит определиться с терапевтической тактикой.

Анализ крови на туберкулез методом ПЦР не назначается пациенту, который проходит или недавно прошел лечение от данного заболевания.

Данная рекомендация связана с высоким риском получения ложноположительного результата.

Поскольку даже после терапии некоторое количество бактерий остается в организме.

Анализ крови на ВИЧ методом ПЦР

Вирус иммунодефицита человека или сокращенно ВИЧ, является одним из самых известных и угрожающих инфекционных заболеваний с момента его открытия в 1980-х годах.

Несмотря на тот факт, что до сих пор проводятся исследования относительно лечения ВИЧ, не существует пока лекарства или вакцины против данного вируса.

Игнорирование терапии ВИЧ-инфекции неизбежно приводит к СПИДу — синдрому приобретенного иммунодефицита.

За последние 30 лет ВИЧ стал настоящей пандемией, унесшей жизни около 28 миллионов человек.

Поэтому, своевременная диагностика вируса позволит минимизировать риски перехода заболевания в СПИД-стадию, что значительно продлит жизнь пациенту.

Особое значение в исследовании вируса иммунодефицита человека имеет полимеразная реакция — ПЦР.

Особенно диагностика важна в педиатрии, где в принципе невозможно обнаружить раннее течение вируса у детей без применения ПЦР.

Данное явление связано с тем, что ребенок, родившийся от матери с подобной патологией, уже имеет антитела к вирусу.

Полимеразная цепная реакция дает возможность провести дифференциальное исследование ВИЧ-статуса у новорожденного.

При проведении ПЦР в первые два дня и получении положительного результата, будет говорить об инфицировании ребенка еще в утробе матери.

Если результат получен отрицательный, но в течение двух недель после повторного анализа стал положительным — заражение произошло в момент прохождения плода по родовому пути.

Количественный анализ на ВИЧ проводится пациентам в качестве мониторинга терапии.

Диагностика позволяет обнаружить количество копий рибонуклеиновой кислоты, таким образом, определяя эффективность терапевтического воздействия.

На какой день после заражения анализ крови методом ПЦР может обнаружить ВИЧ?

Выявить присутствие в организме вируса можно спустя 5-10 дней после контакта с партнером, имеющим положительный статус ВИЧ.

Отрицательный результат считается достоверным в случае, если он был проведен спустя две недели после контакта с больным.

Однако дополнительно потребуется проведение ИФА.

Обнаружение Staphylococcus методом ПЦР

Staphylococcus aureus (S. aureus) является факультативно-патогенной бактерией высокой клинической значимости.

Может вызывать тяжелые инфекции, такие как сепсис или эндокардит.

Особенно у людей с ослабленным иммунитетом (например, в контексте химиотерапии, при врожденных иммунодефицитах, сахарном диабете).

Кроме того, увеличение заболеваемости мультирезистентными штаммами Staphylococcus aureus (MRSA) затрудняет успешное лечение антибиотиками.

Диагностика MRSA сегодня проводится микробиологическими и референтными лабораториями (учреждения, которые проводят тестирование в конкретной официальной области исследований).

Сегодня все чаще прибегают к использованию полимеразной реакции количественного типа или в реальном времени.

Анализ крови методом ПЦР на стафилококковую инфекцию позволяет быстро обнаружить патоген и определить штамм резистентного Staphylococcus.

В момент лечения или после него, пациенту может быть назначена молекулярная диагностика методом ПЦР Real-time для определения количественной концентрации патогена.

Анализ ПЦР на паразитарные инфекции

Сразу стоит отметить, что анализ крови методом полимеразной реакции (ПЦР) на обнаружение паразитов, эффективен не для всех видов патогенных микроорганизмов.

Наиболее высокая чувствительность метода отмечается при диагностике следующих паразитарных инфекций:

Амебная дизентерия вызвана амебой Entamoeba histolytica.

Инвазивный амебный колит и амебный абсцесс печени.

Не очень распространенные, но потенциально опасные для жизни заболевания среди путешественников в странах с низким уровнем социально-экономического развития.

Амебная дизентерия, также известная как амебиаз, часто протекает бессимптомно, симптомы варьируют от легкой диареи до тяжелой дизентерии.

Основная диагностика заключается в исследовании кала, в частности микроскопия опытной лабораторией, в результате которой можно обнаружить амебные цисты.

В последнее время все чаще прибегают к ПЦР для обнаружения ДНК патогена.

Полимеразная цепная реакция относительно E. histolytica имеет высокую специфичность.

Однако не может определить острое течение паразитарной инфекции от носительства.

Инфекционная болезнь, вызванная паразитом Toxoplasma gondii.

Человек действует как промежуточный хозяин возбудителя; конечным хозяином являются кошки.

При здоровой иммунной системе симптомов обычно нет, только иногда признаки гриппа и опухшие лимфатические узлы. Диагностика — анализ на антитела к токсоплазме, возможно, прямое обнаружение патогенных микроорганизмов при помощи ПЦР.

Получение положительного результата при анализе крови говорит о присутствие в организме острого токсоплазмоза.

Тем не менее, отрицательный результат не дает гарантии, что патогена в организме нет.

Скорее всего, следует тестировать другой биологический материал.

Беременные женщины, которые еще не перенесли токсоплазмозную инфекцию, поэтому не имеют антител к паразиту.

Они должны обратить особое внимание на рекомендуемые профилактические меры.

Трихинеллез является паразитарным заболеванием, вызываемым личинками Trichinella spiralis.

Употребляя в пищу сырое или недостаточно хорошо приготовленное мясо, паразиты могут попасть в организм человека.

Особенно опасна свинина, а также мясо других домашних или диких животных.

Человеческий трихинеллез диагностируется путем обнаружения личинок Trichinella (микроскопия) в биопсии мышц или других биологических материалах.

Часто используется ИФА для обнаружения антител к Trichinella spiralis.

Наиболее современным и часто используемым методом диагностики инфекции является ПЦР.

Метод позволяет обнаружить личинки трихинелл.

ИФА или ПЦР: что лучше?

Что собой представляет диагностика крови методом ПЦР, какие отличия от ИФА, и какое исследование выбрать?

Оба вида анализа достаточно широко применяются в лабораторном практике.

Более того, имеют высокую специфичность и точность, которая достигает 98-99%.

Какой именно анализ назначить пациенту, врач решает в индивидуальном порядке.

Нередко может рекомендовать обе диагностика для максимально эффективного мониторинга за состоянием здоровья больного.

Назначение анализа ИФА и ПЦР практически у всех пациентов вызывает множество вопросов.

Поскольку подобный диагностический комплекс кажется одинаковым.

Тем не менее, отличия имеются и вполне существенные.

Так, ИФА позволяет выявить не сам патогенный микроорганизм, а только антитела к нему, которые организм успел выработать.

Тогда как ПЦР определяет непосредственно тип патогена, а также его количество/концентрацию в организме.

Оба анализа являются высокоинформативными и высокоточными методами тестирования инфекционных агентов.

Однако ни ПЦР, ни ИФА нельзя назвать панацеей в исследовании заболеваний вирусной или бактериальной этиологии.

Они являются дополнением к другим лабораторным тестированиям.

Позволяя добиться точного результата при постановке диагноза и определении максимально эффективного лечения.

Для назначения и сдачи анализов крови методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

• ВИЧ
• Гарднереллез
• Кондиломатоз
• Молочница
• Сифилис
• Трихомониаз
• Баланопостит
• Герпес
• Гонорея
• Микоплазмоз
• Уреаплазмоз
• Уретрит
• Хламидиоз
• ЗППП