Диагностика лабораторная больных с энтеровирусной инфекцией

Лабораторная диагностика энтеровирусных инфекций проводится путем выделения вируса из организма больного, а также по нарастанию титра вирусспецифических антител. Вирусы выделяют из фекалий, крови, смывов носоглотки и другого материала в зависимости от периода заболевания одновременно на первичных и перевиваемых культурах клеток, а также путем заражения мышей-сосунков. Для идентификации вируса применяется реакция нейтрализации.

Гемагглютинирующие варианты вирусов ECHO и Коксаки можно идентифицировать с помощью РТГА, которая, подобно реакции вируснейтрализации, характеризуется типоспецифичностью.

Выделение энтеровирусов из организма бoльнoгo особенно из фекальных масс, не является абсолютным основанием для постановки диагноза, учитывая распространение бессимптомного носительства. Поэтому необходима серологическая диагностика с использованием парных сывороток, взятых в первые дни и на 2—3-й неделе после начала заболевания. В положительном случае отмечается нарастание титра антител во второй сыворотке не менее чем в 4 раза в реакциях нейтрализации, РСК, РТГА.

Риновирусы

Эта группа вирусов впервые была выделена в 1960 г. от людей, больных острым ринитом.

Вирионы риновирусов имеют сферическую форму и кубический тип симметрии, достигая 20—30 нм в диаметре. Они похожи на энтеровирусы, но в отличие от них теряют свои инфекционные свойства в кислой среде. Хорошо сохраняются при низких температурах.

Для культивирования риновирусов используют культуру клеток, приготовленную из фибробластов легких эмбриона человека или эпителия трахеи человека и хорьков. В оптимальных условиях культивирования проявляется ЦПД.

Выделено 113 серотипов риновирусов, многие из которых имеют идентичные антигены, ответственные за перекрестные серологические реакции. Они не обладают гемагглютинирующими свойствами.

Патогенез заболеваний человека и иммунитет. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Риновирусы локализуются в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа, а у детей — и бронхов, вызывая насморк, бронхиты и бронхопневмонии.

После заболевания сохраняется непродолжительный иммунитет, который определяется не столько сывороточными антителами, сколько секреторными иммуноглобулинами типа IgA. Специфическая профилактика не разработана.

Лабораторная диагностика основана на выделении вируса в чувствительных культурах клеток. Для экспресс-диагностики применяется иммунофлюоресцентный метод, который позволяет обнаружить вирусный антиген в цитоплазме эпителиальных клеток слизистой оболочки.

Афтовирусы

К роду афтовирусов относится вирус ящура — возбудитель высококонтагиозного заболевания парнокопытных домашних животных, вирусная природа которого была установлена еще в 1898 г. Ф. Леффлером и П. Фрошем. Вирус ящура мало чем отличается от других пикорнавирусов. Существует 7 серотипов вируса яищфа, отличающихся друг от друга типоспецифическими антигенами.

Патогенез заболеваний человека. Вирус репродуцируется в средних слоях эпителия кожи и слизистых оболочек. Затем проникает в кровь, вызывая вирусемию. При этом может произойти поражение миокарда и паренхиматозных органов.

После перенесения заболевания сохраняется непродолжительный типоспецифический иммунитет (около 1 —1,5 лет).

Экология и распространение. Источником инфекции являются больные животные. Человек заражается главным образом при уходе за ними, реже — при употреблении в пищу зараженных продуктов (сырого молока и мяса) без достаточной термической обработки.

Вирус ящура в течение 2 мес сохраняется в некоторых пищевых продуктах (масле, жирах), а также в сгустках крови и костном мозге погибших животных.

Лабораторная диагностика. Исследуемый материал (содержимое везикул) вводится в кожу стопы морской свинки. Через 24—48 ч в месте введения, а также в полости рта появляются везикулы. Вирус можно выделить в культуре клеток. Серодиагностику проводят в реакции вируснейтрализации и РСК с парными сыворотками.

Дополнительные материалы по лабораторной диагностике энтеровирусной инфекции

Кишечные вирусы (энтеровирусы) человека входят в род Enterovirus семейства Picornaviridae. К ним относятся вирусы полиомиелита (3 серотипа), Коксаки А (24 серотипа), Коксаки В (6 серотипов), ECHO (34 серотипа) и энтеровирусы человека 69—72-го серотипов. Энтеровирус 70 вызывает острый геморрагический конъюнктивит, энтеровирус 72 — вирус гепатита А. В род Enterovirus входят также кишечные вирусы животных (крупного рогатого скота, обезьян, свиней, мышей) и насекомых. Энтеровирусы животных характеризуются видовой специфичностью.

Обратите внимание: Коксаки А 23 идентичен ЕСНО 9. ЕСНО 28 отнесен к риновирусам, ЕСНО 34 – вариант Коксаки А 24

Энтеровирусы вызывают у человека поражение центральной нервной системы (энцефалит, менингоэнцефалит, полиомиелит, менингит), желудка и кишок (диарея, гепатит, панкреатит), а также дыхательных путей (ринит, фарингит, пневмония новорожденных и др.), сердечно-сосудистой системы (миокардит, перикардит). Возможно также развитие герпетической ангины, экзантемы, везикулярного стоматита, миалгии и конъюнктивита. Различные энтеровирусы могут обусловливать одинаковые клинические проявления, в то же время один энтеровирус способен привести к развитию разных клинических синдромов.

Материалом для исследования служат фекалии, смывы с носовой части глотки, спинномозговая жидкость, кровь, сыворотка, содержимое везикул, моча, асцитическая жидкость. От трупа берут на исследование кровь, спинномозговую жидкость, ткань спинного и продолговатого мозга, варолиева моста, кусочки кишок и их содержимое, кусочки печени, селезенки, легкого, поджелудочной железы, миокарда, лимфатические узлы. Материал берут в первые часы болезни, от трупа — не позднее чем через 3—4 ч после смерти.

Кровь (около 10 мл) для вирусологического анализа и приготовления сыворотки берут натощак в начале болезни, а затем спустя 3—4 недели.

Фекалии (4—6 г) собирают с интервалом 1—2 дня (можно использовать флаконы из-под антибиотиков). Готовят 10 % суспензию в растворе Хенкса, встряхивают и осветляют центрифугированием в течение 30 мин при 3000 об/мин (при возможности материал центрифугируют при 10 000 об/мин). Надосадочную жидкость обрабатывают эфиром (к осветленной суспензии фекалыий добавляют 50 % по объему диэтилового эфира, смесь оставляют в холодильнике под ватно-марлевой пробкой в течение 12-16 часов) и антибиотиками.

Ректальные тампоны помещают в пробирку с 1—2 мл раствора Хенкса или Эрла, споласкивают, отжимают. Материал центрифугируют и обрабатывают эфиром и антибиотиками.

Глоточный смыв в объеме 20 мл получают при 2-кратном (с интервалом 3 мин) полоскании горла стерильным солевым раствором или дистиллированной водой. Тампонами протирают заднюю стенку глотки, миндалины и небные дужки и погружают в пробирку с 1—2 мл раствора Хенкса. Материал центрифугируют и обрабатывают эфиром и антибиотиками.

Стерильную прозрачную спинномозговую жидкость (около 3 мл) используют для выделения вируса без предварительной обработки. Мутную спинномозговую жидкость, а также содержащую эритроциты центрифугируют. Мочу в объеме 10 мл берут в стерильный сосуд в середине акта мочеиспускания и обрабатывают антибиотиками.

Пробы секционного материала растирают в стерильной ступке, готовят 20 % суспензию в растворе Хенкса, центрифугируют 5—10 мин при 2000 об/мин.

Материал обрабатывают антибиотиками — пенициллином (1000 ЕД/мл) и стрептомицином (500 ЕД/мл) в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем используют его для выделения вируса. Часть материала замораживают и хранят при температуре —70 °С. Многократное замораживание и оттаивание недопустимо, так как приводит к инактивации вируса.

Экспресс-диагностика не нашла широкого применения при энтеровирусных инфекциях из-за особенностей их патогенеза. Описано применение РИФ для исследования клеток спинномозговой жидкости. При ротавирусных инфекциях применяют ЭМ и ИЭМ (см. с. 243).

Выделение вируса проводят в культурах клеток и на однодневных белых мышах (табл.).

Таблица. Методы выделения и идентификации энтеровирусов

[youtube.player]

Среди энтеровирусов (семейство Picornaviridae) на сегодняшний день насчитывается более 100 серотипов. Энтеровирусная инфекция широко распространена во всех регионах мира. У человека энтеровирусная инфекция может протекать бессимптомно или сопровождаться широким спектром клинических проявлений: от легкого недомогания или диарейного синдрома до развития тяжелых заболеваний, таких как серозный менингит, паралич, миокардит, энтеровирусный сепсис новорожденных. Более 90% случаев заболевания серозным менингитом имеют энтеровирусную этиологию. Энтеровирусы одного серотипа могут быть связаны с различными клиническими проявлениями, но в то же время энтеровирусы разных серотипов могут вызывать схожую симптоматику заболевания. Наиболее подвержены заболеванию дети младшего возраста. Сезонный подъем заболеваемости в РФ – летне-осенний период. Циркуляция энтеровирусов может сопровождаться развитием вспышек заболевания. Диагностика энтеровирусной инфекции требует комплексной оценки клинической симптоматики заболевания, результатов лабораторных исследований и эпидемиологических данных.

К энтеровирусам относится вирус полиомиелита (полиовирус), имеющий особое эпидемиологическое значение в связи с проводимой ВОЗ Программой глобальной ликвидации полиомиелита. Острый полиомиелит характеризуется разнообразием клинических форм – от абортивных до паралитических. Паралитические формы с развитием вялых и периферических парезов и/или параличей возникают при поражении вирусом серого вещества, расположенного в передних рогах спинного мозга и двигательных ядрах черепно-мозговых нервов. Благодаря интенсивной иммунизации против полиомиелита, циркуляция вирусов дикого типа прекращена в большинстве стран. В 2002 г. Европейский регион, включая РФ, сертифицирован ВОЗ как свободный от вирусов полиомиелита дикого типа. Однако в рамках Программы во всех странах осуществляется эпидемиологический надзор за паралитическим полиомиелитом, а также за клинически схожим синдромом острого вялого паралича (надзор за ПОЛИО/ОВП). В случае выявления больного с подозрением на ПОЛИО/ОВП медицинские работники организаций и частнопрактикующие медицинские работники обязаны руководствоваться действующей нормативно-методической документацией СП 3.1.2951-11.

Показания к обследованию

Наличие одного или нескольких клинических синдромов: очаговая неврологическая симптоматика, менингеальные симптомы, сепсис новорожденных небактериальной природы, ящуроподобный синдром (экзантема полости рта и конечностей), герпангина, афтозный стоматит, миокардит, геморрагический конъюнктивит, увеит, миалгия,
возникновение групповой заболеваемости в детском организованном коллективе при наличии таких синдромов, как респираторный, гастроэнтерит, экзантема и другие.

Материал для исследований

Стерильные типы материала: СМЖ (при наличии клинических показаний для проведения люмбальной пункции), отделяемое конъюнктивы, мазок отделяемого везикул, биоптаты органов;
нестерильные типы материала: мазок (смыв) из ротоглотки/носоглотки, мазок отделяемого язв при герпангине, образцы фекалий.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение энтеровируса в культуре клеток с последующей идентификацией, выявление РНК вируса.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Выделение изолята вируса из биологического материала позволяет с наибольшей информативностью изучать его свойства. Для идентификации (определения серотипа) выделенного энтеровируса с целью изучения эпидемиологических аспектов инфекции используют иммунологический метод нейтрализации с помощью типоспецифических диагностических сывороток. Культуральные исследования, характеризующиеся высокой трудоемкостью, в настоящее время применяются преимущественно в научно-исследовательских целях, их применение затруднено ограниченным набором типоспецифических диагностических сывороток. Обнаружение РНК вируса методом ПЦР является более быстрым и доступным для практики подходом. Применение ПЦР также позволяет обнаружить РНК энтеровирусов, не размножающихся в культуре клеток.

Косвенные способы диагностики – оценка нарастания титров АТ в динамике заболевания не нашли широкого применения в диагностике энтеровирусной инфекции.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Выявление РНК вируса методом ПЦР предпочтительно при обследовании пациентов для лабораторной диагностики энтеровирусных заболеваний.

Выделение вируса в культуре клеток показано при реализации программ эпидемиологического мониторинга циркулирующих изолятов энтеровирусов. В последние годы получает все более широкое распространение методов генетического типирования энтеровирусов. Такие исследования проводятся в ограниченном числе референтных лабораторий и применяются в основном для решения задач эпидемиологического мониторинга.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение энтеровирусов или их РНК в стерильных типах биологического материала (СМЖ, отделяемое везикул) имеет высокую диагностическую значимость. Выявление энтеровирусов или их РНК в нестерильных типах биологического материала (фекалии, респираторные мазки) часто не имеет этиологической связи с диагностируемым заболеванием, в связи с высоким уровнем их бессимптомного носительства в популяции.

Недопустимо подтверждение или исключение диагноза энтеровирусной инфекции, сопровождающейся любой неврологической симптоматикой, на основании результатов исследования нестерильных типов клинического материала. Для установления энтеровирусной инфекции с менингеальной симптоматикой должны учитываться только результаты исследования СМЖ. К сожалению, в действующей нормативно- методической документации СП 3.1.2950-11 данный основополагающий принцип интерпретации отражения не нашел. Рекомендации по интерпретации результатов лабораторных исследований изложенные в МУ 3.1.1.2363-08 по этой причине являются более приемлемыми для клинической практики.

При наличии специфической для некоторых форм энтеровирусной инфекции симптоматики (ящуроподобное заболевание, острый геморрагический конъюктивит, увеит и др.) интерпретация результатов исследования нестерильных типов клинического материала должна проводиться с учетом эпидемиологических и клинических данных.

Выявление энтеровирусов или их РНК в образцах фекалий и материале из рото/ носоглотки у пациентов со спорадической заболеваемостью не может служить основанием для подтверждения этиологии не только серозных менингитов, но и заболеваний верхних дыхательных путей, диарейных инфекций и лихорадочных заболеваний неясной этиологии, вследствие высокой частоты транзиторного носительства энтеровирусов в популяции.

Выявление энтеровирусов или их РНК в нестерильных типах клинического материала может служить подтверждением энтеровирусной инфекции при проведении исследований в ходе вспышки и при наличии у пациента характерной для нее клинической картины заболевания, а также в отсутствие вспышки, но при соответствии идентифицированного вируса специфичной клинической картине.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

[youtube.player]

Эпидемиологическая характеристика и клинико-лабораторная диагностика энтеровирусной инфекции

Энтеровирусные инфекции (Enterovirosis) – большая группа антропонозных инфекционных заболеваний с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя, вызываемых энтеровирусами группы Коксаки и ECHO, которые характеризуются полиморфизмом клинической картины (с поражением ЦНС, мышц, слизистых оболочек и кожи).

Этиология. Энтеровирусы разделяются на три подгруппы: полиомиелита (3 серологических типа), вирусы Коксаки А и В (30 серологических типов) и вирусы ECHO (более 34 серологических типов). Все они относятся к группе самых мелких вирусов, обладают нейротропными свойствами, содержат рибонуклеиновую кислоту, устойчивы во внешней среде, обусловливают продолжительное фекальное вирусоносительство. При заборе материала в первые дни заболевания вирусы выделяются почти одинаково часто и в очень высоком проценте случаев как из фекалий, так и из носоглоточных смывов.

Эпидемиология. Пути передачи: фекально-оральный, контактный, водный. Источником заражения являются больные и вирусоносители инфекции. Больной весьма контагиозен, его роль в распространении инфекции значительна. Носительство, которое часто наблюдается в эпидемических очагах среди лиц, окружающих больного, обычно сопровождается выраженными иммунологическими сдвигами, нарастанием антител. Это — бессимптомная, циклически протекающая инфекция, при которой вирус выделяется как из зева, так и из фекалий. Обладая значительной устойчивостью, вирусы могут сохраняться продолжительное время во внешней среде. Описаны водные, алиментарные и воздушно-капельные вспышки энтеровирусных заболеваний.

Патогенез. После проникновения вируса через слизистые оболочки и накопления в организме происходит вирусемия с распространением его по органам и тканям. Следствием этого является чрезвычайный полиморфизм клинических проявлений заболевания на фоне разной степени выраженности синдрома интоксикации.

Клиническая картина. Клинический полиморфизм энтеровирусной инфекции проявляется не только обилием различных клинических вариантов, но и комбинацией различных клинических проявлений у одного больного.

Герпангина(герпетическая ангина). Этиологическими агентами, вызывающими это заболевание, считаются вирусы Коксаки А (серотипы 1-6, 8, 10, 22) и Коксаки В (серотипы 3-4). Течение болезни может быть лёгким и средней тяжести с повышением температуры тела до 39-40оС в течение 2-5 дней. В зеве, на передних дужках, наблюдаются изменения в виде папул, везикул (пузырьков), которые затем могут изъязвляться. Характерны боль в горле, головные боли и т.п. У части больных, особенно детей, возможны диспептические явления. Иногда возможны рецидивы. Исход обычно благоприятный.

Эпидемическая миалгия, плевродиния (болезнь Борнхольма). Характерно повышение температуры тела до 39-40оС, сильные приступообразные мышечные боли в области живота и нижних отделов грудной клетки. У части больных через 2-3 дня возможна вторая волна лихорадки и аналогичные мышечные боли. Иногда появляются симптомы серозного менингита, гиперемия зева, лимфоаденопатия. Возможно также появление полиомиелитоподобного синдрома, но без стойких отдалённых последствий в виде парезов и вялых параличей. Исход и прогноз обычно благоприятный.

Асептический серозный менингит. Может быть обусловлен вирусами Коксаки А и В, вирусами ЕСНО почти всех серотипов. Типично острое начало, повышение температуры тела до 39-40оС, общая интоксикация. Нередко температурная кривая носит двугорбый характер. Длительность лихорадочного периода различна, в среднем не превышает 5—7 дней, лишь иногда затягивается до 10—12 дней. С 1-2-го дня появляются менингиальные симптомы (сильная головная боль, ригидность затылочных мышц, симптомы Кернига, Брудзинского и др.).Больные вялы, сонливы, временами беспокойны, отказываются от еды и питья. Из других наиболее постоянных и ранних симптомов можно отметить боли в животе различной интенсивности.Спинномозговая жидкость при энтеровирусной менингите прозрачна, давление ее повышено, характеренлимфоцитарныйплеоцитоз.Состояние больных может улучшаться после спинальной (спинномозговой) диагностической пункции. Стационарное лечение длится 2-3 недели.

Исход обычно благоприятный. Эти инфекции теперь протекают в виде локальных вспышек, небольших эпидемий и очаговых заболеваний.

Миелит. Возбудителями считают вирусы Коксаки А (серотипы 4, 7, 10, 14) и В (серотипы 1-6), ЕСНО (серотипы 2,4,6,7,9,11,16). По клиническим симптомам и течению сходны с полиомиелитом, однако могут протекать легче. Парезы и параличи также проходят относительно быстро. У некоторых больных возможно тяжёлое течение и летальные исходы.

Инфекционная экзантема (Бостонская экзантема, эпидемическая экзантема, кореподобная и краснухоподобная экзантема). Вызывается вирусами ЕСНО (серотипы 4,9,12,16,18), реже вирусами Коксаки (А-9, А-16 и В-3). Наблюдается лихорадка – 38-39оС в течение 1-7 дней, интоксикация (слабость, головная боль, мышечные боли, боль в горле и др.). Сыпь кореподобная или краснухоподобная на всём теле (туловище, конечностях, лице). Сыпь появляется на 1-2-й день болезни и исчезает на 4-6-й день. Прогноз обычно благоприятный.

Везикулярный стоматит. Возбудители – вирусы Коксаки А (серотипы 5, 10, 16). На фоне умеренной интоксикации на языке и слизистой оболочке щёк наблюдаются единичные афтозные элементы, а на пальцах кистей и стоп появляется экзантема в виде небольших пузырьков (везикул), слегка выступающих над кожей. Исход благоприятный.

Энцефалиты. Вызываются многими серотипами вирусов Коксаки и ЕСНО. Течение может быть лёгким, средней тяжести и тяжёлым. В лёгких случаях возможна нечётко выраженная неврологическая симптоматика. При тяжёлом течении могут быть нарушения сознания, хорееподобные подёргивания мышц, судороги, нистагм, парезы и параличи лицевого нерва и т.п.

Перикардиты и миокардиты. Возбудители – вирусы Коксаки В (серотипы 2 –5). Возможны и другие возбудители – энтеровирусы, так как этиология заболеваний изучена недостаточно. Симптомы: умеренная лихорадка, слабость, боли в области сердца, глухость тонов, шум трения перикарда. На ЭКГ – специфические изменения, характерные для миокардитов. Прогноз обычно благоприятный.

Малая болезнь (трёхдневная лихорадка, летний грипп, неопределённая лихорадка, Коксаки и ЕСНО-лихорадка). Этиологическими агентами могут быть энтеровирусы всех типов. Симптомы: умеренная лихорадка в течение 1-3 дней, явления интоксикации, слабость.

Энтеровирусная диарея. Вызывается многими типами энтеровирусов. Основными симптомами являются энтероколит с поносом, болями в животе.

Энтеровирусные увеиты. Возбудители энтеровирусныхувеитов – вирусы ЕСНО 19 типа, реже 11 типа.Увеит – воспаление сосудистых оболочек глаза и, в первую очередь, радужной оболочки.

Эпидемический геморрагический конъюнктивит.Высококонтагиозная энтеровирусная инфекция; возбудители – энтеровирус 70, реже – вирус Коксаки А-24. Характерно поражение глаз в виде острого геморрагического конъюнктивита, с отёками, гиперемией слизистых оболочек глаз, слезотечением, светобоязнью, субконъюнктивальными кровоизлияниями. Возможно в ряде случаев развитие кератита. Особенностью данной инфекции является возможность присоединения к глазной патологии симптомов поражения центральной нервной системы, в том числе полиомиелитоподобного синдрома.

Тяжёлые полиомиелитоподобные заболевания, вызываемые энтеровирусом 71. Тяжёлая клиника с вялыми парезами и параличами, явлениями менингоэнцефалита, бульбарными поражениями, параличами дыхательного центра у детей дошкольного возраста.Характерно быстрое эпидемическое распространение с охватомкак детей так и взрослых. Среди детей с бульбарными поражениями – летальность до 43%, общая летальность – более 10%.

Энтеровирусный энцефалит, энтеровирусный энцефаломиелит

Энтеровирусный менингит; менингит, вызванный вирусом Коксаки /ECHO

[youtube.player]

Занятие № 2.1.4

Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить основные группы энтеровирусов; биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO, ротавирусов; принципы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителейвирусных кишечных инфекций.

Ситуационная задача 1

Работа № 1. Принципиальная лабораторная диагностика энтеровирусных инфекций

Цель:изучить схему лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций. Самостоятельная работа: отметить основные направления и этапы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций (см. теоретическую справку).Отметить необходимость и информативность используемых методов.

Исследуемый материал:

Работа № 2. Строение энтеровирусов

Цель:изучить морфологию энтеровирусов.

Самостоятельная работа: используя атлас, теоретическую справку, зарисовать строение вирусов полиомиелита, ECHO, Коксаки, гепатитов АиЕ, ротавирусов; описать, сделать вывод.

пикорнавирусыгепевирусы (вирус ГЕ) реовирусы (ротавирус)

Работа № 3. Вирусологическая диагностика энтеровирусов

Методические указания

Идентификацию вирусов проводят в различных серологических реакциях, используя известные специфические антитела. Например, вирусы полиомиелита можно дифференцировать от вирусов Коксаки А и В, ECHO в РСК, используя антитела к общему антигену (VP-4) для всех типов вирусов полиомиелита.

В реакции использована диагностическая сыворотка, содержащая антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4 и исследуемый вируссодержащий материал.

Тип вируса полиомиелита определяют в реакции нейтрализации по цветной пробе, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VP-2 и VP-3).

Самостоятельная работа

А) Цель:учестьрезультат РСК, поставленной с целью идентификации вируса полиомиелита, выделенного от больного с подозрением на полиомиелит.

Б) Определить тип вируса полиомиелита в реакции нейтрализации по результату постановки цветной пробы, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, УР-2 и VP-3). Учесть результат реакции. Сделать вывод.

Методические указания

Цветная проба для обнаружения вируса полиомиелита в культуре тканиприменяется наряду с изучением цитопатического эффекта, вызываемого вирусом в культуре тканей. В пробирки с культурами тканей и питательной средой вносят исследуемый материал и индикатор феноловый красный, пробирки ставят в термостат. В этом случае, если вирус не размножается в культуре ткани, кислые продукты метаболизма клеток поступают в среду, которая приобретает желтую окраску. Если же полиовирусы размножаются в клетках тканей и пораженные клетки гибнут, то среда сохраняет первоначальный красный цвет, так как в неё не поступают кислые продукты метаболизма клеток и не изменяют её окраску. При рН 7,4-7,8 цвет среды красный, при рН 7,2 — оранжевый, при рН 7,0 и ниже — жёлтый. Таким образом, по изменению цвета среды с культурой тканей, куда внесён исследуемый материал и индикатор, можно судить о поражении клеток вирусами.

Диагностические сыворотки, содержащие антитела к поверхностным антигенам вируса полиомиелита	Контроль среды	Контроль культуры клеток	Контроль вируса
VP-1(тип1)	VP-2 (тип2)	VP-3 (типЗ)
Результат реакции

Вакцина ротавирусная

Заполнить контрольные карты по предложеннымнозоформам:

ПОЛИОМИЕЛИТ

Эпидемиология

Патогенез

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Назовите основные клинические формы полиомиелита:

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)______________________________________________________________________________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ Е

Эпидемиология

Патогенез

Особенности течения гепатита Е:

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

Эпидемиология

Патогенез

Основные клинические проявления:

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_________________________________________________________________

Эпидемиология

Патогенез

Основные клинические проявления:

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)__________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

2. В приемное отделение инфекционной больницы поступили двое больных с желтухой. Возникло подозрение на гепатит А. В целях подтверждения диагноза в лабораторию отправлена сыворотка крови больных для проведения иммуноферментного анализа с использованием диагностикума вируса гепатита А. Оценить результат, записать протокол, сделать выводы. Как проводится специфическая профилактика гепатита А?

Выделяется для учета результатов исследования полистироловый планшет с результатами ИФА.

Диагностикум	Сыворотки
Больной 1	Больной 2	Положительный контроль	Отрицательный контроль
Диагностикум гепатита А	+ (окрашивание)	- (отсутствие окрашивания)	+	-

Какую тест-систему взяли для исследования? Зарисовать схему реакции (ИФА) в данном исследовании. 3. У кого из больных подтвержден диагноз гепатита А и почему?

3. В инфекционную больницу массово поступили пациенты с жалобами на боли в правом подреберье, тошноту, рвоту, головную боль, изменения цвета мочи и кала. При обследовании выявлены гепато- и спленомегалия, желтушность склер и кожных покровов. В анамнезе – употребление водопроводной воды после аварии на водозаборе. Какой материал следует взять на исследование в острый период для выявления возбудителя? ИФА поставлена с диагностической сывороткой и исследуемым материалом. Учесть и описать реакцию по схеме: направление, механизм, ингредиенты, результат, вывод.

4. Женщина, 25 лет на 3 неделе беременности поступила в клинику с жалобами на общую слабость, тошноту, отсутствие аппетит, ноющие боли в правом подреберье. Из анамнеза, больная приехала из Туркменистана. Ответить на вопросы: какой вирус гепатита мог вызвать инфекционный процесс у больной? Указать тропизм вируса. Перечислить признаки, характерные для данной инфекции. Составить план лабораторного обследования на гепатит, указать, какие реакции и с какой целью используются для диагностики заболевания.

5. Двое работниц из числа обслуживающего персонала ГИКБ №1 - Евсеева В. и Астафьева Н. заболели инфекционным гепатитом. Было известно, что Евсеева В. (по совместительству) постоянно проводила уборку в санузлах, а Астафьева Н. осуществляла предстерилизационную очистку материала, часто загрязненного биологическими жидкостями от больных, в том числе и кровью. Учитывая разные условия работы, какими видами гепатита могли вероятнее всего, заразиться Евсеева В. и Астафьева Н.? Что могло способствовать заражению работниц? Какие пути заражения для каждого из случаев наиболее вероятны? Какие вирусы гепатита передаются парентеральным и половым путями? Как необходимо дезинфицировать руки при попадании на них крови или любого другого биологического материала от больных?

6. Две студентки МУ проходили УПП в ГИКБ №1. Студентка Сидорова Е., в основном, работала в процедурном кабинете, а студентка - Иванова Р. - в палатах (осуществляла сестринский уход за больным гепатитом). Через две недели после прохождения УПП Иванова Р. почувствовала недомогание, а через 3 дня стала темнеть моча (напоминать цвет пива). Через 4 месяца такие же симптомы заболевания появились у Сидоровой Е., что характерно для больных инфекционным гепатитом. Ответить на вопросы: поставьте предварительный диагноз заболевшим студенткам. Какими характерными свойствами обладают возбудители этих гепатитов? Какие механизмы передачи характерны для разных видов возбудителей? Как называется скрытый период болезни? Какова его продолжительность у данных больных?

7. В лабораторию поступили сыворотки крови больных детей с подозрением на полиомиелит для определения в них специфических вируснейтрализующих антител. Поставлена цветная проба с соответствующимдиагностикумом в динамике. Результаты исследования – в таблице. Учесть результаты и ответить на вопросы. Какие ингредиенты необходимы для постановки цветной пробы в данном серологическом методе? Каким должен быть результат цветной пробы при условии обнаружения вируснейтрализующих антител в исследуемом материале? Кто из обследуемых болен полиомиелитом? Чем объяснить наличие вируснейтрализующих специфических антител в сыворотке Больного 2.?

Обследуемые	Дни	Разведение сывороток
1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	К
Больной 1	5-й	+	-	-	-	-	-
15-й	+	+	+	+	+	-
Больной 2	5-й	+	-	-	-	-	-
15-й	+	-	-	-	-	-

8. В лабораторию поступила сыворотка крови больного с подозрением на перенесенную энтеровирусную инфекцию. Для подтверждения диагноза была поставлена цветная проба с соответствующимидиагностикумами. Оценить результат, сделать вывод. Ответить на вопросы: цель постановки реакции. Каков механизм изменения цвета среды? Какой диагноз подтверждается и почему?

Диагностикум	Разведение сыворотки
1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	К
ЕСНО	- (красный цвет среды 199)	-	-	-	-	-
Коксаки	+ (изменение цвета среды на желтый)	+	+	+	+	-

9. У ребенка повышение температуры тела, общее недомогание, головные боли, рвота, боли в горле. Выяснено, что он находился в контакте с больным полиомиелитом. Какой материал следует взять для исследования? Какая должна быть поставлена серологическая реакция? Учесть и описать реакцию по схеме: направление, механизм, ингредиенты, результат, вывод.

10. В лабораторию поступили исследуемый материал от пациента с подозрением на энтеровирусную инфекцию. Какой материал взят на исследование? Для подтверждения диагноза поставлена РН по методу цветной пробы полиомиелитными диагностическими сыворотками типов 1, 2, 3. Учесть и описать реакцию по схеме: направление, механизм, ингредиенты, результат, вывод.

1. Укажите таксономическое положение ротавирусов. 2. Охарактеризуйте распространение во внешней среде, источники и возможные пути передачи.

3. Назовите применяемые методы лабораторной диагностики ротавирусной инфекции. 4. Укажите таксономическое положение ротавирусов. 5. Опишите морфологию вирионов и их антигенный состав. 6. Объясните этапы репродукции ротавирусов. 7. Объясните патогенез ротавирусного гастроэнтерита. 8. Назовите цели и применяемые методы лабораторной диагностики ротавирусной инфекции.

Решение ситуационной задачи:

Теоретическая справка

Маркеры гепатитов А и Е

Возбуди-тель	Маркеры	Диагностическое значение
Вирус HA	Антиген HAV Ag анти-HAVIgM анти-HAVIgG	Определяется в фекалиях уже через 10–20 дней после заражения и обычно сохраняется там короткое время (не более 1–2 недель). Появляются в сыворотке в начале желтушного периода и сохраняются до 6 месяцев. Таким образом, выявление антител анти-НAV IgM указывает на острое заболевание вирусным гепатитом А. Появляются в начальной стадии инфекции и сохраняются в крови всю жизнь.Обнаружение в крови антител анти-HAV IgG при отсутствии анти-HAV IgM указывает на перенесенный в прошлом вирусный гепатит А.
Вирус HE	антигеныВГЕ анти-HEVIgM анти-HEVIgG	Определяют методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР,иммунофлюоресцирующих антител (МФА) в фекалиях больных определяются с высокой частотой в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ - инфекции.

Занятие № 2.1.4

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

Ситуационная задача 1

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

[youtube.player]

Читайте также: