Диагностикум клещевого энцефалита сухой для ртга рск ррг

Цена: по запросу

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Ед. изм.: упаковка

Набор реагентов предназначен для выявления антител к вирусу клещевого энцефалита (КЭ) в образцах сывороток или плазм крови людей и животных в реакции торможения гемагглютинации (РТГА, высокочувствительный анализ), реакции связывания комплемента (РСК, малочувствительный метод) и реакции радиального гемолиза в геле (РРГ, чувствительный метод, выявляющий IgG-антитела даже спустя годы после заболевания). Набор на 200 тестов

Функциональное назначение

Применяется в клинической микробиологии, эпидемиологических исследованиях, производстве иммунобиологических препаратов. Специфическим компонентом набора является диагностикум КЭ, который способен выявлять антитела к вирусу клещевого энцефалита в сыворотках крови (плазме, асцитной жидкости) людей и животных в РТГА, в РСК, в РРГ. Для анализа пригодны пробы сывороток или плазмы крови с добавлением цитрата, гепарина, ЭДТА.

Принцип РТГА: диагностикум КЭ (антиген вируса клещевого энцефалита) способен вызывать агглютинацию взвеси гусиных эритроцитов в зоне слабокислых значений pH. В присутствии сыворотки, содержащей антитела к вирусу клещевого энцефалита, агглютинация тормозится (подавляется), благодаря блокировке ответственного за этот феномен антигена - гемагглютинина (ГА), обычно располагающегося на поверхности вириона.

Принцип РСК: комплекс антиген-антитело обладает способностью связывать комплемент. В реакции участвуют две системы антиген+антитело: специфическая - (диагностикум КЭ + сыворотка крови людей или животных) и индикаторная - (эритроциты барана + гемолизин). При взаимодействии вирусных антигенов с антителами (на первом этапе реакции) с комплексом антиген-антитело связывается комплемент, и он уже не может быть использован для лизиса эритроцитов (которые в смеси с гемолизином добавляют на втором этапе реакции). Таким образом, отсутствие лизиса эритроцитов говорит о положительном результате реакции (наличии антител к вирусу клещевого энцефалита в исследуемом образце).

Принцип РРГ: при взаимодействии с антителами сенсибилизированных вирусным антигеном эритроцитов барана в присутствии комплемента происходит реакция лизиса эритроцитов. Суспензию бараньих эритроцитов обрабатывают диагностикумом КЭ, отмывают и вносят в расплавленный агарозный гель, одновременно добавляя туда комплемент. После перемешивания гель тонким слоем наливают на стеклянную пластину и после затвердения вырезают в нем лунки диаметром 2 мм. В лунки наливают по 5 мкл исследуемой сыворотки (предварительно прогретой для удаления содержащегося в них комплемента). Диффундируя через гель, антитела образуют комплекс с антигеном и комплементом на поверхности эритроцитов, следствием чего является лизис. Вокруг лунок образуется прозрачная зона гемолиза, диаметр которой прямо пропорционален концентрации специфических антител.

Технические характеристики

Состав набора:
1. Диагностикум клещевого энцефалита (диагностикум КЭ) - антиген вируса клещевого энцефалита, полученный из мозга белых мышей, инфицированных вирусом КЭ, методом боратно-солевой экстракции, очищенный протаминсульфатом или фреоном-113, инактивированный бетапропиолактоном, лиофилизованный — аморфный порошок кремового цвета, после растворения - прозрачная жидкость светло-желтого цвета, выпускаемый в комплекте с реагентами для постановки РТГА, РСК и РРГ. Титр специфических гемагглютининов не ниже чем 1:160, комплементсвязывающих антигенов - не ниже чем 1:32 — 10 ампул по 1 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 1 суток.
2. Положительный контрольный образец для РТГА (К+ РТГА) - асцитная жидкость крыс, иммунизированных живым вирусом КЭ (в виде 10% вируссодержащей суспензии мозга крысят-сосунков) с последующим введением в брюшную полость крыс клеток опухоли яичника крысы для индукции асцита, обработанная хлороформом, каолином и гусиными эритроцитами, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения — прозрачная жидкость от светло-желтого до светло-рубинового цвета. Титр антигемагглютинирующих антител - не ниже чем 1:160 — 2 ампулы по 1 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
3. Отрицательный контрольный образец для РТГА (К- РТГА) - асцитная жидкость неиммунизированных крыс, индуцированная путем введения клеток опухоли яичника крысы, обработанная хлороформом, каолином и гусиными эритроцитами, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения — прозрачная жидкость от светло-желтого до светло-рубинового цвета — 2 ампулы по 1 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
4. Положительный контрольный образец для РСК (К+ РСК) - асцитная жидкость крыс, иммунизированных живым вирусом КЭ, обработанная хлороформом, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения — прозрачная жидкость от желтого до рубинового цвета. Титр комплементсвязывающих антител не ниже чем 1:32 — 2 ампулы по 0,5 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
5. Отрицательный контрольный образец для РСК (К- РСК) - асцитная жидкость неиммунизированных крыс, обработанная хлороформом, лиофилизированная — пористая масса кремового или коричневого цвета, после растворения - прозрачная жидкость от желтого до рубинового цвета — 2 ампулы по 0,5 мл.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток.
6. Смесь солей для приготовления боратного буферного раствора (ББР) pH 9,00±0,05 — таблетка белого цвета массой 1,05+0,02 г, в состав которой входят: натрия хлорид - 0,7 г; кислота борная - 0,32 г; кальция стеарат или магния стеарат (наполнитель)
- 0,03 г. 1 таблетка рассчитана для получения 100 мл раствора ББР. По 1 таблетке в пакете из ПЭ пленки — 3 пакета.
Хранение рабочего раствора: не более 2 недель при температуре от 2 до 8 °С. 4 % раствор натрия гидроксида хранят при температуре 20-25 °С в пластиковом флаконе не более 14 суток, в стеклянном флаконе - не более 7 суток.
7. Смесь солей для приготовления фосфатного буферного раствора (ФБР) pH 6,20+0,05 — таблетки белого цвета общей массой 4,12+0,08 г, в состав которых входят: натрия хлорид - 0,88 г; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 1,06 г; натрий фосфорнокислый однозамещенный двуводный - 2,06 г; кальция стеарат или магния стеарат - 0,12 г. 1 таблетка рассчитана для получения 100 мл раствора ФБР. По 4 таблетки в пакете из ПЭ пленки — 2 пакета.
Хранение рабочего раствора: не более 2 недель при температуре от 2 до 8 °С.
8. Смесь солей для приготовления раствора Альсевера или Гепарин, раствор для внутривенного и подкожного введения 5000 МЕ/мл (ФСП 42-0504-7813-06) — 1 ампула (1 мл).
Смесь солей для приготовления раствора Альсевера - таблетки белого цвета общей массой 5,30+0,10 г, в состав которых входят: кислота лимонная моногидрат - 0,8 г; натрий лимоннокислый трехзамещенный моногидрат - 2,26 г; глюкоза - 2,2 г; кальция стеарат или магния стеарат - 0,04 г. 1 таблетка рассчитана для получения 100 мл раствора. По 5 (6) таблеток в пакете из ПЭ пленки — 1 пакет.
Хранение рабочего раствора: не более 2 недель при температуре от 2 до 8 °С.
9. Каолин (белая глина) по ГФ X, ст. 109 — 2 стакана по 30 г или 1 стакан по 60 г.
Хранение рабочего раствора: при температуре от 2 до 8 °С в течение любого времени.
В коробку с набором вкладывают инструкцию по применению и нож или скарификатор ампульный. При упаковке ампул, имеющих кольцо излома или точку для вскрытия, нож ампульный или скарификатор ампульный не вкладывают.
Набор реагентов необходимо хранить при температуре от 2 до 8 °С.
Срок годности 3 года со дня изготовления. Набор реагентов с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Набор реагентов рассчитан на исследование 200 сывороток одновременно в трех тестах: РТГА, РСК, РРГ. Смеси солей для приготовления растворов и каолин, предназначенные для постановки РТГА, приложены в количестве, рассчитанном для исследования 200 или 350 сывороток при их предварительной обработке в объеме 100 мкл или 50 мкл соответственно.

[youtube.player]

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с ЗАО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа разработана совместно с ЗАО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Письмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 25 марта 2008 г. № 01/2659-8-32 “О лабораторной диагностике КВЭ”

Эпидемиологическая ситуация по заболеваемости клещевым вирусным энцефалитом (КВЭ) в Российской Федерации продолжается оставаться напряженной.

Заболеваемость КВЭ в 2007 году регистрировалась в 48 субъектах Российской Федерации. В 2007 году заболеваемость КВЭ сравнению с 2006 годом снизилась на 9,52% и составила - 2,2 на 100 тысяч населения (зарегистрировано 3162 против 3490 случаев, имевших место в 2006 году). Более 52% случаев заболеваний КВЭ приходится на Сибирский федеральный округ, 16,87% - на Уральский Федеральный округ, 16% - на Приволжский федеральный округ. Остаются крайне высокими уровни заболеваемости в Томской области - 29,7, Республиках Алтай - 25,9, Тыва - 17,5, Красноярском крае - 17,6, Усть-Ордынском Бурятском автономном округе - 14,1, Республиках Хакассия - 11,4 и Бурятия - 9,1 на 100 тысяч населения.

Исследования сывороток крови от людей в 57 субъектах Российской Федерации проводятся с использованием иммуноферментного анализа (ИФА), однако в Псковской, Амурской областях, Усть-Ордынском Бурятском автономном округе для диагностики КВЭ продолжают использоваться методы РНГА, РТГА, РСК. Ускоренные методы диагностики КВЭ методом ПЦР внедрены только в Ярославской и Тамбовской областях. Для проведения диагностических исследований методами ИФА, РНГА, РТГА, РСК используются зарегистрированные отечественные диагностикумы и тест-системы. Исследования методом ПЦР проводятся с использованием экспериментальных тест-систем, незарегистрированных в установленном порядке.

В 2007 году в 45 из 48 субъектов Российской Федерации, где регистрировались случаи заболеваний КВЭ, проводились исследования иксодовых клещей из природных очагов на зараженность вирусом клещевого энцефалита. Вместе с тем исследования клещей на вирусоформность не проводятся в Мурманской области, Ямало-Ненецком автономном округе.

Низкими остаются объемы исследований клещей в Архангельской, Вологодская, Псковской, Читинской областях, Республиках Алтай, Бурятия, Усть-Ордынском Бурятском автономном округ, эндемичных по КВЭ, в которых исследовано от 50 до 500 переносчиков.

Всего в 2007 году было исследовано 105648 клещей, из них 8128 (7,7%) оказались зараженными вирусом клещевого энцефалита. Вирусоформность клещей в различных территориях колебалась от 0 до 42,0%. Более 10% зараженных переносчиков выявлено в Республиках Бурятия (12,0%), Хакасия (12,2%), Удмуртия (17,7%), Томской (17,7%), Читинской (18,1%), Кировской (19,1%) областях, Красноярском крае (11,7%) и г. Санкт - Петербурге (17,6%). Наиболее высокая зараженность переносчиков (42,0%) отмечена в Иркутской области, что свидетельствует о большой эпидемиологической опасности природных очагов на данной территории.

Для определения вирусоформности клещей в 57 субъектах Российской Федерации используется метод ИФА. Метод ПЦР используется при исследовании клещей в Республике Коми, Вологодской, Липецкой, Тамбовской областях, г. Санкт-Петербурге, Красноярском крае.

Медленными темпами внедряется метод экспресс-исследования инфицирования клещей, что позволило бы своевременно и обоснованно назначать адекватную специфическую профилактику КВЭ. Не решаются вопросы по организации таких лабораторий в Вологодской, Костромской областях, Республиках Коми, Татарстан, Тыва, Усть-Ордынском Бурятском автономном округе и других субъектах Российской Федерации.

Население недостаточно информировано о наличии лабораторий, в которых можно провести исследования снятых клещей.

В целях повышения эффективности лабораторной диагностики клещевого вирусного энцефалита в эпидсезон 2008 г. прошу обеспечить:

- обязательное энтомологическое обследование территорий и исследование клещей-переносчиков на зараженность вирусом клещевого энцефалита;

- исследование материала от людей с целью диагностики клещевого энцефалита и клещей с использованием тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке;

- подготовку специалистов микробиологических лабораторий по вопросам лабораторной диагностики клещевого вирусного энцефалита у людей, исследований клещей, соблюдения безопасности при работе с биологическим материалом, потенциально зараженным возбудителями инфекционных заболеваний II группы патогенности;

- обязательную вакцинацию работников микробиологических лабораторий, проводящих исследования на клещевой вирусный энцефалит;

- соответствие лабораторий, проводящих серологические исследования клещей, требованиям действующих нормативных документов;

- информирование населения о диагностических лабораториях, в которых возможно провести исследования снятых клещей и режиме их работы.

Руководитель

Г.Г. Онищенко

1. Для исследования сывороток:

2. Для исследования клещей:

Письмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 25 марта 2008 г. N 01/2659-8-32 “О лабораторной диагностике КВЭ”

[youtube.player]

В настоящее время в лабораториях используются следующие диагностикумы.

1 .Бактериальный диагностикум сальмонелл брюшного тифа (или сальмонелл паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне и др. бактерий семейства Enterobacteriaceae) является взвесью убитых бактерий соответствующего вида и применяется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных, т.е для серодиагностики.

2. Сальмонеллезные 0-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл. Получают из взвеси убитых нагреванием сальмонелл. Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой больных (серодиагностика).

3. Сальмонеллезные Н-диагностикумы представляют собой жгутиковые антигены формалинизированных бульонных культур сальмонелл соответствующих видов и используются в реакции агглютинации для серодиагностики заболевания, т.е. для определения Н- антител в сываротке.

4. Vi — брюшнотифозный диагностикум — препарат, полученный из S. typhi, содержащей Vi-антиген, воздействием формалина Применяется в реакции агглютинации для обнаружения Vi-антител в сыворотке для серодиагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

5. Диагностикум бруцеллезный единый – взвесь убитых бруцелл, подкрашенная метиленовым синим. Единый бруцеллезный диагностикум применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Хеддльсона и Райта (серодиагностика бруцеллеза).

6. Диагностикум риккетсиозный Провачека - взвесь убитых риккетсий Провачека. Применяется для определения антител в сыворотке больных эпидемическим сыпным тифом в реакции агглютинации риккетсий (РАР) – серодиагностика эпидемического сыпного тифа.

7. Кардиолипиновый антиген готовят из мышечной ткани сердца быка в виде спиртового экстракта с добавлением холестерина. Применяют в качестве неспецифического антигена для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

8. Антиген Вассермана – специфический антиген из тканевых трепонем, обработанных ультразвуком. Применяется для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

9. Эритроцитарный сальмонеллезный 0-диагностикум – взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного для серодиагностики сальмонеллезной инфекции.

10. Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi. Применяется в РПГА для определения Vi-антител в сыворотке для серодиагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

11. Эритроцитарный дифтерийный диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные дифтерийным анатоксином. Применяется в РПГА для определения антитоксических противодифтерийных антител в исследуемой сыворотке с целью оценки напряженности антитоксического иммунитета для выявления контингента лиц, подлежащих ревакцинации против дифтерии.

12. Эритроцитарный микоплазменный диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные микоплазменным антигеном. Применяется для определения нарастания титра антимикоплазменных антител в парных сыворотках больного в РПГА с целью серодиагностики микоплазменных инфекций.

13. Эритроцитарный сыпнотифозный (риккетсиозный Провачека) диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Провачека антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Провачека антител в сыворотке больного (серодиагностика эпидемического сыпного тифа).

14. Эритроцитарный риккетсиозный Музера диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Музера антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Музера антител в сыворотке больного (серодиагностика эндемического сыпного тифа).

15. Эритроцитарный риккетсиозный Бернета диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Бернета антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Бернета антител в сыворотке больного (серодиагностика Ку-лихорадки).

16. Эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антибутулиническими антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики ботулизма).

17.Эритроцитарный антительный противостолбнячный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антистолбнячными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс- метод диагностики столбняка).

18. Эритроцитарный антительный противогангренозный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими противогангренозными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления противогангренозного экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики газовой гангрены).

19. Эритроцитарный антительный менингококковый диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антименингококковыми антителами. Применяется в РПГА для выявления менингококкового антигена в ликворе больного.

20. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную. Диагностикум применяется при постановке РТГА или РСК с парными сыворотками больных для определения нарастания титра антител (серодиагностика гриппа)

21. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом клещевого энцефалита с последующей инактивацией вируса.

Диагностикум используется в РТГА или РСК для определения нарастания титра антител в парных сыворотках больного (серодиагностика клещевого энцефалита).

[youtube.player]

Таксономия: семейство Flaviviridae, род Flavivirus.

Морфологические свойства: сложные, +РНК, структурные белки – V2капсид,V3суперкапсид,V1внутри от суперкапсида.

Имеет пять генотипов, имеющих некоторые антигенные различия, но только один структурный гликопротеин V-3 индуцирует образование вируснейтрализующих антител. Он обладает четкой антигенной консервативностью. Несмотря на небольшую устойчивость вируса к действию физических и химических факторов, в организме переносчиков он сохраняет свою жизнеспособность от —150С до +30С.

Резистентность: Высокая, к действию кислых значений рН, что важно при алиментарном пути заражения. Вирус обладает висцеротропностью и нейротропностью. К вирусу чувствительны белые мыши.

Эпидемиология:Переносчиком и основным резервуаром являются иксодовые клещи. У клещей происходит трансовариальная и трансфазовая передача вируса. Поддержание циркуляции осуществляется за счет прокормителей клещей — грызунов, птиц, диких животных. Характерна весенне-летняя сезонность.

Патогенез:Человек заражается трансмиссивно при укусе инфицированными клещами, от которых в период кровососания вирус проникает в макроорганизм. Проникновение вируса в организм возможно также контактным путем через мелкие повреждения кожи. Алиментарный путь заражения при употреблении сырого молока коз и овец. Употребление молока ведет к ощелачиванию желудочного сока, что препятствует инактивации вируса. Инкубационный период — от 8 до 23 дн.

Клиника: Сначала вирус размножается в месте входных ворот инфекции под кожей, откуда он попадает в кровь. Возникает резорбтивная вирусемия. Вирус проникает в эндотелий кровеносных сосудов, внутренних органов, где активно размножается. При пищевом пути заражения входными воротами является слизистая оболочка глотки и тонкой кишки. В конце инкубационного периода в эндотелии кровеносных сосудов возникает вторичная вирусемия, длящаяся 5 дн. Вирусы гематогенно, периневрально проникают в головной и спинной мозг, поражая мотонейроны (крупные двигательные клетки в сером веществе спинного мозга). Различают три клинические формы клещевого энцефалита: лихорадочную, менингеальную и очаговую.

Иммунитет: После перенесенного заболевания остается стойкий иммунитет. Вирус клещевого энцефалита относится к факультативным возбудителям медленных вирусных инфекций.

Микробиологическая диагностика: Выделение вируса из крови и цереброспинальной жидкости, внутренних органов и мозга путем интрацеребрального заражения мышей и культур клеток. Идентификацию вируса проводят в РТГА, РН и РСК, а в монослое культур клеток — в РИФ. Обнаружение антител в парных сыворотках и цереброспинальной жидкости проводят с помощью РСК и РТГА, а также других серологических реакций. Экспресс-диагностика основана на обнаружении вирусного антигена в крови с помощью РИГА и ИФА, выявлении IgM антител на первой неделе заболевания в цереброспинальной жидкости и обнаружении РНК-вируса в крови и цереброспинальной жидкости у людей, в клещах и внутренних органах животных с помощью ПЦР.

Лечение и профилактика:Для лечения и экстренной профилактики применяют специфический гомологичный донорский иммуноглобулин против клещевого энцефалита,полученный из плазмы доноров, проживающих в природных очагах клещевого энцефалита и содержащий в высоком титре антитела к вирусу клещевого энцефалита. При отсутствии препарата назначают специфический гетерологичный лошадиный иммуноглобулин.При лечении тяжелых форм применяют иммуногемосорбцию и серотерапию иммунной плазмой доноров. Применяют виферон, ридостин, рибонуклеазу.

Активная иммунизация – убитые вакцины:

1. Вакцина против клещевого энцефалита культуральная сорбированная инактивированная жидкая;

2. Вакцина против клещевого энцефалита культуральная очищенная концентрированная инактивированная сухая (вакцина клещевого энцефалита концентрированная), предназначенная для вакцинации взрослых;

3. Австрийская вакцина клещевого энцефалита культуральная очищенная концентрированная инактивированная для иммунизации детей;

5. Культуральная концентрированная инактивированная сухая вакцина для профилактики клещевого энцефалита у детей с 4-летнего возраста

Для формирования надежной защиты необходима ревакцинация, так как при вакцинации убитыми вакцинами формируется кратковременный иммунитет. Протективным действием обладает неструктурный белок NS1 вируса - растворимый комплементсвязывающий антиген. Он является компонентом для противовирусных вакцин.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

[youtube.player]

Лекарственные формы
РТГА, РСК, РРГ, РНГА, сухой комплект,

Производители
Вирион(Россия)

ФармГруппа
Разные диагностические средства

Международное непатентованное наименование
Диагностикум клещевого энцефалита

ИЗВЕСТНОМУ в Анапе парапланеристу Д. крупно повезло как минимум дважды. В первый раз, когда из-за.

Более половины россиян не верят в эффективность прививок от гриппа. Кроме того, некоторое число.

Соки не заменят овощей и фруктов, считают ученые из Института медицинских исследований Западной Австралии.

Городской роддом Кыштыма (Челябинская область) превратится в межрайонный центр родовспоможения в рамках областной программы.

Медицинское оборудование на сумму более 85 млн руб. для Тверской областной больницы будет закуплено.

[youtube.player]

Полезная информация для каждого

В течение многих лет в России для экстренной серопрофилактики и лечения клещевого энцефалита (КЭ) применяется препарат Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита. В 60–80-е годы прошлого столетия были проведены многочисленные исследования по доказательству профилактических и лечебных свойств этого препарата [1–4].

В Инструкциях по медицинскому применению отечественных вакцин против КЭ представлены специальные схемы вакцинации для доноров, обеспечивающие получение в короткие сроки регламентированного уровня специфических антител в плазме крови доноров [5–7]. Отечественный препарат Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита представляет собой концентрированный раствор очищенной фракции иммуноглобулинов, выделенных методом фракциониро- вания этиловым спиртом при температуре ниже 0ºС из плазмы крови здоровых доноров, содержащей антитела к вирусу КЭ.

Иммунологические свойства: действующим началом препарата являются иммуноглобулины класса G, обладающие активностью антител, нейтрализующих вирус клещевого энцефалита. Препарат также повышает неспецифическую резистентность организма [8, 9].

В готовом препарате фракция иммуноглобулинов должна составлять не менее 97% от общего белка. Со- держание белка в иммуноглобулине – от 10 до 16%. Титр антител к вирусу КЭ в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) – не менее 1:80 [8, 10, 11].

Цель работы – изучить возможность применения иммуноферментного анализа для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ и дать дополнительную характеристику специфической активности препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефа- лита в ИФА по титру специфических иммуноглобулинов класса G.

Для выполнения этой цели были проведены следующие исследования:

II. Подбор условий проведения иммуноферментного анализа для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ в препарате Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита при использовании отече- ственных наборов реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ, предназначенных для исследования сывороток (плазмы) крови человека.

Подтверждение пригодности отработанной мето- дики постановки ИФА для иммуноглобулинов класса G при параллельном исследовании серий препарата с использованием наборов реагентов для ИФА отечественного и зарубежного производства.

III. Титрование образцов 58 серий препарата Имму- ноглобулин человека против клещевого энцефалита методом ИФА для определения содержания иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ для дополнительной характеристики специфической активности препарата.

Материалы и методы

агглютинацию эритроцитов гуся [11, 14]. Гемагглютинирующая активность и выбор рабочей дозы антигена для РТГА проводится в реакции гемагглютинации (РГА) с взвесью гусиных эритроцитов по учёту феномена агглютинации эритроцитов. При использовании образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к вирусу КЭ, агглютинация тормозится (подавляется), благодаря блокировке ответственного за этот феномен.

8. Эритроциты гусей для постановки РТГА. Примечание: Образцы серий вышеуказанных различных иммуноглобулинов, плазмы для фракциони- рования были предоставлены для выполнения этого исследования из Лаборатории иммуноглобулинов и препаратов крови Испытательного Центра МИБП ФГБУ

1. Титрование образцов препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита – регламентированным методом РТГА (Инструкция по применению набора реагентов Диагностикум клещевого энцефалита сухой для РТГА, РСК, РРГ) [11].

В состав набора реагентов для РТГА в качестве основного компонента входит инактивированный бета-пропиолактоном антиген вируса клещевого энцефалита, полученный методом боратно-солевой экстракции из мозга белых мышей, инфицированных вирусом КЭ, штамм № 139, обладающий способностью вызывать антигена – гемагглютинина (ГА), обычно располагающегося на поверхности вириона [11]. В РТГА используется рабочая доза антигена вируса КЭ – 8 ГАЕ.

До постановки в РТГА образцы исследуемых препа- ратов иммуноглобулинов: Иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита, Иммуновенина, Пентаглобина, Плазмы для фракционирования, субстанция предварительно обрабатывали для удаления неспецифи- ческих гемагглютининов и ингибиторов гемагглютинации 25% взвесью каолина и 0,4% взвесью гусиных эритроцитов. В результате проведенной обработки было получено исходное разведение каждого образца – 1:10, из которого далее готовили на боратном буферном растворе разведения от 1:20 до 1:1280. За титр антител в каждом исследуемом образце иммуноглобулина принимали максимальное разведение препарата, при котором наблюдали визуально полную задержку гемагглютинации (-) с рабочей дозой антигена, при контрольном титровании которой наблюдается гемагглютинация не менее чем на 3+.

Для проведения ИФА с образцами препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита и других препаратов иммуноглобулинов готовили разведения каждого исследуемого препарата от 1:400 до 1:25600 на растворе для разведения сывороток из комплекта набора.

Таблица 1. Состав диагностических наборов реагентов для РТГА и ИФА, предназначенных для выявления антител (иммуноглобулинов) к вирусу клещевого энцефалита

Биологические реагенты, входящие в состав диа- гностических наборов

Набор реагентов для РТГА

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобули- нов класса G к вирусу клещевого энцефалита

Антиген вируса клещевого энцефалита, полученный методом боратно-солевой экстракции из мозга белых мышей ин- фицированных вирусом КЭ, очищенный протаминсульфатом, инактивированный

Планшет разборный с иммобилизо- ванным антигеном вируса КЭ

2. К+ (положительный кон- трольный образец)

К+ (РТГА) – асцитная жидкость крыс, иммунизированных живым вирусом КЭ, обработанная хлороформом, као- лином и гусиными эритроцитами

К+ (положительный контрольный образец, инактивированный)

Не входит в состав набор

3. К– (отрицательный кон- трольный образец)

К– (РТГА) – асцитная жидкость неим- мунизированных крыс, обработанная хлороформом, каолином и гусиными эритроцитами

К– (отрицательный контрольный образец, инактивированный)

Не входит в состав набора

4. Калибровочные раство- ры, содержащие иммуногло- булины класса G к вирусу КЭ

Не входят в состав набора

Калибровочные растворы, содержа- щие IgG к вирусу КЭ в концентрациях от 10 до 160 ЕД/ мл*

Стандарты IgG к вирусу КЭ от 0 до 300 NTU/ml** (TBE/FSME IgG)

5. Растворы для разведения образцов

Смесь солей (таблетка) для приготов- ления боратного буферного раствора (ББР) рН 9,0 ± 0,05;

Смесь солей (таблетка) для приготов- ления фосфатного буферного раство- ра (ФБР) рН 6,2 ± 0,05

Растворы для разведения сывороток (РПРС – для предварительного раз- ведения и РРС – раствор для разве- дения)

Растворы для разведения сывороток (IgG pH 7,2 ± 0,2)

Конъюгат антител к иммуноглобулинам человека, меченых пероксидазой хрена

TBE/FSME anti-IgG конъюгат- связанные с пероксидазой антитела к IgG человека

Раствор тетраметилбензидина (рас- твор ТМБ)

ТМБ субстрат (раствор TMB) 3,3,5,5- тетраметилбензидин

8. Промывочные растворы

Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25)

20-кратный концентрат буферного раствора рН 7,2 ± 0,2

Стоп-раствор – 0,2 М раствор серной кислоты

10. Результьы анализа

(–) полное оседание эритроцитов (от 3+ до 4+) гемагглютинация эритроцитов

Результаты ИФА регистрируют, изме- ряя величину оптической плотности растворов в лунках на спектрофото- метре вертикального сканирования в двухволновом режиме 450/620 нм

Для сравнения и оценки специфичности положительных результатов ИФА для препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита в опыте ИФА в разведении 1:400 и более параллельно исследовали образцы препаратов иммуноглобулинов человека нормальных (Пентаглобин, 1 серия, Иммуновенин, 2 серии, образцы Плазма для фракционирования, субстанция, 2 серии), которые по данным РТГА не содержали антитела к вирусу КЭ (титр менее 1:10).

Воспроизводимость полученных результатов ИФА оценивали при параллельном титровании образцов в разведениях 1:400–1:25600 трёх серий (в трех повторах) препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита.

рис. 2. определение уровня иммуноглобулинов класса G к вирусу кЭ в образцах иммуноглобулина человека против кЭ, методом ИФА. Воронкова Г.М., Николаева С.П., Захарычева Т.А., Воробьева М.С., Шарыгин С.Л. Лечебный эффект донорских специфических иммуноглобулинов при клещевом энцефалите // Биопрепараты. 2005. № 2 (18). С. 15.

Для зарубежного набора,согласно Инструкции по применению [13], расчет активности (титр) специфического иммуноглобулина класса G проводили при сравнении значений ОП разведений исследуемых образцов препарата со значениями ОП калибровочных стандартов, входящих в комплект этого набора реагентов.

Состав диагностических наборов реагентов для РТГА и ИФА представлен в таблице 1.

2. Методы статистической обработки и анализа полученных результатов. Определяли значение среднеарифметической величины титров и ошибку средней ОП [17–19].

Для статистической характеристики результатов экспериментов выбрана медиана – показатель, позволяю- щий статистически охарактеризовать ряд анализируемых значений и который можно применять для любого типа распределений данных [18]. Применение медианы

Результаты представлены в таблице 2 и на рис. 1. Как видно из представленных данных, все образцы

Большинство образцов серий имели титры антител – 1:160, 1:320, единичные образцы имели титр – 1:640, что соответствовало паспортным данным.

Количество исследованных серий

Титр антител к вирусу КЭ в РТГА (показатель активности по НД – не менее 1:80)*

В образцах исследованных серий препаратов Имму- новенин, Пентаглобин, Плазма для фракционирования антитела к вирусу клещевого энцефалита отсутствовали.

I. Подбор условий проведения ИФА для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ в препарате Им- муноглобулин человека против клещевого энцефалита.

Первоначально исследовали образцы одной серии препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита, образцы двух серий препарата Иммуновенин, образец одной серии препарата Пентаглобин и двух серий Плазмы для фракционирования, субстанция.

Вышеуказанные препараты разводили раствором для разведения сывороток, входящим в состав набора реагентов для ИФА. Для постановки ИФА был использован ряд разведений образцов препаратов от 1:400 до 1:25600, так как в предварительных исследованиях было показано, что для более низких разведений.

Показатели ОП растворов в лунках соответствующих разведений образцов препаратов:

Иммуноглобулин человека против КЭ

Иммуновенин (иммуноглобулин человека нормальный)

Пентаглобин (иммуноглобулин человека нормальный)

Плазма для фракционирования серия № 6

Плазма для фракционирования серия № 7

Примечания. Критерии оценки результатов ИФА (Инструкция по применению набора реагентов) Показатели оптической плотности ОП 450/620 нм:

К+ (положительный контрольный образец) – не менее 0,8; К– (отрицательный контрольный образец) – не более 0,2; Учет результатов анализа:

ОПкрит. = ОПср.К– + 0,1;

ОПобр. ≥ ОПкрит. (результат анализа положительный); ОПобр.

Серия Иммуно- глобулина чело- века против клещевого энцефалита

Количество исследованных образцов

Показатели ОП растворов в лунках соответствующих разведений образцов разведения

1. Контрольные образцы:

ОПкрит. = ОПср.К– + 0,1;

Серия Иммуногло- булина человека против клещевого энцефалита

Количество исследованных образцов

Показатели ОП растворов в лунках соответствующих разведений образцов разведения

Примечания. Критерии оценки результатов ИФА (Инструкция по применению набора реагентов):

Показатели оптической плотности (ОП 450/620 нм): Контрольные реагенты:

-стандарты (NTU/мл) * * 0 NTU/мл 0,200

Учет результатов анализа:

Положительный результат ˃110 NTU/мл Отрицательный результат 110 NTU/мл, для отрицательного – значение 110 NTU/мл) и отрицательные значения в реакции ИФА при значении ОП = 0,223,что соответствовало 50 NTU/мл (т.е. менее 55 NTU/мл).

Сравнивая эти значения ОП калибровочных стандар- тов с данными ОП при тестировании образцов трех серий препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита, определяли положительный или отрицательный результат ИФА в соответствую- щем разведении исследуемого образца иммуноглобулина. Так ИФА реакция была положительной (ОП = 0,600; 0,620; 0,670) для разведения препарата 1:3200;

в разведении 1:6400 (ОП = 0,330; 0,350; 0,380) реакция определялась как серая зона, т.е. неопределенный результат.

Для определения в ИФА концентрации иммуноглобулина класса G к вирусу КЭ в образцах серий пре- парата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита в перспективе необходима разработка стандартного образца (СО) иммуноглобулина против клещевого энцефалита, калиброванного по содержа- нию специфического иммуноглобулина класса G в еди- ницах активности.

Таблица 6. Определение иммуноглобулинов класса G к вирусу клещевого энцефалита в ИФА (набор реагентов

Производство (филиалы НПО «Микроген)

Количество исследованных серий

Титр антител (иммуноглобулинов класса G) к вирусу КЭ в ИФА*

*За титр иммуноглобулина класса G в исследуемом образце препарата принимали максимальное разведение, при котором в ИФА значение оптической плотности в лунках было равно или более ОП критической (ОПкрит.); вычисление значения ОПкрит. проводилось по формуле в соответствии с Инструкцией по применению набора.

КЭ многими российскими специалистами [15, 16].

Нами было проведено тестирование образцов 58 серий препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита в вышеуказанном наборе ре- агентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулина класса G. Использовали подобранное нами исходное разведение (1:400–1:800) исследуемых образцов этого препарата.

Результаты представлены в таблице 6 и на рисунке 2. На представительном количестве образцов серий препарата Иммуноглобулин человека против клеще- вого энцефалита показана возможность выявления специфических иммуноглобулинов класса G по титру – соответствующему максимальному разведению препарата с положительным результатом анализа.

Согласно данным таблицы 6 и рисунка 2, наибольшее количество образцов серий препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита содержало иммуноглобулины класса G к вирусу КЭ в титре 1:12800 и 1:25600, образцы 7 серий – в титре 1:6400.

Таким образом, при исследовании образцов 58 серий препарата Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита показано, что титры иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ в ИФА превышают в 10–40 раз титры антител, определяемых в РТГА.

2. Подобраны условия проведения ИФА для выяв- ления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ в препарате Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита. Подтверждена специфичность выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу КЭ параллельными исследованиями препаратов иммуноглобулинов человека нормальных (Иммуновенин, Пентаглобин, Плазма для фракционирования, субстанция), не содержащих антитела к вирусу КЭ по данным РТГА.

3. Воспроизводимость метода ИФА в применении к титрованию препарата Иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита подтверждена при па- раллельном титровании образцов трех серий препара- та в трехкратном повторении в двух наборах реагентов для ИФА отечественного и зарубежного производства.

1. Козлова И.В., Злобин В.И., Воробьева М.С., Верхозина М.М. Иммуноглобулины и тест-системы для профилактики и диагностики клещевого энцефалита // Экспресс-диагностика и экстренная профилактика иксодовых клещевых инфекций. М. 2009.

З. Пеньевская Н.А. Оценка эффективности этиотропной профилактики инфекций, передающихся клещами: проблемы теории и практики. Омск. 2010. 229 с.

4. Субботина Л.С. Результаты использования метода ELISA при изучении клещевого энцефалита и бешенства // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1985. № 1. С. 73–77.

5. Билалова Г.П. Вакцина клещевого энцефалита

8. Инструкция по применения лекарственного препарата для медицинского применения Иммуноглобу- лин человека против клещевого энцефалита.

9. Медуницын Н.В. Вакцинология. М.: Триада-Х, 2010. гл. 6. раздел 6.4.

10. Фармакопейная статья предприятия ЛС-001279- 010811: Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита, раствор для внутримышечного введения.

11. Инструкция по применению набора реагентов Диагностикум клещевого энцефалита сухой для РТГА, РСК, РРГ.

13. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу клещевого энцефалита

14. Островская Л.А., Верета Л.А., Мжельская Т.В. и др. Штамм вируса клещевого энцефалита № 139 для приготовления гемагглютинирующего инактивированного диагностикума (Авт. Свидетельство на изобретение № 107 / 1634 от 8.10.83).

15. Воробьева М.С., Ладыженская И.П., Бархалева О.А. и др. Иммунный ответ при экспресс-иммунизации против клещевого энцефалита вакцинами

// Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2009.

16. Николаева С.П., Воронкова Г.М., Мжельская Т.В. и др. Специфическая диагностика клещевого энцефалита и иксодовых клещевых боррелиозов в Хабаровском крае // Биопрепараты. 2005. № 2 (18). С. 11.

17. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Изд-во медицинской литературы, 1962. С. 16.

18. Гланц С. Медико-биологическая статистика, М. 1999. С . 32–36.

19. ГОСТ Р ИСО 16269-2004: Статистическое представление данных. Медиана.

[youtube.player]

Читайте также: