Дифтерия анализ кишечная инфекция
Эффективность бактериологического метода в значительной степени зависит от правильного собирания материала для исследования (слизь из зева и носа, секрет конъюнктивы век и др.). Материал собирают стерильными ватными тампонами. Не рекомендуется брать слизь из зева после еды или вскоре после полоскания дезинфицирующими растворами.
Тампоны с собранным для исследования материалом, помещенные в стерильные пробирки, по возможности быстрее направляют в лабораторию с тем, чтобы они поступили туда не позднее чем через 3 — 4 ч.
Через 24 ч на основании определения морфологических свойств выделенного микроба лаборатория дает предварительное ориентировочное заключение. Окончательный результат, исследования может быть получен через,48 — 72 ч после выделения чистой культуры микроба и определения его культуральных, биохимических, токсигенных и серологических свойств.
Бактериологическое подтверждение диагноза дифтерии при усовершенствованной методике и большой тщательности исследования достигает весьма высокого процента (90 и более). (Эднако следует учитывать, что обнаружение палочки Леффлера подтверждает клинический диагноз дифтерии, но однократный отрицательный ответ лаборатории с достоверностью не исключает его.
Исходя из сказанного, при наличии у больного типичной клинической картины дифтерии или симптоматологии заболевания, подозрительного на дифтерию, врач обязан немедленно приступить к серотерапии и принять все первичные противоэпидемические меры.
Бактериологическое исследование не должно задерживать эти мероприятия. В качестве дополнительного метода лабораторной диагностики предложена реакция агглютинации, поставленная с сывороткой больного и типовыми дифтерийными культурами, а также реакция пассивной гемагглютинации с соматическим антигеном дифтерийных бактерий.
Реакция считается положительной, если агглютинация происходит в разведении сыворотки 1 : 80 — 1 : 100 и выше. Особую доказательность имеет значительное нарастание титра, которое выявляется двукратной постановкой реакции: первый раз не позднее 7-го дня и второй раз примерно на 15 — 17-н день болезни. Этот способ может быть использован для ретроспективной диагностики.
При первых признаках миокардита больному предписывают строгий постельный режим и полный покой до исчезновения сердечных явлений. Питание проводят малыми порциям) 5-6 раз в сутки. Назначают кордиамин, стрихнин, внутривенные вливания гипертонического раствора глюкозы, при одновременной сосудистой слабости — эфедрин. Рекомендуют применение 1 % раствора аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) в инъекциях от 0,3 до 1 мл и кокарбоксилазы…
Общие профилактические мероприятия при дифтерии те же, что и при прочих инфекционных болезнях у детей. Основную роль в борьбе с дифтерией играет активная иммунизация. Активная иммунизация. С. К. Дзержговский в 1902 г., иммунизируя себя многократными инъекциями малых доз дифтерийного токсина, впервые доказал возможность иммунизировать человека против дифтерии. Ввиду большой токсичности антигена этот метод не мог…
Выявленного больного дифтерией необходимо поместить в больницу. Больного выписывают из больницы после выздоровления при условии отрицательного результата двукратного контрольного бактериологического исследования, проводимого с промежутком в 2 дня. Выписанный из больницы реконвалесцент допускается в детское учреждение после двукратного дополнительного обследования на носительство с отрицательным результатом. Носители нетоксигенных палочек допускаются к посещению детских учреждений. Носителям токсигенных дифтерийных…
По быстроте развития и смены стадий дифтерийного крупа мы различаем бурно и медленно прогрессирующий круп. Первый тип встречается преимущественно у детей до 2 лет, он часто сопровождается пневмонией. Второй тип протекает более благоприятно. Раннее применение сыворотки может прекратить дальнейшее развитие болезни. Распространенный (нисходящий) дифтерийный круп характеризуется особой тяжестью течения. Начало болезни часто внезапное, развитие ее…
Среди мероприятий по ликвидации интоксикации на первом месте находится серотерапия. В борьбе с интоксикацией используются также неспецифические методы (переливание плазмы и ее заменителей, вливание раствора глюкозы, гормональная терапия, витаминотерапия), которые оказывают сложное разностороннее действие на пораженный организм и, в частности, способствуют дезинтоксикации. Лечение больных дифтерией антитоксической сывороткой, полученной от иммунизированных лошадей, было предложено Берингом и…
Некоторые считают дифтерию проблемой из прошлого, болезнью-рудиментом, с которой повсеместно удалось успешно справиться. Но расслабляться еще рано. До сих пор регистрируются случаи этого заболевания, среди детей и взрослых циркулируют бактерии дифтерии. Поэтому о том, когда и какие анализы нужно сдавать на дифтерию, должен знать каждый.
Характеристика заболевания и особенности диагностики дифтерии
Дифтерия — это инфекционная болезнь, которой можно заразиться только от человека. Однако опасным может быть не только заболевший, но и носитель токсигенного (то есть производящего токсины) штамма. Такое носительство протекает без каких-либо признаков, и его можно обнаружить только с помощью лабораторного обследования.
Бактерии дифтерии — бациллы Леффлера — могут передаваться по воздуху с мельчайшими частичками влаги или пыли. Также бактерии могут передаваться при контакте с зараженными предметами обихода и изредка через зараженную еду.
При контакте с заболевшим или с носителем токсичного штамма вероятность заболеть примерно 15–20% [1] . Первые симптомы появляются через 2–10 дней. Повышается температура до 38–39°С, появляется боль в горле, становится сложно глотать. Признаки дифтерии сходны с ангиной, но при этом возникают и специфические симптомы.
Главная отличительная особенность — это тип поражения миндалин. На них образуется налет в виде плотных пленок. Свежие пленки снимаются достаточно легко, но они быстро утолщаются и становятся плотными. Если такую пленку с силой снять с миндалины, то под ней чаще всего образуется кровоточащая эрозия.
Такая типичная клиническая картина с высокой температурой, выраженной интоксикацией, ознобами, головной болью и бледностью кожи развивается у непривитых и имеющих слабый противодифтерийный иммунитет людей. При более высоком уровне иммунитета вместо пленок может образовываться рыхлый налет, а само заболевание протекает менее остро. Поэтому атипичные формы дифтерии легко можно спутать с обычной ангиной [2] .
Однако дифтерия страшна не только сама по себе, но и своими осложнениями.
Среди них выделяют:
- инфекционно-токсический шок;
- миокардит — поражение сердечной мышцы;
- полинейропатию — поражение периферических нервов;
- нефрозы — дистрофические процессы в почках;
- ДВС-синдром — нарушение свертываемости крови;
- круп — осложненное стенозом гортани воспаление дыхательных путей [3] .
Еще в середине XX века дифтерия была распространенной проблемой, вызывавшей осложнения, связанные с риском для жизни, у каждого пятого взрослого пациента и у каждого десятого заболевшего ребенка [4] .
В 1955 году в СССР было официально зарегистрировано около 321 000 случаев дифтерии [5] . В 2015 году, 60 лет спустя, на всей территории России было зарегистрировано только 2 заболевших [6] . То есть заболеваемость снизилась практически в 160 000 раз.
Так как в России регистрируются только единичные случаи дифтерии, далеко не все молодые врачи за свою практику сталкивались с этим заболеванием. Тем более что она может протекать в стертой или бессимптомной форме, маскируясь под ангину и менее опасные заболевания. Поэтому своевременная лабораторная диагностика играет значительную роль в выявлении этого заболевания.
Кроме обследования пациентов с подозрением на дифтерию проводится регулярный серомониторинг — определение уровня иммунитета среди группы населения. Например, среди детей 3–4 лет, 16–17 лет и взрослых. Это помогает оценить коллективный иммунитет, вероятность возникновения вспышек и распространения заболевания [7] .
Для диагностики дифтерии используются несколько методов — бактериологический, серологический и ПЦР-анализ, а также клинический анализ крови.
Основным методом, который позволяет установить диагноз, является микробиологическая диагностика дифтерии. Ее проводят при ангине с характерным выпотом на миндалинах, при подозрении на инфекционный мононуклеоз, паратонзиллярный абсцесс или ларинготрахеит. Это позволяет на самом раннем этапе исключить дифтерию.
С профилактической целью бактериологическое исследование проводят для поступающих на лечение или на работу в психоневрологические стационары, противотуберкулезные учреждения, дома ребенка. Такое обследование проводится, чтобы предотвратить вспышки инфекции в закрытом учреждении [9] .
Для проведения бактериологического исследования с пораженной поверхности забирают мазок и помещают его в транспортную питательную среду. Примерно через 5–7 дней из лаборатории приходит ответ, есть ли в биоматериале рост дифтерийной палочки и обнаружены ли у нее токсигенные свойства. В норме роста быть не должно. Если в результатах исследования указан нетоксигенный штамм, это тоже в большинстве случаев не страшно. Достаточно провести профилактику по назначенной врачом схеме. А вот если выявлен токсигенный штамм, придется пройти полный курс лечения и обследовать всех контактировавших с пациентом лиц.
Как дополнение к бактериологическому методу могут использовать ПЦР-диагностику . Показания к ее проведению те же, что и для бактериологического метода. Но для установления диагноза она уже не является обязательной. Материал для ПЦР-исследования забирают из очага поражения и помещают в специальную среду. В лаборатории выделяют гены дифтерийной бактерии, в том числе отвечающие за ее токсичность. Интерпретируют результат так же, как и при бактериологическом методе: в лучшем случае следы присутствия бактерии не должны обнаружить. Если же выявлен токсигенный штамм, придется срочно проходить лечение.
Еще один вспомогательный метод — клинический анализ крови. С его помощью нельзя отличить, например, дифтерию от ангины, но можно сказать, что воспаление вызвано бактериальной инфекцией. Для проведения этого анализа также берут кровь из вены. Этот анализ занимает всего 1–2 рабочих дня. При бактериальной инфекции повышается уровень СОЭ, количество лейкоцитов и нейтрофилов.
Анализы на дифтерию можно сдать как в государственных клиниках, так и в частных лабораториях. Анализ крови можно сдать в любой лаборатории и, чаще всего, для этого даже не нужно будет направление врача. А вот специфические анализы на дифтерию проводят уже не все, поэтому лучше заранее уточнить этот момент.
Забор материала лучше сдавать в клинике с собственной лабораторией, особенно это касается бактериологического и ПЦР-исследования. Результаты этих анализов во многом зависят от того, насколько точно соблюдали правила забора мазков, хранения и транспортировки материала. При нарушении на любом из этих этапов можно получить ложный отрицательный результат.
В государственном учреждении по направлению все эти исследования можно пройти бесплатно. В частной лаборатории придется заплатить как за само исследование, так и за взятие биоматериала. Но и уровень сервиса при этом обычно выше. Например, некоторые лаборатории высылают результаты исследований на электронный адрес или публикуют их в личном электронном кабинете пациента, так что возвращаться за бланками уже не нужно. Их можно распечатать самостоятельно в любой момент.
Дифтерию вызывают токсигенные штаммы Corynebacterium diphtheriae или палочки Леффлера, не токсигенные штаммы заболевания не вызывают. Дифтерийный токсин по своим свойствам относится к сильнодействующим ядам, уступая лишь ботулитическому и столбнячному. Под воздействием токсина нарушается синтез белков во внутренних органах больного, что приводит к структурным и функциональным нарушениям, демиелинизация нервных волокон – к параличам и парезам. Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C.diphtheriae, инфицированные бактериофагом (р-фаг), несущим ген tox, кодирующий структуру токсина дифтерии. Передача бактериофагом гена tox нетоксигенным штаммам C.diphtheriae, обитающим в носоглотке и накопление их в популяции, может сопровождаться развитием вспышки дифтерии.
Наиболее таксономически близкими к виду C.diphtheriae являются C.ulcerans и C.рseudotuberculosis, природные патогены крупного и мелкого рогатого скота, лошадей. Кроме того, на слизистой ротоглотки и носа часто встречается палочка Гофмана (C.pseudodiphtheriticum), не обладающая патогенностью и токсигенностью для человека. Поэтому основной задачей лабораторной диагностики дифтерии является выявление токсигенных штаммов дифтерии и дифференцировка возбудителя дифтерии от других коринебактерий, нормальных обитателей носо- и ротоглотки. Все микроорганизмы рода Corynebacterium – грамположительные полиморфные палочки, не образующие спор, хорошо растущие в аэробных условиях при 37°С. При окраске метиленовым синим в клетках C.diphtheriae отмечается внутриклеточная исчерченность, что объясняется наличием зерен волютина. Окраска по Граму не используется из-за вариабельности окрашивания клеток. По форме колоний и некоторым биохимическим свойствам C.diphtheriae подразделяются на культурально-биохимические варианты – gravis, mitis, intermedius, однако все они обладают способностью вырабатывать дифтерийный токсин. Тяжесть течения заболевания не связана с биохимическим вариантом C.diphtheriae. Токсигенные штаммы дифтерии более чувствительны к антибиотикам, чем не токсигенные.
Показания к обследованию
- Профилактическое обследование – выявление источников инфекции, группы населения с повышенным риском заболевания; наблюдение за циркуляцией токсигенных штаммов в популяции; лица, поступающие в детские дома, школы интернаты, специализированные учреждения для детей и взрослых;
- обследования по эпидемическим показаниям – лица с подтвержденным контактом с больным дифтерией или при эпидемии дифтерии в данной местности;
- диагностические исследования – при подозрении на заболевание дифтерией (тонзиллит, назофарингит или ларингит который протекает с налетами псевдомембранозного характера).
Дифференциальная диагностика. Заболевания, сопровождающиеся тонзиллитом (инфекционный мононуклеоз, ангины стрептококковой, стафилококковой этиологии и др.).
При культуральных исследованиях возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis.
Материал для исследований
- Мазок из ротоглотки и носа, при подозрении на дифтерию редких локализаций (глаз, рана, ухо и т.д.) – материал с пораженных участков, а также с миндалин и носа – культуральные исследования, обнаружение специфического фрагмента гена tox;
- сыворотка крови – выявление АТ.
Этиологическая лабораторная диагностика включает посев клинического материала с изучением токсигенных свойств на среде для определения токсигенности и биохимической идентификацией возбудителя, обнаружение АГ (дифтерийного токсина), выявление специфических АТ к дифтерийному токсину, обнаружение специфического фрагмента гена tox.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики и особенности интерпретации их результатов. Микроскопические исследования выполняют только для идентификации выделенной культуры. Микроскопия биологического материала не проводится.
Для посева используют материал соответствующих локализаций. Изучение токсигенных свойств на среде для определения токсигенности выполняют при использовании метода встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических АТ в плотной питательной среде. При отсутствии линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч инкубации культура признается не токсигенной. Для биохимической идентификации используется тест с цистиназой (среда Пизу), определение уреазной и сахаролитической (сахароза, глюкоза, крахмал) активности.
- при обнаружении специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 24–48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к культурально-биохимическому варианту gravis, mitis;
- при отсутствии специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении не токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к соответствующему культурально-биохимическому варианту;
- при наличии линий преципитации на среде для определения токсигенности, идентичных линиям контрольного штамма дифтерии, положительных проб на цистиназу, уреазу, ферментации глюкозы и крахмала, отсутствие ферментации сахарозы, отсутствие редукции нитратов в нитриты, культуру относят к виду C.ulcerans, токсигенный вариант;
- при выделении дифтероидов ответ выдается отрицательный.
При посеве возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis. Для выявления дифтерийного токсина используют методы РНГА или ИФА. Это исследование не является обязательным в практических бактериологических лабораториях, однако может использоваться как дополнительное для выдачи предварительного ответа. Метод также позволяет определить относительное (условное) количественное содержание токсина в исследуемой пробе.
Для выявления специфических АТ используют методы РПГА и РНГА. Метод РПГА используется для изучения напряженности противодифтерийного иммунитета. Условно-защитным титром АТ принят титр 1:20.
У больных определение титра АТ к АГ дифтерийной палочки в сыворотке крови методом РНГА проводится в двух пробах крови, собранных в начале заболевания и через 7–10 дней. Нарастание титра АТ в 3–4 раза во второй сыворотке относительно первой свидетельствует о перенесенной инфекции. Исследование используется преимущественно для ретроспективной диагностики дифтерии.
Обнаружение гена токсигенности (tox) методом ПЦР – наиболее быстрый и надежный метод лабораторной диагностики, однако он не дает информацию о способности микроорганизма к экспрессии дифтерийного токсина. Описаны случаи нетоксигенных штаммов дифтерии, несущих в себе
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020
! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Эффективность бактериологического метода в значительной степени зависит от правильного собирания материала для исследования (слизь из зева и носа, секрет конъюнктивы век и др.). Материал собирают стерильными ватными тампонами. Не рекомендуется брать слизь из зева после еды или вскоре после полоскания дезинфицирующими растворами.
Тампоны с собранным для исследования материалом, помещенные в стерильные пробирки, по возможности быстрее направляют в лабораторию с тем, чтобы они поступили туда не позднее чем через 3 — 4 ч.
Через 24 ч на основании определения морфологических свойств выделенного микроба лаборатория дает предварительное ориентировочное заключение. Окончательный результат, исследования может быть получен через,48 — 72 ч после выделения чистой культуры микроба и определения его культуральных, биохимических, токсигенных и серологических свойств.
Бактериологическое подтверждение диагноза дифтерии при усовершенствованной методике и большой тщательности исследования достигает весьма высокого процента (90 и более). (Эднако следует учитывать, что обнаружение палочки Леффлера подтверждает клинический диагноз дифтерии, но однократный отрицательный ответ лаборатории с достоверностью не исключает его.
Исходя из сказанного, при наличии у больного типичной клинической картины дифтерии или симптоматологии заболевания, подозрительного на дифтерию, врач обязан немедленно приступить к серотерапии и принять все первичные противоэпидемические меры.
Бактериологическое исследование не должно задерживать эти мероприятия. В качестве дополнительного метода лабораторной диагностики предложена реакция агглютинации, поставленная с сывороткой больного и типовыми дифтерийными культурами, а также реакция пассивной гемагглютинации с соматическим антигеном дифтерийных бактерий.
Реакция считается положительной, если агглютинация происходит в разведении сыворотки 1 : 80 — 1 : 100 и выше. Особую доказательность имеет значительное нарастание титра, которое выявляется двукратной постановкой реакции: первый раз не позднее 7-го дня и второй раз примерно на 15 — 17-н день болезни. Этот способ может быть использован для ретроспективной диагностики.
При первых признаках миокардита больному предписывают строгий постельный режим и полный покой до исчезновения сердечных явлений. Питание проводят малыми порциям) 5-6 раз в сутки. Назначают кордиамин, стрихнин, внутривенные вливания гипертонического раствора глюкозы, при одновременной сосудистой слабости — эфедрин. Рекомендуют применение 1 % раствора аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) в инъекциях от 0,3 до 1 мл и кокарбоксилазы…
Общие профилактические мероприятия при дифтерии те же, что и при прочих инфекционных болезнях у детей. Основную роль в борьбе с дифтерией играет активная иммунизация. Активная иммунизация. С. К. Дзержговский в 1902 г., иммунизируя себя многократными инъекциями малых доз дифтерийного токсина, впервые доказал возможность иммунизировать человека против дифтерии. Ввиду большой токсичности антигена этот метод не мог…
Выявленного больного дифтерией необходимо поместить в больницу. Больного выписывают из больницы после выздоровления при условии отрицательного результата двукратного контрольного бактериологического исследования, проводимого с промежутком в 2 дня. Выписанный из больницы реконвалесцент допускается в детское учреждение после двукратного дополнительного обследования на носительство с отрицательным результатом. Носители нетоксигенных палочек допускаются к посещению детских учреждений. Носителям токсигенных дифтерийных…
По быстроте развития и смены стадий дифтерийного крупа мы различаем бурно и медленно прогрессирующий круп. Первый тип встречается преимущественно у детей до 2 лет, он часто сопровождается пневмонией. Второй тип протекает более благоприятно. Раннее применение сыворотки может прекратить дальнейшее развитие болезни. Распространенный (нисходящий) дифтерийный круп характеризуется особой тяжестью течения. Начало болезни часто внезапное, развитие ее…
Среди мероприятий по ликвидации интоксикации на первом месте находится серотерапия. В борьбе с интоксикацией используются также неспецифические методы (переливание плазмы и ее заменителей, вливание раствора глюкозы, гормональная терапия, витаминотерапия), которые оказывают сложное разностороннее действие на пораженный организм и, в частности, способствуют дезинтоксикации. Лечение больных дифтерией антитоксической сывороткой, полученной от иммунизированных лошадей, было предложено Берингом и…
Дифтерия - острое инфекционное заболевание, вызываемое дифтерийной палочкой (Corynebacterium diphtheriae), характеризующеесяместным фибринозным поражением слизистых оболочек рото- и носоглотки (diphthera – пленка), а также тяжелой интоксикацией с поражением сердечно-сосудистой, нервной системы и надпочечников. Лабораторная диагностика дифтерии осуществляется в соответствии со схемой 14.
Микроскопический метод в настоящее время фактически не применяется из-за его низкой информативности в связи с субъективизмом учета и выполняется только по требованию лечащего врача. Микроскопии подвергают мазки, окрашенные по Граму, метиленовым синим, по Нейссеру (для выявления включений волютина). Дифтерийные палочки (Corynebacteriumdiphtheriae) при окраске по Нейссеру содержат полярно расположенные темно-синие, почти черные, включения волютина и располагаются в виде римских цифр V или Х, тогда как сходные с ними дифтероиды и ложнодифтерийные бактерии (Corynebacteriumpseudodiphtheriae) зерен волютина не имеют и располагаются в виде частокола. Разработан также метод прямого флюорохромирования дифтерийных палочек корифосфином, окрашивающим включения волютина в красно-коричневый цвет, а цитоплазму в зеленый или желтый цвет, что позволяет повысить эффективность бактериоскопического метода.
Бактериологический метод-основной метод диагностики дифтерии. Исследуемый материал засевают на одну из специальных питательных сред для культивирования дифтерийных палочек, наиболее часто на среду Клауберга (МПА с глицерином, дефибринированной кровью и теллуритом натрия, задерживающим рост сопутствующей непатогенной микрофлоры). На среде Клауберга Corynebacterium diphtheriae образует 2 типа колоний:
а) серовато-черного цвета с радиальной исчерченностью поверхности, напоминающие цветок маргаритки или розетку (биовар gravis);
б) черные, круглые, выпуклые колонии колонии за счет восстановления теллурита (биовар mitis).
В мазке из типичной для дифтерийной палочки колонии обнаруживают грамположительные палочки булавовидной формы, расположенные в виде римских цифр V или Х, содержащие зерна волютина (рис. 16). Оставшуюся часть колонии пересевают на кровяной МПА для выделения чистой культуры.
Рис. 16. Возбудитель дифтерии - Corynebacteriumdiphtheriae. Окраска по Нейссеру. Расположение в виде римских цифр V или Х, включения волютина по полюсам. х900
Цистиназу у выделенных культур (проба Пизу) определяют путем посева методом укола петли исследуемой культуры на цистиновый МПА с азотнокислым свинцом. Посевы помещают на сутки в термостат при 37 0 С. При наличии цистиназы в среде образуется почернение (образование сульфида свинца) по ходу укола, вокруг которого появляется коричневое облачко.
Выделенную культуру идентифицируют и дифференцируют от сходных с ней непатогенных коринебактерий по биологическим свойствам (табл. 16). Для определения уреазы петлю исследуемой культуры вносят в пробирку, содержащую спиртовый раствор мочевины и индикатор феноловый красный. Пробирку выдерживают 30 минут в термостате при 37 0 С, при наличии уреазы содержимое пробирки окрашивается в красный цвет.
При выделении нетоксигенной культуры ставят реакцию агглютинации с противодифтерийной сывороткой для выявления видового антигена Corynebacterium diphtheriae.
Серологический метод –РА, РНГА с целью определения антител в парных сыворотках крови больных дифтерией.
Таблица 16.Биологические свойства коринебактерий
Вид | Волютин | Гемолиз | ферментация | токсин | цистиназа | уреаза | РА с ПДС | ||
сахарозы | глюкозы | крахмала | |||||||
C. diphtheriae биовар биовар | + + | - + | - | + + | + - | ± ± | + + | - - | + + |
C.xerosis | ± | - | + | + | - | - | - | - | - |
C. pseudodiphtheriae | ± | - | - | - | - | - | - | + | - |
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Острые заболевания лечатся незамедлительно. Анализ на дизентерию должен удовлетворять критерию скорости. У взрослых и детей фиксируется и хроническая форма. Тогда проводится анализ кала на дизентерию. Можно это сделать в рамках анализа состава микрофлоры, как при дисбактериозе. Принцип выращивания аналогичный. Быстрый результат даёт наблюдение в микроскоп.
Проблема сдачи бактериологического анализа в уровне достоверности – не превышает 30-50%. Потому врач руководствуется клиническими симптомами. На дизентерию и сальмонеллёз определение заражения заключается в пристальном осмотре окрашенной пробы. Но кал не всегда даёт всходы. Тогда на дизентерию берут кровь с целью обнаружения антител. Проблема в формировании иммуноглобулинов с опозданием (3 дня)…
Что делать?
Недостаточная точность лабораторных исследований обусловлена характерной клинической картиной дизентерии в острых случаях. Исключение – синдром интоксикации, проявляемый отравлением. Бактериологическое исследование проводится из:
Метод высевания занимает время, а дизентерия не длится долго. Проходит за неделю. Этого хватает, чтобы палочки дали всходы на питательной среде. Типичный протокол предусматривает отведение пятидневного срока на мероприятие (invitro.ru/analizes/for-doctors/571/17420/).
В школе учат: от кишечных инфекций ежедневно умирает 2100 детей. При беременности маме рассказывают, как опасно не мыть руки перед едой. Точность результата невысока. Но посев остаётся одним из вариантов.
Для заражения достаточно попадания внутрь организма человека менее 100 бактерий. Диагностика осуществляется 2 методами:
3-кратный бакпосев шигеллы на питательную среду при последующем исследовании даёт точность диагноза 40-60%. Экспресс-анализ кишечных инфекций проводится без выведения культур. Материал исследуется на наличие специфичных антигенов, токсинов. Пробы берутся из мочи, слюны, выделений ануса, крови. Применяются иммунологические методики, наделённые повышенной чувствительностью и избирательностью:
- иммуно-ферментный анализ (ИФА);
- иммунофлуоресценции (РИФ);
- реакция агглютинации латекса (РАЛ);
- полимеразной цепной реакции (ПЦР);
- реакции коагглютинации (РКА).
Проблема заключается в выпуске реактивов, индикаторов. Российскими предприятиями изготавливается спектр продукции для идентификации биопродуктов шигеллы Зонне.
Антитела крови распознаются в реакции пассивной (непрямой) гемагглютинации. Методы легли в основу исследовательских наборов, выявляющих шигеллы Флекснера, Флекснера-6, Зонне. В ходе процесса исследуются парные сыворотки, взятые в начале заболевания и через 1 неделю. Прочее выполняется согласно инструкции, идущей в комплекте. Положительный результат засчитывается при изменении плотности антител между пробами от 8 раз.
При попытках поставить этиологический диагноз по острой дизентерии на основании 4-кратного изменения титра возникают систематические ошибки. Результат РИГА сопоставляется с эпидемической обстановкой. Одновременно учитывается предполагаемый срок заболевания, особенности течения. Титр не должен быть ниже 1:400. Недостаточная чувствительность обусловливает нецелесообразность использования метода для выявления дизентерии.
При нетипичном развитии заболевания врач прописывает визуальный осмотр толстой кишки. Согласно стадиям развития заболевания выделяются внешние признаки – катаральные, геморрагические, язвенные, некротические, фиброзные. При хроническом течении часто фиксируется атрофия эпителиального слоя.
Иногда диагноз выставляется при вспомогательном изучении внешнего вида испражнений. Распознают выраженное поражение дистального отдела толстого кишечника по обилию слизи (лейкоцитов). Обнаружение эритроцитов говорит о наличии кровоизлияний.
Преимущество бактериологического посева в определении подходящего антибиотика. Выращиваются шигеллы – неподвижные (в отличие от эшерихий и сальмонелл) грамотрицательные палочки длиной 23 микрон, шириной 0,6. Бактерии анаэробные, способны существовать в кислородных средах.
Делается от 3 проб. Такой анализ в большей части случаев даёт правильный результат. Для высевания подходит любая среда. Шигелла – универсальный микроб. Штамм образует S-колонию, за исключением Зонне, разрастающемся в R-колонию.
В процессе роста не образуются ферменты, среда кислая. Шигеллу Зонне отличают по способности медленно расщеплять сахарозу и лактозу. Прочие штаммы различить по биохимическим признакам не представляется возможным. Для дифференциации рассматриваются экспрессированные на оболочке антигены. По структуре они напоминают представленные на кишечных палочках. Шигеллы могут образовывать с патогенными эшерихиями ассоциации.
Бакпосев взращивается несколько дней. Лабораториям требуется 5 суток. Назначается лечение – врач руководствуется клиническими проявлениями заболевания. Стоит удовольствие от 700 рублей.
При сборе фекалий старайтесь не захватывать кровь. При невозможности немедленного высевания проба кала консервируется в глицериновой смеси, либо растворе фосфорнокислых солей.
Биохимический анализ кала
В зарубежной практике осознали: ждать 5 дней опасно, учитывая процент смертей (до 40%). Учёные ищут токсины Шига. Яды выделяет даже атипичный штамм кишечной палочки. При дизентерии исследуется кал на признаки токсина.
Штамм кишечной палочки STEC – в научной среде О157 – ответственен за большую часть эпидемических вспышек. В 2011 году привёл к смерти 32 немцев. На долю STEC приходится до трети случаев кишечных инфекций. Пути заражения, клинические признаки напоминают дизентерию. Атипичные штаммы кишечной палочки имеют значение.
Сдавать кал нужно в начале болезни. В последующем становится сложно обнаружить токсин. Метод исследования дополняет бакпосев, серологический анализ на антитела. Для дифференциации с кишечной палочкой применяются электрофорез. С целью идентификации токсинов Шига 1 и 2 используется метод генного ПЦР копирования.
Цитотоксин Шига вырабатывается преимущественно Shigella Dysenteriae. Указанное исследование не всегда подходит для выявления дизентерии.
Серологический анализ
Через 3 дня организм начинает избавляться от дизентерии. Иммунная система формирует антитела (находятся в крови). В ходе исследования используется реакция пассивной гемагглютинации. Метод дополнителен при дизентерии – лабораторная проверка отрицательного результата, выданного диагностикой при помощи бакпосева. Серологический анализ хорош при запоздалом обращении пациента к врачу.
Антитела в крови исчезают через 2-3 года. Вспышка заболевания зарегистрирована через значительный промежуток времени. Минус методики – сложность выявления дизентерии при затяжном характере. Плотность антител падает. В результате процент тестов снижается до 40-30%. В начальной стадии даётся правильный ответ в исследовании до 80% случаев.
Обходят проблему повторным сбором анализа:
- При обращении пациента.
- Через неделю.
Достоверность результата оценивается по скорости изменения плотности антител в сыворотке. Положительный диагноз ставится при восьмикратном изменении. Антигены появляются в моче – могут фиксироваться соответствующим анализом.
Кожная проба
Токсический шок вызывает специфического рода высыпания на коже. В ослабленном болезнью организме достаточно появления дополнительно вводимого вещества для наблюдения реакции (гидролизат дизентерийных бактерий). Он в обилии содержит нужный токсин. Проба в количестве 0,1 мл вводится под кожу, в течение суток наблюдается реакция (как с Манту).
Общая картина исследований
На карантине врачи занимаются причиной возникновения ситуации. За прошедшие 3 столетия больше умирало от дизентерии бойцов, нежели в период сражений. В период Первой мировой войны сильно страдала немецкая армия в Восточной Африке. На 1000 солдат приходилось 277 больных дизентерией. Кишечные инфекции – гроза будущих гитлеровцев.
Помимо крови, мочи и кала исследуется визуально задний проход. Это копрологический метод. Бактериологическое исследование производится на основе:
- Продуктов, местной воды – чтобы установить источник заразы.
- Трупов пациентов.
- Промывных вод желудка.
Материалы хранятся в холодильнике до суток. Для сбора фекалий применяется деревянная, стеклянная палочка. Под бактериологический посев берутся среды Плоскирева и Эндо (реже Левина). Повышение всходов обеспечивается добавками Левомицетина, Синтомицина. Селенитовая среда используется для повышения продуктивности шигелл Зонне. Онаслужит для высевания рвотных масс, промывных вод.
Штамм выращивается при температуре 37 градусов Цельсия в течение 20 часов. На второй день колонии высевают на среду Ресселя. Для дифференциации используется внешний вид штамма:
- Всходы шигелл бесцветные, мягкие, правильной круглой формы, диаметром от 1 мм.
- Штамм Зонне грубый на вид, с изрезанным периметром.
Среда Ресселя содержит углеводы, по изменению собственного цвета позволяет судить о засеянной микрофлоре. Проводится дифференциация между штаммами шигелл Флекснера, атипичной кишечной палочкой, сальмонеллами. На третий день берётся кровь, начинается оценка результатов по питательным средам (внешний вид, цвет). Кал содержит много бактерий. Выбираются штаммы по внешнему виду похожие на шигеллы, по активности в отношении углеводов. Штамм Зонне расщепляет лактозу и сахарозу с образованием кислой среды, но процесс медленный.
Пристальное внимание уделяется неподвижным палочкам, не расщепляющим мочевину. Что касается шигелл Зонне, они ферментируют лактозу медленно. Для окончательной дифференциации штаммов используют прочие питательные среды: Гисса, Клиглера, мясопептонный агар, Симмонса, Кристенса. Аминокислоты некоторыми штаммами расщепляются до индола.
Антитела ищут по иммунологическим реакциям, подкрашивают для наблюдения в микроскоп. Визуальное исследование кишечника проводится в виде дополнительной меры, позволяющей оценить степень патогенных изменений. Полезно визуальное наблюдение кала.
Дифференциация прочих заболеваний
Чтобы назначать дизентерийный бактериофаг, врач должен убедиться в диагнозе. Целая группа кишечных инфекций даёт аналогичные симптомы. Это сальмонеллёз, холера, отравление, диарея. Лечение и симптомы мало связаны между собой. Главенствующая роль отводится анамнезу – что предшествовало заболеванию. Так удаётся выявить факторы, позволяющие думать на отравление. Носительство бактерий проверяется лабораторными исследованиями.
Вакцинация
Россияне уверены: прививка от дизентерии – лучшее средство… Сведений об этом в мировом интернете нет. Дезинфекция может предотвратить заражение. Дизентерийные вакцины в стадии разработки. Есть шансы испытания препаратов на россиянах.
Создание вакцины – решаемая задача лабораторий мира. Учёные уверены: опасность дизентерии сильно преуменьшена, новые виды тестов выявляют солидные цифры. Исследования показывают, что повторные заболевания дизентерией встречаются реже, нежели первичные. Это рычаг, которым ВОЗ хотят перевернуть Земной шар.
Специфика штаммов едва ли позволит создать единственное лекарство на все случаи жизни. Медики надеются прививать виды отдельно: Флекснера 2а, 3а, 6 и Зонне. Механизм прививки изучается на примере кератоконъюктивита у морских свинок, воспалении лёгких у мышей. Планируются исследования на людях. Направления движения лабораторий:
- Ослабленные формалином мёртвые клетки.
- Антигены.
- Гликоконъюгат.
Читайте также: