Исследование методом пцр клещей на инфекции

Комплексное исследование крови, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) выявляют возбудителей боррелиоза (Borrelia burgdorferi), моноцитарного эрлихиоза человека (Ehrlichia chaffeensis) и анаплазмоза человека (Anaplasma phagocytophilum).

ПЦР-диагностика боррелиоза, эрлихиоза и анаплазмоза.

Tick-borne diseases, polymerase chain reaction, PCR, Lyme disease, Human ehrlichiosis, Human anaplasmosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевые инфекции представляют серьезную проблему для здоровья человека. Наибольшее значение имеют следующие клещевые инфекции:

болезнь Лайма (клещевой боррелиоз), возбудителем заболевания является спирохета Borrelia burgdorferi;
анаплазмоз, ранее известный как гранулоцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Anaplasma phagocytophilum.

В обоих случаях переносчиком инфекции являются иксодовые клещи Ixodess capularis, I. ricinus, I. pacificus и I. persulcatus. В России наибольшее значение имеют виды I. ricinus и I. persulcatus.

моноцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Ehrlichia chaffeensis. Переносчик инфекции – иксодовые клещи Amblyomma americanum.

Клещевые инфекции обладают рядом общих свойств:

Клиническая картина клещевых инфекций имеет много общих черт и неспецифична. Как правило, заболевание манифестирует в виде гриппоподобного синдрома с лихорадкой, головной болью, миалгией и артралгией. Дифференцировать клещевые инфекции между собой и с другими острыми инфекционными на основании только лишь клинической картины заболевания невозможно.
Некоторые иксодовые клещи инфицированы сразу двумя (реже тремя) патогенами (коинфекция) и могут приводить к развитию у одного и того же человека сочетанной инфекции. Чаще описаны случаи сочетанного боррелиоза и анаплазмоза.

Учитывая эти особенности, при подозрении на клещевую инфекцию необходимо комплексное лабораторное исследование, включающее анализы на все значимые возбудители клещевых инфекций.

Для лабораторной диагностики клещевых инфекций могут применяться несколько методов, в том числе серологические тесты, анализ окрашенного мазка крови, бактериологический посев, иммуногистохимический анализ и методы молекулярной диагностики. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это один из методов молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в крови) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Исследование обладает целым рядом преимуществ по сравнению с другими методами идентификации клещевых инфекций:

Быстрота получения результата. ПЦР – это один из самых быстрых на сегодняшний день методов идентификации возбудителя. Благодаря этому, метод ПЦР считается самым опитмальным способом диагностики острой инфекции.
Высокая чувствительность метода. Другой "быстрый" метод диагностики эрлихиоза – это окраска мазков крови по Гимзе. Обнаружение в мазках крови так называемых морул (скоплений микроорганизмов внутри лейкоцитов) – это характерный признак эрлихиоза и анаплазмоза. Морулы, однако, удается выявить не всегда: лишь в 3 % случаев моноцитарного эрлихиоза и 25-75 % случаев анаплазмоза. Чувствительность же ПЦР анализа достигает 85 % в отношении E. chaffeensis и 90 % в отношении A. phagocytophilum, что позволяет считать ПЦР самым точным среди быстрых методов диагностики клещевых инфекций.
Высокая специфичность (60-85 %). Специфичность метода особенно важна для дифференциальной диагностики клещевых инфекций. Известно, что, например, серологические тесты на клещевые инфекции часто дают ложноположительный результат из-за наличия перекрестных реакций, обусловленных общими антигенными свойствами указанных микроорганизмов. Так как в ПЦР используются специфические для каждого из микроорганизмов праймеры, вероятность ложноположительного результата гораздо ниже.

Следует отметить ограничения метода ПЦР:

Так как в реакции определяется ДНК как живых, так и погибших микроорганизмов, метод ПЦР не предназначен для оценки эффективности лечения: результат будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени после начала эффективного лечения.
Чувствительность ПЦР в меньшей степени, чем других методов идентификации возбудителя, зависит от приема антибиотиков. Наиболее точный результат, однако, будет получен при взятии образца биоматериала до начала лечения антибактериальными препаратами.

В диагностике клещевых инфекций также могут помочь дополнительные лабораторные исследования. Так, характерной чертой эрлихиозов является панцитопения и умеренное повышение печеночных трансаминаз. При тяжелом течении заболевания могу наблюдаться гипонатриемия, гипокальциемия, гипомагниемия, повышение креатинина и мочевины и признаки ДВС-синдрома.

Следует отметить, что иксодовые клещи также являются переносчиками вируса клещевого энцефалита. При необходимости это комплексное ПЦР-исследование может быть дополнено исследованием на вирус клещевого энцефалита.

Для чего используется исследование?

Для диагностики боррелиоза, моноцитарного эрлихиоза и анаплазмоза.

Когда назначается исследование?

При наличии у пациента гриппоподобного синдрома (лихорадки, головной боли, миалгии и артралгии) в сочетании с указанием на укус клеща;
при обнаружении у пациента с лихорадкой "лабораторных" признаков клещевых инфекций: панцитопения, повышение уровня печеночных трансаминаз.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

боррелиоз (Borreliaburgdorferi), моноцитарный эрлихиоз человека (Ehrlichiachaffeensis) и/или анаплазмоз человека (Anaplasmaphagocytophilum).

Исследование не предназначено для оценки эффективности лечения заболевания.

Клещевой вирусный менингоэнцефалит может протекать в особо тяжелых формах, вплоть до летального исхода. На первой стадии развития болезни он схож с другими опасными заболеваниями, такими как клещевой боррелиоз, острый полиомиелит, серозный менингит, сыпной тиф, японский комариный энцефалит. Поэтому крайне важна ранняя дифференциальная диагностика, позволяющая однозначно установить истинную причину нарастающих симптомов. Необходимость дифференцировать вирусный энцефалит и боррелиоз объясняется также тем, что эти два заболевания характерны для одних и тех же регионов и возникают они после присасывания клеща в весенне-летний период.

Если при нахождении в эндемичном регионе вы обнаружили на теле клеща, следует незамедлительно провести лабораторные исследования биоматериала, а в случае положительного результата — принять экстренные меры в ближайшие 4 суток после укуса насекомого, обратившись к инфекционисту или терапевту. В нашем обзоре мы рассмотрим, какие методы диагностики существуют и какие показатели анализов на энцефалит и боррелиоз являются сигналом к безотлагательным действиям.

Боррелиоз и энцефалит: что это и в каких случаях следует сдать анализ на наличие инфекции

Среди десятков заболеваний, переносчиками которых являются клещи, двумя — энцефалитом и боррелиозом (болезнью Лайма) — можно заразиться, не покидая территории России. Эти инфекционные болезни часто путают, а между тем, они совершенно разные. Клещевой энцефалит имеет вирусное происхождение, а клещевой боррелиоз — бактериальное. Оба заболевания поражают ЦНС, но болезнь Лайма — также суставы, кожный покров, сердечную мышцу. Энцефалит протекает преимущественно в острой форме, боррелиоз склонен к хронизации. Энцефалит оставляет устойчивый и продолжительный иммунитет, болезнь Лайма вызывает замедленный иммунный ответ с каскадным развитием аутоиммунных реакций, поэтому следующее заражение боррелиозом возможно уже спустя 7 лет. По мере развития каждая болезнь приобретает собственные ярко-выраженные симптомы.

По мере развития вируса происходят постепенные, зачастую необратимые изменения в сосудах и оболочках мозга. Первые две недели болезнь протекает бессимптомно. К 3-й неделе появляются высокая температура, головная и мышечная боль, тошнота, отсутствие аппетита. У четверти заболевших эти симптомы возникают еще позднее, спустя месяц после заражения. С течением времени боли усиливаются. Появляются судороги, паралич конечностей, дезориентация, потеря сознания, кома. При отсутствии помощи — летальный исход.

В зависимости от преобладания тех или иных симптомов, различают несколько форм течения клещевого энцефалита. Наиболее тяжелые, очаговые, формы чаще встречаются на территории Дальнего Востока, наиболее легкие, неочаговые, формы превалируют в центрально-европейской части России (см. табл. 1).

Таблица 1 . Клинические формы течения клещевого энцефалита

Клиническая форма	Тяжесть	Течение	Прогноз
Неочаговые формы
•Стертая	Легкая форма	Острое	Полное выздоровление
•Лихорадочная	Средней степени		Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Менингеальная	Тяжелая форма		Выздоровление с неврологическим дефицитом
Очаговые формы
•Энцефалитическая	Средней степени	Острое	Полное выздоровление
•Менингоэнцефалитическая	Средней степени	Первично-хроническое	Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Полиоэнцефалитическая	Тяжелая форма	Вторично-хроническое	Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Полиомиелитическая		Стабильное	Хронизация
•Полиоэнцефаломиелитическая		Прогредиентное (с нарастанием симптоматики)	Летальный исход
•Полирадикулоневритическая		Прогредиентное (с нарастанием симптоматики)	Летальный исход

Через месяц появляются признаки поражения нервной системы: дефекты речи, частичный паралич конечностей, перепады в настроении. У некоторых больных развивается менингит, нарушаются сердечные ритмы. Если болезнь оставить без внимания, через год начнет прогрессировать потеря слуха, артрит, невралгия, сильная затрудненность речи, потеря ориентации в пространстве.

Боррелиоз хорошо лечится, и главное в этом деле — не допустить перехода заболевания в диссеминированную (распространенную, рассеянную) или хроническую стадию (см. табл. 2). Больному назначают антибиотики на протяжении 2–4 недель, своевременный прием которых практически гарантирует полное выздоровление.

Таблица 2 . Клинические стадии и формы болезни Лайма

Группа иксодовых клещевых инфекций, возбудители которых передаются клещами рода Ixodes, включает в себя клещевой энцефалит (вирус клещевого энцефалита), иксодовые клещевые боррелиозы (Borrelia burgdorferi sensu lato), гранулоцитарный анаплазмоз человека (Anaplasma phagocytophilum), моноцитарный эрлихиоз человека (Ehrlihia chaffeensis, Ehrlihia muris) и др. Сезон активности иксодовых клещей начинается в последней декаде апреля и продолжается в средней полосе России до октября, а в Приморье – до ноября. Исследование позволяет экстренно провести диагностику наличия опасных возбудителей в клеще и при получении положительного результата обратиться в специализированные учреждения.

Клещевой энцефалит. Возбудитель - Tick-borne encephalitis Virus, TBEV. Около 70% всех случаев клещевого энцефалита в РФ приходится на Урал и Сибирь. В преобладающей части случаев клещевой энцефалит протекает в инаппарантной форме, в остальных случаях развиваются различные по степени тяжести варианты течения заболевания: лихорадка, вирусные менингит и энцефалит. В большинстве случаев после очаговой энцефалитической формы развиваются стойкие нарушения деятельности ЦНС.

Лайм-боррелиоз, болезнь Лайма или иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – трансмиссивное полисистемное заболевание, приводящее к поражению опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем, кожи. Занимает по широте распространения и уровню заболеваемости одно из ведущих мест среди природно-очаговых заболеваний. В группу иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) входят заболевания, вызываемые в большинстве случаев тремя представителями комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato: B.burgdorferi, B.garinii и B.afzelii. В результате попадания боррелий в кожу у больных отмечается местное кожное воспаление – клещевая мигрирующая эритема. Но почти у 50% пациентов эритема отсутствует в начале заболевания, это так называемая безэритемная форма.

Гранулоцитарный анаплазмоз человека относится к острым лихорадочным заболеваниям. Возбудителем заболевания является Anaplasma phagocytophillum. Размножение анаплазм в нейтрофилах приводит к ослаблению иммунных защитных реакций организма. Для данного заболевания характерно острое начало с высокой лихорадкой, слабостью, головной и мышечными болями.

Моноцитарный эрлихиоз человека вызывается микроорганизмами рода Ehrlichia: E.chaffeensis, E.muris. Эрлихии поражают кожу, печень, ЦНС (центральную нервную систему) и костный мозг, образуя в этих органах инфекционные гранулемы. Клинически выраженное заболевание чаще регистрируется у детей и в группе пациентов старше 40 лет. Для моноцитарного эрлихиоза человека характерно развитие выраженного общеинтоксикационного синдрома в острый период заболевания: высокая лихорадка, сопровождающаяся ознобом, головной и мышечной болью, артралгиями, абдоминальной болью.

Исследование клеща в случае присасывания с целью принятия мер экстренной профилактики
Эпидемиологические исследования

Референсные значения: не обнаружено

В случае отрицательного результата и наличия факта присасывания внимательно наблюдать за возможными клиническими признаками проявления заболеваний, передающихся иксодовыми клещами, в период первых 30 дней после укуса, в случае появления клинических симптомов обратиться к врачу-инфекционисту.

1. При обнаружении в клеще вируса клещевого энцефалита проводится экстренная серопрофилактика в специализированных ЛПУ ( не позднее четвертого дня после присасывания клеща ).

Адреса специализированных Центров экстренной профилактики против клещевого энцефалита г. Москвы:

Для детей: Детская городская клиническая больница №13 им. Н.Ф.Филатова, Москва, ул. Садовая-Кудринская, д.15. Справочная служба: +7 (499) 254-91-29.

Жители Московской области могут получить специализированную помощь по месту жительства в ЦРБ или по вышеуказанным адресам.

Для динамичного наблюдения за возможным развитием заболевания рекомендуется исследовать кровь на наличие специфических антител класса IgM сразу после получения положительного результата исследования клеща и через две недели после укуса клеща.

2. При обнаружении в клеще патогенных видов боррелий, анаплазм и эрлихий ( не позднее пятого дня после присасывания клеща ) проводится антибиотикопрофилактика, назначаемая врачом-инфекционистом.

Рекомендации по подготовке к проведению исследования

Рис. 1 - Завязать нить вокруг хоботка клеща

Рис. 2 - Скручивая концы нити и подтягивая ее вверх, удалить клеща

Заказать

Возбудители клещевых инфекций (вирус клещевого энцефалита (TBEV), возбудители клещевых боррелиозов (B.burgdorferi sl), гранулоцитарного анаплазмоза (A.phagocytophillum), моноцитарного эрлихиоза (E.chaffeensis, E.muris), определение ДНК/РНК в клеще

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Ляпунов А.В., Хаснатинов М.А., Манзарова Э.Л., Егорова Д.В., Данчинова Галина Анатольевна

Проанализированы результаты исследований 842 обращений в Центр диагностики и профилактики клещевых инфекций ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ (Иркутск) людей, пострадавших от иксодовых клещей в 2014 г. Диагностика на наличие РНК/ДНК возбудителей клещевого энцефалита, клещевого боррелиоза , моноцитарного эрлихиоза и гранулоцитарного анаплазмоза человека сывороток крови этих людей или клещей, снятых с пострадавших от их присасывания и укусов людей, проведена с помощью метода ПЦР в реальном времени. Показана возможность применения этого метода для диагностики инфекций, передающихся иксодовыми клещами, и проведения эффективной профилактики с целью снижения инфекционной заболеваемости.

Real-Time PCR for the Diagnosis of Tick-Born Infections

Overall 842 cases of admission due to tick bites in Irkutsk area during 2014 were analyzed. Detection of DNA/RNA of the tick-born encephalitis virus, Lyme borreliosis , monocytic ehrlichiosisand granulocyticanaplasmosis in the human serum and in the ticks was performed using real-time PCR . According to the study results we have demonstrate that real-time PCR could be used as a routine tool for diagnostics of tick-born infections .

Опыт применения метода ПЦР в реальном времени для диагностики инфекций, передающихся иксодовыми клещами

А.В. Ляпунов, М.А. Хаснатинов, Э.Л. Манзарова, Д.В. Егорова, Г.А. Данчинова

в реальном времени. Показана возможность применения этого метода для диагностики инфекций, передающихся иксодовыми клещами, и проведения эффективной профилактики с целью снижения инфекционной заболеваемости.

Ключевые слова: таежный клещ, степной клещ, клещевой энцефалит, клещевой борре-лиоз, моноцитарный эрлихиоз человека, грану-лоцитарный анаплазмоз человека, диагностика, ПЦР.

Real-Time PCR for the Diagnosis of Tick-Born Infections

Ä.V. Lyapunov, М.А. Hasnatinov, E.L. Manzarova, D.V. Egorova, G.Ä. Danchinova

Scientific Center of Family Health and Human Reproduction Problems, Irkutsk, Russia

Overall 842 cases of admission due to tick bites in Irkutsk area during 2014 were analyzed. Detection of DNA/RNA of the tick-born encephalitis virus, Lyme bor-reliosis, monocytic ehrlichiosisand granulocyticanaplas-mosis in the human serum and in the ticks was performed using real -time PCR. According to the study results we

have demonstrate that real-time PCR could be used as a routine tool for diagnostics of tick-born infections.

Key words: tick-born infections, tick-born encephalitis, Lyme borreliosis, monocytic ehrlichiosis, granulo-cyticanaplasmosis, diagnosis, PCR.

Трансмиссивные инфекции, передающиеся человеку при укусах иксодовых клещей, являются серьезной угрозой для здоровья людей, проживающих в эндемичных районах. К настоящему времени в России обнаружено пять основных трансмиссив-

Галина Анатольевна Данчинова

Эл. почта: [email protected]

ных клещевых инфекций: клещевой энцефалит (КЭ), болезнь Лайма или клещевой боррелиоз (КБ), клещевой риккетсиоз (КР), моноцитарный эрлихиоз человека (МЭЧ) и гранулоцитарный анаплазмоз человека (ГАЧ) 6. И в третьем тысячелетии проблема заболеваний, связанных с иксодовыми клещами, несмотря на пристальное внимание и предпринимаемые профилактические мероприятия (вакцинация, развитие сети центров диагностики инфекций, разработка современных репеллентов и противоэнце-

В Восточной Сибири многие из этих причин зависят, в том числе, от глобального потепления и взаимосвязи между собой. Практически ежегодно увеличивается число людей, пострадавших от укусов иксодовыми клещами, и, как следствие, растут показатели заболеваемости КЭ и КБ. Так, в 2014 г. по данным Роспотребнадзора по Иркутской области, показатель обращаемости населения по поводу укусов клещей превысил среднероссийский более чем в 1,5 раза (всего обратилось в лечебные учреждения 11 780 жителей области), а уровень заболеваемости КЭ — в 3,2 раза [7]. Кроме того, отмечена циркуляция Anaplasma phagocytophilum и Ehrlichia chaffensis/E. muris — возбудителей ГАЧ и МЭЧ соответственно. Интересны факты обнаружения иксодовых клещей в Республике Саха [8]: за 20082014 гг. в 13 районах было собрано 32 экз. клещей Ixodes persulcatus и 14 экз. Haemaрhysalis concinna, хотя авторы признают, что правильность определения клещей не подтверждена акарологами.

Для естественных и преобразованных человеком биоценозов Предбайкалья установлено обитание шести видов иксодовых клещей: I. persulcatus P. Sch., 1930 (таежный клещ); I. lividus Koch, 1844; I. trianguliceps Bir., 1895; Dermacentor nuttalli Ol., 1929 (степной клещ); D. silvarum Ol., 1932 (лесостепной клещ) и H. concinna Koch, 1844 [9], которые являются переносчиками разнообразных заболеваний вирусной, бактериальной и риккетсиозной природы. Кроме того, установлены случаи обращений людей, пострадавших от присасывания клещей других видов, причём как на территории региона, так и в других регионах страны [10].

Экстренная диагностика спектра клещевых инфекций с последующей специфической профилактикой (при необходимости) имеет первостепен-

ное значение для снижения заболеваемости. В соответствии с СанПиН сегодня в РФ регистрируется пять инфекционных заболеваний, передающихся иксодовыми клещами [11].

Материал и методы

Пациентам, у которых был получен при первичном обращении положительный результат на

Таблица 1. Материал и характеристика населения, пострадавшего от присасывания клещей

Материал для исследования Количество проб Число людей с полисами ДМС, n (%) Число людей, вакцинированных от КЭ, n (%) Средний возраст людей, лет

Ixodes persulcatus 361 172 (47,6) 46 (10,3) 35,69±1,61

Dermacentor sp. 33 20 (60,6) 6 (18,2) 27,00±2,88

Сыворотка крови 448 195 (43,5) 39 (10,8) 35,75±1,02

Всего . 842 387 (46,0) 91 (10,8) 35,20±0,88

При работе с пациентами соблюдались этические принципы, предъявляемыми Хельсинской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Médical Association Déclaration of Helsinki), 1964, в редакции 2000 г. [15]. Все исследования проводились с одобрения Комитета по биомедицинской этике ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ и при информированном согласии пациентов.

При экологогеографической характеристике установлено, что свыше 92% обследованных людей пострадали от укусов клещей в Иркутской области, в основном в пригороде, в зонах рекреационного освоения при посещении садоводческих товариществ или на отдыхе. У 58 (6,9%) человек присасывание клещей произошло на территории Республики Бурятия — в излюбленных местах отдыха иркутян (Тункинская долина, восточное

и юго-восточное побережье оз. Байкал). Случаи присасывания клещей в других регионах были единичны: по два человека пострадало в Забайкальском и Красноярском краях, по одному — в Алтайском и Приморском краях, Еврейской АО, Омской области и Республике Монголия.

В ПЦР, так же как при микроскопии фиксированных препаратов из содержимого кишечника клещей, чаще всего выявлялись возбудители КБ: в среднем — 12,7%, хотя у таежных клещей этот показатель почти в два раза выше (табл. 2).

При исследовании сывороток крови людей обнаружено, что доля положительных находок по всем патогенам ниже, чем у клещей: в 2,6-2,9 раза для ВКЭ, A. phagocytophillum, E. chaffeensis / E. muris и в 5,3 раза для B. burgdorferi sensu lato. Этот факт служит еще одним доказательством того, что не каждый инфицированный клещ может заразить человека.

Также заслуживают особого внимания 6,5% микст-инфицированых клещей, у которых одновременно выявлено по два патогена в различных сочетаниях (табл. 3). Чаще всего у микст-инфици-рованных клещей встречались анаплазмы (52%), большинство из которых сочетались с боррелия-ми (61,5%) и ВКЭ (31%) и только одна — с эрли-хиями. Кроме того, выявлен единичный случай инфицирования таёжного клеща тремя различными возбудителями: ВКЭ, B. burgdorferi s. l. и A. phagocytophillum. Три эпизода микст-инфицирования (0,7%) обнаружено при анализе сывороток крови людей: у одного человека обнаружено одновременное инфицирование ВКЭ и эрлихиями,

Таблица 2. Результаты исследования клещей и сывороток крови людей на наличие РНК/ДНК возбудителей клещевых инфекций

Материал для исследования ВКЭ* B. burgdorferi s. l. E. chaffeensis / E. muris A. phagocytоphiüum Всего

I. persulcatus 25 86 25 43 179

Dermacentor sp. 1 2 1 3 7

Сыворотка крови 11 19 10 20 60

Всего . 37 107 36 66 246

Примечание. * В таблице приведены абсолютные числа.

Доля клещей и сывороток крови людей с РНК/ДНК ВКЭ (TBEV), B. burgdorferi s. l., E. chaffeensis / E. muris, A. phagocytophillum

у второго — ВКЭ и анаплазмами, у третьего — бор-релиями и эрлихиями.

При одновременном заражении людей несколькими патогенами при единичном присасывании клещей существует опасность в неправильной постановке диагноза и некорректном проведении профилактических или лечебных мероприятий.

Для сравнения достоверности применения разных методик (ПЦР и ИФА) мы провели оценку результатов исследования сывороток крови на наличие ВКЭ и показали, что данные согласуются с материалами, полученными нами ранее (20072011 гг.). При анализе методом ИФА 14,2 тыс. сывороток крови людей через 2-3 суток после присасывания клещей доля положительных проб с антигеном ВКЭ варьировала от 2% в 2011 г. до 3,7% в 2010 г. [16]. Полученный нами в 2014 г. с помощью метода ПЦР результат в 2,5% случаев сопоставим с этими данными.

Всем людям, пострадавшим от присасывания зараженных клещей, было рекомендовано повторное обследование через 1,5-2 месяца после введения иммуноглобулина человека против ВКЭ и/или приема антибиотиков. Из них на контрольное обследование обратились менее половины (43,5%).

Анализ сывороток крови этих пациентов показал, что после проведения антибиотикопрофилактики в случае выявления в клеще или сыворотке крови возбудителей бактериальных инфекций (КБ, МЭЧ, ГАЧ) отмечается практически 100% эффективность. Лишь у одного человека с наличием возбудителя ГАЧ в момент обращения (9 июня), при повторном обследовании (28 июля) в сыворотке крови наблюдалось присутствие IgG-антител к ГАЧ. При изучении сроков обращения и обстоятельств присасывания клеща оказалось, что пациент обратился за помощью через две недели после укуса клеща с жалобами на температуру 38,5-39,8 °С, боль в мышцах и ломоту в суставах. Возможно, этот пациент, направленный в инфекционную больницу, по результатам первичного обращения не получил адекватного лечения, поскольку в течение 2014 г. в Иркутской области официально не было зарегистрировано ни одного случая ГАЧ.

При изучении эффективности профилактики КЭ было показано, что у 28% невакцинированных от КЭ людей, подвергшихся укусу инфицированного ВКЭ клеща, выявлялись IgG-антитела в титре от 1:200 до 1:2000 через полтора месяца после введения противоклещевого иммуноглобулина. Однако при этом никаких жалоб на протяжении всего периода после присасывания клеща эти пациенты не предъявляли. Этот факт может свидетельствовать либо о естественной иммунизации, либо о нарушении сроков вакцинации, когда человек, не желающий проверить напряженность иммунитета, считается не вакцинированным, либо о легкой форме заболевания после произошедшего присасывания клеща.

Таблица 3. Сочетания и количество случаев выявления двух-трех патогенов в клещах, снятых с людей (по результатам ПЦР)

Наименование и количество патогенов / сочетаний

Патогены 2 патогена 3 патогена

и их сочетания ВКЭ B. burgdorferi s. l. E. chaffeensis / E. muris A. phagocytophillum B. burgdorferi s. l. + A. phagocytophillum

B. burgdorferi s. l. 4 - 5 8 -

E. chaffeensis / E. muris 3 5 - 1 -

Phagocytophillum 4 8 1 - -

B. burgdorferi s. l. + A. phagocytophillum 1 - - - -

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют как об актуальности проблемы для медицинской науки и практического здравоохранения, так и о возможности применения метода ПЦР в реальном времени для диагностики инфекций, передающихся иксодовыми клещами, что позволяет выявить наличие возбудителей КЭ,

1. Коренберг Э.И., Ковалевский Ю.В., Кузнецова Р.И. и др. Выявление и первые результаты изучения болезни Лайма на Северо-Западе СССР. Мед паразитол и паразитарные болезни 1988; 1:45-8.

2. Alekseev A. N., Dubinina H.V., Van De Pol I., Schouls L.M. Identification of Ehrlichia spp. and Borrelia burgdorferi in ixodes ticks in the Baltic regions of Russia. J Clin Microbiology 2001; 39(6):2237-42.

4. Афанасьева М.В., Воробьева Н. Н., Коренберг Э.И. и соавт. Гранулоцитарный анаплазмоз человека: особенности клинических проявлений в России. Инфекционные болезни. Научно-практический журнал Российского общества инфекционистов 2006; 4(2):24-8.

5. Шпынов С.Н., Рудаков Н.В., Гранитов В.М. и соавт. Выявление альфа1-протеобактерий в иксодовых клещах и образцах от больных в России. Омский научный вестник 2006; 3:32-7.

8. Решетников А.Д., Барашкова А.И., Прокопьев З.С. Иксодовые клещи (Ixodida: Ixodidae) Якутии. Теоретические и прикладные аспекты современной науки 2014; 5:141-3.

9. Данчинова Г. А., Хаснатинов М. А., Сунцова О. В. и соавт. Переносчики и возбудители трансмиссивных клещевых инфекций на юге Восточной Сибири и севере Монголии. Бюллетень ВСНЦ СО РАМН 2004; 1-3:107-12.

ИКБ, МЭЧ и ГАЧ в клеще или сыворотке крови, провести эффективную профилактику и, тем самым, снизить инфекционную заболеваемость.

Установлено, что в Байкальском регионе таежные клещи являются основными переносчиками исследованных нами патогенов. Степные клещи также могут являться носителями всех этих инфекций, но в гораздо меньшей степени могут влиять на осложнение эпидемиологической ситуации.

10. Данчинова Г. А., Ляпунов А.В., Хаснатинов М. А. и соавт. Эколого-географическая характеристика обращаемости людей, пострадавших от укусов клещей в Иркутской области и за её пределами. Сибирский медицинский журнал 2012; 4:64-7.

11. СП 3.1.3.2352-08. Профилактика инфекционных болезней. Кровяные инфекции. Профилактика клещевого вирусного энцефалита. М.; 2008.

14. Коренберг Э.И. Методические указания по эпидемиологии, диагностике, клинике и профилактике болезни Лайма. М.; 1991.

16. Хаснатинов М.А., Ляпунов А. В., Данчинова Г. А. и соавт. Клещевой энцефалит: встречаемость и профилактика инфекции на доклинической стадии у людей, пострадавших от присасывания иксодовых клешей. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы 2012; 5:19-24.

Читайте также: