Количественный или качественный анализ на инфекции

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Описание

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Суть анализа

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Виды ПЦР

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

• отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
• положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача на ПЦР биоматериала

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

• если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
• нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
• за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

Количественная оценка полученных результатов

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Что обнаруживается?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Особенности

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

Стоимость ПЦР-диагностики

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

ДНК ПЦР анализы направлены на выявление патогенных микроорганизмов. Они бывают количественные и качественные.

Если при ПЦР ДНК обнаружена или не выявлена, это качественный тест.

Если указывается ещё и концентрация, это количественная ПЦР. Данный анализ более информативен. Хотя требуется он далеко не всегда.

• Когда необходим количественный ПЦР анализ
• ПЦР на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду
• Мазок ПЦР количественный на хламидии
• Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип
• Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения
• Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам
• Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови
• Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови
• К какому врачу обратиться для ПЦР анализа

Когда необходим количественный ПЦР анализ

При ПЦР количественное определение требуется во многих случаях. Она дает дополнительные возможности, если сравнивать с качественным анализом.

Если после проведения ПЦР ДНК обнаружено, знать количество микроорганизмов необходимо, чтобы понять:

• требуется ли пациенту лечение (при низких количественных показателях оно может не назначаться);
• насколько быстро идет выздоровление (есть ли вирусологический ответ от лечения);
• стоит ли продолжать терапию этими же препаратами или нужно менять схему;
• болезнь находится под контролем или возникает рецидив, требующий дополнительных терапевтических мероприятий;
• насколько высоким является риск осложнений (например, вероятность диспластических изменений в шейке матки при папилломавирусной инфекции).

Поговорим подробнее, при каких патологиях могут потребоваться количественные ДНК ПЦР анализы.

ПЦР на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду

Существуют микроорганизмы, которые не всегда вызывают патологический процесс в структурах урогенитального тракта. Они могут вызывать воспалительные или другие симптомы только в том случае, когда популяция бактерий значительно увеличится.

Чтобы узнать, увеличилась она или нет, требуются соответствующие анализы. Многие лаборатории предлагают комплексный количественный анализ ПЦР сразу на несколько возбудителей.

Микоплазмы двух видов могут вызывать воспалительные процессы во влагалище. Это микоплазма гениталиум и хоминис. Причем, гениталиум может вызывать воспаление даже в минимальных концентрациях. Этот микроорганизм рассматривается как однозначно патогенный. При его выявлении даже в малых количествах проводится лечение. Целью его считается эрадикация возбудителя. Критерием успешности терапии является отрицательный анализ ПЦР на микоплазму гениталиум.

А вот хоминис – менее опасный вид данных микроорганизмов. Он может обнаруживаться в урогенитальном тракте многих людей.
В том числе тех, кто не имеет признаков воспалительного процесса в урогенитальном тракте. В этом случае пороговой считается концентрация бактерий в клиническом материале от 10 4 копий ДНК в мл.

Если ПЦР покажет, что бактерий меньше, лечение может и не назначаться. Но если количество патогенов превышает указанное значение, требуется антибактериальная терапия.

Потому что в больших количествах микоплазмы:

• вызывают воспаление;
• могут провоцировать осложнения;
• передаются при половом акте;
• опасны для беременных.

Гарднереллы – вид транзитных микроорганизмов, которые часто выявляются в урогенитальном тракте женщин. Они не вызывают воспаления. Но в больших количествах провоцируют дисбактериоз. Это заболевание, основным проявлением которого является обильное отделяемое из влагалища с неприятным запахом.

Патология нарушает качество половой жизни. Гарднереллы в больших количествах способны быстро уничтожать лактобактерий. Они вытесняют их. В итоге может оказаться так, что лактобактерии вообще не обнаруживаются во влагалище. Этого не должно случиться, потому что молочнокислые бактерии защищают организм женщины от других микробов. Они делают это за счет продукции молочной кислоты.

Кислая рН влагалища не дает условно-патогенным бактериям чрезмерно развиваться.

Количественная ПЦР ДНК диагностика на гарднереллы показывает, сколько этих микроорганизмов содержится во влагалище. Если их больше 10 4 копий ДНК в мл, требуется антибактериальное лечение. Оно позволяет предотвратить дисбактериоз влагалища или устранить его основные проявления, если они уже присутствуют.

Кандиды – ещё одна группа микроорганизмов, для которых имеет значение количество. Это грибы, которые в норме присутствуют в урогенитальном тракте большинства людей.

Кандидоз является оппортунистической инфекцией. Он развивается, когда в организме ослаблен иммунитет. В этом случае количество кандид резко увеличивается. Появляются красные пятна, белые выделения и другие симптомы, иногда достаточно сильно выраженные.

Само по себе обнаружение кандиды с помощью ПЦР не дает врачу никакой ценной информации. Всем и так понятно, что эти грибы в структурах урогенитального тракта есть. Поэтому качественная ПЦР на кандидоз не проводится.

Клиническое значение имеет только количественный метод ПЦР. При определении кандид в количестве, превышающем пороговое значение, устанавливается диагноз кандидоз. Назначается соответствующее лечение.

Показанием для назначения количественного ПЦР на кандиды является в основном наличие симптомов кандидоза. Анализ также может быть использован в случае обнаружения псевдомицелия при микроскопии мазка из урогенитального тракта. ПЦР позволяет установить вид гриба.

Ведь кандидоз может быть вызван десятками видов микроорганизмов. Чаще всего это кандида альбиканс. Но есть ещё 5-6 видов грибов, которые провоцируют кандидоз достаточно часто. Причем, их наличие усложняет процесс лечения.

Часто такие кандидозы рецидивируют. Они плохо реагируют на традиционно используемые при кандидозе противогрибковые препараты.

Количественная ПЦР на кандидоз используется и после лечения. Она помогает врачу понять, была ли проведенная терапия успешной, и оценить риск рецидива грибкового заболевания в будущем.

Количественная ПЦР на уреаплазмоз тоже проводится достаточно часто. Уреаплазмы рассматриваются как условно-патогенная флора. То есть, они опасны только в больших количествах.

ПЦР количественная на уреаплазмы позволяет решить вопрос о необходимости лечения.

У многих врачей-венерологов целесообразность использования количественной ПЦР на уреаплазмы вызывает вопросы. Этот микроорганизм обладает очень высокой адгезивной способностью. Он крепко прилипает к клеткам, поэтому в клиническом материале может быть гораздо меньше бактерий, чем есть в организме.

Соответственно, количественные показатели могут быть заниженными. Кроме того, они значительно варьируют от анализа к анализу.

Хотя в настоящее время считается, что лечение стоит начинать только при концентрации бактерий от 10 4 копий ДНК в мл, нередко врачи назначают лечение и при меньшем их количестве. Особенно если женщина готовится к беременности.

Есть немало исследований, которые подтверждают: уреаплазма очень опасна для плода. Она вызывает инфицирование околоплодных оболочек.

Уреаплазма способна спровоцировать преждевременные роды. Она вызывает респираторные инфекции у новорожденного плода. Поэтому даже если качественная ПЦР показывает небольшие количества уреаплазм, желательно пролечиться тем женщинам, которые готовятся к беременности.

Не требуется лечение при сочетании таких факторов:

• концентрация уреаплазм ниже пороговой;
• нет симптомов воспаления;
• супружеская пара не планирует беременность.

Тогда лечиться не обязательно. Но такие случаи встречаются редко. Потому что пациенты редко приходят на диагностику венерических заболеваний с профилактической целью. В основном они обращаются после возникновения воспалительных симптомов.

Мазок ПЦР количественный на хламидии

На хламидии чаще проводят тест качественный, а не количественный.

Потому что этот микроорганизм является патогенным.

Одного только факта его обнаружения достаточно, чтобы начать лечение.

Причем, количество копий ДНК не играет существенной роли в определении схемы терапии и дозировок препаратов.

Тем не менее, количественные тесты иногда проводят.

Они дают врачу возможность оценить прогноз заболевания.

Понять, насколько высока вероятность осложнений.

А также спрогнозировать ответ на лечение.

При большой концентрации хламидий в урогенитальном тракте доктор может увеличить курс терапии.

Оценивая данный показатель в динамике, он может понять, работают ли те антибактериальные препараты, которые он назначил.

Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип

Такие исследования могут использоваться в диагностике папилломавирусной инфекции.

Почему нужны именно количественные анализы, а не качественные? Они более информативны в плане оценки прогноза заболевания, целесообразности противовирусного лечения и оценки его результативности.

Для первичной диагностики обычно проводят качественную ПЦР. Она помогает установить, какие типы ВПЧ присутствуют в организме. Это могут быть высокоонкогенные, среднеонкогенные или низкоонкогенные типы.

Особую настороженность вызывают вирусы высокой онкогенности.
Поэтому не лишним будет знать, в каком количестве они содержатся в урогенитальном тракте.

Особенно важен данный анализ для женщин. Ведь у них ВПЧ является основной причиной рака шейки матки.

В свою очередь карцинома шейки матки – самое частое злокачественное онкологическое заболевание среди молодых женщин.

Проведение количественной ПЦР позволяет установить, прогрессирует или регрессирует патологический процесс. Если количество вирусов увеличивается, это говорит о высоком риске дисплазии шейки матки. А она в дальнейшем переходит в рак.

При длительно сохраняющиеся высокой вирусной нагрузке показано лечение с помощью иммуномодуляторов и противовирусных препаратов общего действия. В процессе лечения проводятся повторные исследования ПЦР.

Врач смотрит, стало вирусов в организме больше или меньше. Если их стало меньше, это хороший прогностический признак. Если же вирусов стало больше, то по результатам количественной ПЦР схему терапии стоит пересмотреть.

Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения

Количественная ПЦР имеет важнейшее значение в диагностике и терапии ВИЧ.

В основном первичная диагностика заболевания проводится путем определения уровня антител в крови. Это метод намного дешевле, а результаты можно получить быстрее.

Но в некоторых случаях без ПЦР не обойтись. Метод позволяет обнаружить ДНК провируса или РНК вируса в крови.

В основном используют количественную ПЦР для выявления РНК. Это самый ранний маркер ВИЧ. Анализ крови позволит диагностировать болезнь уже через несколько недель после заражения.
А количественная оценка методом ПЦР имеет огромное значение в определении схемы терапии.

С помощью анализа оценивают эффективность лечения. Если вирусная нагрузка снижается до неопределяемой, это говорит о том, что терапия проходит успешно.

Антиретровирусные препараты работают. Но если она начинает возрастать, это свидетельствует о формировании резистентности к препаратам. Подобное нередко происходит через несколько лет после начала лечения.

В таком случае схему лечения приходится менять. Иначе количество иммунных клеток в крови начнет снижаться. Вследствие ухудшения иммунитета начнут присоединяться инфекции и возникать злокачественные новообразования.

Используется также выявление ДНК ВИЧ при помощи ПЦР. Метод более предпочтителен для обследования новорожденных детей. Потому что количество РНК в крови может уменьшаться, если мать получала антиретровирусную терапию. В результате в первые дни жизни ПЦР количественная на РНК вируса может быть ложноотрицательной.

Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам

Количественный анализ ПЦР используется при гепатите C для определения уровня виремии.

Метод дает возможность подобрать оптимальную схему терапии. А также он дает возможность оценить, насколько эффективной является проводимая терапия.

Благодаря ПЦР вирус гепатита С определяется уже через 1 неделю с момента заражения. В дальнейшем метод применяется, чтобы понять, было ли специфическое лечение эффективным.

Результаты оцениваются по ряду критериев:

• вирусологический;
• биохимический;
• морфологический.

Вирусологический контроль проводится при помощи ПЦР.
Если РНК вируса гепатита С не выявляется, то терапия прошла успешно.

Если результаты остаются отрицательными в течение 6 месяцев, такой вирусологический ответ считается устойчивым.

Появление РНК вируса на фоне прекращения лечения говорит о рецидиве заболевания. В процессе проведения терапии с помощью количественного ПЦР оценивают динамику изменения концентрации вируса.

Оптимальным результатом считается исчезновение РНК в течение не более чем 4 недель противовирусного лечения. Такой вирусологический ответ называют ранним.

ПЦР также позволяет определить тип вируса гепатита. При разных типах назначаются разные схемы лечения. Количественные показатели при вирусном гепатите С оценивают через каждые 3 месяца терапии.

Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови

Интерпретацией результатов занимается врач.

Единицей измерения количества патогенных микроорганизмов является концентрация ДНК или РНК в одном миллилитре клинического материала. Она обычно обозначается в 10, которая возведена в степень. Эта степень фактически означает количество нулей, которые следуют после единицы. Например, 10 4 – это 10 000 копий ДНК.

Для разных инфекций нормы отличаются. В каждом случае требуется индивидуальная расшифровка анализа, так как часто их ещё нужно сравнивать с проведенными ранее исследованиями.

Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови

Подготовки к сдаче крови не требуется.

А вот к сдаче мазка нужно приготовиться. Есть несколько ограничений, которых следует придерживаться.

Запрещено накануне сдачи анализа:

• вести интимную жизнь – в течение 2 дней;
• принимать антибактериальные препараты (за исключением случаев, когда они назначены врачом) – в течение 2 недель;
• не мочиться – 3 часа;
• женщинам – не спринцеваться и не пользоваться тампонами – 2 дня.

К какому врачу обратиться для ПЦР анализа

Чтобы сделать качественную ПЦР, обратитесь к доктору-венерологу. Специалисты данного профиля ведут прием в нашем медицинском центре. Они оценят, есть ли у вас показания к назначению данного анализа.

При необходимости вы сможете сдать кровь или мазки в день обращения. Результаты для большинства исследований получите на следующий день.

Для сдачи анализов методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

• ВИЧ
• Гарднереллез
• Кондиломатоз
• Молочница
• Сифилис
• Трихомониаз
• Баланопостит
• Герпес
• Гонорея
• Микоплазмоз
• Уреаплазмоз
• Уретрит
• Хламидиоз
• ЗППП

Гепатит – это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Чтобы с точностью поставить диагноз и выбрать метод лечения врач может назначить целый ряд анализов: от анализа крови на антитела до УЗИ печени. Но, сам гепатит диагностируется по крови, все дополнительные исследования предназначены в основном для понимания насколько вирус повредил печень.

На сеансе доктор может назначить вам метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного гепатита.

Что такое ПЦР и его виды

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце.

Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток. Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

ПЦР делится на несколько видов:

• Качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
• Количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни. Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

В каких случаях делают количественный анализ

Исследование делается параллельно с качественным анализом после того, как проверка крови на наличие антител к гепатиту (ИФА) показала положительный результат. Делают его несколько раз:

• При первичной диагностике гепатита С до принятия решения о выборе курса лечения;
• Во время лечения заболевания (обычно на 1, 4, 12 и 24 неделе) для определения клинической картины результатов терапии;
• После лечения для определения рецидива.

Количественный анализ является одним из основных видов исследования, на которые врач полагается при выборе методов лечения гепатита. Он служит для того чтобы:

• Понять как сильно организм заражен вирусом, количественное присутствие антигенов в теле.
• Эффективности выбранной терапии.
• Подобрать метод лечения и составить его прогноз.
• Анализ крови, эластометрия, биопсия и другие.

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

1. Определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;
2. Качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;
3. Нахождение острого и хронического гепатита С;
4. Существование микст-гепатитов;
5. При планировании лечения;
6. Если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

Подготовка к сдаче крови на количественный анализ

Сдача биоматериала на проведение анализа происходит из вены. Особых рекомендаций по подготовке нет, поэтому актуальны стандартные правила, которые нужно соблюдать перед сдачей крови на исследование:

• Делать это лучше утром натощак (последний прием пищи должен быть не ранее 8-12 часов до сдачи).
• Если забор крови происходит не утром, то на завтрак нельзя употреблять жирную пищу (интервал в 8-12 часов также должен соблюдаться).
• Отказаться от алкоголя, жирной и жаренной еды за 1-2 дня до исследования.
• Не приходить на анализ на следующий день после праздничного застолья.
• Курение запрещено как минимум за час до сдачи биоматериала.
• Перед забором крови стоит посидеть 10-15 минут в спокойствии, чтобы расслабить тело, исключить влияние на результаты напряжения, как физического, так и психологического.
• Если принимаете какие-либо лекарственные средства или им подобные препараты, то анализ можно сдавать спустя 10-14 дней после последнего их приема. (об этом факте необходимо сообщить врачу, возможно он установит иное условие).
• Биоматериал не сдается сразу после выполнения ректального исследования, рентгенографии, физиотерапевтических процедур.
• Первоначальный и повторный анализы лучше сдавать в одной и той же лаборатории (медицинском учреждении), так они разные заведения могут использовать различные реагенты, оборудование, единицы измерения и точность.

Расшифровка результатов результатов количественного анализа на вирус гепатита с и b

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Коэффициенты перевода разные (колеблются примерно от 1 до 5) и зависит от метода, использованного для определения количественного показателя.

В основном на практике принято, что 1 МЕ/мл = 4 копиям на мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему.

При гепатите C нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки(виремии):

Цифровое обозначение числа вируса	Описание итога
Не обнаружено	Норма для здорового человека. Вирус не найден или исход ниже грани чувствительности методики.
До 1.8*10^2 МЕ/мл (7,5*102 копий/мл)	Обнаружено в концентрации ниже линий границы.
До 8*10^5 МЕ/мл (2*106копий/мл)	Обнаружен вирус при хорошем прогнозе болезни и эффективном лечении. Низкая вирусная нагрузка.
Больше 8*10^5 МЕ/мл (2*106 копий/мл)	Обнаружено вирус и большая вирусная нагрузка.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл (1*108 копий/мл)	Обнаружен вирус в концентрации выше линейного диапазона.

1. Если при повторном анализа нагрузка вируса является меньшей, чем 8*105 МЕ/мл, то можно утверждать, что терапия идёт в правильном направлении и в борьбе с заболеванием есть успех.
2. Говорить о раннем вирусологическом ответе можно при условии снижения количественного присутствия РНК вируса на третий день лечения. Но вероятность этого находится на уровне 85%.
3. Если же, показатель более 8*105 МЕ/мл, то доктор должен пересмотреть схему лечения и выбрать более подходящую. Соответственно, чем больше уровень, тем сильнее вирус поразил организм и хуже прогноз.

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса.

Плюсы методики

1. Методика ПЦР дает возможность дать заключение и назначить правильное лечение.
2. Быстрота результатов — не требует разграничения и выращивания видов возбудителя. Автоматизация процесса позволяет обрабатывать и изучать материал с получением результата за 4−5 часов.
3. Прямота определения возбудителя — найдя особую часть ДНК, прямо указывает на наличие недуга. Например, ИФА — находит белки-маркеры (продукты жизнедеятельности бактерий), что не дает точного подтверждения наличия болезни.
4. Специфичность — исследуется вещество, характерное только для конкретного возбудителя, что исключает реакцию на ложные совместно-реагирующие агенты.
5. Восприимчивость — может обнаружить самое малое количество вирусов.
6. Универсальность — основывается на нахождении фрагментов ДНК или РНК конкретных организмов. Это дает возможность провести диагностику для любых агентов из одного биоматериала, если другие методы бессильны.
7. Выявляет не только явные, но и скрытые инфекции — эффективен для изучения агентов трудно выращиваемых, не выращиваемых, стойких.

К сожалению, диагностика может быть ошибочной. Очень важно проходить ПЦР в клинике, которая хорошо себя зарекомендовала. Ведь несмотря на то, что ПЦР определяет наличие вируса с точностью до 100%, этот показатель может снизиться до 95%, если учреждение использует устаревшее оборудование или неподходящие реактивы.