Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций

Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций подразделяются на несколько больших групп.

- Прямые методы, состоящие в выявлении непосредственно в биологическом материале самого вируса или антител к нему.

- Непрямые методы-заключаются в искусственной наработке вируса в значительных количествах, и его дальнейшем анализе.

К наиболее актуальным в повседневной практике методам диагностики относятся:

Серологические методы диагностики - выявление в сыворотке крови пациента определенных антител или антигенов в результате реакции антиген-антитело(АГ-АТ). То есть, при поиске у пациента определенного антигена используется соответствующее искусственно синтезированное антитело, и, соответственно, наоборот-при выявлении антител используют синтезированные антигены.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

Основана на использовании меченых красителями антител. При наличии вирусного антигена он связывается с мечеными антителами, и под микроскопом наблюдается специфическая окраска, которая говорит о положительном результате. При этом методе, к сожалению, невозможна количественная интерпретация результата, а только лишь качественная.

Возможность количественного определения дает иммуноферментный анализ(ИФА). Он похож на РИФ, однако в качестве маркеров используют не красители, а ферменты, превращающие бесцветные субстраты в окрашенные продукты, что и дает возможность количественной оценки содержания как антигенов, так и антител.

- Отмывают не связавшиеся антитела и антигены.

- Добавляют бесцветный субстрат, и в лунках с антигеном, который мы определяем, произойдет окрашивание, т.к. там будет связанный с антигеном фермент, после чего на специальном приборе оценивают интенсивность свечения окрашенного продукта.

По похожей схеме происходит и выявление антител.

Реакция непрямой(пассивной) гемаглютинации (РПГА).

Метод основан на способности вирусов связывать эритроциты. В норме эритроциты падают на дно планшета, образуя так называемую пуговку. Однако если в исследуемом биологическом материале находится вирус, он свяжет эритроциты в так называемый зонтик, который не упадет на дно лунки.

Теперь остановимся на методах диагностики непосредственно нуклеиновых кислот исследуемых вирусов, и прежде всего о ПЦР ( Полимеразная Цепная Реакция) .

Суть этого метода заключается в обнаружении специфического фрагмента ДНК или РНК вируса путём его многократного копирования в искусственных условиях. ПЦР можно проводить только с ДНК, то есть для РНК-вирусов предварительно необходимо произвести реакцию обратной транскрипции.

Непосредственно ПЦР проводят в специальном приборе, под названием амплификатор, или термоциклер, который поддерживает необходимый температурный режим. ПЦР-смесь состоит из добавленной ДНК, которая содержит интересующий нас фрагмент, праймеров (короткий фрагмент нуклеиновой кислоты, комплиментарный ДНК-мишени, служит затравкой для синтеза комплиментарной цепи), ДНК-полимеразы и нуклеотидов.

Стадии цикла ПЦР:

- Деннатурация-первая стадия. Температура повышается до 95 градусов, цепочки ДНК расходятся друг относительно друга.

- Отжиг праймеров. Температуру понижают до 50-60 градусов. Праймеры находят комплиментарный участок цепи и связываются с ним.

- Синтез. Температуру вновь повышают до 72, это рабочая температура для ДНК-полимеразы, которая, отталкиваясь от праймеров, строит дочерние цепи.

Цикл многократно повторяется. Через 40 циклов из одной молекулы ДНК получается 10*12 степени копий копий искомого фрагмента.

При проведении ПЦР в режиме реального времени синтезируемые копии фрагмента ДНК метятся красителем. Прибор регистрирует интенсивность свечения и по ходу реакции строит графики накопления искомого фрагмента.

Современные методы лабораторной диагностики с высокой достоверностью позволяют выявить присутствие вируса - возбудителя в организме, нередко, задолго до появления первых симптомов заболевания.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Вирусы, вызывающие нейроинфекции. Общая характеристика семейств.

2. Рабдовирусы, классификация. Вирус бешенства, структура, биологические свойства, внутриклеточные включения. Бешенство: природный источник, механизм и пути заражения человека. Клинические стадии течения инфекции. Лабораторная диагностика бешенства. Специфическая профилактика.

3. Классификация группы арбовирусов. Понятие об арбовирусных инфекциях.

4. Тогавирусы. Состав семейства, структура вирусов. Роль альфавирусов в патологии человека.

5. Флавивирусы: классификация семейства, строение вирусов. Характеристика рода Flavivirus, антигенные группы, вирусы клещевого и комариного энцефалитов. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Вирусологическая и серологическая диагностика, динамика появления антител. Специфическая профилактика и лечение.

6. Буньявирусы: классификация, структура, свойства и роль в патологии человека.

7. Аренавирусы: классификация, структура, свойства.

8. Понятие о филовирусах, вирус Эбола, Марбург-вирус.

9. Геморрагические лихорадки, классификация по Чумакову. Принципы развития геморрагического синдрома. Лабораторная диагностика. Методы профилактики.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

ВИРУСЫ, ВЫЗЫВАЮЩИЕ НЕЙРОИНФЕКЦИИ И ГЕМОРРАГИЧЕСКИЕ ЛИХОРАДКИ

(перечислите основные семейства) ______________________________________________________________

Рабдовирусы. Вирус бешенства.

Состав семейства _____________________________________________________________________________

Форма и размер вириона __________________________________________ Наличие суперкапсида _________

Геном: ___________________________________________ Наличие сероваров __________________________

Источник инфекции ____________________________________________________________________________

Путь передачи: ________________________________________________________________________________

Локализация в организме человека:_______________________________________________________________

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БЕШЕНСТВА

Исследуемый материал: ________________________________________________________________________

2. РИФ - выявление антигена в мазках-отпечатках мозга или слюнных желез.

Вирусологический метод

Исследуемый материал: ________________________________________________________________________

Заражение культур клеток ВНК-21 и др.

Выявление вируса по: __________________________________________________________________________

Идентификация вируса в _______________________________________________________________________

Препараты для профилактики бешенства (цель применения):

1.Инактивированная антирабическая вакцина ______________________________________________________

2.Антирабический гамма-глобулин ________________________________________________________________

АРБОВИРУСЫ

Арбовирусы – это _____________________________________________________________________________

Основные семейства, входящие в группу арбовирусов: ______________________________________________

Арбовирусные инфекции - природно-очаговые зоонозы с трансмиссивным механизмом передачи и эндемическим распространением. Возбудитель при укусе членистоногого проникает в кровь, вызывая вирусемию, а в ряде случаев способен проходить через гематоэнцефалический барьер и поражать ЦНС.

Клинические формы арбовирусных инфекций различны: лихорадки, геморрагические лихорадки, менингоэнцефалиты, энцефаломиелиты, медленные инфекции.

Тогавирусы	Флавивирусы
Состав семейства
Форма, размер вириона
Наличие суперкапсида
Геном
Наличие сероваров
Методы культивирования
Заболевания	- Западный энцефаломиелит лошадей - Восточный энцефаломиелит лошадей - Венесуэльский энцефаломиелит лошадей - Комплекс вирусов леса Семлики - Лихорадка О'Ньонг-О'Ньонг - Карельская лихорадка - Геморрагическая лихорадка Чикунгунья	- Клещевой энцефалит - Японский энцефалит - Желтая лихорадка - Лихорадка Денге - Кьясанурская геморрагическая лихорадка - Омская геморрагическая лихорадка - Повассан - Энцефалиты Ильеус, Сент-Луис

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Исследуемый материал: _______________________________________________________________________

Обнаружение антигена вируса клещевого энцефалита в РНГА

Исследуемый материал: ______________________ Диагностический препарат: _________________________

Сыворотка крови	Разведения сыворотки	Контроль эритроцитарного антительного диагностикума
1/2	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	1/128
больного
контрольная (АГ+)

Вирусологический метод

Материал для исследования:_____________________________________________________________________

Размножение вируса в системах__________________________________________________________________

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-26; Нарушение авторского права страницы

Большинство арбовирусов - возбудители природноочаговых зоонозов, распространенных в определенных (эндемичных) регионах и ландшафтных зонах. Они имеют характерных (специфических) переносчиков, определяющих эколого-эпидемиологические особенности арбовирусных инфекций. Передача возбудителей у членистоногих осуществляется трансовариально и трансфазово (по этапам метафорфоза) из поколения в поколение. Арбовирусы обладают способностью размножаться при температуре тела теплокровных животных, а также в организме членистоногих, температура тела которых зависит от природных условий окружающей среды.

Клинически арбовирусные инфекции проявляются преимущественно в трех вариантах - лихорадки неясного генеза (“денге - подобной”), поражения центральной нервной системы (энцефалита), геморрагической лихорадки.

Свое название тогавирусы получили от лат. toga - плащ. Это сферические оболочечные вирусы с икосаэдральным нуклеокапсидом, заключенным в липидную оболочку. Геном представлен позитивной линейной РНК.

Собственно к арбовирусам относят род Alphavirus (альфа - вирусы или арбовирусы антигенной группы А) с типовым представителем - вирусом Синдбис. Альфа - вирусы имеют родоспецифический нуклеокапсидный белок и два гликопротеида суперкапсидной оболочки - Е₁ - группоспецифический гемагглютинин и Е₂ - видоспецифический белок, антитела к которому обладают вируснейтрализующими свойствами.

В состав рода входят возбудители ряда экзотических для России инфекций - восточного и западного американского, венесуэльского энцефаломиелитов лошадей, лихорадок Чикунгунья, Росс - Ривер и др. В России из вирусов этой группы встречается вирус карельской лихорадки. Многие альфавирусы экологически связаны с птицами.

По некоторым классификациям относят в качестве рода Flavivirus к семейству тогавирусов, имея ряд близких к другим тогавирусам характеристик. Строение вирионов в целом аналогично альфавирусам. Имеют капсидный белок, шипы суперкапсида состоят из двух белков, один из которых является гликопротеидом (Е₁) и обладает гемагглютинирующей активностью. Гемагглютинирующие свойства альфа - и флавивирусов лучше выявлять в отношении птичьих (особенно гусиных) эритроцитов.

По данным РТГА альфавирусы разделяют на три, а флавивирусы - на четыре группы, представители которых (внутри групп) обладают перекрестной реактивностью по гемагглютинину. Отличительная особенность флавивирусов - наличие неструктурного растворимого антигена, выявляемого в РСК.

Основные группы флавивирусов (антигенный комплекс по РТГА).

1. Группа клещевого энцефалита (КЭ, ОГЛ, Лангат, Повассан и др.).

2. Группа японского энцефалита (ЯЭ, Западного Нила, Сент - Луис и др.).

3. Группа желтой лихорадки.

4. Группа лихорадки Денге.

Флавивирусы по экологическим предпочтениям условно делят на преимущественно комариные (вирусы желтой лихорадки, энцефалита Сент - Луис, японского энцефалита, лихорадки Денге) и преимущественно клещевые (вирусы КЭ, ОГЛ, Повассан, Кьясанурской лесной болезни).

Клещевой энцефалит (КЭ) - широко распространенная в лесной зоне умеренного климатического пояса Евразии природноочаговая облигатно - трансмиссивная инфекция, переносчиками которой являются преимущественно иксодовые клещи рода Ixodes. В соответствии с основным видом переносчика выделяют два основных типа вируса КЭ - восточный (переносчик таежный клещ Ixodes persulcatus) и западный (переносчик - европейский лесной клещ I.ricinus).

Наиболее тяжело протекает КЭ, вызываемый восточным вариантом, тяжелое течение с высокой частотой очаговых поражение головного мозга и наибольшая летальность отмечены на Дальнем Востоке России. Наиболее типичные формы клинического проявления - лихорадочная, менингиальная и очаговая. Очаговая, наиболее тяжелая и прогностически неблагоприятная форма может сопровождаться параличами, поражением стволовых отделов мозга с нарушениями дыхательной и сердечной деятельности.

Нозоареал КЭ связан с ареалом основных переносчиков, распространенных преимущественно в лесной зоне. Сезонность заболеваний связана с периодом активности переносчиков (максимальная - в мае - июне).

Лабораторная диагностика. Основные методы - вирусологические и серологические. Вирус КЭ можно выделить из крови и спинномозговой жидкости больных, снятых с человека переносчиков. Чаще производят внутримозговое заражение сосунков белых мышей, у которых вирус вызывает развитие параличей и парезов. Идентификация вируса осуществляется в РТГА, РСК и различных вариантах реакции нейтрализации вируса, в последние годы - в ИФА и с помощью генетических методов.

При серологической диагностике используют РТГА (группоспецифическая диагностика), РСК (более специфический тест, позволяет дифференцировать КЭ и ОГЛ), в последние годы - ИФА для выявления IgM - и IgG - антител.

Профилактика. Выделяют неспецифическую профилактику (борьба с переносчиками, использование средств индивидуальной защиты), экстренную серопрофилактику (введение в случае присасывания клещей в очагах противоклещевого иммуноглобулина), специфическую вакцинопрофилактику (использование инактивированной вакцины). Ни один из этих методов не может полностью обезопасить человека на неблагополучной (эндемичной) территории от заболевания КЭ, однако применение вакцины, а также иммуноглобулина в ранние сроки (первые сутки с момента присасывания клеща) существенно улучшает клинический прогноз.

Омская геморрагическая лихорадка (ОГЛ).

ОГЛ - природноочаговая инфекция, эндемичная для лесостепных районов Западной Сибири (преимущественно Омская и Новосибирская области). Заражение людей может происходить через присасывание луговых клещей Dermacentor reticulatus (клещевой тип заражения) или нетрансмиссивным путем - при прямом или опосредованном контакте с ондатрами (ондатровый тип). В последние десятилетия абсолютно преобладает ондатровый тип заражения. У больных отмечается лихорадка и геморрагический синдром (мелкоточечная сыпь, носовые, желудочно-кишечные и маточные кровотечения).

Вирус ОГЛ близок по свойствам и происхождению к вирусу КЭ. Имеются гипотезы происхождения вируса ОГЛ от вируса КЭ. Вирус ОГЛ антигенно близок вирусу КЭ, их серологическая дифференциация осуществляется в РСК с растворимыми антигенами. Вакцинация против КЭ обеспечивает перекрестный протективный иммунитет против ОГЛ.

Семейство буньявирусов считают крупнейшим по числу входящих в него вирусов (более 250). Оно включает пять основных родов и ряд не отнесенных к основным родам вирусов. Большинство членов семейства - типичные арбовирусы (рода Bunyavirus, Phlebovirus, Nairovirus и Uukuvirus), недавно к буньявирусам отнесены также природноочаговые вирусы рода Hantavirus.

Буньявирусы - сферические оболочечные вирусы с тремя нуклеокапсидами, содержащими по три линейных фрагмента негативной РНК. Оболочка липопротеидная, имеет гликопротеидные шипы, проявляющие гемагглютинирующие свойства.

Наибольшее распространение на территории России имеют вирусы рода Hantavirus. Хантавирусы Хантаан, Добрава, Пуумала, Сеул и другие вызывают геморрагическую лихорадку с почечным синдромом (ГЛПС).

ГЛПС - тяжелое природноочаговое, зоонозное, нетрансмиссивное заболевание, характеризующееся лихорадкой, геморрагическим синдромом, почечной недостаточностью, возможен легочной синдром. Эпидемически активные очаги выявлены на Дальнем Востоке (восточная часть нозоареала), в Европейском части России и на Урале (западная часть нозоареала). ГЛПС - одна из наиболее распространенных и тяжелых природноочаговых инфекций.

Основной резервуар и источник заражения хантавирусами - мелкие млекопитающие (особенно - рыжие полевки, наибольшая численность которых отмечена в липовых лесах). Заражение человека может происходить при прямом или опосредованном (загрязненная экскрементами грызунов почва, пищевые продукты, вода) контакте, в том числе аэрогенным путем (вдыхание инфицированной пыли).

Лабораторная диагностика. Вирусологическая диагностика не применяется, вирус можно выявить в паренхиматозных органах с помощью МФА с моноклональными антителами. Преимущественно используют серологическую диагностику - реакцию непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) с инфицированными вирусом клеточными культурами, исследуют парные сыворотки в динамике инфекционного заболевания.

Лечение - преимущественно патогенетическое, направленное на основные клинические синдромы. При острой почечной недостаточности, уремии и геморрагическом нефрозонефрите необходим гемодиализ.

Выделяют три рода - Vesiculovirus, Sigmavirus и Lyssavirus. Наибольшее значение имеет род лиссавирусов, к которому относится вирус бешенства.

Бешенство - летальная инфекция центральной нервной системы, связанная с попаданием рабдовируса со слюной (чаще в результате укусов) больных бешенством животных. Рабдовирусы - оболочечные РНК - вирусы пулевидной формы, геном образован негативной РНК. Вирус бешенства имеет широкий круг хозяев. Основной источник и резервуар этого лиссавируса - дикие плотоядные (волки, лисицы, шакалы и др.), от них происходит заражение домашних плотоядных - собак и кошек. Заболевание происходит через укус или ослюнение.

Вирус из входных ворот мигрирует по аксонам периферических нервов в базальные ганглии и центральную нервную систему, где размножается в сером веществе, поражая нейроны гиппокампа, продолговатого мозга, черепных нервов, симпатических ганглиев, центробежно - в клетках слюнных желез. Вирус вызывает дегенеративные поражения нейронов с образованием в клетках телец включений, известных как тельца Бабеша - Негри (выявляют гистологически - включения проявляют эозинофилию и при окраске методом флюоресцирующих антител).

Клиника бешенства у человека достаточно характерна. Второе название болезни - гидрофобия (водобоязнь), у человека наблюдается возбуждение, нарушения тонуса мышц (в т.ч. затруднения глотания), галлюцинации, затем развиваются судороги и параличи. Смерть наступает от паралича сердечного или дыхательного центров.

Лабораторная диагностика. Применяют вирусологические методы - внутримозговое заражение белых мышей и других животных мозговой тканью или материалом подчелюстных слюнных желез. Выявляют тельца Бабеша - Негри (скопления вирусных нуклеокапсидов вблизи ядер клеток) окраской по Романовскому - Гимза или МФА.

Специфическая профилактика. Используется антирабическая инактивированная культуральная вакцина. Экстренная лечебно - профилактическая вакцинация проводится вакциной или вакциной в сочетании с антирабическим иммуноглобулином. Чем короче инкубационный период, тем хуже эффект специфической профилактики (наименьший инкубационный период - при укусах в голову, кисти рук). Обязательно проводят промывание и обработку ран или места попадания слюны с прижиганием спиртовым раствором йода.

Основа профилактики - борьба с бездомными собаками и кошками, вакцинация домашних животных. Проводятся попытки пероральной вакцинации (вскармливание разбросанных приманок с вакциной) диких плотоядных - основного резервуара вируса в природе.

Семейство Rhabdoviridae включает более 60 вирусов, инфицирующих млекопитающих, рыб, насекомых и растения; в семействе выделяют два рода – Vesiculovirus и Lyssavirus; наибольшую опасность для человека представляет вирус бешенства.

Способность некоторых рабдовирусов размножаться в клетках членистоногих и млекопитающих позволила рассматривать некоторые из них как возбудителей арбовирусных инфекций. Рабдовирусы отличают пулевидная форма, наличие оболочки, спиральная симметрия; геном образован РНК.

Средние размеры вириона 180х75 нм; один конец закруглён, другой – плоский; поверхность выпуклая с шарообразными структурами. Сердцевина вириона симметрично закручена внутри оболочки по продольной оси частицы.

Вирусная оболочка состоит из двойного липидного слоя, включающего внешние поверхностные гликопротеиновые структуры. Мембрану образуют поверхностный гликопротеин (G) и два негликозилированных белка (Ml и М2).Репликативный цикл реализуется в цитоплазме клетки.

Везикулярный стоматит. Возбудитель относят к роду Vesiculovirus; выделяют два антигенных варианта. По своей эпидемиологии и экологии – типичный арбовирус. Переносчики – различные комары, в организме которых он размножается. Отличительная особенность вирусов везикулярного стоматита способность индуцировать выработку ИФН в больших титрах и высокая чувствительность к нему. Клинически заболевание проявляется везикулярными высыпаниями на слизистой оболочке рта, дёсен и глотки.

Клещевой (русский дальневосточный) и центрально-европейский энцефалиты. Возбудитель выделен Л.А. Зильбером, Е.Н. Левкович, М.П. Чумаковым и др. (1937). Резервуар и переносчик вируса – клещи Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus (переносит вирус более благоприятно протекающего европейского варианта). Дополнительный резервуар – различные животные и птицы. У последних развивается бессимптомная инфекция с вирусемией. Заражение человека происходит после укусов инфицированных клещей или употребления в пищу сырого молока коз и коров. После укуса переносчика вирус попадает в кровоток и первично реплицируется в лимфатических узлах, эндотелиоцитах, клетках печени и селезёнки. В дальнейшем возбудитель распространяется гематогенным и лимфогенным путями, проникая в ЦНС. Вирус поражает двигательные нейроны передних рогов шейного отдела спинного мозга, мозжечок и мягкую оболочку головного мозга. Инкубационный период варьирует от 1 сут. до месяца. Острые формы разделяют на лихорадочные, менингеальные, менингоэнцефалитические, полиомиелитические и полирадикулоневритические. Для них характерны явления общей инфекционной интоксикации, общемозговые, оболочечные и очаговые неврологические симптомы. Преобладание ряда из перечисленных симптомов определяет клиническую форму болезни. Благоприятно протекают лихорадочная и менингеальная формы; прогноз прочих поражений сложен. Хронические поражения – синдром хронического полиомиелита; синдром бокового амиотрофического склероза и эпилепсия кожевниковского типа.

Омская геморрагическая лихорадка. Возбудитель выделил М.П. Чумаков (1947). Резервуар и переносчик вируса – клещи рода Ixodes; дополнительный резервуар – различные животные и птицы; у последних развивается бессимптомная инфекция с вирусемией. Заражение человека происходит после укусов инфицированными клещами; при контакте с заражёнными животными (например, ондатрами) или употреблении в пищу сырой воды. После укуса переносчика вирус проникает в кровоток и реплицируется в эндотелии капилляров кожи и различных органов. Клинически проявляется лихорадкой и геморрагиями различной локализации; прогноз благоприятный (летальность не превышает 0,5-3%).

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций включает выделение возбудителя и выявление противовирусных AT. Для выделение вируса наиболее универсальный способ – внутримозговое заражение 1-3-дневных мышат-сосунков; после появления признаков болезни мозг пассируют, через 3-4 пассажа вирус достигает высокого титра, и его можно использовать для приготовления Аг для идентификации в РТГА и РСК с наборами иммунных сывороток. Окончательную идентификацию проводят в РН – наиболее специфичной реакции. Следует помнить, что работа с материалом (обычно кровь) представляет большую опасность (в плане ингаляционного заражения) и должна производиться в специализированных лабораториях.

Вируспецифические AT. Через 6-7 дней после заражения в крови появляются антигемагглютинины, к концу 2 нед. – комплементсвязывающие AT, а на 3-4 нед. – нейтрализующие AT.

Арбовирусные болезни это многочисленная группа циклических вирусных трансмиссивных инфекций, человека и животных, как правило, эндемичных, протекающих с общетоксическим синдромом, поражением внутренних органов, высокой лихорадкой, экзантемой, геморрагическим синдромом и преимущественным поражением нервной системы.

Возбудители этой многочисленной группы заболеваний - арбовирусы, т.е. группа вирусов передающихся членистоногими (Arthropod born viruses). Общее свойство арбовирусов - это паразитировать в организмах животных и членистоногих, являющихся хозяином вируса. Следует отметить, что к арбовирусам условно относят ареновирусы, для которых передача трансмиссивным путём не доказана.

История изучения арбовирусных заболеваний связана с желтой лихорадкой, поскольку Рид в 1901 г. описал её возбудителя.

К настоящему времени насчитывается около 450 видов арбовирусов - возбудителей заболеваний. По антигенным свойствам среди арбовирусов насчитывается 49 антигенных групп. При изучении арбовирусов учитываются морфологические, антигенные признаки, различная чувствительность к воздействию физических и химических факторов.

Арбовирусы являются РНК-содержащими вирусами мелких размеров (от 20 до 180 нм), покрыты белково-липидной оболочкой. Арбовирусы достаточно чувствительны к температуре, воздействию протеолитических ферментов, липаз, эфирных соединений. Все арбовирусы хорошо культивируются на различных тканевых средах (Hela, почечный эпителий), а также куриных эмбрионах.

Арбовирусы типичные паразиты птиц, летучих мышей, млекопитающих, рептилий, грызунов, в организмах которых они вызывают либо латентную персистирующую инфекцию, либо субклиническую. Человек включается в экологическую цепь вирусной инфекции случайно, и, как правило, не является дальнейшим источником заражения, за исключением некоторых арбовирусных лихорадок склонных к эпидемическому распространению (флеботомная, желтая, Денге, Чикунгунья, Ньонг-ньонг и др.).

Как уже говорилось, все арбовирусные заболевания являются природно-очаговыми. К настоящему времени различают:

I. Арбовирусные системные лихорадочные заболевания.

II. Арбовирусные энцефалиты и энцефаломиелиты.

Прежде всего следует остановиться на арбовирусных системных лихорадочных заболеваниях. К ним относятся:

1. Лихорадка Западного Нила.

Ареал распространения этой арбовирусной лихорадки весьма обширный: это прежде всего Египет, особенно по течению Нила, страны Ближнего и Среднего Востока; для этих регионов данная лихорадка является эндемичной. Резервуаром вируса являются домашние и дикие (перелетные) птицы. Переносчиком вируса являются комары. Значительное участие в биоценозе возбудителя перелетных птиц обуславливает появление случаев лихорадки Западного Нила в регионах Юго-Восточной и Центральной Европы (бассейны рек Дуная, Днестра, Буга, Днепра), особенно в летний период во время гнездования и выведения птенцов.

2. Лихорадка О’Ньонг-ньонг. Это арбовирусное заболевание распространено главным образом на Африканском континенте (Восточная, Западная и Центральная Африка). Резервуаром этой инфекции является человек, а переносчиком - комар. В связи с этим лихорадка О Ньонг-ньонг может приобретать массовый характер и в ряде случаев протекать в виде эпидемических вспышек и даже эпидемий.

3. Лихорадка Синдбис. Ареал распространения этой арбовирусной лихорадки - страны и континенты находящиеся как в тропическом поясе - Африка, Средний Восток, Австралия, так и в регионах с умеренной и даже с пониженной среднегодовой температурой. Это страны Восточной Европы, Скандинавии. Резервуаром вируса являются дикие перелетные и домашние птицы (утки, гуси), а также грызуны - мыши, крысы, что способствует, в определенных случаях, созданию антропургических очагов. Переносчиками данной инфекции являются комары.

4. Лихорадка Майяро. Это лихорадка распространена главным образом в центральной Бразилии, Колумбии, Перу, Панаме, Тринидаде, Суринаме. Резервуаром инфекции являются кровососущие насекомые (комары), человек, а также некоторые виды ящериц. Переносчиком является комар. Болезнь нередко приобретает эпидемический характер.

5. Лихорадка Буньямвора.

Арбовирусная лихорадка Буньямвора встречается на территориях Мексики и Центральной Америки, но главным образом в Бразилии, особенно в лесах Амазонки. Название лихорадки поэтому может носить название местности, а также племени, где регистрируется этой заболевание (Карапуру, Маритуба, Мурутуку, Напуйо, Орибока, Осса и др.). Резервуаром вируса являются лесные грызуны, летучие мыши, некоторые виды сумчатых млекопитающих. Переносчиком арбовируса являются комары.

Общими симптомами для этих эндемичных арбовирусных лихорадок является: острое начало с подъемом температуры до высоких цифр (39,0-40,0°С), появление в первые дни болезни экзантемы, генерализованного лимфаденита, выраженных миалгий и артралгий. На 4-5 день возможен умеренный геморрагический синдром в виде необильной петехиальной сыпи. При исследовании периферической крови отмечается лейкопения с относительным лимфоцитозом, увеличение СОЭ. Диагноз ставится, как правило, на основании изоляции и культивирования вируса, а также на клинико-эпидемиологических данных.

Среди множества эндемических арбовирусных лихорадок наиболее изученными, в силу их эпидемического распространения, являются лихорадка Папатаччи (флеботомная) и лихорадка Денге.

Флеботомная лихорадка (москитная лихорадка, лихорадка Папатаччи) - это острое вирусное эпидемическое заболевание, характеризующееся кратковременной лихорадкой, сильнейшими миалгиями, экзантемой, конъюнктивитом и поражением нервной системы.

Подробное описание болезни было сделано русским врачом Яворским в 1878 и Пиком в 1886гг. В 1904г. Иванов в России, а Таушиг в Германии доказали вирусную природу заболевания и назвали болезнь лихорадкой Папатаччи. Спустя почти 35 лет Петрищева и Алымов (СССР) установили трансовариальную передачу вируса у москитов.

Этиология.Флеботомус - вирус, относится к семейству Буньявирусов. Это РНК-содержащий вирус - нестойкий к высоким температурам ( при температуре +56°С погибает). В крови больных сохраняется до 14 дней. Очень устойчив к низким температурам - при замораживании до -70°С сохраняет свои вирулентные свойства почти год. В высушенных микросгустках крови сохраняет способность к заражению несколько лет.

Эпидемиология. Лихорадка Папатаччи является трансмиссивным эндемичным заболеванием, склонным к эпидемическому распространению. Естественным резервуаром арбовируса является москит - Флеботомус Папатаччи. Москит становится заразным и способным переносить и передавать инфекцию через 6-8 дней после укуса больного. Эпидемическое распространение лихорадки Папатаччи связано с периодом лёта москитов (конец лета - начало осени). Возможна передача инфекции парентеральным путем (впрочем в настоящее время этот путь передачи инфекции особого значения не имеет).

Восприимчивость к возбудителю весьма высокая (индекс контагиозности до 0,8). Ареал распространения болезни от 20 до 45° северной широты, то есть в регионах с умеренно теплым климатом.

Патогенез. После укуса инфицированного москита арбовирусы попадают в органы ретикуло-эндотелиальной системы, затем, размножившись, попадают в кровь, а с током крови заносятся в нервную систему, а именно в симпатический отдел вегетативной части нервной системы. Это, в свою очередь, ведет к развитию церебрально-ишемической гипертензии. Одновременно происходит поражение капиллярной сети, арбовирусы заносятся в костный мозг, что ведет к лейкопении с относительным лимфоцитозом.

Клиника. Инкубационный период составляет от 3 до 7 дней. Начало болезни острое, с резким подъемом температуры до высоких цифр (40°С и выше), тахикардия, подъем температуры сопровождается потрясающим ознобом. С первых часов болезни больные ощущают интенсивную головную боль, артралгии, миалгии. Особенно болят икроножные мышцы и мышцы поясницы. Одновременно отмечается гиперемия лица, шеи, верхней части груди, выраженный конъюнктивит.

Для лихорадки Папатаччи патогномоничны два симптома, являющиеся опорными для этого заболевания:

- симптом Таушига (при надавливании на глазные яблоки у больного возникает интенсивная боль),

- симптом Пика - кровоизлияния в наружных участках конъюнктивы глаза, имеющие форму треугольника.

На 3-й день болезни появляется необильная кореподобная сыпь. Имевшая место до этого тахикардия сменяется брадикардией с одновременным падением артериального давления. На пятый, максимум на шестой день болезни, температура падает, все симптомы болезни исчезают и наступает реконвалесценция.

Лабораторная диагностика. При исследовании периферической крови обнаруживают лейкопению, увеличение СОЭ. При исследовании спинно-мозговой жидкости ( в связи с интенсивной головной болью с дифференциально-диагностической целью производится люмбальная пункция) обнаруживают повышенное содержание белка, повышенные реакции Панди, Нонне-Аппельта. Плеоцитоз при этом совершенно нормальный.

Верификация диагноза лихорадки проводится на основании изоляции вируса из крови больных, как в остром периоде болезни, так и в первые 2-6 дней периода реконвалесценции. Со второй недели заболевания проводятся серологические исследования (в парных сыворотках) - РСК, РТГА, РН (реакция нейтрализации вируса).

Лечение. Этиотропное и специфическое лечение не разработано. В основном применяют патогенетическую (дезинтоксикация, дегидратация) и симптоматическую терапию (жаропонижающие, болеутоляющие и седативные средства).

Профилактика. Профилактические меры прежде всего направлены на защиту от укусов москитов (соответствующая одежда, противомоскитные сетки, репелленты). Специфическая профилактика заключается в активной иммунизации населения специфической вакциной в очагах инфекции. Вакцина вводится накожным методом, достаточно эффективна (до 95% случаев прививочного иммунитета).

Лихорадка Денге.Лихорадка Денге (суставная лихорадка, семидневная лихорадка, лихорадка жирафов и пр.) была описана впервые в 1799 году голландским врачом Билоном на о.Ява (Индонезия).

Лихорадка Денге, как и все системные арбовирусные лихорадки является острым эндемичным зоонозным трансмиссивным заболеванием со склонностью к эпидемическим вспышкам, характеризующаяся двухволновой лихорадкой, выраженной артралгией и экзантемой.

Этиология. Денге-вирус близок по своей антигенной структуре к вирусу желтой лихорадки, японского энцефалита, лихорадки Западного Нила. К настоящему времени насчитывается 4 серовара Денге-вируса.

Эпидемиология. Распространенность лихорадки Денге от 42°Северной широты до 40°Южной широты, то есть это практически субтропическая и тропическая зоны. В распространении инфекции различают природные (джунглевые) очаги и антропургические. Источником инфекции в природных очагах являются прежде всего обезьяны и другие животные, населяющие тропические леса. В антропургических очагах источником инфекции может быть также и больной человек. Что особенно важно в эпидемиологическом плане, источником инфекции может быть зараженный Денге-вирусом комар. В таких случаях заболевание приобретает характер эпидемии. Следует подчеркнуть, что восприимчивость к лихорадке Денге всеобщая, у лиц, впервые попавших в очаг инфекции индекс контагиозности доходит до 1,0.

Патогенез. После укуса инфицированного комара арбовирусы попадают в органы ретикуло-эндотелиальной системы, где сохраняются и размножаются около 10-15 дней. Накопившись в достаточном количестве, вирусы проникают в кровь, а затем гематогенно в почки, печень, миокард, головной мозг. Происходит повсеместное поражение сосудов (капиллярная сеть). В результате возникают геморрагии в эндокарде, перикарде, слизистых оболочках кишечника. В результате поражения и набухания эндотелия сосудов наступает повышение их проницаемости, что ведет к периваскулярному отеку. Через 1-1,5 недели из внутренних органов арбовирус лихорадки Денге способен вновь попадать в кровь, что может обусловить вторую волну заболевания.

При общем исследовании крови в первые дни болезни отмечается нейтрофильный лейкоцитоз, который вскоре сменяется лейкопенией с относительным лимфоцитозом.

Реконвалесценция медленная до двух месяцев. Из осложнений редко наблюдаются миелиты, полиневриты, энцефалиты, инфекционный делирий. Летальность составляет от 0,1 до 0,5%.

Специфическое подтверждение диагноза заключается в изоляции вируса из крови больных, у реконвалесцентов с 6-7 дня проводят серологические исследования в парных сыворотках (РСК, РТГА, РН).

Лечение. Этиотропное и специфическое лечение не разработано. Применяется лишь патогенетическая и симптоматическая терапия.

Профилактика. Защита от комаров ( репелленты, противомоскитные сетки). Специфическая профилактика в очагах проводится с помощью живой вакцины, действие которой (прививочный иммунитет) не превышает одного года.