Лабораторная диагностика сифилитической инфекции реферат

Статистика заболеваемости сифилисом в России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.

Как диагностировать сифилис?

Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:

В первой группе исследований — тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.

Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.

Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.

Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.

Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:

Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.

Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.

RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.

Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.

Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.

К нетрепонемным тестам относятся:

РМП — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
RPR — тест быстрых плазменных реагинов.

Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.

Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.

К трепонемным тестам относятся:

ИФА — иммуноферментный анализ;
РПГА — реакция пассивной гемагглютинации;
РИФ — реакция иммунофлюоресценции;
иммуноблоттинг;
ИХЛ — иммунохемилюминесценция;
РИБТ (РИТ) — реакция иммобилизации бледных трепонем.

Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.

Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.

Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:

Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.

Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.

Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.

Сам анализ занимает немного времени:

Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.

Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.

Где можно сдать анализ на сифилис?

Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:

[youtube.player]

Структура и стандартные компоненты комплекса серологических реакций для констатации сифилитической инфекции. Использование кардиолипинового антигена, обладающего сходными антигенными свойствами с бледной трепонемой в реализации реакции Вассермана.

Рубрика	Медицина
Вид	реферат
Язык	русский
Дата добавления	26.09.2017
Размер файла	17,4 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

сифилис трепонема вассерман инфекция

Диагностика сифилиса основывается на клинических и лабораторных данных. Диагноз сифилиса ставят только после лабораторного подтверждения, т.е. обнаружения бледных трепонем в отделяемом твердого шанкра, эрозивных папул при первичном и вторичном сифилисе, и данных серологического обследования. Серологические реакции являются чрезвычайно ценным методом не только для подтверждения диагноза сифилиса, но и наблюдения за динамикой его течения под влиянием лечения и определения излеченности болезни.

Стандартные компоненты комплекса серологических реакций (КСР) для констатации сифилитической инфекции в настоящее время дополняются трепонемными реакциями: РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем), РИФ (реакция иммунофлюоресценции). Реакция Вассермана (RW, РВ) основана на феномене связывания комплемента. Для ее постановки используют кардиолипиновый антиген, являющийся холестеринизированным спиртовым экстрактом из мышц бычьего сердца и обладающий сходными антигенными свойствами с бледной трепонемой.

Реакция Вассермана. Комплемент связывается комплексом (липоидный антиген и реагин испытуемой сыворотки). Для индикации образовавшегося комплекса используют гемолитическую систему (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка).

В группу КСР кроме реакции связывания комплемента с кардиолипиновым и трепонемным антигенами, включена реакция на стекле (экспресс-метод). Выраженность гемолиза при РВ обозначается плюсами:

резко положительная - 4 +; положительная - 3 +; слабоположительная - 2 + или 1 +; отрицательная - -.

Имеет значение и постановка реакции по количественному методу, т.е. с различными разведениями сыворотки (1:10; 1:20 и т.д. до 1:320). Многочисленность стандартных серологических реакций объясняется антигенной мозаичностью бледных трепонем, в связи с чем в сыворотке крови больных возникает соответствующая множественность антител (комплементсвязывающие, агглютинины, преципитины, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию и др.). В каждой стадии сифилиса могут преобладать те или иные антитела и, следовательно, реакции с одними антигенами могут быть уже положительными, а с другими - еще отрицательными. Кроме того, относительная специфичность стандартных серологических реакций вызывает необходимость во избежание диагностических ошибок пользоваться не одной из них, а комплексом реакций. КСР становятся положительными в конце 3-й или в течение 4-й недели после появления твердого шанкра. Эти реакции бывают резко положительными и в значительном разведении сывороток практически у всех больных вторичным свежим (98-99%), вторичным рецидивным (100%), третичным активным (70-80%) и третичным скрытым (50-60%) сифилисом. Однако КСР не является строго специфичным комплексом реакций для сифилиса. Они могут оказаться положительными у больных лепрой, туберкулезом, бруцеллезом, малярией, красной волчанкой, а также при пневмонии, заболеваниях печени, онкологических болезнях, после приема алкоголя, жирной пищи, во время беременности, особенно во второй ее половине, а также в течение первых 2 нед. после родов. С возрастом количество неспецифических ложноположительных результатов КСР увеличивается.

Для обоснованного диагноза сифилиса наряду с данными КСР учитываются клинические данные, результаты исследования на бледную трепонему в манифестных проявлениях первичного и вторичного сифилиса, данные других серологических реакций - РИБТ и РИФ.

РИБТ основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антителами типа иммобилизинов, имеющимися в сыворотке крови больных сифилисом. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных трепонем, полученных из тканей сифилитического орхита кролика. Бледные трепонемы после добавления к ним сыворотки крови больного прекращают движение, т.е. происходит их иммобилизация. Результаты реакции оценивают в процентах: положительная РИБТ констатируется при иммобилизации от 51 до 100% бледных трепонем, слабоположительная - от 31 до 50%, сомнительная - от 21 до 30% и отрицательная - от 0 до 20%. Реакцию ставят в условиях анаэробиоза. Иммобилизины появляются в сыворотке крови больных позднее, чем другие антитела, поэтому РИБТ становится положительной позже, чем КСР и РИФ. РИБТ является наиболее специфичной из существующих реакций на сифилис. Ее основное назначение - распознавание ложноположительных результатов при постановке КСР. Это особенно важно в отношении больных, у которых сифилис протекает скрыто без наружных проявлений, но с поражением внутренних органов или нервной системы. Особенное значение имеет РИБТ при распознавании ложноположительных результатов КСР у беременных. Следует помнить, что неспецифические положительные результаты РИБТ возможны и у больных саркоидозом, красной волчанкой, туберкулезом, циррозом печени и др. Однако при этих заболеваниях РИБТ бывает слабоположительной (от 30 до 50%) и никогда не достигает 100%). При лечении антибиотиками результаты РИБТ становятся негативными. Поэтому исследования с помощью РИБТ проводятся только через 7 дней, если вводились водорастворимые антибиотики, и через 25 дней после окончания лечения дюрантными антибиотиками.

РИФ - более чувствительная реакция, поэтому она бывает положительной уже в первичном серонегативном периоде сифилиса у 80% больных. По степени специфичности РИФ уступает РИБТ, что не позволяет заменить ею РИБТ, хотя техника ее значительно проще. Реакцию ставят в нескольких модификациях: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-абс. (абсорбированная). РИФ-10 более чувствительна, а РИФ-200 и РИФ-абс. более специфичны. Принцип реакции заключается в том, что специфический антиген (бледные трепонемы) соединяют с сывороткой крови больного (антитела) и антивидовой флюоресцирующей сывороткой (кроличья сыворотка против глобулинов человека, соединенная с флюоресцеином, - веществом, светящимся при ультрафиолетовом свете). При положительной реакции в люминесцентном микроскопе можно видеть желто-зеленое свечение бледных трепонем, поскольку они оказываются окруженными прилепляющимися к ним флюоресцирующими антителами. Степень свечения оценивается плюсами, как и при КСР. Положительная реакция констатируется 4 +, 3 + и 2. +. При степени свечения 1 + и отсутствии свечения реакция считается отрицательной. При вторичном сифилисе РИФ положительна почти в 100% случае. Она всегда положительна при латентном сифилисе (99-100%), а при третичных формах и врожденном сифилисе положительна в 95-100%.

Экспресс-метод (микрореакция на стекле). В этой реакции, так же как и при КСР, используют кардиолипиновый антиген, одну каплю которого смешивают с 2-3 каплями сыворотки крови обследуемого человека в лунках специальной стеклянной пластины. Реакция протекает по механизму преципитации. Общая продолжительность постановки реакции 10-40 мин. Результат оценивают по количеству выпавшего осадка и величине хлопьев; выраженность реакции обозначают плюсами: 4 +, 3 + и т.д., как и КСР. Микрореакция на стекле менее специфична лля больных сифилисом, чем РВ, но несколько превосходит ее по чувствительности. Ложноположительные результаты при экспресс-методе получают чаще, чем при РВ. Поэтому этот метод разрешен для применения только как отборочная реакция при массовых обследованиях населения, диспансеризации и обследовании больных в клинико-диагностических лабораториях соматических больниц. Окончательный диагноз сифилиса на основании этого метода устанавливать запрещено. Только экспресс-метод нельзя применять при обследовании доноров, беременных, а также для контроля после лечения больных сифилисом.

Для диагностики сифилиса можно использовать и другие методы: иммуноферментный анализ (ИФА) с реакцией микропреципитации (РПМ) или реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА) с РМП (в том числе зарубежных аналогов РМП - RPR или VDRL).

При проведении клинико-серологического контроля после специфического лечения (для определения эффективности терапии) допускается количественное исследование РМП (изучение титра реакции в динамике).

Иммуноферментный анализ (ИФА, Elisa). Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антигеном испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса антиген-антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Макромодификацию этой реакции именуют ТРНА, микромодификацию - МНА-ТР, автоматизированный вариант - АМНА-ТР.

IgM-серология. В последние десятилетия широко изучается динамика образования антител в организме больных сифилисом до, в процессе и после окончания лечения. Это вызвано тем, что у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, в течение длительного времени остаются положительные результаты специфических серологических реакций на сифилис, что усложняет решение вопроса об излеченно-сти больных, а также постановку диагноза раннего врожденного сифилиса. Затруднена также дифференциальная диагностика рецидива заболевания и реинфекции. При изучении антителообразовния в организме больных сифилисом было установлено, что первыми после заражения вырабатываются специфические IgM, выявляемые уже на второй неделе после заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6-9 неделе. Через 6 мес. после окончания терапии у большинства больных в крови они не определяются. На четвертой неделе после инфицирования организм начинает продуцировать специфические IgG. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через 1-2 года после заражения. Следует обратить внимание на то, что специфические IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреции IgG продолжается клонами клеток памяти. Кроме того крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по их наличию у ребенка судят об его инфицировании бледной трепонемой. Ввиду того, что концентрация в крови специфических IgM закономерно снижается с течением времени, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия рецидива заболевания или реинфекции.

В 1977 г. была предложена 19S IgM-ТА-абс, затем 19 IgM-TPHA. В основе этих тестов лежит разделение с помощью гельфильтрации испытуемых сывороток крови на 19S IgM и 7S IgG и выявления первых с помощью иммунофлюресцентного метода и теста гемагглюцинации. В 1980 г. В. Шмидт описал реакцию гемадсорбции на твердофазном носителе IgM-SPHA, объединившую элементы постановки ИФА и РПГА, а в 1983 г. Е. Линдешмидт предложил IgM-TP-ABS-Elisa. А. Люгер (1981) определил, что для установления активности специфического процесса в ЦНС важно определение IgM путем постановки 19S IgM-SPHA.

Особое внимание обращается на сероконверсию при сифилисе у младенцев, матери которых получали противосифилитическое лечение. Диагноз врожденного сифилиса нередко ставится ошибочно у здоровых новорожденных на основании выявления у них IgG-AT, которые попадают в кровь ребенка через плацентарный барьер от больных сифилисом матерей. Требуется дополнительное тестирование IgM-AT и использование комбинаций различных тестов для исключения врожденного сифилиса у младенцев, рожденных от леченных от сифилиса матерей, при наличии у первых положительных серологических реакций, но отсутствии клинических симптомов.

Реакция пассивной гемагглютинации в серодиагностике сифилиса (РПГА) в отличие от РИФ и ИФА отличается методической простотой постановки, быстротой получения результатов и высокой воспроизводимостью. Учитывая эти качества РПРА должна использоваться как скрининг-тест при массовых обследованиях на сифилис. Принцип метода заключается в том, что при взаимодействии сыворотки крови, содержащей специфические антитела, с эритроцитами, сенсибилизированными бледной трепонемой, наблюдается характерная их агглютинация. Сенсибилизация эритроцитов может производиться антигенами патогенных и культуральных штаммов бледных трепонем. РПГА является ценным диагностическим тестом на всех стадиях сифилиса, особенно чувствительна при поздних формах сифилиса.

[youtube.player]
реферат Сифилис диагностика Тип работы: реферат. Добавлен: 27.06.2012. Год: 2011. Страниц: 6. Уникальность по antiplagiat.ru:

Выполнила студентка 4 курса,
педиатрического факультета,

Саратов - 2011 г.

Эпидемиологическая ситуация в России в 1993–1997 гг., характеризовавшаяся резким ростом заболеваемости сифилиса (более 270 на 100 тыс. населения), вскрыла существенные недостатки клинико-лабораторного обследования и ведения пациентов. Наряду со значительным снижением в последние годы уровня заболеваемости, довольно часто диагностируют поздние формы заболевания, в том числе нейро- и висцеральный сифилис, врожденную инфекцию.
В последние годы изменилось клиническое течение сифилиса и его патоморфоз; преобладают скрытые, латентные формы заболевания. По данным специалистов, более чем в половине случаев сифилис сочетается с другими инфекциями, такими как гонорея, трихомониаз, хламидиоз. Особое внимание следует уделить вирусным инфекциям частично или преимущественно передаваемым половым путем (ИППП): герпесу, папиломовирусной инфекции, гепатитам В и С, ВИЧ-инфекции, а также туберкулезу, зачастую также протекающими одновременно с сифилисом, осложняя диагностику и лечение последнего.
Комплексная и полноценная диагностика, являющаяся неотъемлемой и наиболее объективной составляющей частью обследования и ведения больных, несомненно, будет способствовать постановке достоверного диагноза и назначению адекватной и эффективной терапии.

Отборочные серологические реакции на сифилис или микрореакции на стекле для экспресс диагностики
Эти реакции используются для массовых серологических обследований на сифилис (лиц декретированных профессий, больных соматических стационаров, пациентов поликлиник и амбулаторий); для экспресс_диагностики в кожно_венерологических диспансерах. Их не применяют для обследования беременных и доноров, а также для контроля после излечения больных сифилисом.
Микрореакции можно ставить в обычных клинических лабораториях.
Постановка микрореакций осуществляется на стекле с каплей крови, плазмы, активированной или неактивированной сывороткой и специальным кардиолипиновым антигеном. Кардиолипиновый антиген отличается высокой чувствительностью и представляет собой экстракт бычьего сердца, обогащенный холестерином и лецитином. МРП можно проводить по количественной методике с разведением сыворотки крови.
Преимуществом экспресс метода являются быстрота получения ответа (через 30–40 мин), небольшой объем необходимой для анализа крови (2–3 капли плазмы или сыворотки).МРП могут давать ложноположительные, а в отдельных случаях и отрицательные результаты при активных формах сифилиса, поэтому окончательный диагноз этим методом устанавливать запрещено.
В качестве отборочных реакций рекомендуют также применять реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА). Наивысшую чувствительность этого теста отмечают у нелеченных (100%) и леченных (99,6%) больных как с ранними, так и поздними формами сифилиса. При контроле результатов лечения тест не имеет значения, так как дает отрицательные результаты в малом количестве случаев. Возможность использовать антиген Рейтера, простота, высокая чувствительность, малая стоимость ставят РПГА на первое место среди методов для диагностики сифилиса. Ценность ее еще более повышается при автоматическом выполнении.

Диагностические подтверждающие серологические реакции при сифилисе
Стандартные серологические реакции.
Реакция Вассермана (РВ). Разработана А. Вассерманом совместно с А. Нейссером и Бруком в 1906 г. Исторически это первый серологический метод диагностики сифилиса. Реакция основана на феномене связывания комплемента (реакция Борде — Жангу) и определяет противолипидные антитела (реагины) — классическая реакция. В настоящее время реакцию связывания комплимента ставят еще со специфическими трепонемными
антигенами (неклассическая реакция).
Липидные антигены, используемые в РВ, являются неполноценными антигенами — гаптенами. Они не обладают иммунногенной способностью. После специальной обработки эти гаптены приобретают свойства полноценных антигенов. Антигены, приготовленные из культуральных и патогенных трепонем, представляют собой полноценные антигены. В РВ используют одновременно два антигена: кардиолипиновый и трепонемный. Трепонемный антиген представляет собой обработанную ультразвуком взвесь апатогенных культуральных трепонем. Эти антигены образуют совместно с реагинами сыворотки крови больного иммунный комплекс, способный адсорбировать, связывать комплемент. Поскольку образовавшийся комплекс (реагины + антиген + комплемент) невидим, для определения наступившего связывания комплемента необходима как индикатор гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой).
Если комплемент связан в первой фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), то гемолиз не наступит, эритроциты выпадут в осадок, легко заметный невооруженным глазом (РВ положительная). Если в первой фазе комплемент связан не будет вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, то он используется гемолитической системой и произойдет гемолиз (РВ отрицательная). Степень выраженности гемолиза в реакции Вассермана оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза 4+ (РВ резко положительная), едва начавшийся гемолиз 3+ (РВ положительная), значительный гемолиз 2+ (РВ слабоположительная), полный гемолиз — РВ отрицательная.
Реакция Вассермана обладает недостаточной чувствительностью. Она отрицательна в начале первичной стадии, бывает негативной у 1/3 больных третичным активным сифилисом с поражениями кожи, слизистых оболочек, костей, внутренних органов, центральной нервной системы, поздним врожденным сифилисом, особенно если больные
в прошлом подвергались лечению антибиотиками. В первичном периоде сифилиса РВ становится положительной через 2–3 нед после появления твердого шанкра или на 5–6_й неделе после заражения, во вторичном—почти у 100% больных, в третичном активном — 70–75%,при спинной сухотке—у 50%, прогрессивном параличе—95–98%.
После окончания специфического лечения первичного серопозитивного и вторичного свежего сифилиса реакция становится отрицательной в сроки от 1,5 до 7–8 мес.

Группа специфических серологических реакций
Существует пять основных типов специфических реакций, в которых используется трепонемный антиген. Они отличаются друг от друга методами определения комплексов антиген—антитело: иммунофлюоресценция, иммобилизация, иммуноферментный анализ, гемагглюцинация, фиксация комплемента.
1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) занимает центральное положение среди специфических реакций.
Принцип ее заключается в том, что исследуемой сывороткой обрабатывается антиген, который представляет собой бледная трепонема штамма Никольса, полученный из орхита кролика, высушенный на предметном стекле и зафиксированный ацетоном. После промывания препарат обрабатывается люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Флюоресцирующий комплекс (античеловеческий глобулин + флюоресцеин тиоизоционат) связывается с человеческим глобулином на поверхности бледной трепонемы и может быть идентифицирован методом люминесцентной микроскопии.
Для серодиагностики сифилиса используется несколько модификаций РИФ:
а) реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией (РИФ6Абс.). Групповые антитела удаляются из исследуемой сыворотки с помощью разрушенных ультразвуком культуральных трепонем, что резко повышает специфичность реакции. Поскольку исследуемая сыворотка разводится только 1:5, то модификация сохраняет высокую чувствительность.
Показания для постановки РИФ_Абс.:
— положительная реакция Вассермана у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных в пользу сифилиса;
— положительная реакция Вассермана у лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями;
— отрицательная реакция Вассермана у лиц с клиническими проявлениями сифилиса (метод ранней диагностики сифилиса).
Переход положительной РИФ_Абс. в отрицательную, в результате проведенного лечения, является абсолютным критерием успешности противосифилитического лечения.
Ложноположительные результаты РИФ_Абс. отмечали у беременных, алкоголиков, больных с ревматоидным артритом, системной и дискоидной красной волчанкой, склеродермией, смешанной болезнью соединительной ткани, циррозом печени. Иногда реакция бывает положительной у здоровых людей. Кроме того, могут быть технические ошибки;
б) реакция IgM РИФ Абс. Выше указано, что у больных с ранним сифилисом в первые недели болезни появляются IgM, которые в данный период являются носителями специфических свойств сыворотки. В более поздние сроки болезни начинают преобладать IgG. Этот же класс иммуноглобулинов ответственен и за ложноположительные результаты, так как групповые антитела бывают результатом длительной по времени иммунизации сапрофитными трепонемами (полости рта, половых органов и др.).
Раздельное изучение классов Ig представляет особый интерес при серодиагностике врожденного сифилиса, где противотрепонемные антитела, синтезированные в организме ребенка, будут представлены IgM, а IgG будут материнского происхождения. Реакция IgM_РИФ_Абс. основана на использовании во второй фазе коньюгатации_IgM, вместо сифилисе доля положительных результатов РИТ приближается к 100%. Негативация РИТ в результате полноценного лечения наступает не всегда; реакция может оставаться положительной на протяжении многих лет. Показания к постановке реакций такие же, как для РИФ_Абс.
Ложноположительная РИТ может наблюдаться у больных лепрой, трепонематозными заболеваниями (пинта, беджель и пр.), злокачественными заболеваниями, красной волчанкой, сердечнососудистыми заболеваниями, пневмонией.
3. Иммуноферментный анализ (ИФА). Принцип метода заключается в том, что антигенами бледной трепонемы сенсибилизируется поверхность твердофазового носителя (лунки панелей из полистирола или акрила). Затем в такие лунки вносится исследуемая сыворотка. При наличии в сыворотке антител против бледных трепонем образуется комплекс антиген—антитело, связанный с поверхностью носителя. На следующем этапе в лунки наливают антивидовую (против глобулинов человека) сыворотку, меченную ферментом (пероксидазой или щелочной фосфатазой). Меченые антитела (конъюгат) взаимодействуют с комплексом антиген—антитело, образуя новый комплекс. Для его выявления в лунки наливают раствор субстрата (5_аминосалициловая кислота). Под действием фермента субстрат меняет цвет, что указывает на положительный результат реакции. По чувствительности и специфичности метод близок к РИФ_Абс. Показания к постановке ИФА такие же, как для РИФ_Абс. Разработаны макро_ и микроварианты ИФА. Реакция может быть автоматизирована.
4. Реакция непрямой гемагглютинации (РПГА). Принцип реакции заключается в том, что в качестве антигена используются формалинизированные и таннизированные эритроциты, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы. При добавлении такого антигена к сыворотке больного происходит склеивание эритроцитов — гемагглютинация. Специфичность и чувствительность реакции выше по сравнению с другими методами
обнаружения антител к бледной трепонеме при условии высокого качества антигена. Реакция становится положительной на 3_й неделе после заражения и остается таковой спустя много лет после выздоровления. Число ложноположительных и ложноотрицательных результатов невелико. Разработан микрометод этой реакции, а также автоматизированная реакция микрогемагглютинации. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (T. pallidum haemagglutination).
5. Реакция гемабсорбции в твердой фазе (IgM SPHA
(IgM—Solid phase haemabsorption).

Исследование спинномозговой жидкости.
Ликворологическая диагностика имеет чрезвычайно важное значение для установления диагноза нейросифилиса, а также при определении излеченности больного сифилисом.
Лабораторное исследование спинномозговой жидкости рекомендуется производить перед снятием с учета после соответствующего клинико-лабораторного контроля. Следует иметь в виду, что в ряде случаев патологическая спинномозговая жидкость возможна при отрицательных стандартных серологических реакциях.
Нормальная спинномозговая жидкость бесцветная, прозрачная, при хранении не образует осадка, относительная плотность ее 1006–1007;рН7,35–7,4; содержание белка от 10 до 25 мг % ; в 1 мл нормального ликвора может содержаться от 0 до 3–5–7 форменных элементов.
Для определения специфических сифилитических изменений спинномозговой жидкости рекомендуются следующие тесты: определение общего содержания белка, подсчет форменных элементов, глобулиновые реакции, реакция Вассермана с тремя разведениями спинномозговой жидкости и коллоидная реакция с хлорным золотом (реакция Ланге), РИТ, РИФ_10 и РИФц (реакция иммунофлюоресценции с цельным неразведенным ликвором).
Определение общего белка. В патологически измененной спинномозговой жидкости больного сифилисом увеличивается количество белка. Определяется это в ступенчатых разведениях ликвора изотоническим раствором хлорида натрия от 1:5 до 1:80.
Количественное определение форменных элементов.
В нормальном ликворе, как правило, содержатся единичные форменные элементы (лимфоциты). Увеличение числа форменных элементов и появление при плеоцитозе наряду с лимфоцитами плазматических клеток и моноцитов свидетельствует о патологическом изменении спинномозговой жидкости.
Глобулиновые реакции. Важное значение в диагностике патологии ликвора имеет определение в спинномозговой жидкости тяжелой фракции белков — глобулинов. К глобулиновым реакциям относятся реакции Нонне—Апельта и Панди, в основу которых положено свойство некоторых солей в определенных концентрациях осаждать избирательно глобулины из спинномозговой жидкости.
Реакция Ланге (реакция с коллоидным раствором хлорного золота). Принцип реакции основан на том, что коллоидные растворы золота, не изменяющиеся под влиянием ступенчатых разведений нормальной спинномозговой жидкости, при тех же условиях в патологически измененной спинномозговой жидкости в присутствии электролитов (раствора хлорида натрия) претерпевают изменение степени дисперсности в зависимости от разведения этой жидкости. Процесс выражается изменением цвета коллоидного раствора при выпадении осадка. Реакция Ланге с коллоидным раствором хлорного золота имеет и диагностическое, и дифференциально_ диагностическое значение при раннем определении сифилитического поражения нервной системы.
и т.д.

* Примечание. Уникальность работы указана на дату публикации, текущее значение может отличаться от указанного.

[youtube.player]

Читайте также: