Питательные среды для кишечных инфекций

Наибольший интерес из кишечно-тифозной группы бактерий представляют три основных рода: Esherichia, Salmonella, Shigella, которые являются возбудителями кишечных инфекции (коли-инфекция, брюшной тиф, паратифы, сальмонеллезы, ди­зентерия). Все бактерии этой группы имеют одинаковые морфологические и культуральные свойства: это грамотрицательные палочки, спор и капсул не образуют, саль­монеллы и эшерихии подвижные, шигеллы неподвижные, в МПБ дают равномерное помутнение, на пластинчатом МПА - бесцветные, полупрозрачные, округлые колонии с фестончатыми (сальмонеллы и эшерихии) и ровными (шигеллы) краями. Первичное распознавание бактерий кишечно-тифозной группы осуществляют на дифференци­ально-диагностических средах с содержанием лактозы - это среды Эндо, Левина, Плоскирева, Ресселя. Эшерихии разлагают лактозу до кислоты и газа, сальмонеллы и шигеллы не действуют на этот углевод.

Среда Эндо содержит лактозу, фуксин (индикатор), который в щелочной среде приобретает розовый цвет, а в кислой - красный. Эшерихии на среде Эндо дают ма­линового цвета колонии, сальмонеллы и шигеллы - бесцветные.

Среда Левина содержит лактозу и индикатор - эозинметиленовую синь, который в щелочной среде приобретает сиреневый цвет, а в кислой - темно-синий. Эшерихии на среде Левина дают темно-синие колонии, сальмонеллы и шигеллы - бесцветные. Среды Эндо и Левина используют для выделения чистой культуры эшерихий.

Среда Плоскирева (бактоагар Ж) содержит лактозу с индикатором - нейтраль­ный красный( краситель) и дополнительные компоненты: соли желчных кислот, по­давляющие рост эшерихий и бриллиантовый зеленый, подавляющий рост грампо- ложительной микрофлоры. Среда Плоскирева используется для выделения чистой культуры сальмонелл и шигелл, которые дают на этой среде бесцветные колонии. Эшерихии на среде Плоскирева дают красного цвета колонии.

Среда Ресселя содержит 1% лактозы, 0,1% глюкозы, индикатор Андреде. Среду готовят в виде скошенного агара, нижняя часть ее в виде столбика, а верхняя - в виде скошенной поверхности. Посев чистой культуры бактерий производят на скошенную поверхность и уколом в столбик среды. Эшерихии, ферментирующие оба углевода (глюкоза и лактоза), изменяют цвет всей среды. Сальмонеллы и шигеллы, ферменти­рующие один углевод (глюкоза), изменяют цвет столбика и скошенная поверхность среды Ресселя. Разрывы столбика среды свидетельствуют о газообразовании.

Коли-инфекция (эшерихиоз) (билет 28) - острая кишечная инфекция, вызываемая патогенными вариантами кишечной па­лочки (E.coli), протекающая с синдромом гастроэнтерита и гастроколита.

E.coli имеет три антигена: соматический О-антиген (термостабильный), капсульный К-антиген (термолабильный), жгутиковый Н-антиген (термолабильный). Капсульный К-антиген неоднороден, имеет три фракции -A,B,L. По О-антигену эшерихии делятся на О-группы. Внутри каждой О-группы бактерии различаются по Н- и К-антигену. Патогенные варианты кишечной палочки содержат ОК(В)-антиген. Принято подразделять патогенные для человека кишечные палочки на четыре группы: энтеропатогенные (ЭПКП), энтероинвазивные (ЭИКП), энтеротоксигенные (ЭТКП) и энтеро-геморрагические (ЭГКП) кишечные палочки.

Эпидемиология

Источник инфекции - больные, бактерионосители. Пути передачи инфекции - алиментарный (фекально-оральный), иногда контактно-бытовой. Факторы передачи - молочные продукты, вода. Входные ворота - слизистая жкт.

Патогенез

Инкубационный период не более трех дней. В этот период возбудитель проникает с пищей в жкт, где разрушается с выделением и накоплением эндотоксина. ЭПКП и ЭТКП вызывают интоксикацию, лихорадку, слабость, тошноту, рвоту и т.д. ЭИКП вызывает дизентериеподобную коли-инфекцию, размножается внутри эпителиаль­ных клеток с продукцией эндотоксина, с последующим разрушением и отторжением эпителиальных клеток, формированием поверхностных микроязв. ЭГКП вызывают геморрагический колит с тяжелыми осложнениями в виде тромбоцитопенической пурпуры.

Клиника

Клинически - слизисто-кровянистый стул. ЭПКП (возбудитель коли-энтеритов), ЭТКП (возбудитель холероподобных заболеваний) размножаются на поверхности эпителиальных клеток. Патологический процесс при коли-энтеритах (ЭПКП) связан с действием эндотоксина, а ЭТКП (холероподобные заболевания) образует еще и энтеротоксин.

Постинфекционный иммунитет группоспецифический, слабонапряженный.

Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал - испражнения, рвотные массы остатки пищевых продук­тов.

1. Микроскопический метод - не применяется, так род определить невозможно.

2. Бактериологический метод: Первый день - испражнения, рвотные массы засе­вают на среды Эндо и Левина.

Второй день - исследуют крупные изолированные колонии малинового цвета на среде Эндо и темно-синие на среде Левина. С каждой чашки исследуют не ме­нее 10 колоний в реакции агглютинации с комплексной ОК(В)-коли сывороткой для выявления патогенных вариантов кишечной палочки. Агглютинирующую колонию накапливают на среде Ресселя. Третий день - отмечают изменение всего столбика цвета среды Ресселя. Для определения серотипа ставится реакция агглютинации с типовыми ОК(В)-коли сыворотками. При наличии агглютинации с одной из сывороток ставят развернутую реакцию агглютинации с этой же сывороткой.С живой культурой для установления В-антигена и с культурой, прогретой в течение 2 ч при 1000°С, для установления О-антигена.

3. Серологический метод - не применяется.

4. Аллергический метод - не применяется.

5. Биологический метод - не применяется.

Лечение и профилактика

Специфическая профилактика коли-инфекций не разработана. Этиотропная те­рапия - ампициллин, норфлоксацин, амоксициллин.

Сальмонеллы (сальмонеллезы, брюшной тиф, паратифы)

Сальмонеллез (билет 26, 44)- острая кишечная инфекция, характеризующаяся преиму­щественным поражением слизистой желудочно-кишечного тракта. Возбудители сальмонеллеза относятся к семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella. Насчи­тывается более 2200 видов сальмонелл. Наиболее частые возбудители сальмонеллезов: S.typhimurium, S.enteritidis, S.choleraesuis, S.heidelberg, S.anatum, S.newsport, S. derby.

Эпидемиология

Источник инфекции - больные люди и животные (крупный рогатый скот, свиньи, овцы, лошади, водоплавающие птицы), бактерионосители. Путь передачи инфекции - алиментарный (пищевой и водный). Факторы передачи инфекции - пищевые про­дукты (мясо инфицированных животных или птиц, их яйца). Инфицирование мяса может происходить при жизни самого животного во время его болезни, при разде­лке туш животных - бактерионосителей (обсеменение мяса содержимым кишечника при его ранении), в процессе транспортировки, хранения, неправильной кулинарной обработки. При тесном общении с больным человеком или животными возможен контактно-бытовой путь передачи инфекции.

Входные ворота - слизистая желудочно-кишечного тракта. Сальмонеллы отно­сительно устойчивы к различным факторам внешней среды: к солению, копчению и действию кислот. Для разрушения бактерий требуется качественно проводимая тер­мическая обработка. Так, для полной инактивации сальмонелл, находящихся в куске мяса массой 400 г, необходимо варить его не менее 2,5 часа.

Патогенез

Инкубационный период в среднем 12-24 часа. За этот период сальмонеллы из ротовой полости проникают в ЖКТ, достигают тонкого кишечника. Преодолев эпите­лиальный барьер тонкой кишки, проникают в толщу тканей, захватываются макрофа­гами, где не только размножаются, но и частично погибают с освобождением эндо­ токсина. Эндотоксин поражает нервно-сосудистый аппарат кишечника и повышает проницаемость клеточных мембран, что способствует дальнейшему распростране­нию сальмонелл по лимфатическим путям и занесению их в мезентериальные лим­фатические узлы. Эндотоксин оказывает как местное действие, так и способствует развитию симптомов общей интоксикации организма. Инфекционный процесс на этой стадии заболевания может завершиться (локализованная форма). При тяжелом течении возможна кратковременная бактериемия.

Генерализованная форма сальмонеллеза возникает при глубоком нарушении ба­рьерной функции лимфатического аппарата кишечника и сопровождается длитель­ной бактериемией, в результате чего сальмонеллы заносятся в различные внутренние органы, вызывают в них формирование вторичных гнойных очагов (септикопиемия).

Повышение секреции жидкости в кишечнике связано с активацией аденилатциклазы и гуанилатциклазы энтероцитов сальмонеллезным энтеротоксином и последу­ющим нарастанием внутриклеточной концентрации биологически активных веществ (цАМФ, цГМФ и др.). Это ведет за собой поступление в просвет кишечника большого количества жидкости, калия, натрия и хлоридов.

КлиникаУ больных развиваются рвота и понос, интоксикация организма. Появившиеся симптомы больные четко связывают с приемом недоброкачественной пищи. Часто появляются симптомы обезвоживания организма. Постинфекционный иммунитет при сальмонеллезе малонапряженный и кратковременный.

Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал - рвотные массы, промывные воды желудка, испражне­ния, желчь, кровь.

1. Микроскопический метод - имеет ориентировочное значение. Морфологичес­ки сальмонеллы представляют собой грамотрицательные палочки с закругленными концами, подвижны, перитрихи, спор и капсул не образуют.

2. Бактериологический метод:

Первый день - посев исследуемого материала (рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь) на плотные дифференциальные питательные среды Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агар. Если исследуемым материалом является кровь, то посев производят на жидкие питательные среды: 10% желчный бульон или среду Раппорт. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течение суток. Забор исследуемого материала следует производить до начала лечения.

Третий день. Проверяют чистоту культуры со скошенного агара в мазках по Гра­му. Отмечают характер роста на среде Ресселя: сальмонеллы, разлагающие только глюкозу, дают двухцветное изменение столбика среды. Идентификация возбудителя проводится в реакции агглютинации на стекле со смесью монорецепторных группо­вых сальмонеллезных 0 -сывороток с целью определения серогруппы выделенной сальмонеллы. При положительном результате по таблице Кауфмана - Уайта опреде­ляют, какие виды сальмонелл относятся к данной группе. Затем ставят реакцию аг­глютинации на стекле с видовыми монорецепторными сальмонелллезными Н-сыворотками, относящимися к данной группе (см. таблицу в учебнике).

3. Серологический метод - реакция непрямо гемагглютинации( РИГА) дает поло­жительные результаты на 5-й день болезни. Специфические антитела определяются в диагностическом титре 1:200. Реакцию агглютинации (РА) ставится на 7-8-й день за­болевания и считается положительной, если специфические антитела определяются при разведении сыворотки больного не менее 1:200 (диагностический титр).

4. Биологический метод не применяется.

5. Аллергический метод - не применяется.

Сальмонеллезы (пищевые токсикоинфекции) необходимо дифференцировать с пищевыми интоксикациями, причиной которых является экзотоксин, выделяемый та­кими микроорганизмами, как стафилококк, палочка ботулизма, палочка перфрингенс тип F (см таблицу).

Таблица дифференциальной диагностики пищевых токсикоинфекций и пи­щевых интоксикаций

Характеристика семейства энтеробактерии

Семейство Enterobakteriaceae включает в себя многочисленных представителей, имеющих общее местообитание — кишечник. Энтеробактерии делят на:

1) патогенные (шигеллы, сальмонеллы, эшерихии, иерсинии и др.);

2) условно-патогенные (37 родов).

Все патогенные энтеробактерии могут вызывать у человека острые кишечные инфекции, условно-патогенные — гнойно-вос­палительные заболевания и пищевые токсикоинфекции.

Энтеробактерии— грамотрицательные палочки средней ве­личины с закругленными концами, располагающиеся беспорядоч­но. Одни из них подвижны за счет жгутиков, другие неподвижны. Являются факультативными анаэробами.

Они нетребовательны к питательным средам. На мясопептонном агаре образуют однотипные колонии средней величины, круглые, гладкие, выпуклые, блестящие, бесцветные. В мясопептонном бульоне рост дает равномерное помутнение.

Биохимические тесты общие для всего семейства. На основании этих тестов семейство энтеробактерии дифференцируют от других, сходных по морфологии.

1) ферментируют глюкозу до кислоты или до кислоты и газа;

2) редуцируют нитраты в нитриты;

3) каталаза +, оксидаза -, OF-тест ++.

Антигены энтеробактерии состоят из:

1) О-антигена, который локализуется в клеточной стенке. По хи­мической природе это глюцидолипоидный комплекс;

2) К-антигена (это поверхностный, капсульный антиген);

3) Н-антигена (термолабильного, жгутикового); его имеют подвижные энтеробактерии;

4) пилифимбриального антигена; он есть у бактерий, имеющих ворсинки, пили, фимбрии.

Классификация энтеробактерии

Классификация энтеробактерии основана на их биохимиче­ских свойствах. Согласно классификации Берджи семейство энтеробактерии делится на 40 родов, роды — на виды. В ряде случаев возможна внутривидовая дифференциация на:

2) серогруппы и серовары;

Эта дифференциация необходима для эпидемиологического анализа, т. е. для установления источника и путей распростране­ния инфекции.

Кишечная инфекция— результат взаимодействия возбудителя с соответствующими структурами макроорганизма при необходимых условиях внешней среды. Этот процесс состоит из нескольких фаз:

4) продукции экзо- и энтеротоксинов. ,

Адгезия— обязательное условие возникновения любого инфек­ционного процесса. Разные энтеробактерии обладают тропизмом только к определенным эпителиальным клеткам, поэтому прикрепля­ются только на определенном уровне ЖКТ. Адгезия идет в два этапа:

1) неспецифическая адгезия (приближение);

2) специфическая адгезия (в результате лиганд-специфического взаимодействия соответствующих структур энтеробак­терий (ворсинок, фимбрий) и рецепторов плазмолеммы эпите­лиальных клеток).

Инвазия— проникновение бактерий в эпителиальные клетки с размножением или без него.

Инвазия, колонизация и продукция токсинов в разной степени выражены у разных энтеробактерий, поэтому патогенез и клини­ка кишечных инфекций существенно различаются.

Рис. Колонии кишечной палочки на питательной среде

Эшерихии

Род Escherihia включает в себя семь видов. Наибольшее значение имеет вид Е. coli, которые по патогенности делят на:

1) патогенные (диарейные);

2) условно-патогенные (входят в состав нормальной микро­
флоры кишечника).Они подвижны, капсул не образуют. Биохимические свойства:

1) ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа;

2) ферментируют лактат.
Антигенное строение:

1) по О-антигену делятся на серогруппы (более 160);

2) большинство имеют К-АГ и Н-АГ.

Заболевания, вызываемые эшерихиями, делят на две группы:

1) эндогенные колиинфекции; вызываются собственной ки­шечной палочкой, которая при снижении иммунологической реактивности вызывает гнойно-воспалительные заболевания;

2) экзогенные колиинфекции — эшерихиозы. Это типичные кишечные инфекции, вызываются только патогенными Е. coli, попавшими в организм извне. Основной источник — человек.
Патогенные Е. coll делят на четыре основных класса.

1. ЕТЕС — энтеротоксигенные эшерихии коли. Обладают тро­пизмом к эпителию тонкого кишечника. Попав в организм, они прикрепляются к рецепторам мембран энтероцитов. У них есть СФ-фактор колонизации, за счет которого они заселяют эпите­лиальные клетки тонкого кишечника. Внутрь клеток они не про­никают, и воспаление не развивается.

Они продуцируют экзоэнтеротоксин, синтез которого кодиру­ется плазмидой. Этот токсин состоит из:

1) ЛТ-термолабильной фракции;

2) СТ-термостабилыюй фракции.

Токсин обладает цитотоническим действием. В результате его воздействия нарушается процесс энтеросорбции, что ведет к раз­витию диарейного синдрома. Клинически заболевание протекает как легкая форма холеры.

2.Е1ЕС — энтероинвазивные эшерихии коли. Обладают тро­пизмом к эпителиальным клеткам толстого кишечника. Факторами их вирулентности являются наличие на поверхности клеточ­ной стенки белков наружной мембраны, способность к инвазии и внутриклеточному размножению. Размножение бактерий при­водит к гибели клетки. На месте погибших клеток образуются яз­вы и эрозия, окруженные воспалением.

3.ЕРЕС — энтеропатогенные эшерихии коли. Вызывают энте­роколиты у детей до года. Поражается эпителий тонкого кишеч­ника. Фактор вирулентности — способность к ограниченной ин­вазии.

4. ЕНЕС — энтерогеморрагические эшерихии коли. Обладаю тропизмом к эпителиальным клеткам толстого кишечника. Фактор вирулентности — продукция двух типов шигоподобных токсинов (SLT). Вызывают гемоколит.

Основной метод диагностики — бактериологическое исследование.

1) принадлежность выделенной культуры Е. coli к патогенной серогруппе (реакции агглютинации и преципитации);

2) наличие токсина (с помощью иммуноферментного анализа
(ИФА)), если выделенная структура принадлежит к серогруппе ЕТЕС;

3) наличие белков наружной мембраны (ИФА), если выделенная структура принадлежит к серогруппе EIEC;

4) особое белковое вещество, общее для всей группы (ИФА), —у группы ЕРЕС;

5) наличие SLT (ИФА) — у ЕНЕС.
Специфической профилактики нет.

Рис. Электронная микроскопия кишечной палочки.

Шигеллы

Относятся к роду Shigella.

Являются возбудителями дизентерии. Морфология такая же. как и у других представителей семейства энтеробактерии. Неподвижны, капсул не образуют.

Хорошо растут на простых питательных средах. На среде Эндо образуют бесцветные колонии.

Род включает в себя четыре вида, различающихся по биохими­ческим свойствам (способности ферментировать маннит и лакто зу) и антигенному строению:

1) Sh. disenteriae; не ферментируют лактозу и маннит; по ан­тигенным свойствам внутри вида делятся на 12 сероваров. один из них — шигелла Григорьева—Шига — самый патоген­ный;

2) Sh. flexneri; ферментирует только маннит; по антигенным свойствам делится на 6 сероваров, которые делятся на подсеровары;

3) Sh. boydii; ферментирует только маннит; по антигенному, строению делится на 18 сероваров;

4) Sh. sonnei; ферментирует только лактозу; в антигенном от­ношении вид однороден, внутри вида выделяют ферментовары, фаговары, колециновары.

Шигеллы, минуя желудок и тонкий кишечник, попадают в толстый кишечник. Прикрепляются к рецепторам мембран колоноцитов и проникают внутрь с помощью белка наружной мемб­раны. Гибель клеток приводит к образованию эрозий и язв, окруженных перифокальным воспалением.

Факторы патогенности:

1) белки наружной мембраны (обеспечивают способность к инвазии и внутриклеточному размножению);

2) контактный гемолизин (способствует лизису мембран вакуолей клетки);

3) экзотоксин (обладает энтеротропным, цито- и нейротоксическим действием);

4) эндотоксин (оказывает на организм общетоксическое дей­ствие и предохраняет попавшие в организм шигеллы от дей­ствия защитных сил макроорганизма).

Различают три клинические формы дизентерии, которые отли­чаются по возбудителям, эпидемиологии и частично по клинике:

1) дизентерия Григорьева—Шига. Возбудитель — Sh. disente­riae, серовар — шигелла Григорьева—Шига. Пути переда­чи — алиментарный, контактно-бытовой. Особенности клини­ки: протекает тяжело, характерен жидкий стул с кровью,
симптомы поражения ЦНС, может быть бактериемия;

2) дизентерия Флекснера. Возбудители — Sh. flexneri и Sh. boy­dii. Путь передачи водный. Особенности клиники: протекает как типичная дизентерия различной степени тяжести;

3) дизентерия Sonnei. Путь передачи пищевой. Особенности клиники: могут быть симптомы пищевой токсикоинфекции, рвота.

1) бактериологическое исследование;

2) иммуноиндикация (ИФА);

3) серодиагностика (имеет ретроспективное значение).
Специфическая профилактика: дизентерийный бактериофаг

(применяется в очагах инфекции).

Этиотропная терапия: в среднетяжелой и тяжелой степени за­болевания назначаются антибиотики (те, которые выводятся ки­шечником) с учетом чувствительности возбудителя.

Сальмонеллы

Род Salmonella включает в себя более 2500 сероваров.

Морфология сходна с другими представителями семейства. Бактерии подвижны, спор и капсул не образуют.

Хорошо растут на простых питательных средах. Образуют не­большие прозрачные колонии.

1) ферментируют углеводы до кислоты и газа;

2) лактозу не разлагают;

3) дезаминируют и декарбоксилируют некоторые аминокис­лоты.

По биохимическим различиям род делится на шесть групп. Антигенная структура:

1) О-антиген. По его строению сальмонеллы делятся на 65 серогрупп;

2) Н-антиген. По его строению внутри серогруппы сальмонеллы делятся на серовары.

У человека сальмонеллы могут вызывать две группы заболе­ваний:

1) антропоонозные — брюшной тиф и паратиф А и В; возбуди­тели: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi В;

2) зооантропоонозные — сальмонеллезы; возбудители: S. typhimurium, S. haifa, S. anatum, S. panama, S. infantis.
Брюшной тиф и паратиф А и В объединены в одну группу тифопаратифозных заболеваний — из-за общего возбудителя, клиники, патогенеза. Источник инфекции — больной (или бакте­рионоситель).

Заболевание включает в себя пять фаз (патогенез).

1. Фаза внедрения возбудителя в организм, прикрепления его к рецепторам мембран энтероцитов и проникновения внутрь кле­ток (соответствует инкубационному периоду болезни).

2. Фаза первичной локализации: сальмонеллы проникают в лимфатический аппарат тонкого кишечника, сенсибилизируют его, размножаются в макрофагах; это сопровождается гибелью микроорганизмов и выделением эндотоксина, который попадает в кровь и вызывает эндотоксинемию (соответствует продромальному периоду).

3. Фаза бактериемии: возбудитель прорывает лимфатический барьер и попадает в кровь, распространяясь по всем паренхима­тозным органам (начало болезни).

4. Фаза вторичной локализации: в паренхиматозных органах возникают брюшнотифозные гранулемы (разгар болезни).

5. Фаза выделительно-аллергическая: повторный контакт воз­будителя с первично-сенсибилизированным лимфатическим аппа­ратом тонкого кишечника; образуются язвы на слизистой обо­лочке.

Исход болезни может быть различным:

2) формирование носительства;

Диагностика тифо-паратифозных заболеваний:

1) в фазу бактериемии — кровь на гемокультуру (РПГА),
если есть сыпь — соскоб с розеол;

2) в фазу реконвалесценции — бактериологическое исследо­вание фекалий, мочи, желчи;

3) для выявления носительства — серологическое исследование.
Этиотропная терапия: антибиотики с учетом чувствительности возбудителя.

Специфическая профилактика: убитая брюшнотифозная вак­цина.

Вторая группа заболеваний — сальмонеллезы — характеризу­ется многообразием клинических проявлений. Источники инфек­ции — больные животные, инфицированные продукты питания. Путь заражения алиментарный. Чаще всего сальмонеллез проте­кает как пищевая токсикоинфекция. При этом сальмонеллы пора­жают энтероциты тонкого кишечника и фиксируются в его лим­фатическом аппарате. При прорыве лимфатического барьера развивается бактериемия, происходит разнос возбудителя по раз­личным органам, регистрируются внекишечные формы сальмонеллеза.

5. Иерсинии

Род Yersinia содержит семь видов, из которых патогенными для человека являются Y. pestis (возбудитель чумы), Y. pseudotuber-culesis (возбудитель псевдотуберкулеза), Y. enterocolitica — воз­будитель острых кишечных инфекций, кишечного иерсиниоза.

Y. enterocolitica — это грамотрицательные подвижные палоч­ки, не образующие спор и капсул. Культивируются на простых питательных средах при температуре 20—26 °С.

Ситауционные Задачи:

1. У 2-х летнего ребенка высокая температура, понос, резко выраженная интоксикация. Как надо провести бактериологическое исследование для постановки диагноза?

2. При проведении бактериологического исследования испражнений больного с клиническим диагнозом - колиэнтерит, на чашках со средой Эндо выросли колонии красного цвета типичные для кишечной палочки. Как решить вопрос патогенные это кишечные палочки или нет?

3. Выздоравливающий больной (10-й день заболевания), перенес заболевание, выразившееся в появлении болей в животе, рвоте, поносе, высокой температуре, появившихся через 4 часа после приема пищи. Клинический диагноз - пищевая токсикоинфекция, пищевой сальмонеллез. Как подтвердить клинический диагноз?

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Кишечные инфекции – большая группа заболеваний, вызываемых патогенными или условно-патогенными бактериями, вирусами и простейшими. Ведущим симптомом таких патологий является диарея. Такие заболевания очень широко распространены в мире, включая развитые страны.

Все кишечные инфекции лечатся одинаково, поэтому выявление конкретного возбудителя важно не лечащему врачу, а ученым-эпидемиологам, изучающим пути распространения, способы передачи, проявления болезни в каждом новом случае, эффективность лечения и другие характеристики бактерии или вируса-возбудителя. Эта информация крайне важна, учитывая широкое распространение кишечных инфекций на планете и их высокую заразность, поскольку бактерии и вирусы изменяются. Кроме того, возбудителя устанавливают для понимания, какие профилактические мероприятия нужно провести, чтобы предотвратить заражение других людей.

Одним из способов выявления инфекционного агента является бактериологический анализ кала. Он проводится при любых обращениях к врачу с жалобами на диарею. Это самый универсальный способ выявления причины кишечной инфекции, не требующий сложной аппаратуры.

Бактериологический анализ кала основан на изучении физиологических свойств возбудителя, выявленного в биоматериале. Он включает культивирование, выделение чистых культур, идентификацию и типирование возбудителей.

Классификация кишечных инфекций

Перечислим заболевания, которые относятся к группе кишечных инфекций.

1. Вызванные бактериями:

• Холера.
• Ботулизм.
• Брюшной тиф и паратиф (сальмонеллез).
• Шигиллез (дизентерия).
• Эшерихиозы (колиинфекция).
• Другие бактериальные инфекции – кампилобактериоз, иерсиниоз.

2. Вызванные простейшими:

• Амебиаз.
• Лямблиоз и др.

3. Вызванные вирусами:

• Ротавирусом.
• Аденовирусом.
• Норовирусом и др.

4. Вызванные условно-патогенными микроорганизмами:

• Стафилококки (есть условно патогенные и патогенные, например, золотистый стафилококк).
• Клебсиеллы.
• Цитробактер (есть патогенные и условно-патогенные штаммы).
• Кишечная палочка.
• Протей и др.

5. Кишечные инфекции невыясненной этиологии.

6. Смешанные кишечные инфекции.

В 40% случаев возбудителем кишечной инфекции являются вирусы, в 20% - бактерии, в 40% возбудитель не удается установить.

По данным ВОЗ острые кишечные инфекции являются причиной 30 % смертельных случаев у детей до 5 лет.

Как правильно сдать анализ

Подготовка к анализу кала на бактериологическое исследование включает особые правила:

• Использование специального контейнера для сбора кала. Врач может выдать специальную пробирку с питательной средой и стерильную ректальную петлю.
• Подготовка судна – обработать его дезинфицирующим раствором, несколько раз сполоснуть проточной водой, обдать кипятком.
• Нельзя касаться ложечки, внутренних стенок контейнера и крышки.
• Нельзя сдавать анализ после приема антибиотиков.
• Проведение тщательного туалета анального отверстия.

Проба должна попасть в лабораторию в максимально короткие сроки. Допускается хранение материала 2 часа при комнатной температуре и 3 часа при температуре 2-8 °С. Для выявления некоторых возбудителей необходим посев на питательную среду сразу же после взятия биоматериала.

Этапы бактериологического анализа кала

1 день. Посев материала на дифференциально-диагностические среды.

Это специальные питательные среды, применяемые для выявления групп бактерий, отличающихся по способности утилизировать то или иное вещество. Например, часто для выращивания возбудителей кишечных инфекций в питательную среду добавляют лактозу. Некоторые бактерии (кишечная палочка) ее расщепляют. Тогда на поверхности среды вырастают окрашенные колонии микроорганизмов. Некоторые микроорганизмы лактозу не расщепляют (сальмонеллы). Тогда вырастают неокрашенные колонии.

2 день. Выросшие колонии просматривают под микроскопом и описывают. Окрашивают по Граму и пересевают на другие специфические среды для накопления чистой культуры возбудителя.

3 день. С бактериями чистых культур проводят реакции агглютинации. Пересевают культуры на другие среды (Гисса) для выяснения ферментативной активности.

4 день. Оценивают результаты реакции агглютинации, рост на средах Гисса. На основании полученной информации дают окончательный ответ о виде возбудителя, присутствующего в кале.

Расшифровка результата

Стандартный анализ кала на бактериологическое исследование включает выявление нескольких групп бактерий. Особое внимание уделяется кишечной палочке – отдельно сообщается о ее колониях с разными ферментативными свойствами. Большинство этих бактерий относится к группе условно-патогенных. То есть они обитают в кишечнике в качестве сапрофитов, но при определенных условиях становятся патогенными. Стандартное исследование включает и бактериологический анализ кала на дисбактериоз. Какие бактерии могут быть обнаружены в пробе? Об этом можно узнать из приведенного ниже (для примера) результата анализа.

Кишечная палочка, или Escherichia coli (E. coli)

Эти микроорганизмы заселяют толстый кишечник ребенка сразу после рождения. Здесь они преобладают среди факультативно-анаэробных бактерий. Кишечные палочки выполняют множество полезных функций в организме человека. Они способствуют выработке иммунитета к патогенным разновидностям бактерии, а также вырабатывают вещества, сдерживающие рост других микроорганизмов.

Бактерии вида E. coli бывают патогенные и условно-патогенные. Под микроскопом одни и другие выглядят одинаково. Их различают по строению антигенов, расположенных на поверхности бактерий. Для этого проводят серологическое исследование. Условно-патогенные кишечные палочки обитают в толстом кишечнике, но на фоне иммунодефицита могут вызвать воспаления и в других органах, например, в мочевыводящих. Патогенные представители E. coli называют диареегенными. Они относятся к транзиторным бактериям, то есть не локализуются постоянно в организме. При попадании в кишечный тракт они вызывают болезни под общим названием эшерихиозы, главным проявлением которых является диарея.

Расшифровка результатов определения количества кишечной палочки

Стандартный бактериологический анализ кала на кишечную группу инфекций включает такие подсчеты количества кишечных палочек:

• Общее количество E. coli.
• Палочек типичных.
• Со слабовыраженными ферментативными свойствами.
• Лактозонегативных.
• Гемолитических.

Общее количество эшерихии коли в 1 г кала у детей колеблется в пределах от 400 млн до 1 млрд, а у взрослых – 300-400 млн. Чрезмерное размножение бактерий в кишечнике приводит к дисбактериозу.

Типичные (классические) кишечные палочки полезны для организма. Их нормальное количество в кале должно быть в интервале 10 7 -10 8 . Снижение свидетельствует об интоксикации, приводящей к гибели полезной микрофлоры в толстом кишечнике, а также о заселении кишечника паразитами – глистами или простейшими. Другие причины – высокая чувствительность к аллергенам, поражение печени, почек, поджелудочной и щитовидной желез.

Высокое содержание в кале этих бактерий говорит об их чрезмерном размножении, что может привести к появлению гнойных воспалений разной локализации.

Разновидности кишечной палочки, не ферментирующие лактозу (лактозонегативные), являются патогенными. Они поражают клетки толстого кишечника, вызывая диарею. Количество данных бактерий в кале не должно превышать 10 5 . Если у больного с диареей их обнаружено больше, например 10 6 или 10 7 , значит, именно эти микроорганизмы явились причиной болезни. Неспособность использовать лактозу и некоторые другие свойства роднят их с шигеллами – возбудителями дизентерии.

Гемолитические кишечные палочки являются патогенными, локализуются, в основном, в слепой кишке. Вызывают геморрагический колит с симптомами общей интоксикации (тошнота, рвота). В норме в кале отсутствуют.

Условно-патогенные микроорганизмы, способные вызвать кишечную инфекцию

Все чаще бактерии, постоянно обитающие в толстом кишечнике человека, вызывают инфекции различной локализации – пищеварительного тракта, дыхательной или мочеполовой системы. К этому приводят ухудшающаяся экологическая обстановка, бесконтрольный прием антибиотиков и других препаратов, постоянное присутствие бактерий в окружении человека. Заболевают, как правило, новорожденные и дети первых 6 месяцев жизни.

Можно выполнить бактериологический анализ кала в "Инвитро". Это сеть лабораторий, филиалы которых есть во всех крупных городах. Пациентам нравится то, что результаты анализа можно получить онлайн, то есть не нужно за ними ехать в лабораторию.

Стафилококки

Существует три вида бактерий рода Staphylococcus, которые способны вызвать кишечную инфекцию:

• Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus).
• Эпидермальный.
• Сапрофитный.

Золотистый стафилококк является самым патогенным из них, то есть при попадании в организм всегда вызывает развитие болезни. Поэтому в результатах анализа он обычно прописывается отельной строкой. В норме золотистого стафилококка в кале быть не должно. На картинке представлен вид чистой культуры золотистого стафилококка под микроскопом.

Эпидермальный вид также является патогенным, но он менее агрессивен, чем золотистый, то есть может присутствовать в организме, не повреждая его. Сапрофитный вид является обычным обитателем толстого кишечника. Суммарно количество эпидермального и сапрофитного стафилококков не должно превышать 10 4 .

Патогенные микроорганизмы, вызывающие кишечные инфекции

Бактериологический анализ кала на патогенную кишечную группу включает определение бактерий рода Salmonella и рода Shigella. Они являются патогенными, то есть в случае попадания в кишечник вызывают патологии – сальмонеллез, брюшной тиф, дизентерию. В норме отсутствуют в организме, поэтому не выделяются с калом.

Реже в анализах кала обнаруживают другие патогенные микроорганизмы, способные вызвать кишечные инфекции.

Вирусы при анализе кала

У детей первого года жизни возбудителями кишечных инфекций могут быть различные вирусы. При анализе кала микроскопическими и бактериологическими методами вирусы не выявляются.

Обнаружение в кале возбудителей любых кишечных инфекций требует госпитализации детей до 3-месячного возраста. Желательна госпитализация и детей до года.

При установлении дизентерии, сальмонеллеза, стафилококковой инфекции, пищевых токсикоинфекций, эшерихиоза у взрослых и детей старше года назначают лечение на дому. Если течение болезни тяжелое или существует высокая степень риска распространения болезни, больных госпитализируют в инфекционную больницу.