Ревматоидный фактор методом латекс-агглютинации

Исследование крови на содержание ревматоидного фактора – лабораторное исследование, которое используется при диагностике многих аутоиммунных и инфекционных заболеваний.

Ревматоидным фактором (РФ) называют группу антител, реагирующих в качестве антигена с иммуноглобулинами G, которые вырабатывает иммунная система. Ревматоидный фактор образуется в результате чрезмерно высокой иммунологической активности плазматических клеток в суставной ткани. Из суставов антитела попадают в кровь, где образуют с IgG иммунные комплексы, которые повреждают синовиальную оболочку суставов и стенки сосудов, в конце концов приводя к тяжелым системным поражениям суставов. Почему это происходит? Считается, что при некоторых заболеваниях иммунные клетки принимают собственные ткани организма за чужеродные, то есть за антигены, и начинают выделять антитела для их разрушения, однако точный механизм аутоиммунного процесса все еще недостаточно изучен.

Изредка (у 2–3% взрослых и 5–6% пожилых людей) повышение ревматоидного фактора в крови обнаруживается у здоровых людей.

Тем не менее, определение ревматоидного фактора в анализе крови позволяет диагностировать на ранних стадиях многие заболевания. Направление на исследование ревматоидного фактора в крови обычно дает травматолог, ревматолог или иммунолог, так как самая распространенная болезнь, которую диагностируют с помощью этого анализа – ревматоидный артрит.

Методы определения ревматоидного фактора в анализе крови

Существует несколько лабораторных методик для определения ревматоидного фактора в анализе крови. Чаще всего используются количественные методы определения РФ, но для скрининга может проводиться качественное исследование – латекс-тест.

Латекс-тест – вид реакции агглютинации (склеивания и выпадения в осадок частиц с адсорбированными на них антигенами и антителами), который основан на способности иммуноглобулинов ревматоидного фактора реагировать с иммуноглобулинами класса G. Для проведения теста используется реактив, который содержит иммуноглобулин G, адсорбированный на частицах латекса. Наличие агглютинации говорит о присутствии ревматоидного фактора в сыворотке крови (качественный тест). Несмотря на то, что этот метод анализа быстрее и дешевле других, его используют сравнительно редко, так как он не дает информации о количестве ревматоидного фактора в крови.

Другой методикой, использующей реакцию агглютинации, является тест Ваалера – Розе, при котором ревматоидный фактор сыворотки крови реагирует с эритроцитами барана. В настоящее время этот метод используется редко.

Для расшифровки результатов анализа необходимо учитывать не только возраст, но и индивидуальные особенности организма, а также метод исследования, поэтому интерпретировать результаты и ставить диагноз может только врач.

Более точными и информативными являются нефелометрия и турбидиметрия – методы, позволяющие определить не только наличие ревматоидного фактора в сыворотке крови, но и его концентрацию в разных разведениях (количественный тест). Суть методов состоит в измерении интенсивности светового потока, который проходит через плазму крови с взвешенными частицами. Высокая мутность означает высокое содержание ревматоидного фактора. Нормы зависят от особенностей теста в конкретной лаборатории.

Чаще всего используется ИФА (иммуноферментный анализ). Он показывает не только уровень ревматоидного фактора, но и соотношение видов иммуноглобулинов, которые в него входят. Этот метод считается самым точным и информативным.

Анализ крови на ревматоидный фактор - что это такое?

Для исследования крови на ревматоидный фактор производится забор крови из вены. Перед тем, как сдавать кровь, необходимо исключить прием алкоголя, курение и физические нагрузки за 12 часов до анализа. В этот период не следует пить чай, кофе и сладкие напитки, а вот чистая вода будет только полезна. Желательно на время отменить прием любых лекарств. Если это невозможно, следует сообщить врачу, какие именно лекарства принимались в последнее время. Анализ сдается натощак, перед забором крови желательно отдохнуть в течение 10–15 минут.

Как правило, РФ исследуется в комплексе с двумя другими показателями – С-РБ (С-реактивным белком) и АСЛ-О (антистрептолизином-О). Определение этих показателей называют ревматоидными пробами, или ревмопробами.

Направление на исследование ревматоидного фактора в крови обычно дает травматолог, ревматолог или иммунолог.

Кроме ревматоидных проб, для диагностики системных заболеваний и других иммунологических патологий могут назначаться следующие дополнительные исследования:

общий анализ крови с развернутой лейкоцитарной формулой – позволяет выявить воспалительный процесс в организме и опухоли системы кроветворения;
СОЭ (скорость оседания эритроцитов) – ее повышение также является маркером воспаления;
биохимический анализ крови – в частности, значение имеют уровень мочевой кислоты, количество общего белка и соотношение его фракций;
анализ на анти-ССР (антитела против циклического цитрулинового пептида) – позволяет подтвердить диагноз ревматоидного артрита;
определение антител к клеточным органеллам.

Норма ревматоидного фактора

В норме ревматоидный фактор в крови отсутствует либо определяется в очень низкой концентрации. Верхняя граница нормы одинакова для мужчин и женщин, но меняется в зависимости от возраста:

дети (меньше 12 лет) – до 12, 5 МЕ/мл;
12–50 лет – до 14 МЕ/мл;
50 лет и старше – до 17 МЕ/мл.

Однако для расшифровки результатов анализа необходимо учитывать не только возраст, но и индивидуальные особенности организма, а также метод исследования, поэтому интерпретировать результаты и ставить диагноз может только врач.

Высокий РФ в анализе крови – что это может означать?

Если исследование показало, что ревматоидный фактор в анализе крови повышен, значит, есть основания предполагать системные (аутоиммунные) патологии, т. е. связанные с поражением соединительной ткани и хроническим воспалительным процессом. К ним относятся:

ревматоидный артрит (РА) – заболевание соединительной ткани, в основном затрагивающее мелкие суставы. Форма РА, при которой в сыворотке крови повышается ревматоидный фактор, называется серопозитивной;
системная красная волчанка – заболевание, при котором поражаются сосуды, что приводит к характерным высыпаниям;
болезнь Бехтерева (анкилозирующий спондилоартрит) – аутоиммунное поражение суставов, при котором больше всего страдает позвоночник. Заболевание при длительном течении приводит к деформации позвоночника и сутулости;
системная склеродермия – характеризуется поражением кожи, сосудов, внутренних органов и опорно-двигательного аппарата;
саркоидоз – заболевание, при котором в разных органах (чаще всего в легких) образуются гранулемы – очаги воспалительного процесса, которые выглядят как плотные узелки и состоят из фагоцитирующих клеток;
дерматомиозит (болезнь Вагнера) – патология, при которой поражается кожа, сосуды, скелетная и гладкая мускулатура;
синдром Шегрена – заболевания соединительной ткани, при котором главными очагами поражения являются слюнные и слезные железы, что приводит к сухости глаз и ротовой полости. Синдром Шегрена может возникать первично или как осложнение других заболеваний, например, ревматоидного артрита.

Ревматоидный фактор образуется в результате чрезмерно высокой иммунологической активности плазматических клеток в суставной ткани.

Кроме того, повышение ревматоидного фактора может быть признаком следующих заболеваний:

васкулиты – генерализированное поражение сосудов, которое может развиваться при многих патологиях (болезнь Такаясу, болезнь Хортона и другие);
септический эндокардит – бактериальная инфекция внутренней оболочки сердца, покрывающей его полости и клапаны. Может приводить к сердечной недостаточности и развитию пороков сердца;
инфекционный мононуклеоз – заболевание, которое вызывается герпесоподобным вирусом Эпштейна – Барр. Протекает остро и сопровождается лихорадкой, поражением внутренних органов и появлением в крови атипичных мононуклеарных клеток;
туберкулез, лепра (болезнь Хансена) – инфекционные заболевания, которые вызываются микобактериями;
вирусные гепатиты в активной фазе;
малярия, лейшманиоз, трипаносомоз и другие паразитарные заболевания;
онкологические заболевания – хронический лимфолейкоз, макроглобулинемия Вальденстрема и злокачественные новообразования, дающие метастазы в синовиальную оболочку суставов.

Изредка (у 2–3% взрослых и 5–6% пожилых людей) повышение ревматоидного фактора в крови обнаруживается у здоровых людей, однако в большинстве случаев это служит признаком серьезной патологии, поэтому является поводом для неотложного обращения за врачебной помощью.

Видео с YouTube по теме статьи:

Показания к применению

Выявление и определение концентрации РФ в сыворотке крови человека для диагностики ревматоидного артрита, изучения динамики болезни и контроля проводимой терапии.

Действующее вещество

Лекарственная форма

Набор диагностический многокомпонентный

Противопоказания

Как применять: дозировка и курс лечения

Отбор и хранение образцов

Использовать свежую свободную от примесей сыворотку крови.

Хранить образцы не более 72 часов при 2-8°С. Длительное хранение допускается в замороженном виде при температуре не выше минус 20°С. Не подвергать образцы повторному замораживанию и оттаиванию.

Исследуемая сыворотка или плазма должна быть прозрачной и не содержать взвешенных частиц. При необходимости отцентрифугировать недостаточно прозрачные образцы перед анализом. Использование гемолизированных образцов не допускается.

Подготовка реагентов и материалов

Выдержать все компоненты диагностикума и исследуемые образцы не менее 15 мин при комнатной температуре.

Жидкие контрольные сыворотки и глицин-фосфатный буферный раствор готовы к применению.

Подготовить дополнительное оборудование:

- пластину стеклянную, или тестовый слайд;

- микропипетки автоматические или пипетки-мешалки пластиковые (на 50 мкл);

- палочки стеклянные или пипетки-мешалки пластиковые;

- планшет для серологических исследований;

- часы или таймер.

1) Все компоненты диагностикума содержат в качестве консерванта токсичное вещество - азид натрия; при использовании диагностикума необходимо соблюдать правила безопасной работы с токсичными материалами.

2) При работе с исследуемыми образцами сыворотки необходимо обращаться как с потенциально инфицированными материалами.

Нанести на стеклянную пластину (в первую ячейку тестового слайда) 50 мкл К+, рядом, с интервалом 3 см (или в соседнюю ячейку слайда) - 50 мкл К-. На оставшееся место (в свободные ячейки) с аналогичным интервалом нанести по 50 мкл исследуемых образцов. Исследуемую сыворотку не разводить!

Легким встряхиванием флакона перемешать ДРФ-латекс и добавить по 50 мкл в каждую ячейку с образцом. Плоским концом пипетки-мешалки (стеклянной палочкой) тщательно перемешать каждую каплю, распределив реакционную смесь на площади диаметром около 2 см (по всей площади ячейки). Для каждой капли использовать новую пипетку-мешалку (стеклянную палочку).

Покачивать пластину (слайд) вручную или на механическом ротаторе в течение 2 минут, после чего сразу произвести учет результатов реакции.

В лунках планшета приготовить следующие разведения исследуемого образца в глицин-солевом буфере: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и 1:64.

Нанести по 50 мкл каждого разведения исследуемого образца, а также по 50 мкл К+ и К- на стеклянную пластину с интервалом 3 см (или в соответствующие ячейки слайда).

Легким встряхиванием флакона перемешать РФ-латексный реагент и добавить по 50 мкл в каждую ячейку с разведением исследуемого образца и с контрольными образцами, после чего перемешать каждую каплю, как указано выше для качественного определения.

Покачивать пластину (слайд) вручную или на механическом ротаторе в течение 2 минут, после чего произвести учет результатов реакции.

Учет результатов проводить визуально на темном фоне при хорошем освещении.

Учет реакции позднее 2 мин после ее начала может дать искаженные результаты за счет неспецифической агглютинации частиц.

Положительной РАЛ считается наличие агглютинации латекса (появление зернистости или различимых частиц).

Отрицательной РАЛ считается отсутствие агглютинации (сохранение равномерно мутного фона).

Результаты реакции с исследуемыми образцами учитываются только при положительной реакции с К+ и отрицательной реакции с К-.

Положительная реакция в качественном определении свидетельствует о наличии РФ в образце в концентрации не менее 8 МЕ/мл..

Отрицательная реакция в качественном определении свидетельствует, что концентрация РФ находится в норме.

Все образцы, давшие положительную реакцию, подлежат дополнительному исследованию для определения концентрации РФ.

Минимальная концентрация РФ, при которой наблюдается положительная реакция, составляет 8 МЕ/мл. Величина, обратная максимальному разведению, давшему положительную реакцию, является титром РФ.

Таким образом, концентрация РФ в исходном образце сыворотки (плазмы) крови рассчитывается по формуле:

Концентрация РФ(МЕ/мл) = 8(МЕ/мл) х Титр Пример: макс, разведение = 1:32; титр = 32; концентрация РФ(МЕ/мл) = 8x32 = 256.

Концентрация РФ при ревматоидном артрите коррелирует с активностью процесса, что делает этот показатель полезным для установления стадии и прогноза течения заболевания. Исследование образцов, отобранных повторно через определенные периоды времени, можно применять для наблюдения за результатами лечения.

В высоких концентрациях РФ характерен для ревматоидного артрита. Указанием на возможное наличие его активной формы служит уровень РФ в сыворотке или плазме крови от 120 МЕ/мл и выше. РФ может выявляться также (в основном в более низких титрах) при некоторых других заболеваниях, таких как системная красная волчанка, болезнь Шегрена, бактериальный эндокардит, ряде хронических инфекционных процессов и у отдельных здоровых людей. В то же время отрицательная реакция на РФ не может исключить наличие у пациента ревматоидного артрита.

Фармакологическое действие

Диагностикум латексный для определения ревматоидного фактора жидкий (РФ-латекс-тест) представляет собой 1,5 % суспензию монодисперсного полистирольного латекса с иммобилизованным на поверхности его частиц иммуноглобулином сыворотки крови человека. Суспензия белого цвета, при хранении разделяется на белый осадок, легко разбивающийся при встряхивании, и прозрачную или слегка опалесцирующую надосадочную жидкость.

Диагностикум выпускается в комплекте с глицин-солевым буферным раствором (БР) - прозрачная бесцветная жидкость, положительной контрольной сывороткой (К+) и отрицательной контрольной сывороткой (К-) - прозрачные или желтоватого цвета жидкости.

Принцип работы РФ-латекс-теста основан на взаимодействии ревматоидного фактора (РФ), представляющего собой аутоантитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина G человека, с IgG, находящимся на поверхности латексных частиц. Результатом взаимодействия является агглютинация латекса с образованием мелких или крупных зерен, различимых визуально.

Чувствительность диагностикума позволяет обнаруживать ревматоидный фактор в концентрации 8 международных единиц (МЕ)/мл в неразведенной сыворотке крови человека.

Историческая справка

Впервые метод реакции латекс-агглютинации (РЛА) был предложен в 1956 году и использован для определения ревматоидного фактора с помощью полистирольных латексных микросфер с узким распределением частиц по размеру, покрытых гамма-глобулином человека. Сообщалось, что взаимодействие антигенов, находящихся в сыворотке крови пациента, с гамма-глобулином, адсорбированным на поверхности гидрофобных микросфер суспензии, привело к агглютинации полимерных частиц и образованию крупных агломератов, легко различимых невооруженным глазом. В последующие годы метод РЛА получил широкое распространение, как в клинических диагностических тестах, так и в биохимических и иммунологических исследованиях. Особенно широкое применение РЛА наблюдается в инфекционной патологии.

Описание метода реакции латексной агглютинации

Реакция латексной агглютинации используется в клинической химии в течение многих лет как простой, быстрый и недорогой метод определения белков, гормонов и других биологически активных соединений. Белки, являясь поливалентными антигенами, вступают в реакцию с антителами с образованием иммунных комплексов, или агглютинатов. Как правило, иммунные комплексы слабо визуализируются не только невооруженным глазом, но и с помощью фотометрических методов. Использование дисперсионных полимеров (латексов), сенсибилизированных антителами или антигенами, позволяет значительно облегчить детекцию реакции агглютинации, которая в этом случае называется реакцией латексной агглютинации.

Носители для метода реакции латексной агглютинации

Наиболее часто для получения диагностических препаратов используют полистирольные микросферы, несущие на своей поверхности различные функциональные группы (карбоксильные, эпоксидные, альдегидные и др.) и полиакролеиновые микросферы, содержащие на своей поверхности альдегидные функциональные группы, способные вступать в реакцию с первичными аминогруппами, образуя основание Шиффа Применение инертных синтетических носителей для иммобилизации антител (или антигенов) является широко распространенным методическим подходом в иммуноанализе.

Полимерные микросферы с узким распределением частиц по размерам и функциональными группами на поверхности представляют большой интерес для биологии и медицины, в частности для использования в качестве носителей биолигандов вместо эритроцитов при создании диагностических тест-систем на различные виды заболеваний. Замена эритроцитов на полимерные микросферы является решением проблем, связанных с недостатками эритроцитарных диагностикумов, а именно:

1) эритроциты получают из крови животных, содержание которых трудоемко и дорогостояще
2) эритроциты содержат много антигенных детерминант, которые реагируют с компонентами сывороток человека и животных, что обуславливает протекание неспецифических реакций и приводит к ложноположительным результатам
3) свойства эритроцитов часто зависят от источника и способа их выделения
4) диагностикум на основе клеток одних и тех же животных не дает постоянный титр и после длительного хранения не сохраняет прежнюю степень агглютинации.

Для замены эритроцитов, полимерные микросферы должны обладать определенными свойствами: скорость седиментации 3 – 8 мм/час, диаметр частиц порядка 5 мкм., агрегативная устойчивость в воде и буферных растворах высокой ионной силы, наличие в поверхностном слое функциональных групп, доступных для ковалентного связывания с функциональными группами белков.

Одним из преимуществ применения полимерных микросфер в качестве носителей биолигандов является возможность получения полимерных частиц с заданным комплексом свойств. Для устранения проблем, связанных с применением эритроцитов, используются полимерные микросферы с определенными свойствами:

1) монодисперсное распределение по размерам
2) сферическая форма
3) устойчивость к электролитам в широком интервале pH
4) способность присоединять биологические макромолекулы без значительного изменения их функциональной активности
5) воспроизводимые свойства и характеристики

Однородность частиц по размерам позволяет достаточно точно определить площадь поверхности носителя и установить степень ее покрытия биолигандом, кроме того, она обусловливает сходный характер их поведения во время агглютинации, что облегчает “прочтение” результатов реакции латекс-агглютинации(РЛА). Впервые, для создания диагностических тест-систем были использованы полистирольные микросферы. Полистирол, благодаря своей оптической прозрачности, высокой адсорбционной способности, прочности и хорошей воспроизводимости свойств, успешно используется в качестве носителя.

Главной проблемой полимерных микросфер, используемых при создании диагностикумов является неспецифическая агглютинация(частицы отрицательного контроля образуют ореол из частиц вокруг центра дна лунки) , причины которой и факторы ее вызывающие во многом еще не ясны. Наибольшее распространение в качестве способов уменьшения неспецифического связывания нашли значительное разбавление образцов, добавление детергентов, экранирование поверхности частиц низкомолекулярными белками. Однако применение данных методов чаще всего приводит к уменьшению чувствительности и точности реакции латексной агглютинации.

При тщательной отработке методики получения латексных диагностикумов, соблюдении оптимальных условий их приготовления и постановки самой реакции, РЛА может приближаться к самым современным иммунологическим методам.

РЛА сходна с РНГА по принципу сорбции антител на поверхности более крупных частиц.

Преимущества метода РЛА

Реакция РЛА — экспресс-метод диагностики инфекционных болезней (время проведения — до 10 мин, возможно обнаружение антигена в небольшом объёме исследуемого материала). Для постановки РЛА используют стеклянные или темнопольные пластины.

РЛА в качестве сигнального экспресс-теста для выявления антигенов микроорганизмов удобна при использовании в практических лабораториях, а также при проведении массовых обследований. К преимуществам РЛА, как метода серологической диагностики бактериальных и вирусных инфекций, можно отнести следующие моменты:

- высокую специфичность и чувствительность;
- отсутствие необходимости в сложной аппаратуре для постановки и реакции и регистрации результатов;
- сведение до минимума количества компонентов реакции;
- возможность получения инертных носителей с заданными характеристиками.

Относительная дешевизна метода реакции латексной агглютинации (РЛА), простота и возможность постановки теста практически в любых условиях делают его очень удобным как при одиночных, так и при массовых исследованиях даже в небольших клинических мало оборудованных лабораториях.

Применение метода реакции латексной агглютинации

РЛА применяют для индикации антигенов Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типа b( Neisseria meningitidis в СМЖ, выявления стрептококков группы А в мазках из зева, в диагностике сальмонеллёзной инфекции, иерсиниозов и других заболеваний. Чувствительность метода — 1-10 нг/мл (103-106 бактериальных клеток в мл). Недостаток метода — возможность получения артефактов, особенно в присутствии ревматоидных факторов и продуктов фибринолиза плексы с участием комплемента — преципитаты. Простейший пример качественной реакции преципитации — образование непрозрачной полосы преципитации в пробирке на границе наслоения антигена на иммунную сыворотку (реакция кольцепреципитации). Реакцию преципитации проводят в гелях агара, агарозы. Их используют для выявления и изучения свойств разнообразных антигенов и антител.

Материалы и реагенты для метода реакции латексной агглютинации

лаборатория клинического анализа

Обратная связь
FAQ

О нас
Наша миссия
Врачам
Пациентам
Услуги
СТАТЬИ
СОБЫТИЯ
Документы
Контакты

Ревматоидный артрит, ревматоидный фактор

Теория

Ревматоидный фактор (РФ) представляет собой аутоантитела классов IgG, IgM и IgA, реагирующие с определенным рецептором на Fc фрагменте молекулы IgG.

Он образуется в результате стимуляции иммунокомпетентных клеток модифицированным IgG или за счет взаимодействия экзогенного перекрестно реагирующего антигена при нарушении иммунорегуляции.

Таким образом, различного рода инфекция может вызвать образование аутоантител, представляющих ревматоидный фактор.

Вырабатываемый ревматоидный фактор в итоге реагирует с IgG, образуя комплексы IgG-РФ.

Комплексы IgG-РФ не фагоцитируются, откладываются в периваскулярном пространстве, стимулируя клеточно-опосредованные цитотоксические реакции, что приводит к возникновению воспаления.

Повышение уровня РФ в крови характерно для ревматоидного артрита (до 90% больных). Выявление РФ при наличии соответствующей клинической картины подтверждает диагноз ревматоидного артрита (РА).

Определение РФ

РФ стандартным латекс-тестом может быть обнаружен в низких титрах при инфекционном мононуклеозе, острых воспалительных процессах, СКВ с поражением суставов, синдроме Шегрена, саркоидозе, гепатите, циррозе, и т.д.

Наибольшее клиническое значение имеет определение РФ IgM, которое выполняют с помощью латекс-агглютинации (с модифицированным IgG человека), или тестом Ваалер-Розе (с пространственно доступным IgG кролика). Реакция Ваалер-Розе — менее чувствительна, но более специфичный метод определения РФ при ревматоидном артрите.

Определяемый показатель	Метод/тест-набор	Вид образца	Результаты анализа	Нормальные величины (ед. акт-ти)
Ревматоидный фактор
Латексный тест	Агглютинация/RefaTex, Moldova	сыворотка	отсутствие реакции
Подтверждающий латекс-тест	Агглютинация/RefaTex-Conf, Moldova	сыворотка	отсутствие реакции
Реакция Ваалер-Розе (с учетом титра нормальных антител)	Агглютинация/DAC-Spectromed, Moldova	сыворотка	отсутствие реакции
Нормальные антитела	Агглютинация/IM-Er-DAC, Moldova	сыворотка	титр до 1:32
Комбинированный диагностикум (с учетом титра нормальных антител)	Агглютинация/Refa-DAC, Moldova	сыворотка	отсутствие реакции

Нам часто задают вопрос: зачем мы делаем так много тестов на ревматоидный фактор? Неужели недостаточно сделать просто латекс-тест, который выполняется в остальных лабораториях? Ведь эти дополнительные тесты повышают стоимость блока. Не перегружаем ли мы специалистов ненужной им диагностической информацией?

Чтобы ответить на эти вопросы, позвольте описать каждый из приведенных тестов, чтобы специалисты сами могли составить свое мнение и убедиться в необходимости их проведения.

Латекс-тест в особых представлениях не нуждается. Он выполняется во всех лабораториях, и особо ценим лаборантами за то, что требует всего несколько минут для того, чтобы его сделать. Вместе с простотой постановки, на чем все достоинства этого метода и заканчиваются, данный метод обладает рядом существенных недостатков.

Во-первых, невысокая выявляемость РФ . По нашим данным, латекс-тест является положительным только у трети пациентов, у которых есть РФ. У двух из трех пациентов, у которых РФ выявляется другими методами, латекс-тест отрицателен. Это объясняется невысокой чувствительностью (20 МЕ/мл, тогда как метод ИФА, например, выявляет РФ с активностью 1-1,5 МЕ/мл), и разнообразием форм РФ, которые могут реагировать как с рецептором на Fc-фрагменте IgG человека, так и с IgG кролика. А второй тип РФ в латекс-тесте не выявляется.

Во-вторых, неспецифичностью самого латекс-теста . В крови пациентов, особенно с системными заболеваниями, циркулируют наряду с РФ и антииммуноглобулины (АИГ). Отличие АИГ от РФ, состоит в том, что если РФ реагирует только с рецептором на Fc-фрагменте IgG человека, то АИГ реагируют с антигенными детерминантами, расположенными на всей поверхности молекулы IgG, как на Fc- так и на Fab-фрагменте. Но проблема состоит в том, что АИГ и РФ в латекс-тесте дают одинаковую реакцию . Поэтому, получая результаты латекс-теста на РФ, врач, никогда не знает, с чем он имеет дело. То ли с РФ, то ли с АИГ. Это и является основой мнения о не специфичности выявления РФ при РА, и о том, что РФ выявляется при многих других заболеваниях. А в этих случаях как раз выявляться могут не РФ, а именно АИГ.

Первым компонентом этого блока является традиционный латекс-тест. Но реагент, используемый в этом тесте, отличается от обычных наборов. Его чувствительность составляет от 1,5 до 3 МЕ/мл, приближаясь к чувствительности метода ИФА. По нашему убеждению, РФ в сыворотке здоровых людей не содержится. То, что обнаруживают у практически здоровых лиц является либо АИГ, либо является РФ, который свидетельствует о доклиническом этапе развития заболевания. По данным национальных программ, проводимых в Исландии и Финляндии, у 45-70% практически здоровых лиц с выявленным РФ, в течение последующих пяти лет развивался РА. Поэтому, чем более чувствительный тест используется в диагностике РФ, тем раньше можно выявить начинающуюся патологию.

Вторым компонентом является уникальный подтверждающий тест. Этот тест решает проблему перекрестного выявления АИГ и РФ. В отличие от латекс-теста на РФ, в этом методе используются нативные молекулы IgG, с недоступным для РФ рецептором на Fc-фрагменте. Поэтому истинный РФ не дает реакцию с подтверждающим тестом.

Если сыворотка пациента положительна в латекс-тесте, но отрицательна в подтверждающем тесте, то выявлен истинный РФ.

Если же сыворотка положительна как в латекс-тесте, так и в подтверждающем тесте, то в сыворотке могут присутствовать как РФ, так и АИГ. Здесь нужно обратить внимание на титры в обоих тестах.

Если титр латекс-теста равен или меньше титра подтверждающего теста, то в сыворотке, по-видимому, нет РФ, а реакция обусловлена АИГ.

Если титр латекс-теста выше титра подтверждающего теста, то в сыворотке, присутствует как РФ, так и АИГ.

Таким образом, используя эти два теста можно точно определить, что именно содержит исследуемая сыворотка.

Третьим компонентом блока является тест Ваалер-Розе. Он позволяет выявить те фракции РФ, которые не реагируют с IgG человека, а только с IgG кролика. Пациентов с таким РФ не так много, но их тоже нельзя пропустить.

Четвертым компонентом блока является комбинированный диагностикум на основе модифицированного IgG человека с доступным для РФ рецептором на Fc-фрагменте, и пространственно ориентированным Fc-фрагментом IgG кролика также доступным для взаимодействия с РФ. Такая уникальная комбинация IgG двух видов позволяет выявлять даже такие РФ, которые не выявляются при отдельном тестировании латекс-тестом и тестом Ваалер-Розе.

Пятым компонентом блока является тест для определения титра нормальных антител. Он необходим для учета титров комбинированного диагностикума и теста Ваалер-Розе, определения состояния неспецифической иммунологической резистентности, а также для исключения инфекционного мононуклеоза.

Для иллюстрации вышесказанного, позвольте привести следующие данные. Всего было обследовано 520 сывороток больных артропатиями. Среди больных были пациенты с ревматоидным артритом, ревматизмом, системными коллагенозами, тонзиллитами с суставными проявлениями, подагрой и другими артропатиями. Всем пациентам проводили определение ревматоидного фактора (РФ) тремя методами: латекс-тестом, реакцией Ваалер-Розе, Refa-DAC и Refa-DAC + латекст-тест.

При тестировании сывороток пациентов с артропатиями РФ был выявлен у 314 человек, что составило 60,4% всех пациентов. Дальнейший анализ будет проводиться с учетом этой цифры. РФ, реагирующий с модифицированным IgG человека (латекс-тест), был выявлен у 38,3%, реакция Ваалер-Розе была положительна у 28,8%, и методом с комбинированным тестом, РФ выявлялся у 77,7% пациентов. При сочетании различных методов выявления РФ были получены следующие результаты. Латекс-тест и реакция Ваалер-Розе выявляли 61,8%, латекс-тест с комбинированным диагностикумом выявляли 97,8%, и реакцией Ваалер-Розе и комбинированным диагностикумом выявляли 83,8% результатов из всех положительных случаев.

Кроме определения РФ в крови, мы можем определить его активность и в синовиальной жидкости. Кроме этого, по специальному запросу мы определяем биологическую активность РФ.

Заключение

Как следует из приведенных выше результатов, ни один используемый метод не позволяет выявить все случаи положительного РФ у пациентов с артропатиями. Этот диапазон колеблется от 28,8% методом Ваалер-Розе до 77,7% комбинированным диагностикумом. Полноценную диагностику можно провести, только используя методы всего блока.

Читайте также: