Тест-системы для ифа на клещевой энцефалит

В настоящее время диагностика клещевых инфекций проводится в основном по сыворотке крови методом ИФА (иммуноферментный анализ) с использованием отечественных тест-систем. Остальные методы, регистрирующие иммунный ответ организма (РНГА, РТГА, РСК), занимают долю на рынке, меньшую чем 5%.

Исследования методом ПЦР проводятся с использованием экспериментальных тест-систем, незарегистрированных в установленном порядке[4]

Тест – системы для диагностики описторхоза

Существует несколько методов диагностики описторхоза. Сравнение их эффективности приведено в таблице.

Сравнительный анализ методов определения O. Felineus

Методы	Аналитическая чувствительность	Специфич-ность	Инвазивность метода	Квалификация персонала	Диагностика на ранней стадии
Микроскопия дуоденального содержимого	10 5 яиц в мл	79 – 90%	высокая	высокая	нет
Копроовоскопия фекалий	10 5 яиц в мл	79 – 90%	неинвазивный метод	высокая	нет
ИФА	-	60 – 78% *	средняя	средняя	да **
ПЦР	400 копий ДНК в мл (30-40 яиц)	100%	неинвазивный метод	средняя	да

*- при использовании высококачественных тест-систем;

** - для каждой стадии заболевания требуется отдельное исследование.

Единственным средством подтверждения диагноза описторхоза в настоящее время является паразитологическая диагностика (копроовоскопия и микроскопия дуоденального содержимого), основанная на выявлении яиц гельминтов в фекалиях и/или дуоденальном содержимом, начиная с четвертой недели после заражения.

Тест системы для диагностики онкозаболеваний

В настоящее время на рынке есть ИФА тест-системы для диагностики белковых онкомаркеров, которые используются в комплексной диагностике онкозаболеваний, на стадии лечения заболевания и мониторинга состояния пациента после лечения. Этот метод информативен при мониторинге течения заболевания, эффективности проводимого лечения, получении прогностической информации при решении вопроса о прекращении или продолжении консервативной терапии больных и т.д., однако такой подход не позволяет выявлять опухолевые процессы на ранней стадии.

Цены на ИФА тест системы высокие, порядка двадцати – тридцати тысяч рублей на одно определение.

Что касается ПЦР, то существуют тест-системы для определения наследственной предрасположенности человека к онкологическим заболеваниям. ПЦР-анализ по выявлению мутантных генов в ДНК плазмы крови является предметом научных исследований во всем мире и не внедрен в практику. В России ПЦР-анализы некоторых мутаций проводится в научно-исследовательской лаборатории Военно-медицинской академии в Санкт-Петербурге, однако также на уровне экспериментов. [5]

В качестве альтернативного конкурента следует упомянуть ядерно-магнитный резонанс, однако это чрезвычайно дорогостоящий метод, и скрининг населения с его использованием наладить невозможно. Все остальные методы диагностики – биохимия крови, ультразвук, рентгенография, исследование биопсии ткани – возможны только при первых клинических проявлениях заболевания, что исключает раннюю диагностику.

Планируемые рыночные позиции компании

После регистрации тест-систем в Росздравнадзоре в ноябре 2017 года, в 2018гг. планируется захват 36% рынка в 4-х регионах к концу эпидсезона 2018 года.

В 2019 году планируется захватить около 40% рынка по клещевым инфекциям, 1.4% рынка по скринингу описторхоза, около 2% рынка по скринингу онкологических заболеваний и 5% - по диагностике онкологических заболеваний.

Ниже в таблицах приведены данные по емкости рынка и прогнозам продаж по годам в каждом из сегментов в натуральном и денежном выражении, а также планируемая к захвату доля рынка по каждому из сегментов.

Направление	Емкость рынка руб.
Диагностика клещевого энцефалита	25 млн.
Диагностика клещевого боррелиоза	25 млн.
Диагностика описторхоза	700 млн.
Скрининговые исследования населения на предрасположенность к онкозаболеваниям	3.48 млрд.
Ранняя диагностика онкологических заболеваний	759 млн.
Мониторинг хода течения онкозаболеваний	180 млн.
Рынок тест – систем всего	5.169 млрд.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Исследование направлено на выявление антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза (болезни Лайма) в исследуемых клещах. Применяется в целях своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактики и проведения целенаправленного патогенетического лечения.

Какие тесты входят в данный комплекс:

• Клещевой энцефалит (ВКЭ), антиген
• Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), определение РНК

Иксодовый клещ; клещевой энцефалит; вирус клещевого энцефалита; системный клещевой боррелиоз (болезнь Лайма), клещевой менингополиневрит, клещевой боррелиоз, иксодовый боррелиоз, хроническая мигрирующая эритема, эритемный спирохетоз, синдром Банноварта.

Синонимы английские

Ixodes tick; tick-borne encephalitis; tick-borne encephalitis virus; tick-borne borreliosis (Lyme borreliosis); Borrelia burgdorferi.

• Иммуноферментный анализ: Клещевой энцефалит (ВКЭ), антиген
• Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), определение РНК

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании:

Клещевой энцефалит – это вирусное природно-очаговое трансмиссивное заболевание, характеризующееся преимущественным поражением центральной нервной системы. Возбудителем заболевания является РНК-содержащий вирус, относящийся к роду Flavivirus семейства Togaviridae, группы Arboviruses. Инфекция носит сезонный (весенне-летний) характер и передается преимущественно с укусом клещей, при раздавливании внедрившегося насекомого, также возможен алиментарный путь передачи через инфицированное сырое молоко коров и коз. Основным резервуаром и переносчиком вируса являются клещи Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus. Дополнительным резервуаром вируса являются грызуны, дикие животные и птицы. Заражение клеща происходит при укусе и кровососании инфицированных животных. При этом вирус проникает в органы и ткани клеща, преимущественно в слюнной аппарат, кишечник, половой аппарат, и сохраняется в течение всего периода жизни насекомых. Возбудитель клещевого энцефалита подразделяется на три подвида: дальневосточный, центрально-европейский и сибирский.

Инкубационный период заболевания длится от 3 до 21 дней, в среднем 10-14 дней. Клинические проявления носят разнообразный характер. Начальная фаза заболевания характеризуется лихорадкой, головной болью, миалгиями, возможно присоединение тошноты, рвоты, светобоязни. Далее развивается фаза неврологических расстройств, при которой происходит поражение центральной и периферической нервных систем. В зависимости от выраженности неврологических расстройств выделяют следующие формы заболевания: лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, менингоэнцефалополиомиелитическую и полирадикулоневритическую, двухволновый менингоэнцефалит. По степени тяжести инфекция может протекать в легкой, средней или тяжелой форме, что влияет на длительность заболевания, выраженность клинической симптоматики и варианты исхода болезни. В завершающую фазу заболевания может отмечаться выздоровление с угасанием неврологической симптоматики, хронизация патологического процесса или гибель больных. Возможно длительное латентное вирусоносительство, персистенция или хроническая форма инфекции.

Системный клещевой боррелиоз, или болезнь Лайма, – природно-очаговое трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является грамотрицательная бактерия Borrelia burgdorferi семейства Spirochaetaceae. Заражение человека может происходить после укусов иксодовых клещей, инокуляции боррелий со слюной клеща, при раздавливании внедрившегося насекомого, также возможна трансплацентарная передача возбудителя от матери к плоду. Основным "резервуаром" и переносчиком вируса являются клещи Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus, Ixodes scapularis. Чаще всего заражение происходит в весенне-летний период активности клещей.

Инкубационный период заболевания может длиться от 3 до 32 дней, по данным некоторых авторов до 60 дней. Клещевой боррелиоз имеет разнообразные клинические проявления. В первую фазу заболевания, фазу локальной инфекции, отмечаются лихорадка, интоксикация, головные боли, распространенная "мигрирующая" эритема на месте контакта клеща с кожей больного, регионарный лимфаденит. В фазу гематогенного и лимфогенного диссеминирования боррелий отмечается поражение органов и систем с развитием разнообразной клинической картины заболевания. Отмечается поражение опорно-двигательной, нервной, сердечно-сосудистой систем, глаз, печени, почек, кожи. При этом развивается клиническая картина невритов, радикулитов, энцефалитов, артритов, конъюнктивитов, миокардитов, появляется сыпь вне места укуса клеща. При прогрессировании заболевания, его осложнении и несвоевременном применении лечения могут развиться следующие процессы: неврологические нарушения в виде менингита, менингоэнцефалита, энцефалита и энцефаломиелита, тяжелые поражения сердца, рецидивирующие и/или хронические артриты. Возможно развитие непрерывного или рецидивирующего течения болезни, хронических форм поражения нервной системы.

В связи с тем что основным "резервуаром" и переносчиком клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза являются иксодовые клещи, в лабораторной диагностике и выявлении возбудителей данных заболеваний используется непосредственное исследование клещей. Возможно обследование экземпляров клещей из природных очагов их распространения в целях выявления наличия возбудителей, определения процента инфицированных клещей на обследуемых территориях, количественного содержания вируса в случае клещевого энцефалита. Необходимым является исследование отдельных экземпляров клещей при их укусе человека, инокуляции вируса или боррелий со слюной клеща, при раздавливании внедрившегося насекомого. Это важно для определения возможного инфицирования клеща, своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактике и проведении целенаправленного патогенетического лечения.

К современным методам диагностики возбудителей относятся методы твердофазного иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Они позволяют определить антиген возбудителя даже в минимальном объеме исследуемого биоматериала, характеризуются быстротой получения результата и обладают высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности. Особенностью ПЦР-метода является возможность выявления генетического материала даже при малом его содержании в исследуемом биологическом материале. Данные методы позволяют в кратчайшие сроки определить наличие или отсутствие инфицированности клещей вирусом клещевого энцефалита и/или возбудителем клещевого боррелиоза. Но при отрицательных результатах исследований и сохранении подозрения на заболевания, а также при развитии клинической симптоматики рекомендуется исследование крови пациентов. При этом возможно определение антител классов IgM и/или IgG к антигенам возбудителей, а также выявление генетического материала возбудителей методом ПЦР.

Для чего используется исследование?

• Для комплексной лабораторной диагностики клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
• для определения инфицированности исследуемых клещей;
• для определения содержания антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза в исследуемых клещах;
• для определения возможного инфицирования клеща в целях своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактики и проведении целенаправленного патогенетического лечения;
• для определения наличия и процента инфицированности клещей на исследуемой территории в природных очагах и в сезон распространения насекомых.

Когда назначается исследование?

• При обследовании клеща после его укуса человека, раздавливания внедрившегося насекомого, извлечения клеща, в том числе в специализированном стационаре;
• при обследовании клеща в целях диагностики антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
• при обследовании клещей в целях определения наличия и процента инфицированности клещей на исследуемой территории в природных очагах и в сезон распространения насекомых.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• инфицированность исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита;
• инфицированность исследуемого клеща возбудителем системного клещевого боррелиоза;
• инфицированность исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие инфицированности исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
• содержание возбудителя в исследуемом материале ниже уровня детекции;
• ложноотрицательные результаты.



При подозрении на наличие клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза, но при отрицательных результатах исследования рекомендуется исследование крови пациентов. При этом возможно определение антител классов IgM и/или IgG к антигенам возбудителей, а также выявление генетического материала возбудителей методом ПЦР.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, вирусолог, паразитолог, эпидемиолог.

9 Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

77 Вирус клещевого энцефалита, IgM

84 Вирус клещевого энцефалита, IgG

33 Вирус клещевого энцефалита, антиген (в ликворе)

52 Белок общий в ликворе

33 Глюкоза в ликворе

62 Borrelia burgdorferi, IgM, титр

31 Borrelia burgdorferi, IgG, титр

37 Borrelia burgdorferi s.l., ДНК [ ПЦР ]

56 Серологическая диагностика клещевого боррелиоза и энцефалита

Литература

1. Wang G, Liveris D, Brei B, Wu H, Falco RC, Fish D, Schwartz I. Real-time PCR for simultaneous detection and quantification of Borrelia burgdorferi in field-collected Ixodes scapularis ticks from the Northeastern United States / Appl Environ Microbiol. 2003 Aug;69(8):4561-5.

2. Pancewicz SA, Garlicki AM, Moniuszko-Malinowska A, Zajkowska J, Kondrusik M, Grygorczuk S, Czupryna P, Dunaj J Diagnosis and treatment of tick-borne diseases recommendations of the Polish Society of Epidemiology and Infectious Diseases. Polish Society of Epidemiology and Infectious Diseases / Przegl Epidemiol. // 2015;69(2):309-16, 421-8.

3. Вирусологическое исследование отдельных экземпляров иксодовых клещей с использованием методов микроанализа. Методические рекомендации.

4. Ткачев С. Е., Ливанова Н. Н., Ливанов С. Г.Исследование генетического разнообразия вируса клещевого энцефалита сибирского генетического типа, выявленного в клещах Ixodes persulcatus на Северном Урале в 2006 году / Сибирский научный медицинский журнал, № 4 (126) – 2007.

5. Покровский В.И., Творогова М.Г., Шипулин Г.А. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник / М. : БИНОМ. – 2013.

6. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / М.: Медицина. – 2005. – 696 с.

Набор реагентов ИФА ТС АГ ВКЭ Тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита (Комплект № 1) включает следующие реагенты для проведения прямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА):
ИГ - иммуносорбент – иммуноглобулин класса G (крысиный) против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) – аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабоопалесцирующая бесцветная жидкость.
КА+ - контрольный положительный образец – антиген ВКЭ, экстрагированный из ткани мозга мышей, инфицированных ВКЭ, инактивированный бетапропиолактоном -аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесци-рующая светло-желтого цвета жидкость.
КА– - контрольный отрицательный образец – антиген из ткани мозга неинфицированных мышей, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая светло-желтого цвета жидкость.
Конъюгат (концентрат) – иммуноглобулин класса G против ВКЭ (крысиный), конъюгированный с пероксидазой хрена, аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость.
КББ×20 - 20-кратный концентрат карбонатно-бикарбонатного буферного раствора для разведения ИГ – прозрачная бесцветная жидкость.
ФСБ-Т×25 – 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор для промывания планшетов и приготовления раствора РР – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов бело-го цвета, растворимых в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС.
БСА - бычий сывороточный альбумин – стабилизатор – аморфный порошок от белого до светло-желтого цвета, после растворения в ФСБ-Т – прозрачная или слабо опалесциру-ющая светло-желтого цвета жидкость.
ЦБР - буферный раствор с перекисью водорода – раствор для разведения ТМБ – про-зрачная бесцветная жидкость.
ТМБ - концентрат тетраметилбензидина – хромоген – прозрачная бесцветная жид-кость.
Планшеты полистироловые 96-луночные монолитные для ИФА.

Комплект № 1 рассчитан на одновременное проведение 192 определений, включая контрольные.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора), необ-ходимые для проведения анализа:
- многоканальный спектрофотометр, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) ºС;
- холодильник бытовой;
- промыватель для микропланшет, ручной или полуавтоматический;
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные): 8- или
12-канальные с объемом дозирования от 50 до 300 мкл и 1- канальные с объемом до-зирования от 10 до 100 мкл, от 100 до 1000 мкл и от 500 до 5000 мкл;
- наконечники для дозаторов соответствующей вместимости;
- шейкер (встряхиватель лабораторный медицинский V-3 типа вортекс);
- часы;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 50 мл и 500 мл;
- цилиндры мерные вместимостью 25 мл, 100 мл, 500 мл;
- вода дистиллированная или вода очищенная;
- кислота серная концентрированная.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна быть химически чистой и не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления ТМБ. Для отбора исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реагентов следует произ-водить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.

Подготовка исследуемого материала.

Обработка клещей.
Для испытания в ИФА пригодны лишь неповрежденные клещи. Клещей однократно промывают 70 % спиртом этиловым и 2-3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида. Каждого клеща помещают в пробирку для микропроб вместимостью 0,5-1,5 мл, маркируют и хранят до исследования при температуре не выше минус 20 ºС не более 2 недель. Перед испытани-ем в ИФА готовят 10 % суспензию клеща: его растирают металлическим стержнем в той же пробирке, добавляют 0,2 мл РР (см. п. 4.4). Клеща, насосавшегося крови, растирают, добавляя РР в количестве, равном его объёму. Для ИФА берут 0,1 мл суспензии, остаток пробы хранят в той же пробирке и тех же условиях, что и клещей не более 2 недель.

Подготовка крови.
Кровь забирают из вены шприцем в количестве 2-5 мл, переносят в стерильную про-бирку, выдерживают 30-50 мин при температуре 37 оС или 1-2 ч при температуре 18-25 ºС для образования сгустка, затем центрифугируют 15-20 мин при 1500-2000 об/мин. Сыво-ротку отсасывают и помещают в стерильную пробирку, сгусток крови растирают в асепти-ческих условиях, добавляя равное ему по объёму количество РР. Затем центрифугируют при том же режиме, что и кровь. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробир-ку.
Приготовленные пробы маркируют и хранят до исследования при температуре от 2 до 8 оС не более 1 недели или при температуре не выше минус 20 ºС не более 3 мес. В зависимости от цели исследования в ИФА могут быть испытаны как неразведенные пробы сывороток и сгустков крови, так и в разведениях (например, от 1:2 до 1:8).

Подготовка мозговой суспензии.
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани людей, взятой в случае летального исхода) необходимо приготовить 1 % мозговую суспензию на РР. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин, надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркируют и хранят до исследования также как пробы крови. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и выше.

Подготовка культуральной жидкости.
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА освобождают от клеток центрифугированием при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как неразведенные пробы, так и в разведении 1:2 и более.
Подготовка растворов и реагентов (для проведения анализа на одном планшете).

Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при температу-ре от 18 до 25 °C.

Раствор для разведения ИГ (КББ).
0,5 мл КББ×20 разводят в 9,5 мл воды очищенной или дистиллированной (далее воды). Хранение: неиспользованный концентрат КББ×20 хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Иммуносорбент (ИГ).
Рабочее разведение ИГ указано на ампуле.
Содержимое ампулы с ИГ растворяют в 1 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 оС), затем разводят в КББ (см. п. 4.1) до разведения, указанного на ампу-ле (например: 1:20 – 0,5 мл ИГ и 9,5 мл КББ).
Хранение: неиспользованный растворенный ИГ хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 7 сут.

Раствор для промывания планшетов и приготовления РР (ФСБ-Т).
Содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т×25 разводят в 480 мл воды. В случае вы-падения осадка концентрат ФСБ-Т×25 предварительно прогревают в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС до полного растворения осадка.
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 2 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 14 сут.

Рабочий раствор (РР) для разведения образцов, конъюгата, КА+, КА–.
В 50 мл ФСБ-Т (см. п. 4.3) растворяют навеску 0,5 г стабилизатора БСА (время рас-творения 20 мин при помешивании при температуре 20-25 ºС).
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Подготовка контрольных образцов.
Содержимое ампул с КА+ и КА– растворяют в 0,5 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем готовят рабочее разведение каждого контрольного образ-ца в РР (см. п. 4.4) так, как указано на ампуле (например: 1:200 – 0,01 мл антигена и 2 мл РР).
Хранение: неиспользованные растворенные контрольные образцы хранят при темпе-ратуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут (рекомендуется разлить на аликвоты в микропробирки для исключения повторного замораживания-оттаивания).

Рабочее разведение конъюгата.
Содержимое ампулы с конъюгатом растворяют в 0,5 мл воды (время растворения
1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем разводят на РР (см. п. 4.4) так, как указано на ам-пуле (например: 1:40 – 0,25 мл конъюгата и 9,75 мл РР). Рабочее разведение конъюгата го-товят не ранее чем за 30 мин до использования.
Хранение: оставшийся не использованным растворенный конъюгат хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут.

Подготовка рабочего раствора ТМБ.
Рабочий раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием, соединяя 2,5 мл концентрата ТМБ и 10 мл ЦБР (разведение 1:5), тщательно перемешивают. Смесь готовят в чистой посуде, избегая контакта раствора с металлом, воздействия интенсивного источника света и близости с хлорсодержащими веществами.
Хранение: при температуре 18-25 ºС не более 15 мин в защищенном от света месте.
4.8. Стоп-реагент (кислота серная концентрации 2 моль/л) в набор не включен, гото-вится дополнительно: к 9 мл воды добавляют 1,2 мл концентрированной кислоты серной.

Проведение иммуноферментного анализа.

Внесение контрольных и исследуемых образцов.
В две лунки планшета вносят по 100 мкл КА+ (в рабочем разведении), в три лунки – КА– (в рабочем разведении), в две лунки – по 100 мкл раствора РР – контроль конъюгата.
В остальные лунки планшета (кроме 12А) вносят по 100 мкл исследуемых образцов. Планшет закрывают и помещают на 1-2 ч при температуре (37±1) ºС или на 18-25 ч при температуре от 2 до 8 ºС, после чего планшеты промывают (см. п.5.1).

Внесение конъюгата.
В каждую лунку планшета, кроме 12А, вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет закрывают и помещают на 45-60 мин при температуре (37±1) ºС, затем отмывают 5 раз, остатки влаги удаляют (см. п.5.1).

Внесение хромогена и стоп-реагента.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора ТМБ. Планшет выдерживают в защищенном от света месте при температуре 18-25 ºС в течение 5-7 мин до появления интенсивного голубого окрашивания в лунке с КА+, после чего в лунки вносят по 50 мкл стоп-реагента (п. 4.8).

Клещевой вирусный менингоэнцефалит может протекать в особо тяжелых формах, вплоть до летального исхода. На первой стадии развития болезни он схож с другими опасными заболеваниями, такими как клещевой боррелиоз, острый полиомиелит, серозный менингит, сыпной тиф, японский комариный энцефалит. Поэтому крайне важна ранняя дифференциальная диагностика, позволяющая однозначно установить истинную причину нарастающих симптомов. Необходимость дифференцировать вирусный энцефалит и боррелиоз объясняется также тем, что эти два заболевания характерны для одних и тех же регионов и возникают они после присасывания клеща в весенне-летний период.

Если при нахождении в эндемичном регионе вы обнаружили на теле клеща, следует незамедлительно провести лабораторные исследования биоматериала, а в случае положительного результата — принять экстренные меры в ближайшие 4 суток после укуса насекомого, обратившись к инфекционисту или терапевту. В нашем обзоре мы рассмотрим, какие методы диагностики существуют и какие показатели анализов на энцефалит и боррелиоз являются сигналом к безотлагательным действиям.

Боррелиоз и энцефалит: что это и в каких случаях следует сдать анализ на наличие инфекции

Среди десятков заболеваний, переносчиками которых являются клещи, двумя — энцефалитом и боррелиозом (болезнью Лайма) — можно заразиться, не покидая территории России. Эти инфекционные болезни часто путают, а между тем, они совершенно разные. Клещевой энцефалит имеет вирусное происхождение, а клещевой боррелиоз — бактериальное. Оба заболевания поражают ЦНС, но болезнь Лайма — также суставы, кожный покров, сердечную мышцу. Энцефалит протекает преимущественно в острой форме, боррелиоз склонен к хронизации. Энцефалит оставляет устойчивый и продолжительный иммунитет, болезнь Лайма вызывает замедленный иммунный ответ с каскадным развитием аутоиммунных реакций, поэтому следующее заражение боррелиозом возможно уже спустя 7 лет. По мере развития каждая болезнь приобретает собственные ярко-выраженные симптомы.

По мере развития вируса происходят постепенные, зачастую необратимые изменения в сосудах и оболочках мозга. Первые две недели болезнь протекает бессимптомно. К 3-й неделе появляются высокая температура, головная и мышечная боль, тошнота, отсутствие аппетита. У четверти заболевших эти симптомы возникают еще позднее, спустя месяц после заражения. С течением времени боли усиливаются. Появляются судороги, паралич конечностей, дезориентация, потеря сознания, кома. При отсутствии помощи — летальный исход.

В зависимости от преобладания тех или иных симптомов, различают несколько форм течения клещевого энцефалита. Наиболее тяжелые, очаговые, формы чаще встречаются на территории Дальнего Востока, наиболее легкие, неочаговые, формы превалируют в центрально-европейской части России (см. табл. 1).

Таблица 1 . Клинические формы течения клещевого энцефалита

Клиническая форма	Тяжесть	Течение	Прогноз
Неочаговые формы
•Стертая	Легкая форма	Острое	Полное выздоровление
•Лихорадочная	Средней степени		Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Менингеальная	Тяжелая форма
Очаговые формы
•Энцефалитическая	Средней степени	Острое	Полное выздоровление
•Менингоэнцефалитическая		Первично-хроническое	Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Полиоэнцефалитическая	Тяжелая форма	Вторично-хроническое
•Полиомиелитическая		Стабильное	Хронизация
•Полиоэнцефаломиелитическая		Прогредиентное (с нарастанием симптоматики)	Летальный исход
•Полирадикулоневритическая

Через месяц появляются признаки поражения нервной системы: дефекты речи, частичный паралич конечностей, перепады в настроении. У некоторых больных развивается менингит, нарушаются сердечные ритмы. Если болезнь оставить без внимания, через год начнет прогрессировать потеря слуха, артрит, невралгия, сильная затрудненность речи, потеря ориентации в пространстве.

Боррелиоз хорошо лечится, и главное в этом деле — не допустить перехода заболевания в диссеминированную (распространенную, рассеянную) или хроническую стадию (см. табл. 2). Больному назначают антибиотики на протяжении 2–4 недель, своевременный прием которых практически гарантирует полное выздоровление.

Таблица 2 . Клинические стадии и формы болезни Лайма