Биопрепараты для сибирской язвы

Возбудитель сибирской язвы относится к роду Bacillus, виду B. anthracis ивходит в группу 18 (Грамположительные палочки и кокки, образующие эндоспоры) определителя Берджи.

B. anthracis – крупные палочки с прямыми концами, неподвижны. В организме образуют капсулу. Эндоспоры овальные, высокоустойчивые ко многим неблагоприятным воздействиям. В клетке образуется не более одной споры. При попадании в благоприятную среду в течение нескольких часов споры прорастают и дают начало вегетативной форме. Грамположительны. Факультативные анаэробы. Активны в биохимическом отношении.

К основным антигенам возбудителя сибирской язвы относятся полисахаридный антиген клеточной стенки, протеиновый капсульный антиген, протективный антиген и антиген экзотоксина.

Основным фактором вирулентности B. anthracis является капсула. Мутанты, дефектные по образованию капсулы, авирулентны и используются в качестве вакцинных штаммов. Другой важный фактор вирулентности – токсинообразование. У сибиреязвенных бактерий обнаружен многокомпонентный комплекс экзо- и эндотоксинов.

Сибирская язва – особо опасная зоонозная инфекция. В естественных условиях ею болеют домашние животные, в основном, крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, у которых сибирская язва может протекать даже бессимптомно. Люди заражаются при уходе за больными животными, разделке туш вынужденно забитых больных животных, употреблении в пищу их мяса, выделке шкур погибших животных. Возможно заражение и при непрямом контакте через объекты, инфицированные кровью или выделениями больных животных, а также через инфицированные предметы.

Заражение происходит через кожу, слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта или дыхательные пути. В зависимости от этого различают кожную, кишечную или легочную формы сибирской язвы. Две последние, как правило, переходят в септическую форму с высокой летальностью.

После перенесенного заболевания вырабатывается достаточно стойкий иммунитет. Он носит антимикробный и антитоксический характер.

Материал для исследования определяется клинической формой болезни. Для обнаружения возбудителя используют микроскопию мазков из патологического материала, методы иммуноиндикации. Бактериологическое исследование проводится только в лабораториях строгого режима. При комплексной диагностике сибирской язвы используют сибиреязвенный аллерген – антраксин.

Для лечения сибирской язвы помимо антибиотиков используют противосибиреязвенную сыворотку и специфический гамма-глобулин.

Специфическая профилактика проводится живой сибиреязвенной вакциной. На основе протективного антигена разработан6а также химическая вакцина. Для экстренной профилактики применяется сибиреязвенный глобулин.

Для приготовления вакцины используют стойкий бескапсульный вариант (мутант) сибиреязвенных бацилл, лишенный способности вызывать заболевание у людей и сельскохозяйственных животных. Готовый препарат представляет собой высушенную взвесь живых спор вакцинного штамма.

С целью получения вакцины споровую культуру вакцинного штамма, выращенную на плотной питательной среде, смывают с поверхности агара дистиллированной водой, устанавливают необходимую концентрацию спор в полученной взвеси, разливают ее по ампулам, замораживают и высушивают в условиях вакуума. Ампулы с сухой вакциной запаивают под вакуумом. В каждой ампуле содержится 8-10 млрд. спор вакцинного штамма. Сухая вакцина имеет вид пористой массы желтовато-белого цвета, которая в течение 2-3 минут равномерно суспендируется в воде без образования хлопьев или осадка.

В зависимости от показаний сибиреязвенная вакцина может быть применена накожным (скарификационным) или подкожным способом. В обоих случаях вакцинируют однократно.

Для накожной вакцинации сухую вакцину непосредственно перед применением разводят при строгом соблюдении правил асептики стерильным водным раствором глицерина, флакон с которым вкладывают в каждую коробку с вакциной. Содержимое одной ампулы, разведенное в 1 мл раствора глицерина, составляет 20 накожных прививочных доз. Кожу наружной поверхности средней трети плеча перед прививкой обрабатывают спиртом или эфиром. После испарения спирта или эфира на обработанный участок кожи шприцем с тонкой иглой наносят две капли по 0,02-0,03 мл разведенной вакцины в двух местах на расстоянии 3-4 см друг от друга. Через каждую нанесенную каплю стерильным пером проводят 4 параллельные насечки, после чего плоской стороной прививательного пера втирают вакцину в насечки и дают подсохнуть в течение 10 минут.

Учет результата вакцинации при накожном введении проводят через 24-48 часов. Прививочная реакция считается положительной при наличии на коже по ходу насечек выраженной гиперемии и припухлости.

Для подкожной вакцинации сухую вакцину разводят стерильным физиологическим раствором хлорида натрия: из флакона, содержащего 100 мл физиологического раствора, берут 2-3 мл и переносят в ампулу с сухой вакциной. Ампулу осторожно встряхивают до образования гомогенной взвеси, которую переносят обратно во флакон с физиологическим раствором. Таким образом, получают 100 мл вакцины, в которой суспендировано содержимое одной ампулы – около 100 млн. спор в 1 мл. Подкожная прививочная доза составляет 50 млн. спор в 0,5 мл взвеси.

Разведенные вакцины, применяемые как для накожного, так и для подкожного введения годны в течение 4 часов, после чего остаток неиспользованной вакцины уничтожают кипячением в течение 2 часов.

Плановую вакцинацию против сибирской язвы осуществляют по профессиональным показаниям накожным способом.

Внеплановую вакцинацию против сибирской язвы по эпидемиологическим показаниям проводят подкожным способом.

Детей в возрасте от 14 до 16 лет вакцинируют только по эпидемиологическим показаниям и только накожным способом. Дети младше 14 лет вакцинации не подлежат.

Сухую живую вакцину следует хранить в темном сухом помещении при температуре не выше 8 °С. Допускаются хранение и транспортировка вакцины при температуре ниже 0 °С.

Срок годности вакцины 3 года. Дата срока годности указывается на каждой ампуле. По истечении 3 лет неизрасходованная вакцина может быть подвергнута переконтролю в институте, выпустившем препарат. При условии соответствия качества вакицны установленным требованиям, в первую очередь при сохранении в препарате достаточного количества живых спор вакцинного штамма, срок годности проверенной серии может быть продлен еще на 2 года.

Сухая живая аэрозольная сибиреязвенная вакцина

Препарат представляет собой пористую серовато-белую массу, переводимую в аэродисперсное состояние с помощью специального прибора – распылителя.

Действующее начало вакцины – живые споры авирулентного высокоиммунного штамма сибиреязвенных бацилл, обладающего типичными признаками. 1 грамм сухой массы должен содержать не менее 30 млрд. спор, из них живых 90 %. Препарат контролируется на специфическую безвредность и иммунность.

Аэрозольная иммунизация проводится дважды с интервалом в 1 месяц.

Срок годности вакцины – 1 год.

Для пассивной профилактики и лечения сибирской язвы у людей применяется противосибиреязвенный глобулин, действующим началом которого являются β- и γ-глобулиновые фракции, полученные спиртовым осаждением из лошадиной противосибиреязвенной гипериммунной сыворотки.

Помимо обычных контролей, применяемых при изготовлении сывороточных препаратов, противосибиреязвенный глобулин проверяется на специфическую активность. Введенный внутривенно в дозе 1 мл/кг шести кроликам он должен предохранить не менее четырех из них при заражении вирулентной культурой бацилл сибирской язвы.

С профилактической целью вводится внутримышечно – взрослым в дозе 20-25 мл, подросткам – 12 мл, детям – 5-8 мл.

С лечебной целью его нужно вводить как можно раньше, тем же путем, в количестве 30-35 мл и, если нужно, повторно.

Срок годности глобулина – 2 года.

Антраксин является диагностическим препаратом и предназначен для выявления в кожно-аллергических пробах сенсибилизации у больных сибирской язвой, переболевших или привитых против этой инфекции.

Антраксин представляет собой бесцветную прозрачную жидкость, полученную путем гидролиза сибиреязвенных бацилл, выращенных на питательной среде. Действующим началом препарата является белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, извлекаемый при гидролизе из бацилл. Антраксин фасуют в ампулы по 1 мл. Это количество соответствует 10 кожным диагностическим дозам.

Реакцию ставят на внутренней поверхности предплечья строго внутрикожно в дозе 0,1 мл. Результат учитывают через 24-48 часов.

У людей, инфицированных сибиреязвенным микробом или иммунизированных сибиреязвенной вакциной, в результате иммуноаллергической перестройки организма, в месте введения антраксина возникают через 6-10 часов гиперемия и инфильтрат, достигающие максимального развития через сутки после введения препарата.

Срок годности препарата – 1 год.

Люминесцирующие адсорбированные сибиреязвенные антитела

Для выявления сибиреязвенных палочек в чистых и смешанных культурах, в пробах из различных объектов внешней среды и в материале от больных людей и животных могут быть применены люминесцирующие сибиреязвенные антитела.

Сырьем для приготовления их служат адсорбированные противосибиреязвенные сыворотки. Препарат обладает строгой специфичностью, он не сообщает свечения гетерологичным бактериям и бациллам, что позволяет расценивать его как ценное средство индикации возбудителя сибирской язвы.

Bacillusantracis, ПОЧВЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ

Болеют КРС, свиньи +человек. Труп вздут, окоченения нет, красн пена- трупы не вскрывая СЖИГАЮТ.

Морфология: Гр+, Споры+ , Капсула+ общая для цепочки, Подвижность–. Палочки в виде цепочек.

Рост: МПБ – прозрачн, на дне комочки в виде ваты, МПЖ – елочка верхушкой вниз, воронка разжижения (аэроб), МПА – R-колонии (голова медузы, грива льва), Агар с пенициллином – жемчужное ожерелье

Биопроба – мышам подкожно в корень хвоста 0,1мл, свинкам 0,2мл, кроликам 0,3мл.

Серологич – РП по Асколи (несвежий материал) и РДискП, МФА и ИФА

ПЦР-обнаружение генов, кодирующих синтез токсина и капсулы.

Аллергический метод-у людей вводят антраксин в предплечье (у больных,переболевших, привитых – зона воспаления больше 15мм)

60) Дифференциальная диагностика возбудителя сибирской язвы и эмфизематозного карбункула.

+спора меньше диаметра кл.

+спора больше диаметра кл.

+ (Гамма МВА, К-ВИЭВ)

9.МФА (на сибирскую язву)

61) Дифференциальная диагностика возбудителя сибирской язвы и антракоидов (сибиреязвенноподобных).

В природе существует несколько видов микроорганизмов морфологически похожих на возбудителя сибирской язвы. Это непатогенные почвенные бациллы такие как Bac.anhtracoides,pseudoanthracoides,cereus,subtilis.

+ (Гамма МВА, К-ВИЭВ)

9.Серолог.диагностика (МФА, РДискП)

62) Биопрепараты для диагностики профилактики и лечения сибирской язвы.

1. Живая вакцина из безкапсульного эталонного штамма СТИ

2. Живая вакцина из штамма 55

4. Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и ЭМКАРа КРС

5. Гипериммунная лечебно-профилактическая сыворотка и гамма-глобулин

Диагностические биопрепараты:преципитирующая сыворотка и стандартный АГ для РП, люминесцирующие сыворотки для МФА, диагностические бактериофаги.

63) Патогенные анаэробы и болезни, вызываемые ими. Особенности взятия материала при анаэробных болезнях и проведения бакдиагностки (среды, условия).

Патогенные анаэробы относят преимущественно к клостридиям – это многочисленная группа почвенных, анаэробных, спорообразующих, палочковидных микроорганизмов, из них 12 патогенных: Сl.tetani– возбудитель столбняка(судороги);Cl.botulinum– возбудитель ботулизма(парезы и параличи гладкой мускулатуры);Cl.chauvoei– возбудитель ЭМКАРа(крепитирующие отеки в массивных группах мышц, хромотой, быстрой гибелью);Cl.perfringens,oedematiens,septicum,histolyticum,novyi,sordellii,sporogenes– возбудители злокачественного отека(отек и некроз травмированных тканей, лизис мышечной ткани с газообразованием, сепсис тканей, смерть);Cl.septicum,oedematiens,sordellii– возбудители брадзота овец(геморрагическое воспаление сычуга и 12-перстной кишки с образованием газа в пищеварительном тракте, заканчивается летально);Cl.perfringensтипC,D– возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии(геморрагический энтерит, кровоизлияния на слизистых, поражение почек, токсемия);Cl.perfringensтипB– возбудитель анаэробной дизентерии ягнят(общая токсемия, диарея, быстрая гибель, часто внезапная)

Кроме клостридий анаэробные инфекции вызывают микроорганизмы родов Fusubacteriumnecrophorum– возбудитель некробактериоза(гнойно-некротические поражения кожи, слизистой оболочки и конечностей);Bacteroidesnodosus– возбудитель копытной гнили(мацерация и воспаление кожи межкопытной щели, гнойно-гнилостным распадом копытного рога).

Материал на ЭМКАР, брадзот, инфекционную энтеротоксемию и другие клостридиозы следует брать не позже 3-4 часов после гибели животного, так как затем происходит быстрое размножение анаэробов в организме. При ЭМКАРе не вскрывать трупы-ПОЧВЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ. Среды Китта-Тароцци, молоко с кусочками печени, сахарно-кровяной агар Цейслера. Для выделения чистой культуры материал прогревают на водяной бане при 80С в течение 10-60 минут, чтобы в нем остались только споры клостридий. Создают анаэробные условия.

Описание работы:

Реклама от Google

Доступные действия

Найти все файлы пользователя

Прокомментировать файл

Текст работы:

Реферат по микробиологии на тему:

1. Морфология, тинкториальные и другие свойства…………………. ……….3

6. Пункты плана диагностики…………………………………..………………9

Список используемой литературы……………………………………………..16

1. Морфология, тинкториальные и другие свойства

Возбудитель сибирской язвы (В. anthracis) представляет собой крупную палочку с обрубленными концами (в среднем 1,5X8 мкм). В окрашенном препарате палочки располагаются одиночно, попарно или цепочкой.

Грамположительны. Микроб неподвижен, окружен прозрачной капсулой, образование которой характерно для вирулентных штаммов. Капсула образуется как в организме больных людей и животных, так и при культивировании на специальных питательных средах. В неблагоприятных условиях внешней среды при доступе кислорода и температуре от 15 до 42°С микроб образует спору, которая располагается центрально и имеет овальную форму. Диаметр ее не превышает поперечника клетки. При попадании в благоприятную среду споры прорастают в течение нескольких часов.

Возбудитель сибирской язвы относится к факультативным аэробам. Оптимальная температура роста 35— 37°С и рН 7,4—8,0. Микроб нетребователен к питательным средам, поэтому может расти даже на таких субстратах, как настой соломы, сырой и вареный картофель, экстракты злаков, гороха и др. На мясо-пептонном агаре рост настолько характерен, что имеет диагностическое значение. Через 24 ч роста появляются колонии: серебристо-серые, зернистые, диаметром 3—5 мм, с бахромчатыми краями и отходящими от них пучками нитей, напоминающими голову медузы или львиную гриву. Такой рост (R-форма) характерен для вирулентных штаммов.

В старых культурах появляются гладкие S-формы колоний, авирулентные. В бульоне через 18—24 ч образуется осадок в виде хлопьев, а сам бульон остается прозрачным.

Устойчивость. Вегетативные формы малоустойчивы: в трупе погибают в течение 1—3 сут, при 60°С — через 15 мин, а при 75°С — через минуту. Споры сибиреязвенных бацилл отличаются большой устойчивостью. Они сохраняются во внешней среде длительнее, чем все другие известные патогенные спорообразующие микробы. Выдерживают сухой жар 120—140°С в течение 2—3 ч, автоклавирование при 120°С — 5—10 мин. Дезинфицирующие растворы (сулема 1 : 1000, 5% раствор карболовой кислоты, 5—10% раствор хлорамина) убивают их только за несколько часов, а этиловый спирт в концентрациях от 25% до абсолютного — за 50 дней.

Антигенная структура. Возбудитель сибирской язвы содержит в клеточной стенке полисахаридный антиген и капсульный протеиновый антиген. К обоим антигенам в организме вырабатываются антитела, но защитными свойствами они не обладают. В организме животных и человека микроб образует особый протективный антиген, который обусловливает состояние иммунитета.

2. Отбор пат. материала

С целью личной безопасности отбор проб патологического материала выполняется в спецодежде и резиновых перчатках.

При подозрении сибирской язвы для постановки прижизненного диагноза у больного животного (кроме свиней) берут кровь из уха. Для этого участок кожи с хорошо выраженным сосудом тщательно дезинфицируют и, надрезав сосуд, наносят капли крови на обезжиренные предметные стёкла. Место надреза сосуда тщательно дезинфицируют. Затем, после подсушивания мазка, стёкла прокладывают спичками, плотно обёртывают пергаментной бумагой, перевязывают и помещают в герметичный полиэтиленовый пакет. Пакет помещают в термос. К данному материалу прилагают сопроводительный документ с указанием хозяйства, вида животного, даты отбора проб крови. В лаборатории мазки после окраски по Граму исследуют под световым микроскопом с целью обнаружения капсул и делают посевы на питательные среды.

У павшего животного при подозрении сибирской язвы также берут пробу крови. Если количества крови недостаточно, то проводят следующие манипуляции. Ухо со стороны, на которой лежал труп, перевязывают шпагатом в двух местах, ближе к основанию и отсекают между перевязкой. Места разреза прижигают калёным железом. Затем отрезанное ухо помещают в герметичный пакет и в термос. Вскрытие трупа недопустимо !Если вскрытие сделано, то с предосторожностью отбирают лимфатические узлы, кусочки селезёнки и печени, помещают в двойные герметичные полиэтиленовые пакеты и в термос. От свиней пробы крови не берут. В качестве патологического материала используют кусочки воспалённой ткани в области отёка и заглоточные лимфатические узлы.

Для исследования кожевенного сырья от каждой кожи отрезают участок величиной 3х3 см и надевают на бечёвку, маркируют и обеззараживают в камере Крупина при 0,7 атм. в течение 1 часа 45 минут.

Шерсть - не менее 10 образцов массой около 2 г каждый из разных мест упаковки. Образцы объединяют и упаковывают вместе.

При подозрении на особо опасные инфекции сосуды с материалом помещают в герметичный металлический пенал (ящик), который опечатывают.

Транспортировку и хранение материала до исследования проводят таким образом, чтобы предотвратить размножение сопутствующей микрофлоры и инактивацию искомого микроорганизма. С этой целью исследуемый материал (кусочки органов) помещают в стерильную смесь равных объемов глицерина и физиолоuического раствора или помещают в термос, содержащий: 1) снег или лед и поваренную соль (в соотношении 3: 1), температура смеси — 15 минус 20 °С; 2) равные части сухого льда и этанола, температура смеси около —70 °С.

Для бактериологического исследования патологический материал (органы или их части) консервируют 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением или автоклавированием в течение 30 минут. Материал можно консервировать также в стерильном вазелиновом масле. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4-5 раз превышающем его объем.

Небольшие трупы павших животных (поросят, ягнят, телят), а также трупы мелких животных лучше посылать целыми в непроницаемой таре.

4. Факторы патогенности

К возбудителю сибирской язвы восприимчивы все виды млекопитающих. Чаще болеют овцы, крупный рогатый скот, лошади, козы, буйволы, верблюды и северные олени, могут заражаться ослы и мулы. Свиньи менее чувствительны. Среди диких животных восприимчивы все травоядные. Известны случаи заболевания собак, волков, лисиц, песцов, среди птиц - уток и страусов.

Важнейшим фактором вирулентности сибиреязвенной палочки является капсула. Утрата капсулы приводит к потере вирулентности. Капсула предохраняет В. anthracis от фагоцитоза. Другим важным фактором вирулентности, который ответствен за смерть животных, является сложный комплекс токсина, содержащего 3 различных компонента: фактор I, состоящий из белка и углевода; и два фактора чисто белковой природы (факторы II и III). Синтез сложного токсина контролируется плазмидой pXOl с м. м. 110-114 МД. В составе плазмиды pXOl есть три гена, определяющих синтез основных компонентов экзотоксина:

• ген суа - фактора отечности (ОФ);
• ген pag - протективного антигена (ПА);
• ген lef - летального фактора (ЛФ).

Продуктом гена суа (ОФ) является аденилатциклаза, катализирующая накопление в клетках эукариот цАМФ. Фактор отечности вызывает повышение проницаемости сосудов.

Протективный антиген индуцирует синтез защитных антител (однако наиболее иммуногенным является комплекс из всех трех компонентов обезвреженного токсина), летальный фактор вызывает смерть животных. Все три компонента токсина Действуют синергидно. Синтез капсулы сибиреязвенной палочки контролируется также плазмидой рХ02 с м. м. 60 МД.

Вакцина СТИ — живая вакцина из эталонного штамма, полученного Н. Н. Гинсбургом (1944), представляет собой споровую (95. 100 %) агаровую культуру в виде суспензии в 30%-м стерильном растворе глицерина; содержит (2,5. 3,5) • 107 жизнеспособных спор в 1 мл. Вакцину контролируют на чистоту роста, концентрацию спор, безвредность на кроликах, иммуногенность на морских свинках.

Вакцина ГНКИ — сухая живая вакцина из эталонного штамма ГНКИ. Содержит 5 • 107 спор в 1 мл. Готовят и контролируют так же, как вакцину СТИ. Срок годности сухой вакцины 3 года.

Вакцина против сибирской язвы из штамма № 55.

Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

Лечебно-профилактическую сибиреязвенную сыворотку получают гипериммунизацией лошадей инактивированной сибиреязвенной культурой. Сыворотку проверяют на стерильность, безвредность на белых мышах и морских свинках, активность на кроликах. Также выпускают противосибиреязвенный глобулин.

Сибиреязвенная преципитирующая сыворотка предназначена для исследования материала на сибирскую язву в реакции преципитации. Сыворотку получают гипериммунизацией лошадей.

Сибиреязвенный стандартный антиген для РП выпускают для контроля активности преципитирующей сыворотки. Представляет собой экстракт из инактивированной бактериальной массы В. anthracis.

Сибиреязвенные люминесцирующие сыворотки готовят из сибиреязвенной преципитирующей сыворотки; предназначены для ускоренного обнаружения некапсулированных клеток возбудителя в первичных посевах.

Сибиреязвенные диагностические бактериофаги представляя ют собой освобожденную от бактерий путем фильтрования жидкость бульонной культуры возбудителя, зараженную бактериофагом. Титр бактериофага 10.

6. Пункты плана диагностики

Из поступившего в лабораторию материала готовят мазки, окрашивают по Граму; одним из методов для выявления капсулы (методы Михина, Гимзы, Ольта и т. д.), а также сибиреязвенными люминесцирующими сыворотками. В окрашенных мазках из трупного материала возбудитель обнаруживают в виде крупных грамположительных палочковидных бактерий, располагающихся одиночно, парами, короткими цепочками. Концы палочек, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы закруглены, клетки окружены капсулой. В отдельных случаях, особенно в мазках из материала, полученного от свиней, форма клеток может быть нетипичной: короткие, толстые, изогнутые или зернистые палочки со вздутием в центре или на концевых частях бактерий.

Предварительный ответ в хозяйство, откуда поступил материал, дают немедленно по результатам микроскопического исследования.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Факульта­тивный анаэроб, температурный оптимум 35. 37 "С, рН 7,2. 7,4. С целью выделения культуры возбудителя исследуемый материал засевают в МПБ, на МПА или в бульон и агар Хоттингера и инкубируют в аэробных условиях 18. 24 ч, а при отсутствии роста — до 48 ч.

В выросших культурах исследуют морфлогические и тинкториальные свойства клеток. В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают длинные цепочки из грамположительных типичных палочек; в мазках из культур на средах с диффузным ростом находят отдельные или парные палочки. На бессывороточных средах бактерии капсулу не образуют, на сывороточных средах возбудитель формирует капсулу, причем клетки в препарате в последнем случае чаще располагаются одиночно или парами.

Биопроба. Заражение лабораторных животных исходным материалом — обязательный этап, проводимый сразу после поступления материала в лабораторию. Тканевой суспензией заражают подкожно двух белых мышей по 0,2. 0,5 мл или морских свинок по 0,5. 2 мл. Наблюдение ведут в течение 10 сут. При наличии возбудителя животные погибают обычно через 1. 3сут. Павших животных исследуют с выделением культуры возбудителя.

Если в ходе указанных исследований выделена бактерия, типичная для В. anthracis по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам, патогенная для лабораторных животных, то дальнейшие исследования не проводят и диагноз считают установленным.

В случае получения нечетких результатов при вышеизложенных исследованиях проводят дополнительные с целью дифференциации выделенной культуры от сходных сапрофитных бацилл, и в первую очередь от В. cereus. При этом определяют способность микроорганизма к капсулообразованию путем посева на сывороточные среды, патогенность для лабораторных животных в биопробе, чувствительность к пенициллину, сибиреязвенному бактериофагу, специфичность к сибиреязвенным люминесцирующим сывороткам, гемолитическую активность, наличие жгутиков.

Для определения чувствительности к сибиреязвенному бактериофагу культуру или материал засевают на скошенный МПА, затем на поверхность среды наносят каплю бактериофага в рабочем титре и посевы выдерживают при температуре 37. 38°С 24 ч. В случае принадлежности культуры к В. anthracis на поверхности МПА в зоне нанесения бактериофага остается стерильная зона при наличии роста микроорганизма на остальных участках среды. Для идентификации В. anthracis методом люминесцирующих антител используют флуоресцирующую адсорбированную сыворотку, не дающую перекрестных реакций с антигенно-родственными сапрофитными бациллами.

Гемолитическую активность исследуемой культуры определяют посевом на 5%-й МПА или в МПБ.

Если для исследования поступил загнивший материал, который нельзя подвергать обычному бактериологическому исследованию, то диагноз ставят на основании обнаружения антигенов возбудителя в материале при помощи реакции кольцевой преципитации.

Материал экстрагируют физиологическим раствором (соотношение 1:10) путем кипячения в течение 30. 40 мин (горячий способ). Экстракцию смеси тканевой суспензии и карболизированного физиологического раствора (соотношение 1 : 10) можно проводить в течение 16. 18 ч при комнатной температуре (холодный способ). Экстракт фильтруют через асбестовую вату и исследуют в РП.

В ветеринарных лабораториях часто исследуют на сибирскую язву в РП кожевенно-меховое сырье. В лабораторию доставляют пробы кожевенного сырья в виде небольших квадратиков (или кружков), взятых от шкур в местах, вырез которых не снижает товарной ценности. Эти пробы нанизывают на тонкую проволоку в том порядке, в котором шкуры расположены на складе. Поступившие пробы обязательно стерилизуют автоклавированием при 1,5 атм. 30 мин. Затем пробы измельчают и берут навески: 1 г — от парного, мороженого, пресно-сухого и сухосоленого сырья и 2 г —от мокросоленого. Пробы заливают экстрагирующей жидкостью (физиологический раствор, содержащий 0,3 % кристаллического фенола).

Контроли РП. 1. Контроль преципитирующей сыворотки: а) со стандартным сибиреязвенным антигеном (результат положительный в течение 1. 2 мин); б) с экстрактом из заведомо благополучных боенских кож (результат отрицательный в течение 1 ч); в) с экстрагирующей жидкостью (результат отрицательный в течение 1ч). 2. Контроль асбестовой ваты на нейтральность (при поступлении каждой новой партии асбестовой ваты).

Учет результатов РП проводят через 10. 15 мин для пресно-сухого (одиночные пробы), через 30 мин —для пресно-сухого (сдвоенные пробы) и сухосоленого (одиночные пробы), через 60 мин — для сухосоленого (сдвоенные пробы) и мокросоленого сырья.

При исследовании на сибирскую язву свежего тканевого мате­риала, а также при идентификации выделенных культур можно использовать реакцию диск преципитации, которая основана на взаимодействии продуктов метаболизма возбудителя (антиген), растущего в жидкой питательной среде, с антителами преципитирующей сибиреязвенной сыворотки.

В стерильную бактериологическую пробирку вносят 0,5. 1 мл преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, на ее поверхность осторожно (по стенке пробирки) наслаивают расплавленный (45. 50°С) 1%-й агаровый гель столбиком высотой 5. 7 мм. Далее на поверхность застывшего агара наливают 1. 1,5 мл жидкой питательной среды (МПБ, среда ГКИ и т. д.) и в нее делают посев исследуемого тканевого материала или идентифицируемой культуры микроорганизма.

Посевы выдерживают при 37. 38 °С 16. 20 ч. Результаты учитывают, просматривая пробирку в проходящем свете на черном фоне. В положительном случае в средней части столбика агароного геля обнаруживают тонкую белую четкую линию (диск) пре­ципитации. Сапрофитные бациллы при росте в этой системе преципитации не дают. Некоторые штаммы В. cereus могут вызывать в нижней части агарового столбика образование рыхлой толстой зоны преципитации, которая за 30. 40ч разрыхляется и сливается с преципитирующей сывороткой.

Список используемой литературы

Полный текст:

1. Абрамов ДД, Воробьев АА, Кузнецовский АВ, Савиных АВ, Онучина НВ, Дармов ИВ, Трофимов ДЮ, Кузнецов СЛ. Разработка и испытания молекулярно-биологической тест-системы для выявления ДНК возбудителя сибирской язвы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Клиническая лабораторная диагностика 2011; (3): 46-50.

2. Антюганов СН, Рязанова АГ, Еременко ЕИ, Куличенко АН. Сибирская язва в Российской Федерации и за рубежом. Эпидемиология и инфекционные болезни 2012; (5): 4-8.

3. Буравцева НП, Мицаев ШШ, Мезенцев ВМ, Рязанова АГ, Еременко ЕИ, Куличенко АН. Эпизоотологическая и эпидемиологическая обстановка по сибирской язве в Чеченской Республике и Республике Дагестан. Эпидемиология и инфекционные болезни 2011; (3): 10-5.

4. Artenstein AW. Anthrax: from antiquity to answers. J Infect Dis. 2007; 195(4): 471-3.

5. Саяпина ЛВ, Абдрашитова АС, Комратов АВ, Ращепкин ЛИ, Осин АВ, Храмов МВ и др. Характеристика новых препаратов для диагностики сибирской язвы по данным медицинских испытаний. Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. 23-24 мая 2012. Ставрополь: Экспо-Медиа; 2012.

6. Шарова ИН, Казакова ЕС, Карнаухов ИГ, Щербаков ДА, Щербакова СА, Самойлова ЛВ и др. Принципы организации и проведение лабораторной диагностики в мобильной лаборатории индикации для осуществления эпизотоологического мониторинга особо опасных и других природно-очаговых инфекций. Проблемы особо опасных инфекций 2012; (3): 94-6.

7. Egren J, Hamidjaja Raditijo A, Hansen T, Ruuls R, Thierry S, et al. In silico and in vitro evaluation of PCR-based assays for the detection of Bacillus anthracis chromosomal signature sequences. J Virulence 2013; 4(8): 671-85.

9. Kaman WE, Hulst AG., Roffel S, van der Schans M, Merkel T, van Belkum A, Bikker FJ. Peptide-based fluorescence resonance energy transfer protease substrates for the detection and diagnosis of Bacillus species. Anal Chem. 2011; 83(7): 2511-7.

10. Куличенко АН, Еременко ЕИ, Буравцева НП, Рязанова АГ. Диагностика сибирской язвы в Российской Федерации. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2010; (5): 62-6.

11. Саяпина ЛВ, Малахаева АН, Касина ИВ, Барулина ИС. Анализ качества диагностических флуоресцирующих иммуноглобулинов, используемых для выявления возбудителей особо опасных инфекций. Биопрепараты 2007; (2): 26-8.

12. Лобач РН, Абдрашитова АС, Саяпина ЛВ. Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы. Биопрепараты 2013; (4): 29-33.

13. Баркова ИА, Алексеев ВВ, Липницкий АВ, Барков АМ. Использование иммуноглобулинов сибиреязвенной монорецепторной сыворотки для идентификации Bacillus anthracis в МФА. В кн.: Материалы IX Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ. 30 сентября - 2 октября 2008. Волгоград: ВолгГМУ; 2008.

14. Маринин ЛИ, Дятлов ИА, Мокриевич АН, Бахтеева ИВ, Белова ЕВ, Борзилов АИ и др. Методы изучения биологических свойств возбудителя сибирской язвы. М.: Гигиена; 2009.

15. Барков АМ, Баркова ИА, Алексеев ВВ, Липницкий АВ, Кулаков МЯ. Обнаружение антител к протективному антигену Bacillus anthracis с использованием реакции непрямой гемагглютинации и твердофазного иммуноферментного метода. Проблемы особо опасных инфекций 2010; 105: 42-5.

16. Цncь Serkan, Цncь Selcen, Serhan Sakarya. Anthrax - an overview. Med Sci Monit. 2003; 9(11): 276-83.

17. Терешкина НЕ, Девдариани ЗЛ. Современное состояние проблемы иммунодетекции возбудителя сибирской язвы. Проблемы особо опасных инфекций 2008; (1): 44-8.

18. Шишкова НА, Кравченко ТБ, Маринин ЛИ, Мокриевич АН. Идентификация возбудителя сибирской язвы, выделенного из почвы скотомогильника. Проблемы особо опасных инфекций 2011; (4): 53-6.

19. Хлынцева АЕ, Лунева НМ, Белова ЕВ, Дятлов ИА, Шемякин ИГ. Разработка и испытания диагностикума на основе моноклональных антител для определения спор возбудителя сибирской язвы в реакции латекс-агглютинации. Проблемы особо опасных инфекций 2011; (4): 71-5.

20. Кравец ЕВ, Дугаржапова ЗФ, Родзиковский АВ, Хлынцева АЕ, Лунева НМ, Белова ЕВ и др. Применение методов латекс агглютинации и иммунохроматографии для ускоренной идентификации культур Bacillus anthracis при эпидемиологических расследованиях вспышек. Проблемы особо опасных инфекций 2011; (1): 81-2.

21. Хлынцева АЕ, Баранов АМ, Белова ЕВ, Шемякин ИГ, Маринин ЛИ, Дятлов ИА. Изучение свойств моноклональных антител для разработки иммунохроматографического стрип-теста с целью определения спор возбудителя сибирской язвы. В кн.: Материалы IX Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ. 30 сентября - 2 октября 2008. Волгоград: ВолгГМУ; 2008.

22. Соловьев ПВ, Баранова ЕВ, Рудницкий СЮ, Королева-Ушакова АГ, Колосова НВ, Бикетов СФ. Разработка иммунохроматографических тестов для идентификации спор и вегетативных клеток B. anthracis. Материалы научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора. 25-27 мая 2010 г. Оболенск: А-ПРИНТ; 2010.

23. Ярков СП, Шиленко ИВ, Скопинская СН, Злобин ВН. Комплект для выявления возбудителей особо опасных заболеваний и токсинов люминесцентным иммунохроматографическим анализом. Проблемы особо опасных инфекций 2008; (2): 46-9.

24. Горобец ЕА. Разработка иммунобиологических препаратов для диагностики сибирской язвы: автореф. дис. … канд. биол. наук. Ставрополь; 2009.

25. Дугаржапова ЗФ, Родзиковский АВ, Чеснокова МВ, Балахонов СВ, Болошинов АБ, Ханхареев СС. и др. Эпизоотолого-эпидемиологический анализ ситуации по сибирской язве в Республике Бурятия (1995-2008). Эпидемиология и инфекционные болезни 2010; (6): 11-5.

26. Гаранина СБ, Тучков ИВ, Куличенко АН, Куклев ЕВ, Пикалов ИН. Использование ПЦР-анализа при работе в очаге сибирской язвы. В кн.: Сборник тезисов докладов 3-й Всероссийской научно-практической конференции 25-27 января 2000 г. Москва. М.; 2000.

27. Еременко ЕИ, Рязанова АГ, Цыганкова ЕА, Цыганкова ОИ, Куличенко АН. Генотипические особенности штаммов Bacillus anthracis c разным проявлением признаков, ассоциированных с патогенностью. Проблемы особо опасных инфекций 2010; (2): 53-6.

28. Чеканова ТА, Кирдяшкина НП, Пудова ЕА, Сажин АИ, Судьина АЕ, Маркелов МЛ, Шипулин ГА. Наборы реагентов для идентификации возбудителей особо опасных инфекций в формате иммуночипов и ДНК-чипов. Материалы V Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. Москва; 2013. С. 441-2.

29. Яцышина СБ, Обухов ИЛ, Кириллов ЛВ, Саленко ЛС, Шмаргун БИ, Шипулин ГА. Применение мультиплексной ПЦР для идентификации вирулентных форм возбудителей сибирской язвы. Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции. Тверь; 2002.

32. Кутырев ВВ, Смирнова НИ. Генодиагностика и молекулярное типирование возбудителей чумы, холеры и сибирской язвы. Молекулярная генетика, микробиология, вирусология 2003; (1): 6-14.

33. Цыганкова ЕА, Еременко ЕИ, Цыганкова ОИ, Рязанова АГ. Полиморфизм гена протективного антигена у вариантов штаммов Bacillus anthracis, обнаруживаемый методом PCR RFLP анализа. В кн.: Материалы IX Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ. 30 сентября - 2 октября 2008. Волгоград: ВолгГМУ; 2008.

34. Harrell LJ, Andersen GL, Wilson KH. Genetic variability of Bacillus anthracis and related species. J Clin Microbiol. 1995; 33(7): 1847-50.

35. Лиманская ОЮ, Муртазаева ЛА, Klee S, Лиманский АП. Молекулярные технологии детекции возбудителя сибирской язвы посредством ПЦР различных форматов. Биотехнология 2013; (3): 86-96.

36. Ezzell JW, Abshire T, Ibrahim S, Teska J, et al. Identification of Bacillus anthracis: an overview. 3rd International Conference on Anthrax. Plymouth, England, 7-10 Sept., 1998.

37. Шишкова НА, Мокриевич АН, Платонов МЕ, Светоч ТЭ, Маринин ЛИ. Изучение генетического разнообразия штаммов сибиреязвенного микроба из коллекции ГНЦ ПМБ. Проблемы особо опасных инфекций 2010; (2): 60-5.

38. Рязанова АГ, Еременко ЕИ, Цыганкова ОИ, Цыганкова ЕА, Куличенко АН. Использование методов молекулярного типирования Bacillus anthracis в Референс-центре по мониторингу за возбудителем сибирской язвы. Проблемы особо опасных инфекций 2011; (4): 68-70.

39. Амосов МЮ, Кузнецовский АВ, Сероглазов ВВ, Савиных АВ, Онучина НВ, Воробьев АА, и др. Идентификация и дифференциация микробных культур возбудителя сибирской язвы, выделенных на территории Южного федерального округа в мае 2007 г. Молекулярная медицина 2011; (6): 43-8.

40. Beyer W, Turnbull PCB. Anthrax in animals. Molecular Aspects of Medicine 2009; 30(6): 481-9.

41. Keim P, Price LB, Klevytska AM, Smith KL, Schupp JM, Okinaka R, et al. Multiple-locus variable-namber tandem repeat analysis reveals genetic relationships within Bacillus anthracis. J Bacteriol. 2000; 182(10): 2928-36.

42. Рязанова АГ, Еременко ЕИ, Цыганкова ОИ, Цыганкова ЕА. Усовершенствование методов идентификации атипичных штаммов возбудителя сибирской язвы и их дифференциация от близкородственных бацилл. Журнал микробиология, эпидемиология и иммунобиология 2009; (3): 76-80.

43. Ригвава С, Натидзе М, Бубашвили М, Гогиашвили Д, Вардзелашвили Н. Идентификация штаммов B. anthracis, выделенных из различных объектов, и серодиагностика сибирской язвы. Аллергология и иммунология 2010; 2(11): 123-5.

44. Головинская ТМ, Буравцева НП, Цыганкова ОИ, Еременко ЕИ. Сравнительное изучение литической активности и специфичности экспериментальных серий сибиреязвенных бактериофагов Гамма А-26, К ВИЭВ, ВА-9 и Fah-ВН ИИВВиМ. Проблемы особо опасных инфекций 2011; (3): 28-30.

45. Желудкова ЕВ, Климов ВИ, Бывалов АА, Зиганшин РШ, Ковтун ВП. Совершенствование системы контроля качества питательных сред, используемых в микробиологии. В кн.: Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария. Матер. юбилейной науч. конф., посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. 1998. С. 298-299.

46. Говорунова ВА, Маринин ЛИ, Миронова РИ, Храмов МВ, Мокриевич АН, Баранов АМ. Диагностическая питательная среда для выделения и идентификации возбудителя сибирской язвы. Проблемы особо опасных инфекций 2012; (2): 82-4.

Саяпина Л.В., Лобач Р.Н., Бондарев В.П., Никитюк Н.Ф. Современное состояние лабораторной диагностики сибирской язвы: обнаружение и идентификация Bacillus anthracis. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2016;16(1):27-34.

Sayapina L.V., Lobach R.N., Bondarev V.P., Nikityuk N.F. Current status of the laboratory diagnosis of anthrax: detection and identification of Bacillus anthracis. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2016;16(1):27-34. (In Russ.)

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.