Диагностикум на бруцеллез рпга

Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.

При проведении эпидемиологического исследования бруцеллеза в очагах применяют 1.реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и 2.Объемную (Райта), а так же реакции Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилактической вакцинацией населения можно ограничиться постановкой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.\

Реакция Райта (Реакция агглютинации с бруцеллезным антигеном в пробирках )

Реакция Райта проводится в пробирках в объеме 1 мл с разведениями сыворотки 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800 и единым бруцеллезным диагностикумом. Последний представляет собой взвесь убитых нагреванием и фенолом бруцелл. Для пробирочной реакции диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физраствором. Методика разведения сыворотки обычна для пробирочной реакции агглютинации. Пробирки встряхивают, ставят в термостат при температуре 37° до следующего дня. Учет реакции проводят обычным способом или по 50% агглютинации (2+) в сравнении со стандартом мутности. Серийные титры 50% агглютинации 1:50, 1:100, 1:200, 1:400,1:800 свидетельствуют о том, что в 1 мл исследуемой сыворотки содержится соответственно 50, 100, 200, 400, 800 МЕ антител. Выраженность реакции больного оценивают по следующей схеме: титр 1:50 оценивается как сомнительный, 1:100 – слабо положительный, 1:200 и 1:400 – положительный, 1:800 – резко положительный.

При остром бруцеллезе реакция Райта положительна у больных в титре 1:200-1:800, тогда как при хроническом бруцеллезе – в титре 1:50-1:100. В то же время обострение хронического бруцеллеза сопровождается повышением титра 1:200-1:400.

Иногда резко выраженная реакция Райта наблюдается у больных со слабо выраженными клиническими проявлениями бруцеллеза.

Напечатать перед райта

Серологическая реакция агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона)

Реакция Хеддльсона (пластинчатая – применяют на стекле) чувствительна, но менее специфична, дает возможность выявлять агглютинины в первые дни болезни, быстро получить ответ. На большое (9х12см) хорошо обезжиренное сухое стекло на расстоянии 3-4 см друг от друга микропипеткой наносят исследуемую сыворотку в дозах 0,04, 0,02, 0,01 мл (опытные капли) и 0,02 мл (контрольная капля). К трем первым каплям сыворотки добавляют по 0,03 мл единого неразведенного диагностикумума, к последней – 0,03 мл физраствора. Максимальный срок наблюдения – 8 минут. Учет осуществляют невооруженным глазом по 4+ системе. При положительной реакции в опытных каплях появляются хлопья и жидкость становится более или менее прозрачной. Агглютинацию во всех трех дозах 4+ принимают за резко положительный результат, в первой и второй дозах – за положительный результат, только в первой дозе – сомнительный результат, отсутствие агглютинации во всех дозах – отрицательный результат.

Реакция Кумбса либо антиглобулиновый тест.

Его проводит для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.

Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат – значит кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борются с эритроцитами.

ПЦР-диагностика основывается, на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, прибавляя метиолят натрия концентрацией 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит, все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддерживании температуры в 66С на протяжении 10-15 минут биологическая ткань обезвреживается.

Этот анализ обладает положительной чертой в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.

Таксономия: Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis относятся к отделу Gracilicutes, роду Brucella.

Морфологические и тинкториальные свойства: Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу.

Культуральные свойства: облигатные аэробы. B.abortus для своего роста нуждается в присутствии 5—10 % углекислого газа. Оптимальными для роста являются темпера­тура 37С. Требовательны к питатель­ным средам и растут на специальных средах (пече­ночных, кровяной агар). Их особенностью является медленный (в течение 2 нед) рост. В жидких средах – равномерное помутнение с небольшим осадком. На плотных – мелкие, круглые гладкие голубые колонии. Диссоциация от S- к R-формам колоний.

Биохимическая активность: очень низкая; содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, продуцируют Н₂S.

Антигенная структура. O-антиген – соматический, и капсульный антигены. Две разновид­ности О-антигена — А(абортус) и М(мелитензис).Иногда обнаруживают К-антиген.

Факторы патогенности: Образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной активностью. Продуцируют один из ферментов агрессии — гиалу-ронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Резистентность. Быстро погибают при кипяче­нии, при действии дезинфицирующих веществ, устойчивы к низкой температуре: в замороженном мясе они со­храняются до 5 мес, в молочных продуктах — до 1,5 мес.

Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Источник - крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, овцы, выделяющие B.melitensis. Люди более восприимчивы к этому виду возбудителя. Реже заражение происхо­дит от коров (B.abortus) и свиней (B.suis). Больные люди не являются источником заболевания.

Патогенез. Проникают в организм через слизи­стые оболочки или поврежденную кожу, попадают сначала в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь, разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели освобождается эндоток­син, вызывающий интоксикацию.

Клиника: Инкубационный период составляет обычно 1—3 нед. Длительная лихорадка, озноб, потливость, боли в суставах, радикулиты.

Иммунитет: После перенесенного заболевания формирует­ся непрочный иммунитет. Клеточно-гуморальный, нестерильный, относительный.

Микробиологическая диагностика:

Микробиологическая диагностика обычно проводится путем серологических исследований (реакция Райта и Хеддлсона).

Бактериологическое исследование. Для получе­ния гемокультуры кровь засевают в два флакона печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры В. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первич­ной культуры В. abortus) —с СО₂. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно. На агаре бруцеллы образуют бесцветные коло­нии, в бульоне — помутнение и слизистый осадок. В мазках, ок­рашенных по Граму, обнаруживаются мелкие грамотрицательные формы. Они неподвижны, спор не образуют, в опре­деленных условиях появляется видимая капсула.

Для быстрой идентификации бруцелл ставят реакцию агглю­тинации со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференци­руют по образованию H₂S, чувствительности к СО₂, действию анилиновых красителей (основной фуксин).

Для серодиагностики используют РПГА, РИФ, РСК, метод опреде­ления неполных антител. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса.

Биопроба.Применяется для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Исследуемый материал вводят морским свинкам подкожно в паховую область. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.

Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне).На предплечье внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6 ч. могут появиться гипере­мия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч. Реакция обладает высокой чувстви­тельностью.

Лечение: Антибиотики широкого спектра действия. Специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной или бруцеллина (фильтрат бульонных культур В. melitensis, B.abortus, В.suis, убитых нагреванием. При острых формах – бруцеллезный иммуноглобулин.

Профилактика: Живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА-19А, полученную из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других видов бруцелл.

Бруцеллезный единый диагностикум.Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется при серо­логической диагностике бруцеллеза постановкой реакции агглю­тинации Райта и Хеддлсона.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вак­цина.Взвесь вакцинного штамма. В. abortus применяется для профилактики бруцеллеза.

Методы МБ диагностики бруцеллеза.

· К биологической пробе ( заражение морских свинок) прибегают в том случае, если материал сильно загрязнён посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. (Вводится морской свинке по 1.0 подкожно в паховую обл. Через 30 дней: Проба Бюрне, р-ия Райта, посев материала из органов и лимфатических узлов на питатетльные среды для выделения чистой культуры)

· Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

Б. Для обнаружения антигена

1. Реакция агрегат-гемагглютинации.

2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

4. Реакция коагглютинации.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

· Аллергический - проба Бюрне

От больного человека - кровь, костный мозг , моча (печеночный бульон + антифаговая сыворотка)

От больного животного - абортивный плод, околоплодная жидкость, кусочки некротизированной плаценты, моча, молоко, мясо (печеночный агар и бульон+ антифаговая сыворотка+ генциа-виолет)

Печеночный МПА + антифаговая сыворотка:

1)Биохимические тесты( активность уреазы, образование сероводорода. При необходимости др тесты.

2)Р-ия агглютинации со спец. сывороткой

3) Изучение отношения к Тбилиотическому бруцеллезному фагу

4)Изучение роста на средах с красителями

Серодиагностика бруцеллеза.

Преимущества реакции Кумбса при серодиагностике бруцеллеза.

При помощи р-ии прямой и пассивной агглютинации определяют полные ( бивалентные) антитела. Неполные ( моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами , так как, соединяясь с антигеном , блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигены в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют спец. р-июКумбса. В р-ии участвуют : а)сыворотка больного в которой преобладают неполные антитела, б)антиген-диагностикум, в)антиглобулиновая сыворотка- антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в 2 этапа:

1)взаимодействие антигена с неполными антителами

2)взаимодействие антиглобулиновой сыворотки с антителами, адсорбированными на антигене.

В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают 2 одновалентных антитела, адсорбированных соотвественно на 2 антигенах , что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

Серологические экспресс-реакции для диагностики бруцеллеза.

Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

Реакция Хеддльсона и реакция Райта, их сущность.

1. Реакция Хеддльсона: На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипет­кой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положи­тельная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

2. Реакция Райта(ставится по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта - 1:200): Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза. Отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки - реакция "отрицательная". Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости. Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза

Дата добавления: 2019-01-14 ; просмотров: 377 ;

Бесплатная горячая линия юридической помощи

• Главная
• "ПРОФИЛАКТИКА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА ЛЮДЕЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.1.7.1189-03" (утв. Главным государственным санитарный врачом РФ 30.01.2003)

5.2.4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

РПГА является специфичным и высоко чувствительным методом выявления бруцеллезных антител в сыворотке крови человека. Для постановки РПГА необходимо иметь: а) бруцеллезный эритроцитарный антигенный диагностикум; б) контрольные (несенсибилизированные) эритроциты; в) нормальную сыворотку кролика; г) бруцеллезную сыворотку.

Для титрования испытуемых сывороток применяется нормальная сыворотка кролика, инактивированная при 56 °C в течение 30 минут и разведенная физиологическим раствором 1:100.

Испытуемую сыворотку разводят физиологическим раствором 1:25 (0,1 мл сыворотки +2,4 мл физиологического раствора) и инактивируют в течение 30 минут при 56 °C. Перед исследованием сыворотку адсорбируют 50% взвесью контрольных эритроцитов. К 1,2 мл инактивированной сыворотки добавляют 0,2 мл 50% эритроцитов, встряхивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Затем смесь центрифугируют при 1000 об./мин. в течение 2 минут.

Можно оставить сыворотки с эритроцитами на ночь в холодильнике (+4 °C), в этом случае исключается центрифугирование.

Эритроцитарный диагностикум перед применением разводят физиологическим раствором (pH 7,0 - 7,2) согласно указанию на этикетке и получают 2,5%-ную взвесь, которая применяется в РПГА. Контрольные (несенсибилизированные эритроциты также разводят согласно указанию на этикетке и применяют полученную 2,5%-ную взвесь для контроля сывороток).

Техника постановки РПГА.

Реакцию ставят в прозрачных полистироловых пластинках с лунками. Каждую сыворотку исследуют не менее чем в 6 - 8 разведениях, начиная с 1:50. Сначала нормальную разведенную 1:100 инактивированную сыворотку кролика разливают во все лунки по 0,5 мл. Затем в первую лунку (контроль сыворотки) вносят 0,5 мл испытуемой сыворотки, предварительно инактивированной и разведенной 1:25, перемешивают и 0,5 выливают. Во вторую лунку также добавляют 0,5 мл испытуемой сыворотки (1:25), перемешивают, переносят 0,5 мл в третью лунку и титруют сыворотку до конца ряда, из последней лунки 0,5 мл выливают. Таким образом получают ряд последовательных двукратных разведений испытуемой сыворотки, начиная с 1:50, в объеме 0,5 мл.

В первые лунки (контроль сыворотки) добавляют микропипеткой по 0,05 мл контрольных эритроцитов. Затем в каждую лунку, начиная со второй, с помощью микропипетки добавляют по 0,05 мл диагностикума. Пластины осторожно встряхивают до полного перемешивания содержимого лунки, следя, чтобы не было разбрызгивания жидкости, и оставляют при комнатной температуре. Учет реакции проводят через 2 - 3 часа.

При постановке РПГА предусматриваются следующие контроли:

а) контроль качества нормальной сыворотки кролика (1:100) проводят в двух лунках. К 0,5 мл сыворотки добавляют в первую лунку 0,05 мл 2,5% взвеси диагностикума, во вторую - 0,05 мл контрольных эритроцитов;

б) качество диагностикума проверяют путем титрования специфической бруцеллезной сыворотки, начиная с разведения 1:50 до 1:100000. Затем в каждую лунку добавляют по 0,05 мл 2,5% взвеси диагностикума.

Реакция считается специфической, если в контролях исследуемых и контрольной сыворотки отсутствует гемагглютинация, а титр специфической сыворотки в реакции будет соответствовать титру, указанному на этикетке флаконов эритрицитарного диагностикума.

Оценка реакции проводится по следующей схеме:

4+ - эритроциты покрывают все дно лунки равномерным слоем, иногда наблюдается зонтик.

3+ - эритроциты выстилают все дно лунки тонким равномерным слоем, но площадь его меньше, чем при 4-крестовой реакции, размеры зонтика также меньше.

2+ - агглютинат небольшой, расположен в центре лунки.

1+ - вокруг осадка эритроцитов в центре виден небольшой агглютинат.

Отрицательная реакция - осадок эритроцитов на дне лунки в виде пуговки или маленького кольца.

За титр сыворотки принимают ее последнее разведение с оценкой реакции не менее чем 3+. Оценка результатов исследования сывороток на бруцеллез в РПГА у людей: титр 1:50 - реакция сомнительная, титр 1:100 и выше - реакция положительная. При записи результатов РПГА следует указывать титр сыворотки.

Техника постановки РПГА микрометодом.

РПГА может быть выполнена в микрообъемах с помощью микротитратора типа Такачи (или круглодонных микропланшетах с микропипетками), который позволяет проводить титрование в объемах 25 и 50 мкл. Техника постановки реакции, последовательность всех операций такая же, как и при использовании макрометода. Следует учитывать то, что чувствительность микрометода обычно на одно разведение ниже, чем макрометода.

Для постановки реакции в микротитраторе с помощью пипетки-капельницы в каждую лунку вносят разводящую жидкость в объеме 50 мкл. Затем с помощью титраторов с головкой объемом 50 мкл забираем исследуемую сыворотку, погружая в нее головку. Титратор с сывороткой переносят в первую лунку и делают несколько вращательных движений в обе стороны. Затем титратор переносят в следующую лунку и повторяют манипуляцию. Титрование можно проводить одновременно в нескольких рядах. После титрования всего ряда титратор промывают дистиллированной водой путем вращательных движений, удаляют воду из головки с помощью тампона и обжигают ее на пламени горелки.

В лунки после титрования добавляют 25 мкл эритроцитарного диагностикума, разведенного 1:10, пластины слегка встряхивают до получения гомогенной взвеси. Учет проводят через 2 - 3 часа по аналогичной схеме, как и при использовании макрометода.

Нет данных по стоимости, ссылка устарела

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.06.012.000.01 "Определение суммарных антител к бруцеллам (Brucella spp.) в реакции пассивной гемагглютинации"

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 2 р.д. *

Описание

Бруцеллез - инфекционное заболевание, склонное к хроническому течению, характеризуется поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, половой и других систем. Относится к группе зоонозов. Возбудитель бруцеллеза - бруцеллы - мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллеза полученные клинико-эпидемиологические данные должны быть подтверждены лабораторно. С этой целью используются бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллезе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель B. melitensis и в 5-15%, если B. abortus). Культура СМЖ бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи рост чистой культуры бруцелл можно получить через 5-10 суток, а в ряде случаев через 20-30 суток. В связи с этим для диагностики бруцеллеза широкое распространение получили серологические методы.

Показания к назначению

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Результат исследования – качественный.

Референсные значения: не обнаружено

Для определения антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке крови используется РПГА, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. У большинства больных титры специфических антител в крови повышаются на 3-5-й день от начала заболевания.

При однократном исследовании диагностически значимым титром является 1:160 и выше. Если в первом анализе титр ниже, то необходимо через 7-12 дней взять повторную пробу. Увеличение титров антител в четыре и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 недели, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. Повышенный титр антител выявляется у 97 % больных в первые 3 недели заболевания. Наиболее высокий титр антител наблюдают обычно через 1-2 месяца от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться.

РПГА выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7 % пациентов в течение 2-х лет после перенесенной инфекции. Поэтому метод РПГА не может быть использован для дифференциальной диагностики бруцеллеза с другими инфекционными заболеваниями, при наличии в анамнезе бруцеллеза в течение 2-х последних лет.

Причиной ложноположительных результатов могут служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В ряде случаев могут отмечаться ложноотрицательные результаты РПГА у больных бруцеллезом, что объясняется эффектом прозоны или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллеза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител > 1:160 является надежным объективным указанием на текущую или имевшую недавно место инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуется проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9, 12 месяцев, а в течение второго года – ежеквартально.

Если при первом исследовании уровень антител ниже или антитела не определяются необходимо исследовать парные сыворотки. При исследовании в парных сыворотках для подтверждения диагноза необходимо исследовать кровь с интервалом в 10-14 дней.

Где сдать анализ?

Адреса медицинских центров, в которых можно заказать исследование, уточняйте по телефону 8-800-100-363-0
Все медицинские центры СИТИЛАБ в г. Москва >>

Код	Наименование	Срок	Цена	Заказ
11-10-001	Общий анализ крови (CBC/Diff - 5 фракций лейкоцитов)	от 1 р.д.	370.00 р.
45-20-106	Ат к Mycobacterium tuberculosis (суммарные)	от 5 р.д.	1160.00 р.
46-20-003	Ат к Aspergilius fumigatus IgG	от 4 р.д.	630.00 р.
47-20-202	Ат к Giardia lamblia (лямблии) суммарные	от 3 р.д.	660.00 р.

* На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.
Приведенная информация носит справочный характер и не является публичной офертой. Для получения актуальной информации обратитесь в медицинский центр Исполнителя или call-центр.

Серологическая диагностика – наиболее распространенный метод диагностики бруцеллёза, при котором с помощью различных реакций проводится выявление специфических антител к бруцеллёзу и выявляется нарастание титра антител.

Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных:

- в реакции агглютинации (РА) в пробирках,

- реакции связывания комплемента (РСК),

- реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК),

- реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД),

- пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба - РБП)

- реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

и в молоке коров - кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.

Почему так много серологических реакций на бруцеллёз?

Во время бруцеллеза в организме животного происходят защитные реакции, вызванные внедрением возбудителя. На разных этапах развития заболевания в организме больного животного вырабатываются те или иные антитела, которые выявляются в одной или в нескольких реакциях. Так в начале заболевания образуются антитела, которые выявляются в основном в реакции агглютинации (РА), а самые поздние антитела (спустя шесть месяцев после заражения) улавливаются в реакции иммунодиффузии (РИД). Поэтому для выявления бруцеллеза разработана не одна реакция. На разных стадиях заболевания животного в зависимости от дозы попавшего в организм возбудителя, и от резистентности самого организма животного в тот или иной момент наличие специфических антител к бруцеллёзу показывают лишь определённые реакции.

На ранних стадиях бруцеллезного процесса наиболее чувствительна реакция агглютинации (РА). Агглютинины в сыворотке крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10-15-го дня заболевания. Наиболее высокий титр антител отмечают обычно через 1-3 месяцев от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться. У отдельных особей повышенный титр антител может сохраняться до 2 лет.

Реакция связывания комплемента (РСК) и реакция длительного связывания комплемента на холоде (РДСК) – специфичные и высокочувствительные методы диагностики бруцеллёза, дополняющие данные РА. РДСК часто применяют вместо РСК для исследования сывороток крови, обладающих антикомплементарными свойствами. Обе реакции позволяют выявлять комплементсвязывающие антитела к бруцеллам, появляющиеся в крови больного животного позже агглютининов. В связи с этим РСК (РДСК) позволяет выявить большее количество больных животных в стадах с хронической инфекцией бруцеллёза. Максимальные титры комплементсвязывающих антител в РСК (РДСК) регистрируют к 4-му месяцу заболевания, в дальнейшем титр снижается, но в небольшом количестве их обнаруживают в течение нескольких лет.

Роз бенгал проба (РБП) применяется при плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез в качестве экспресс-метода на неиммунизированных противобруцеллезными вакцинами животных. В основе этой реакции лежит непосредственное соединение антигена и антитела. РБП является специфичным и чувствительным методом, благодаря кислой реакции антигена, ингибируется проявления неспецифических антител. На постановку РБП (роз бенгал проба – пластинчатая цветная реакция агглютинации) уходит несколько минут, однако с ее помощью нет гарантированной возможности количественно оценить наличие антител Сыворотки крови животных благополучных хозяйств, реагировавшие положительно на РБП, сразу же исследуют в РА и РСК, РА и РИД, или в РНГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Сыворотки, с которыми получена отрицательная РБП, дополнительно в РА и РСК (РДСК) не исследуют.

Реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД).

Сущность метода состоит в выявлении бруцеллезных антител, основанном на способности антител и антигена диффундировать в агаровом геле и при взаимодействии образовывать комплекс антиген-антитело, наблюдаемый в виде линии преципитации. Результат исследований становится известен лишь спустя 48 часов. Используется для контроля эпизоотического состояния по бруцеллезу животных не ранее чем через 1,5 месяца после вакцинации и для дифференциации положительных реакций, полученных в РА или (и) РСК (РДСК) по истечении 6 месяцев после введения вакцины;

При получении положительного результата в реакции иммунодиффузии, животное признают больным бруцеллезом.

Кольцевая реакция применяется с целью ориентировочной проверки благо­получных по бруцеллезу молочных стад и для проверки молока на рынках. Сущность кольцевой реакции заключается в том, что в молоке бруцеллезных животных при добавлении антигена образуется комплекс антитела с антигеном, который адсорбируется жировыми частицами молока. Жировые частицы вслед­ствие своего малого удельного веса поднимаются наверх, увлекая адсорбиро­ванный агглютинат, который в зависимости от цвета антигена образует на по­верхности жидкости окрашенное кольцо. Преимущество КР с молоком заключается в простоте постановки и быстроте получения результатов. Всех животных, реагирующих по КР в свободных от бруцеллеза стадах, необходимо перепроверять по РА и РСК (РДСК).

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) при бруцеллезе является специфической и высокочувствительной. Для её проведения используют эритроцитарный бруцеллезный полисахаридный диагностикум. Метод основан на выявлении бруцеллезным эритроцитарным антигеном специфических антител в сыворотке крови больных бруцеллезом животных или иммунизированных вакцинами против бруцеллеза животных. По диагностической эффективности значительно превосходит используемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РБП и РИД с ОП-С антигеном), вместе взятые, выявляя больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания. При этом является экспресс-методом пригодным для массовой диагностики бруцеллеза животных, результат становится известным в течение 3-4 часов,

Мелкий рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, в РНГА не исследуют.

Интерпретация результатов серологических исследований на бруцеллёз во многом зависит от достоверных данных о благополучии хозяйства по бруцеллёзу и вакцинации против бруцеллёза.

Важно соблюдать сроки разрешающие проведение серологических исследований после применения вакцины, указанные в инструкции. Так как например аглютиногенные вакцины (из шт. Б. абортус 19, Б. абортус 82 и др.) изготавливают из культур бруцелл, находящихся в S- или в SR (RS)-форме. В организме животных, привитых такими вакцинами, синтезируются специфические антитела, гомологичные S-антигену, выявляемые стандартными бруцеллезными диагностическими препаратами в РА, РСК, РДСК, РБП КР с молоком, РИД с 0-ПС антигеном и др. При нарушении инструкции у таких животных будут выявлены вакцинные специфические антитела.

Также важно строго соблюдать правила отбора и сроки доставки материала для исследования, которые оказывают большое влияние на результаты исследований.

Помимо этого, иногда встречаются индивидуальные неспецифические реакции при исследовании сывороток на бруцеллёз.

При постановки РА и РБП, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакцированных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также рядом других причин.

Кольцевая реакция с молоком (КР) может давать положительные реакции при исследовании молока коров, больных маститами и другими болезнями, сопровождающимися лихорадкой, а также в первые две недели после отела.

Поэтому при выявлении положительных или сомнительных реакций, рекомендуется проводить повторное исследование материала, взятого от таких животных, и исследовать их спустя 15-30 суток в аналогичных реакциях, а также в других реакциях показывающих нарастание или падение титра антител.