Диагностировать коклюш в ранние сроки позволяет метод

Многие считают, что коклюш — детская инфекция, редко встречающаяся и легко протекающая. В действительности и коклюш, и паракоклюш становятся все более серьезной проблемой в мире из-за тяжелого течения и наличия атипичных, или стертых, форм. В этой статье мы расскажем, как вовремя распознать это непростое заболевание.

Коклюш — острое инфекционное заболевание, поражающее преимущественно детский организм и сопровождающееся спазматическим кашлем. Инфекция передается воздушно-капельным путем: при кашле, чихании и даже во время разговора.

Коклюш вызывает бактерия Bordetella pertussis, которая попадает в дыхательные пути и прикрепляется к клеткам эпителия. В результате микроскопические реснички, помогающие выводить мокроту и очищать бронхи, повреждаются. Бактерия начинает размножаться и выделять несколько видов токсинов, которые и приводят к появлению симптомов.

Первый симптом коклюша — ночной кашель. Постепенно он усиливается и появляется днем. Так может продолжаться до двух недель. Со временем состояние ухудшается, кашель становится спастическим, или спазматическим. Во время приступа человек с трудом может вдохнуть, напрягается, лицо становится красным или даже синеватым, появляется ощущение нехватки воздуха. Приступ такого мучительного кашля иногда заканчивается рвотой или выделением очень густой стекловидной мокроты.

Проблема своевременной диагностики заключается в том, что патология начинается с незначительных симптомов. Сухое покашливание ночью или перед сном напоминает кашель при ОРВИ. Температура тела больного может как незначительно повыситься на несколько дней, так и остаться нормальной. Общее самочувствие инфицированного почти не страдает. И только когда появляются более серьезные симптомы, врачи начинают задумываться о полноценной лабораторной диагностике коклюша.

Еще в начале прошлого столетия коклюш считался одной из самых опасных инфекций, он ежегодно становился причиной смерти тысяч детей. Но даже на современном уровне развития медицины коклюш может протекать очень тяжело.

Исследования, проведенные в 2000-е годы, указывают на значительное увеличение за последнее десятилетие доли тяжелых и среднетяжелых случаев коклюша. Если в 1990-х годах регистрировалось только 18,6% тяжелых форм болезни, то в 2000-е — уже 43,2%.

Токсины, которые выделяет возбудитель коклюша, поражают дыхательный центр в головном мозге. Из-за этого возникает нарушение дыхания, в крови становится меньше кислорода, увеличивается содержание углекислого газа. Возникает гипоксия — кислородное голодание. Поражаются сосуды, развивается повреждение головного мозга (энцефалопатия). В крови увеличивается количество лимфоцитов и лейкоцитов.

К осложнениям коклюшной инфекции относят ателектаз легкого (сближение и сжатие стенок легкого, сопровождающееся выходом воздуха с данного участка), кровоизлияния на коже и в конъюнктиву глаза, поражение сосудов, энцефалопатию, легочное сердце. Из-за снижения иммунитета часто присоединяется вторичная инфекция, развивается бронхит или пневмония.

Паракоклюш — острое инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Bordetella parapertussis. Она очень похожа по своему строению на возбудитель коклюша и поэтому вызывает практически такие же симптомы.

Раньше считалось, что паракоклюш — более легкое заболевание. Но последние исследования доказали, что он тоже может привести к тяжелому судорожному кашлю, рвоте и нарушению дыхания. Единственное клиническое отличие этого заболевания от коклюша — отсутствие повышения уровня лейкоцитов в крови.

Особо тяжелые последствия наблюдаются при заражении взрослых и подростков. По данным серологических исследований, проведенных в США, 12–21% взрослых с кашлем более 2 недель могут болеть коклюшем. В России ситуация примерно такая же. Согласно исследованиям ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, проведенным в очагах коклюша, после контакта с зараженным заболело 23,7% взрослых.

Существуют бактериологические, серологические и ПЦР-методы диагностики коклюша и паракоклюша. Биологический метод (посев материала из носоглотки и культивирование его на питательной среде) информативен на раннем этапе. В первые дни болезни он дает достоверный результат в 86–98% случаев. Но со временем показатели точности снижаются до 15–20%. Особенно если ребенок начинает принимать антибиотики.

Каждый из анализов на коклюш имеет свои особенности, показания, принципы интерпретации результатов. Давайте разберем их все.

Этот анализ проводят в катаральном периоде заболевания, то есть в первые дни появления кашля. Исследование назначают после контакта с больным коклюшем, особенно если у ребенка нет прививок или нет данных об их проведении.

Чувствительность теста колеблется в зависимости от качества и сроков исследования от 20 до 90%. При этом анализ выявляет и коклюш, и паракоклюш. В более поздний период заболевания и при приеме антибиотиков его результативность сильно снижается. Исследование проводится натощак, через 2–3 часа после питья или еды. Материал забирают в среднем на 5–7 день заболевания двукратно: два дня подряд или через день. Мазок берется с поверхности ротоглотки.

Биоматериал помещают в специальную емкость и направляют в лабораторию. Там проводится посев материала на питательную среду. Через несколько дней проводится микроскопическое исследование выросших колоний бактерий. Предварительный результат обычно можно получить на 3–5 день, окончательный — на 5–7 день.

Наличие Bordetella в организме говорит или о заболевании коклюшем (паракоклюшем), или о бессимптомном носительстве. Лечение необходимо в любом из этих случаев.

Исследование проводят при подозрении на инфекционное заболевание, при кашле, повышении температуры и практически при любых заболеваниях. Анализ может дать информацию о наличии воспаления в организме, но что послужило причиной, на его основании сказать нельзя.

Кровь забирают натощак и отвозят в лабораторию. Само исследование проводится или на специальном гемоанализаторе, или с помощью ручного подсчета клеток крови.

Результаты анализа крови при коклюше у детей нельзя анализировать без учета клинической картины и данных других методов исследования. При заражении коклюшной инфекцией значительно повышается количество лейкоцитов и лимфоцитов, при этом скорость оседания эритроцитов (СОЭ) остается в пределах нормы. При паракоклюше повышения лейкоцитов не наблюдается.

При проведении анализа на антитела к коклюшу выявляют три вида иммуноглобулинов — IgA, IgG и IgM.

ИФА назначают при подозрении на коклюш, часто на поздних стадиях болезни, когда бактериологическое исследование уже неэффективно. То есть начиная со 2-3 недели заболевания. Диагностическая чувствительность этого метода — 66,6%, специфичность — 100%.

Забор крови проводится натощак, не раньше чем через 4 часа после последнего приема пищи. После этого из крови выделяют сыворотку, которая и является материалом для исследования. Собранный материал отправляется в лабораторию, где проводится серологический анализ на коклюш методом ИФА.

Исследование можно проводить в течение первых 4-х недель заболевания. Чувствительность этого теста превосходит бактериологическое исследование во много раз. Специфичность метода —100%.

Мазок берется из носа или из ротоглотки. Забор материала желательно проводить натощак или через 2-3 часа после питья и еды. Предварительно полоскать рот не нужно.

В лаборатории в забранном материале определяются специфические участки ДНК бактерии, которая вызывает коклюш. Положительный результат говорит о заболевании коклюшем или о бактерионосительстве.

Не стоит самостоятельно выбирать тип анализа на коклюш, необходимо проконсультироваться со специалистом. И помните, на результат исследования влияет качество подготовки и проведения: техника взятия материала, условия транспортировки, состояние питательных сред.

В среднем определение каждого типа иммуноглобулинов обойдется в 700–850 рублей. Бактериологический анализ на коклюш будет стоить уже дороже — от 850 до 1400 рублей. Ценовая разница при ПЦР-тестировании составляет от 300 до 800 рублей.

При этом стоит учесть расходы на взятие анализа крови (100–150 рублей) или мазка (200–250 рублей). Дополнительно клинический анализ крови с определением СОЭ будет стоить примерно 400–460 рублей.

Коклюш – острое инфекционное заболевание органов дыхания, основным проявлением которого является длительный приступообразный кашель. Болеют коклюшем люди любого возраста – у кого нет достаточного иммунитета после вакцинации, тот в зоне риска. Однако тяжелее всего переносят недуг маленькие дети, у них часто возникают осложнения со стороны нервной системы, расстройства дыхания и кровообращения. Своевременная диагностика коклюша в большинстве случаев позволяет избежать затягивания болезни и развития осложнений.

Почему важно своевременно диагностировать коклюш

Коклюш вызывают бактерии Bordetella pertussis. Они выделяются больным в окружающую среду во время кашля и чихания на протяжении практически всей острой фазы болезни (в среднем 20 дней). С этими микроорганизмами можно бороться с помощью антибиотиков, однако чтобы был эффект, лечение должно быть назначено на ранней стадии заболевания. Вообще в течении коклюша выделяют четыре периода:

• инкубационный (длится 10-14 суток от момента заражения) – время, необходимое микроорганизму для проявления своих патогенных свойств;
• продромальный или катаральный (длится 3-14 дней) – появляются первые признаки болезни, не отличающиеся особо от таковых при обычном ОРЗ, – сухой кашель, субфебрильная температура;
• спазматический (длится 4-6 недель) – период специфического коклюшного кашля:
• фаза реконвалесценции – восстановления и выздоровления.

По клинической картине диагностировать коклюш можно только в третьем периоде заболевания, но для начала специфической антибактериальной терапии, позволяющей остановить прогрессирование патологии, это уже поздно. Оптимальное время для лечения антибиотиками – первая неделя заболевания, то есть продромальный период. Отсюда выплывает первое преимущество своевременной диагностики коклюша – возможность проведения специфического лечения болезни.

Если коклюшем заболеет маленький ребенок (до года), которому не были сделаны противококлюшные прививки, течение недуга будет очень тяжелым. У таких деток возникают серьезные осложнения со стороны нервной, сердечно-сосудистой и респираторной системы, требующие оказания помощи в условиях реанимации.

К сведению! По данным Американского центра по контролю за инфекционными болезнями, ежегодно в мире коклюшем заболевает приблизительно16 млн. человек, около 200 тис. случаев недуга заканчивается летально, большинство умирающих – малыши первого года жизни.

У детей постарше, не прошедших курс вакцинации, риск тяжелого течения коклюша ниже, но есть. У больных может развиться пневмония, ателектаз легкого, энцефалопатия, судороги. Однако если заболевание будет выявлено своевременно, врачи смогут приложить все усилия для стабилизации состояния пациента и недопущения возникновения осложнений – это второе преимущество своевременной диагностики коклюша.

У правильно вакцинированных детей, подростков, взрослых людей коклюш, как правило, не развивается, а если и развивается, то в виде стертой или малосимптомной формы болезни. Такие больные представляют не меньшую опасность для окружающих, чем больные с явными признаками коклюша, поскольку и первые, и вторые выделяют инфекцию в окружающую среду с кашлем. Если же заболевание будет выявлено и будет начата антибиотикотерапия, заразность больного резко снизиться, соответственно другие члены семьи (особенно маленькие дети) не будут подвергаться риску инфицирования опасной бактерией. Это еще одно преимущество ранней диагностики коклюша.

В каких случаях показано обследование на коклюш

Лабораторное обследование на коклюш рекомендуется проводить следующим категориям населения:

• детям, кашляющим более 5-7 дней (особенно если кашель имеет приступообразный характер);
• лицам, которые тесно контактировали с больным коклюшем дома, в садике, в школе, на работе;
• взрослым с подозрением на коклюш (особенно если в семье есть грудные дети или же если больной является работником детского учреждения).

Роль взрослых в распространении коклюша среди детей очень высокая – это доказали многочисленные научные исследования. У взрослых болезнь протекает зачастую как затянувшееся ОРЗ, а кашель не имеет характерных для рассматриваемого заболевания черт. Поэтому многие врачи и сами больные не задумываются о коклюше, считая его исключительно детской болезнью. В таких ситуациях пролить свет на истинную причину недомогания может только лабораторная диагностика.

Анализы при подозрении на коклюш

Диагностика коклюша проводится следующими методами:

• бактериологическим (посев на питательные среды);
• молекулярно-генетическим (обнаружение ДНК возбудителя коклюша);
• серологическим (определение концентрации в крови специфических антител).

Для каждого из этих исследований есть свои сроки проведения, если их не соблюдать информативность и достоверность анализа значительно понижается.

Оптимальный срок для забора материала на бактериологический анализ – это 5-7 дни болезни. Если недуг длится 3 и более недель – исследование будет малоинформативным. Кроме того, материал должен быть взят до начала антибиотикотерапии, в ином случае возможны ложноотрицательные результаты, при которых роста микроорганизмов на питательных средах нет, а инфекционное заболевание есть. Чтобы повысить достоверность бактериологического исследования, его проводят двукратно, например, на 5 и 6 дни болезни.

В лабораторных условиях возбудителя коклюша выращивают на искусственных средах, которые отличаются от естественной среды обитания данной бактерии. Поэтому очень важно, чтобы в ходе забора материала медицинский работник смог захватить как можно больше биомассы микроорганизма из глотки пациента. Для этого перед походом в лабораторию обследуемый не должен чистить зубы, кушать, пить, полоскать рот и горло. Если это условие нарушено, сдавать материал можно будет не ранее чем через 2-3 часа.

Выделения для анализа на коклюш забирают специальным тампоном с задней стенки глотки в инфекционной больнице или прямо в лаборатории. Далее материал сеют на питательные среды, в которых хорошо растет и размножается возбудитель коклюша. Есть еще один метод забора слизи для исследования – открытую чашку с питательной средой подносят непосредственно ко рту обследуемого во время кашлевого приступа.

Предварительный результат бактериологического анализа можно получить уже на 2-3 день после посева, а заключительный – только через 5-7 суток. Bordetella pertussis на искусственных средах растет достаточно медленно, поэтому бактериологом необходимо время для точной идентификации микроорганизмов.

Материалом для данного исследования служит соскоб с задней стенки глотки. Эффективность метода ПЦР в диагностике коклюша является самой высокой (около 80%), ложноотрицательные результаты встречаются редко. Проводится такой анализ в первые 3-4 недели заболевания, то есть когда в слизистой дыхательных путей еще присутствует Bordetella pertussis.

Особенности подготовки: нельзя чистить зубы, кушать и пить минимум за 2-3 часа до исследования, непосредственно перед взятием материала можно пополоскать рот кипяченой водой.

Серологическое исследование применяется для диагностики коклюшной инфекции на поздних сроках ее развития – приблизительно с 3 недели заболевания. В это время описанные выше методы оказываются малоэффективными, поскольку возбудителя в дыхательных путях уже нет, а сохранение кашля связано с остаточными воспалительными явлениями и перевозбуждением кашлевого центра в головном мозге.

В ходе серологической диагностики коклюша определяют титры антител к антигенам Bordetella pertussis трех классов:

• иммуноглобулины М – появляются на 2 недели заболевания;
• иммуноглобулины А – синтезируются с 2-3 недели;
• иммуноглобулины G – обнаруживаются только после 3 недели недуга.

Основным методом серологической диагностики коклюша является иммуноферментный анализ (ИФА). Исследуемый материал – венозная кровь. Подготовка к сдаче крови должна быть такой же, как и перед другими анализами: приходить в лабораторию необходимо утром натощак, за 12 часов до исследования желательно исключить физические нагрузки и не принимать лекарственные средства, если это возможно.

Особенностью серологической диагностики коклюша является необходимость в исследовании парных сывороток, то есть проведении двух анализов с промежутком в 10-14 дней. Такая тактика дает возможность выявить нарастание титров антител, которое говорит в пользу развивающегося заболевания, а не иммунитета, приобретенного вследствие ранее перенесенного коклюша или вакцинации.

Согласно рекомендациям ВОЗ подтверждением наличия коклюша у невакцинированных от этой инфекции детей является нарастание уровня антител Ig М и Ig А к одному или нескольким антигенам Bordetella pertussis. Для оптимальной лабораторной диагностики одновременно должны использоваться два метода исследования: бактериологический посев и серологический анализ крови.

Стоимость анализов на коклюш

Цены могут существенно отличаться в каждом из городов РФ.

В частных клиниках и лабораториях бактериологическое исследование на коклюш стоит в среднем 1,5 тыс. рублей. Определение титра антител к коклюшу обойдется по 750-800 рублей за каждый иммуноглобулин. Приблизительно такая же цена и у анализа глоточного соскоба на коклюш методом ПЦР. Дополнительно оплачивается услуга по забору материала: мазки и соскобы – 300-400 рублей, взятие венозной крови – 100-150 рублей.

Где можно сдать анализы на коклюш

Решать, какие исследования необходимо пройти больному, должен врач с учетом клинической картины заболевания, возраста пациента и эпидемических данных (были ли контакты с больными коклюшем и т.д.). Поэтому сначала следует обратиться именно к нему, а не идти прямиком в лабораторию.

С направлением врача сдать кровь и мазки на коклюш можно в государственных и частных медицинских учреждениях. При этом необходимо учитывать, что не все коммерческие лаборатории предоставляют полный комплекс исследований на коклюш – многие не проводят бактериологический анализ. С результатами обследования необходимо опять-таки идти к своему лечащему врачу, только он сможет грамотно интерпретировать полученные данные и назначить лечение.

Зубкова Ольга Сергеевна, медицинский обозреватель, врач-эпидемиолог

11,736 просмотров всего, 1 просмотров сегодня

Для диагностики коклюша в современное время доступно большое количество тестов и анализов, но как правильно выбрать необходимый и самый точный из них?

Итак, многие специалисты по всему миру рекомендуют:

Если кашель у подростков и взрослых длится менее двух недель, а у детей менее трёх недель то, целесообразно воспользоваться микробиологическими методами (посев) или методами амплификационной диагностики (полимеразно-цепная реакция, ПЦР) [1,2].

Если кашель у детей и взрослых длится более двух недель и в течение текущего года не проводилась вакцинация против коклюша то, целесообразно воспользоваться серологическими методами диагностики (например, иммуноферментным анализом, ИФА) [1,2].

Теперь немного подробнее о важных особенностях каждого метода.

1. Полимеразно-цепная реакция (ПЦР).

Необходимый материал для анализа — назофарингеальный мазок, но предпочтительнее использовать образец слизи из носоглотки [3].

ПЦР необходимо проводить в течение первых двух-трех недель от начала кашля, так как спустя четыре недели от начала заболевания количество бактерий B.pertussis в носоглоточном секрете стремительно снижается, также количество бактерий снижается, если проводилась антибактериальная терапия (более 5 дней [4]).

У младенцев и ранее не привитых детей ПЦР допустимо выполнять в течение первых четырёх недель от начала кашля [4,5].

Для большей точности ПЦР всегда рекомендуется проводить параллельно с посевом [1], следовательно, при заборе материала следует брать два образца одномоментно — один для ПЦР, другой для посева. Зачем? ПЦР может давать ложноположительные результаты, так как определяет только наличие или отсутствие ДНК возбудителя, а не наличие живых форм [6].

При заборе ПЦР рекомендуется пользоваться палочками из нейлона, рэйона и полиэстера. При использовании хлопковой ваты возбудитель гибнет [7].

При подозреваемом коклюше важно проводить дифференциальную диагностику с аденовирусной, бокавирусной инфекциями, гриппом, парагриппом, M.pneumoniae, Chlamydia trachomatis и Chlamydia pneumoniae [8].

ПЦР не рекомендуется проводить лицам, контактировавшим с больным коклюшем при отсутствии каких-либо симптомов [7].

2. Посев.

Посев на питательную среду — золотой стандарт диагностики коклюша [1—4].

Высокая вероятность получения наиболее точного результата отмечается у лиц, страдающих кашлем менее двух недель, если для лечения ещё не применялись антибактериальные препараты и, если вакцинация против коклюша проводилась более 12 месяцев назад [4].

Необходимый материал для проведения посева — отделяемое носоглотки.

Возбудитель коклюша — B.pertussis является очень чувствительным и привередливым микроорганизмом, поэтому рекомендуется, чтобы медперсонал строго следовал инструкции и соблюдал технику забора материала для анализа.

В среднем результат посева может быть готов через 4—10—14 дней [9,10], всё зависит от возможностей лаборатории. У ранее не болевших и не привитых против коклюша предварительный результат посева может быть готов уже через 72—96 часов [9,11].

Большим преимуществом посева является то, что можно определить чувствительность микроорганизма к антибиотикам и, следовательно, правильно подобрать препараты для последующего лечения. Кроме того, по данным посева, можно определить, какой конкретно штамм бактерии циркулирует на определённой территории и оценить эффективность применяемой вакцины [12].

3. Иммуноферментный анализ (ИФА).

В случае поздней диагностики, когда кашель длится более 3—4 недель и/или уже начата или проведена антибиотикотерапия, для лабораторного подтверждения коклюша можно воспользоваться серологическими методами диагностики, например, иммуноферментным анализом (ИФА).

При помощи ИФА можно определять антитела классов IgM, IgA и IgG к различным антигенам возбудителя: коклюшному токсину (PT), филаментозному гемагглютинину (FHA), пертактину (PRN). Наиболее специфичным антигеном является коклюшный токсин, так как это единственный антиген, который характерен только для B.рertussis [12]. Остальные антигены могут присутствовать и у других представителей Bordetella.

У 25% младенцев и 10% подростков антитела к коклюшному токсину могут отсутствовать [2,3].

Серологическое исследование для диагностики коклюша можно использовать с 3 до 12 недель с момента начала кашля [13,14]. Материалом для исследования является кровь.

Какой класс антител лучше определять?

1. Антитела класса IgM.

• Свидетельствуют об остром инфекционном процессе.
• Образуются не раньше второй недели от начала заболевания, следовательно, их определение раньше этого срока нецелесообразно [9,14].
• У некоторых детей и взрослых независимо от наличия вакцинации или перенесённого ранее заболевания антитела класса IgM могут вырабатываться в малом количестве и не определяться по данным анализа [9].
• Если определение IgM проводилось в первые две недели от начала заболевания и результат был отрицательным, то рекомендуется повторить анализ спустя 10—14 дней. Если отрицательный результат получен спустя 14 дней от начала заболевания, то смысла переделывать анализ нет, так как с течением времени количество IgM только уменьшается.

2. Антитела класса IgG.

• Обнаруживаются на третьей неделе от начала заболевания, достигают своего наибольшего значения на 6—8 неделе болезни, после чего их уровень постепенно снижается [9].

Определение специфических IgG является наиболее распространённым и стандартизированным методом при серологической диагностике коклюша [2,3]

• Для более точной диагностики при определении IgG рекомендуется использовать парные сыворотки, так как по данным одного анализа сложно сделать достоверный вывод, ведь неизвестно с чем связано присутствие IgG — с заболеванием или проведенной ранее вакцинацией.
• Рекомендуемый интервал между исследованиями составляет 10—14 дней. Результат считается положительным при нарастании титра в 2—4 и более раз [3,9,15].

Определение титра антител — оптимальный метод диагностики коклюша у ранее иммунизированных подростков и взрослых [1,9].

Определение IgG рекомендуется, если в течение текущего года (12 месяцев) не проводилась вакцинация против коклюша [1,9].

• При исследовании однократно взятой сыворотки (даже у ранее привитого более 12 месяцев назад взрослого или ребенка) результат по обнаружению антител класса IgG может быть расценен как положительный только в случае высокого титра (точное значение необходимо уточнять в лаборатории, так как данные разнятся в зависимости от техники анализа и используемых реагентов) [14].

4. Клинический анализ крови.

В общем анализе крови при коклюше характерно увеличение количества лейкоцитов и лимфоцитов [1—4]. Количество лимфоцитов увеличивается под действием токсина коклюшной палочки. [2], однако отсутствие повышения лейкоцитов не исключает коклюш. Клинический анализ крови является только дополнительным методом диагностики [5].

Имеются данные, что если по результатам клинического анализа крови у ребёнка определяется более 10 000 лейкоцитов в 1 мкл и более чем 50% из них составляют лимфоциты, то диагноз коклюша можно рассматривать как вероятный (конечно, при наличии характерной клинической картины) [16]. Если в повторном анализе — через 24 часа — отмечается повышение лейкоцитов более 20 000 в 1 мкл и из них более чем 50% лимфоцитов, то это свидетельствует о том, что вероятность коклюша крайне высока [16].

При оценке клинического (общего) анализа крови у маленьких детей также следует помнить, что если в течение беременности мама младенца прививалась от коклюша, то повышения лейкоцитов может и не быть [16].

5. Дополнительные обследования.

В связи с большим риском развития осложнений у детей первого года жизни в случае госпитализации рекомендуется выполнять рентгенографию органов грудной клетки (из-за риска пневмонии) и эхокардиограмму (из-за риска легочной гипертензии). Остальные исследования — по показаниям.

Подробнее о симптомах коклюша и его лечении можно прочитать в наших статьях по тегу #коклюш.

3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ

Диагностика коклюша и паракоклюша

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Н.А.Кошкина); Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" (Г.Я.Ценева, Н.Н.Курова); Федеральным бюджетным учреждением науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.Б.Яцышина, Т.С.Селезнева, М.Н.Прадед); Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства" (Ю.В.Лобзин, И.В.Бабаченко).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 мая 2013 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

Термины и сокращения

Термины и сокращения

АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ГОСТ - Государственный стандарт

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

КУА - казеиново-угольный агар

ME - международные единицы

МУ - методические указания

ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция

ПСК - период судорожного кашля

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РА - реакция агглютинации

РИФ - реакция иммунофлуоресценции

РНК - рибонуклеиновая кислота

СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормы

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

СП - санитарно-эпидемиологические правила

ТЕ - буфер Трис-ЭДТА

ТУ - технические условия

ФС - фармакопейная статья

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)

Ig - иммуноглобулин

IL - интерлейкин

FHA - filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)

NASBA - nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)

PT - pertussis toxin (коклюшный токсин)

RS-инфекция - инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом

1. Область применения

В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств В. pertussis, В. parapertussis и В. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций - унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.

Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.

2. Введение

В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. - 16 млн заболевших, 195 тыс. смертей).

Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95%) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2-5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности, несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7-14 лет - до 50,0%, дети 3-6 лет - до 25,0%, наименьшую долю - дети в возрасте 1-2 лет - 11,0% и дети до 1 года - 14,0%. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2-3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65% составляют привитые.

Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.

Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10-20%. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).

Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.

3. Характеристика рода Bordetella, биологические свойства возбудителей коклюша и паракоклюша

________________
* Слово "Bordetella" в наименовании раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: В. ansorpii, В. avium, В. bronchiseptica, В. hinzii, В. holmesii, В. parapertussis, В. pertussis, В. petrii, В. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана В. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. В. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. В. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), В. bronchiseptica вызывала длительный кашель. В. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: В. hinzii и В. holmesii. В. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. В. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена В. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана В. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена В. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).

Морфологические и культуральные свойства

Бактерии рода Bordetellae - мелкие (0,2-0,5 мкм 0,5-2,0 мкм) грамотрицательные коккобациллы. В мазках - часто биполярно окрашенные, одиночные или в парах, реже в цепочках, имеют нежную капсулу. Все, за исключением В. petrii, - строгие аэробы. Температура выращивания бордетелл +35-37 °С (оптимально +35 °С). Бордетеллы требовательны к условиям роста: 130-150 мг %аминного азота, кровь, дрожжевой экстракт, никотиновая кислота, аминокислоты (цистин, пролин, метионин, серин, глютамин и др.); наиболее требователен возбудитель коклюша, он растет только на специальных средах, в то время как остальные представители рода растут на кровяном агаре. Классической средой для первичного выделения В. pertussis является среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар), позднее были предложены синтетические и полусинтетические среды, в частности, казеиново-угольный агар (КУА). На указанных средах бордетеллы вырастают в виде характерных колоний: на среде Борде-Жангу - выпуклые, гладкие, блестящие, серебряного цвета, напоминающие капли ртути, окруженные зоной гемолиза; на КУА - выпуклые, гладкие, серого цвета с жемчужным, желтоватым или беловатым оттенком. Колонии маслянистые, легко снимаются петлей. В. parapertussis и В. holmesii за счет образования пигмента вызывают потемнение сред с кровью, образуют бурую подложку.

Ростовые характеристики основных видов бордетелл