Фекальные стрептококки вода нормативные документы

Нормы качества воды для питьевых нужд

ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения (World Health Organization) - это специализированное учреждение Организации Объединенных Наций, основная функция которого состоит в решении международных проблем здравоохранения и охраны здоровья населения.

USEPA - Агентство по охране окружающей среды США (U.S. Environment Protection Agency) -правительственное учреждение США, в задачу которого входит защита здоровья населения и охрана окружающей среды.

Общие физико-химические показатели

В таблице 9 приведены параметры, нормируемые в России и за рубежом, а также ряд других параметров, часто употребляемых в водоподготовке. Многие из этих величин вообще не нормируются и, тем не менее, важны для оценки физико-химических свойств воды. Как правило, эти дополнительные параметры не только непосредственно определяют качество воды, но, главным образом, содержат информацию, без которой невозможно подобрать оптимальную схему очистки воды.

Нормы качества воды для питьевых нужд. Общие физико-химические показатели

Общая минерализация (солесодержание)

Электропроводность (при 20*С)

Окислительно-восстановительный потенциал (Eh)

Степень насыщения кислородом

* - пробел означает, что данный параметр не нормируется

К числу органолептических показателей относятся те параметры качества воды, которые определяют ее потребительские свойства, т.е. те свойства, которые непосредственно влияют на органы чувств человека (обоняние, осязание, зрение). Наиболее значимые из этих параметров - вкус и запах - не поддаются формальному измерению, поэтому их определение производится экспертным путем. Работа экспертов, дающих оценку органолептическим свойствам воды, очень сложна и ответственна и во многом сродни работе дегустаторов самых изысканных напитков, так как они должны улавливать малейшие оттенки вкуса и запаха.

Нормы качества воды для питьевых нужд. Органолептические показатели

градус Pt-Co шкалы

ЕМФ (по формазину)

* - пробел означает, что данный параметр не нормируется
** - величина нормируется, но единицы измерения не приводимы к российским

В таблице ниже приведены показатели, характеризующие предельные концентрации основных неорганических веществ, влияющих на качество питьевой воды. За основу взят перечень, приведенный в СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода и водоснабжение населенных мест" (как наиболее полный). Этот список был также дополнен несколькими важными неорганическими элементами, впрямую не нормируемыми в России, но играющими большую роль при водоподготовительных мероприятиях.

Прочерк означает, что данный параметр не нормируется.

Нормы качества воды для питьевых нужд. Неорганические вещества

Асбест (миллионов волокон на л.)

Приводятся предельные концентрации, в мг/дм 3 .

** — в пересчете на нитраты и нитриты соответственно.

Нормы качества воды для питьевых нужд. Бактериологические и паразитологические показатели

Общее микробное число

10 (при 22'С)
100 (при 37"С)

Общие колиформные бактерии

Термотолерантные колиформные бактерии

Радиологические показатели качества воды

Общая а - радиоактивность

Общая b - радиоактивность

Радий -226 и Радий -228 суммарно

Приведенная эффективная доза

1. При превышении этих значений проводится подробный поэлементный радиохимический анализ.
2. В пересчете из pCi/l (пико-Кюри на литр) в Бк/л (Беккерель на литр). По нормам США предельный показатель для общей альфа - радиоактивности составляет 15 pCi/l, а для радия 226 и радия 228 суммарно - 5 pCi/l.
3. В пересчете из mRem/year. В нормах USEPA имеется в виду не общая доза, а только суммарно от источников b-частиц и фотонов. Отнесена в эту графу в силу своей физической сути (т.е. доза, а не радиоактивность).
4. Индикаторный параметр, согласно Директиве ЕС "по качеству питьевой воды. " 98/93/ЕС от 1998 г. Не включает тритий. калий-40, радон и продукты распада радона.
5. Индикаторный параметр, согласно Директиве ЕС "по качеству питьевой воды. " 98/93/ЕС от 1998 г.

Нормы качества воды для паровых, водогрейных котлов и тепловых сетей

В настоящее время вводится в строй много паровых и водогрейных котлов импортного производства, для определения водно-химического режима которых обязательно нужно учитывать требования к качеству воды завода-изготовителя и нормативные требования, действующие на территории РФ. При разночтении показателей выбираются более жесткие требования.

Правила устройства и безопасной эксплуатации паровых и водогрейных котлов ПБ 10-574-03. Госгортехнадзор России.

Правила распространяются на:

Правила не распространяются на:

Показатели качества питательной воды для котлов с естественной и многократной принудительной циркуляцией паропроизводительностью 0,7 т/ч и более не должны превышать значений, указанных: для паровых газотрубных котлов - в таблице 13;

Нормы качества питательной воды для паровых газотрубных котлов

Для котлов, работающих

на жидком топливе

на других видах топлива

Прозрачность по шрифту, см, не менее

Общая жесткость, мкг х экв/кг

Содержание растворенного кислорода
(для котлов паропроизводительностью
2 т/ч и более), мкг/кг

* Для котлов, не имеющих экономайзеров, и котлов с чугунными экономайзерами содержание растворенного кислорода допускается до 100 мкг/кг.

Для водотрубных котлов с естественной циркуляцией (в том числе котлов-бойлеров) и рабочим давлением пара до 4 МПа (40 кгс/см 2 ) - в таблице ниже;

Нормы качества питательной воды для водотрубных котлов с естественной циркуляцией и рабочим давлением пара до 4 МПа (40 кгс/см 2 )

Вода является неотъемлемой составляющей всех живых систем. В среднем, человек потребляет 2,5 литра воды в день. Наряду с полезным кальцием, магнием и калием вода несет в себе и вредные для здоровья человека элементы, такие как нитраты, нитриты, кадмий и тому подобное. Характеристики употребляемой нами жидкости определяют качество и продолжительность жизни. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (WHO, 2007), около 1,1 миллиарда человек не имеют доступа к безопасным источникам водоснабжения, а около 2 миллиона человек ежегодно умирают от заболеваний, передающихся через питьевую воду. Тошнота и диарея – не самое опасное, что вызывают микроорганизмы. Бактерии и вирусы в прямом смысле могут отравлять нашу жизнь, вызывая болезни с летальным исходом (например, Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма) или опосредовано приводя к смертельным случаям (Helicobacter pylori – возможная причина рака ЖКТ). В Российской Федерации состояние воды регламентируются несколькими нормативами в зависимости от предназначения (смотреть таблицу).

Требования к микробиологическим показателям качества воды в Российской Федерации в зависимости от хозяйственной деятельности человека

Показатель	Природная вода 1	Вода бассейнов 2	Нецентр. водоснаб. 3	Центр. водоснаб. 4	Бутилированная вода 5
Общая микробная численность (ОМЧ), КОЕ / 1 мл	–	–	не более 100	не более 50	не более 20
Общие колиформные бактерии (ОКБ), КОЕ / 100 мл	не более 1000 (питьевая вода) не более 500 (рекреационное назначение)	не более 1	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Термо-толерантные колиформные бактерии (ТКБ), КОЕ / 100 мл	не более 100	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Колифаги, БОЕ / 100 мл	не более 10	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 1000 мл
Споры сульфит-редукторов	–	–	–	отсутствие в 20 мл	отсутствие в 20 мл
Возбудители кишечных инфекций	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	отсутствие в 1000 мл
Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	–

Оценка качества по микробиологическим показателям сводится к определению в объекте доли микроорганизмов, связанных с человеком и его продуктами жизнедеятельности.

Прежде всего, определим единицы измерения количества микробов. КОЕ/мл (колониеобразующие единицы) – количество жизнеспособных микробных клеток в миллилитре. Если производится оценка вирусных частиц в среде, то указывается БОЕ/мл (бляшкообразующие единицы) – количество вирусных частиц в миллилитре.

Общие показатели

Выявляет бактерии, потенциально способные причинить вред здоровью. Этот показатель достаточно информативен, так как высокая ОМЧ является индикатором загрязнения органическими соединениями (например, содержащихся в фекалиях) и различными формами азота. С другой стороны, в ОМЧ входят как опасные бактерии (например, высокопатогенный штамм кишечной палочки Escherіchіa colі), так и практически безвредные и повсеместно встречаемые сенные палочки (Bacillus subtillis).

Группу ОКБ формируют бактерии семейства Enterobacteriacea (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella). Многие представители этой группы относятся к нормальной микрофлоре желудка, поэтому превышение ОКБ может говорить о возможном фекальном загрязнении, связанном с деятельностью человека. Однако в данной группе могут встречаться и свободноживущие микробы, которые не представляют опасности для здоровья.

ТКБ – более достоверный индикатор загрязнения продуктами жизнедеятельности. Этот показатель свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. В большинстве случаев в этой группе обнаруживается кишечная палочка Escherіchіa colі.

Колифаги являются вирусами палочки Escherichia coli и рассматриваются эпидемиологами как более чувствительный метод определения загрязнения жидкости микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы более устойчивы к окружающей среде, чем бактерии, в которых они обитают, поэтому этот показатель качества служит достоверной меткой давнего фекального загрязнения. Содержание колифагов свидетельствует о наличии опасных для человека энтеровирусов в воде.

Рекомендуется проводить исследование этой характеристики в случае, если ранее источник не был проверен, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения воды.

Спорообразующие клостридии (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) являются дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения. Клостридии встречаются в кишечнике, однако при попадании в организм в большом количестве могут вызывать пищевые отравления и смертельные заболевания, в том числе, ботулизм. В отличие от относительно неустойчивых ОКБ и ТКБ, споры клостридий могут сохраняться долгое время, поэтому этот микробиологический показатель, как и колифаги, свидетельствует о наличии давнего загрязнения. Относительно высокая устойчивость позволяет использовать споры в качестве индикатора эффективности проведения водоподготовки (хлорирования, озонирования и т.п.).

Определение этого микробиологического показателя качества воды рекомендуется проводить при наличии посторонних запахов и образовании чёрного налёта на трубах, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения жидкости.

Pseudomonas aeruginosa – распространённый организм, который встречается практически во всех средах, в т. ч. входит в состав микрофлоры кожи. Однако при снижении иммунитета человека и высоком содержании в воде синегнойная палочка может вызывать серьёзные заболевания, поражая лёгкие и почки и приводя к сепсису. Присутствие Pseudomonas aeruginosa в бассейне или ванне является основанием для полной замены содержимого резервуара. Особенность синегнойной палочки – её чрезвычайная устойчивость к нагреванию, дезинфицирующим средствам и антибиотикам.

Staphylococcus aureus – тесно связанная с человеком бактерия, которая в основном образует колонии на коже, половых органах, респираторном и желудочно-кишечном трактах. Как и синегнойная палочка, золотистый стафилококк встречается у здоровых людей, однако может вызвать развитие болезни при ослаблении иммунитета.

В действующих нормативных документах не прописаны конкретные возбудители кишечных инфекций. В эту группу входят микроорганизмы, заражение которыми происходит через жидкие среды (Escherichia, Shigella, Vibrio, Salmonella). Процесс определения этого параметра трудоёмок и требует специальной квалификации микробиолога.

Микробиологические показатели качества воды, не регулируемые СанПиН

Развитие и удешевление технологий и новых методов приводит, с одной стороны, к расширению контролируемых параметров, с другой, к выбору более конкретных микроорганизмов-показателей. Например, руководство ВОЗ рекомендует использовать в качестве индикатора фекального загрязнения наличие кишечной палочки (Escherіchіa colі), а не ОКБ и ТКБ. В странах ЕС помимо палочки определяют наличие энтерококков – специфичной группы микроорганизмов обитателей кишечника человека. Ниже приведены группы микроорганизмов, которые имеют индикаторное значение при оценке микробиологического качества воды.

Enterococcus spp. – широкая группа микроорганизмов, проживающая в кишечнике человека. Наряду с золотистым стафилококком энтерококки являются причиной внутрибольничных инфекций, вызывают у человека (менингит, эндокардит). Ввиду более высокой устойчивости этих микроорганизмов к засолению и температуре, по сравнению с ТКБ, энтерококки – более надежный индикатор фекального загрязнения морей и солёных озёр. Согласно нормативу ЕС, эта группа не должна обнаруживаться в 250 мл. Согласно законодательству США, при превышении содержания Enterococcus spp. 35 КОЕ / 100 мл вводится запрет на купание людей.

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов. В неё входят Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые вызывают оппортунистические заболевания, в т. ч. грибковые заболевания кожи и молочницу. Другие организмы-микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillus niger) усиливают аллергические реакции, а иногда вызывают их. Особенно опасны плесневые грибы (Penicillium spp., Aspergillus spp., Fusariam spp., Alternaria spp. and Claviceps spp), образующие канцерогенные микотоксины (патулин, афлотоксин). Исследователи из Европейского союза пришли к выводу, что водопроводная вода не является распространителем микотоксинов, однако в стоячих источниках (например, накопительных резервуарах) могут создаться условия для благоприятного развития грибов. В некоторых странах ЕС содержание грибов строго регламентируется, например, в Швеции в питьевой воде их не может быть более 100 КОЕ / 100 мл.

Микроорганизмы, содержащие зелёный пигмент хлорофилл – обитатели богатых питательными элементами стоячих водоемов. Сами микроорганизмы не заражают человека, но синтезируют и выделяют в среду цианотоксины, вызывающие поражение внутренних органов млекопитающих: гепатотоксины (Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Nodularia, Nostoc, Cylindrospermopsis и Umezakia), нейротоксины (Aphanizomenon и Oscilatoria), почечные токсины (Cylindroapermopsis raciborski).

Таким образом, микробиологические показатели качества воды отражают несколько важных показателей:

Общее загрязнение микроорганизмами источника воды (ОМЧ).
Наличие фекального загрязнения и продуктов жизнедеятельности (ОКБ, ТКБ, колифаги, сульфитредукторы, энтерококки).
Возможное наличие энтеровирусов (колифаги).
Наличие потенциально опасных микроорганизмов (золотистый стафилококк, синегнойная палочка, условно-патогенные дрожжи, энтерококки, сульфитредукторы).
Наличие потенциальных продуцентов микотоксинов и цианотоксинов (грибы и цианобактерии).
Наличие патогенных микроорганизмов (Shigella, Vibrio, Salmonella).

Санитарно-бактериологическое исследование воды - Ф. К. Черкес

Исследованию подлежит вода:

1) централизованного водоснабжения;

2) из колодцев различного типа;

3) открытых водоемов (рек, озер, морей);

4) плавательных бассейнов;

Примечание. Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором (гипосульфитом).

Отбор проб воды. Из открытых водоемов воду берут с помощью специальных бутылей или батометров, снабженных грузилами. Пробу воды рекомендуют брать на глубине 10-15 см от поверхности (так как поверхность подвергается воздействию атмосферных факторов) и на расстоянии 1,5 м от берега (вода у самого берега может быть загрязнена микрофлорой почвы).

Для отбора проб водопроводной воды используют стерильные флаконы вместимостью 500 мл, закрытые ватно-марлевыми пробками и покрытые бумажными колпачками.

Кран предварительно обжигают тампоном, смоченным спиртом, после чего воду спускают в течение 10-15 мин и набирают во флаконы. Заполненные флаконы закрывают стерильными пробками.

Примечание. Исследуют 333 мл воды (табл. 54).

Таблица 54. Эмпирическая таблица ГОСТ 16963-73

В распределительной сети водопровода отбор проб воды осуществляют в зависимости от количества населения, проживающего в зоне обслуживания.

Стандартные методы исследования регламентированы для воды центрального водоснабжения (ГОСТ 18963-73) и предусматривают:

1. Определение общего числа микроорганизмов (в 1 мл исследуемой воды должно быть не более 100).

2. Определение коли-индекса и коли-титра (коли-индекс 3, коли-титр 333 и выше; для Москвы и Ленинграда коли-индекс не более 2, а коли-титр более 500).

3. Исследование по эпидемиологическим показаниям на патогенную микрофлору (патогенных микроорганизмов не должно быть обнаружено).

Согласно ГОСТу 18963-73 общее число бактерий - это то количество микроорганизмов, которое содержится в 1 мл исследуемой воды, способных в течение суток при температуре 37° С образовывать колонии, видимые невооруженным глазом (или при увеличении с помощью лупы).

При исследовании водопроводной воды засевают 2 чашки. В одну из них вносят 1 мл неразведенной воды, в другую 1 мл воды, разведенной в 10 раз (т. е. 0,1 мл исходной пробы).

При исследовании более загрязненной воды засевают 1 мл воды, разведенной в 100 раз. Это соответствует 0,01 и 1 мл .воды, разведенной в 1000 раз (0,001 мл) и т. д. Для получения таких объемов готовят последовательно десятикратные разведения, по 1 мл каждого разведения вносят в чашку и заливают тонким слоем (12-15 мл) растопленного и остуженного до 45° С питательного агара. Для равномерного распределения исследуемой воды залитые агаром чашки перемешивают путем вращения их. После застывания агара посевы ставят в термостат и инкубируют при температуре 37° С 24 ч.

Чашки с посевами вынимают из термостата и подсчитывают число выросших колоний. Учитывают только те чашки, где число колоний находится в пределах 30-300. Если колоний немного, их подсчитывают невооруженным глазом или при помощи лупы.

Если колоний много, то подсчет можно вести с помощью специального прибора для счета микробных колоний (рис. 54).

Рис. 54. Прибор для счета колоний микроорганизмов. 1 - столик для чашки Петри; 2 - игла с пружинным устройством; 3 - показатель счетчика; 4 - тумблер для включения импульсного счетчика; 5 - тумблер для включения лампы освещения счетчика

Подсчитанное количество колоний умножают на разведение и узнают число микробов в 1 мл исследуемой воды.

Наличие БГКП (бактерий группы кишечной палочки) является показателем фекального загрязнения, интенсивность которого характеризуют:

Коли-индекс - количество кишечных палочек, обнаруженных в 1 л воды.

Коли-титр - наименьшее количество воды, в котором обнаруживают присутствие кишечной палочки * .

* ( Коли-титр и коли-индекс - это один показатель, различно выраженный.)

Для выявления в воде БГКП можно пользоваться двумя методами: титрационным (бродильным) и методом мембранных фильтров.

Для исследования воды используют среду накопления глюкозопептонную (ГПС) среду Эйкмана с индикатором и бродильными трубками. Среда готовится концентрированной (в 10 раз) и нормальной концентрации - для посева 1 мл воды.

Исследуемую воду засевают по 100 мл в 3 колбы, по 10 мл в 3 пробирки (с концентрированной средой) и по 1 мл в 3 пробирки (со средой нормальной концентрации) - всего 333 мл. Посевы инкубируют в термостате при 37° С 24 ч.

Вынимают посевы из термостата и просматривают их.

При наличии помутнения в колбах или пробирках из них производят посев петлей на сектора среды Эндо в чашках Петри. Посевы инкубируют в термостате при 37° С.

Вынимают чашки из термостата. Из подозрительных колоний делают мазки. При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазную активность. Положительная проба на оксидазу дает право дать отрицательный ответ.

Проба на оксидазу. 1-й способ: со среды Эндо снимают петлей 2-3 колонии каждого типа и наносят на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной диметилпарафенилендиамином. Положительная реакция характеризуется посинением штрихов, сделанных из колоний.

2-й способ: реактив можно нанести на изолированную колонию на среде Эндо (красная колония - синеет) (рис. 55).

Рис. 55. Определение коли-индекса воды титрационным методом

Отрицательная проба на оксидазу свидетельствует о наличии в воде БГКП. В этом случае вычисляют коли-индекс и коли-титр с помощью стандартных (эмпирических) таблиц ГОСТа 16963-73 (см. табл. 54).

Эти таблицы предусматривают любую возможную комбинацию объемов посева, из которых выделена кишечная палочка.

Для фильтрации воды можно использовать воронку Гольдмана вместимостью 700-800 мл.

В воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора Зейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. С помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры № 2 и 3). По окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Эндо в чашке Петри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра).

Посевы инкубируют в термостате при температуре 37° С 18-24 ч.

Чашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. Отсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ.

Учету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму (рис. 56).

Рис. 56. Определение коли-индекса воды методом мембранных фильтров

При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Положительная оксидазная проба дает право дать отрицательный ответ. При отрицательной оксидазной пробе производят посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду ГПС с бродильными трубками - для выявления ферментации углевода до кислоты и газа. При наличии кислоты и газа вычисляют коли-индекс. Например, на всех фильтрах, находящихся на среде Эндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.

Примечание. Титрационный метод более точный и может быть использован при наличии в воде примесей. Метод мембранных фильтров экономичнее и дает возможность дать ответ на 2-й день.

Для определения наличия в воде свежих фекальных кишечных палочек производят посев воды (3-х объемов) на лактозопептонную среду с борной кислотой. Инкубируют при 43° С 24 ч. Наличие кислоты и газа свидетельствует о свежем фекальном загрязнении.

По эпидемиологическим показаниям в воде определяют сальмонеллы, шигеллы, энтеровирусы.

Примечание. Общепринятым дополнительным показателем фекального загрязнения питьевой воды являются энтерококки. При проведении бактериологического исследования определяют все группы энтерококков, хотя санитарное значение имеют преимущественно фекальные стрептококки, обнаружение которых является показателем свежего фекального загрязнения.

1. Какова основная задача санитарной микробиологии?

2. Что такое санитарно-показательные микроорганизмы?

3. Что такое коли-индекс и коли-титр?

4. Какие Вы знаете методы определения БГКП?

Определите общее число микробов в исследуемой пробе воды. Среда ГПС (Эйкмана).

ГПС (Эйкмана) концентрированная. В 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлорида натрия. Нагревают смесь до кипения, фильтруют, прибавляют 100 г глюкозы, устанавливают рН 7,4-7,6 и разливают по 10 мл в колбы вместимостью 250 мл, по 1 мл в 3 пробирки (концентрированной среды) и по 1 мл в 3 пробирки со средой нормальной концентрации (во всех емкостях среду до нужной концентрации доводят стерильной водой).

Примечание. При исследовании особенно загрязненных вод делают большие разведения (например, 10 -6 , 10 -7 и т. д.).

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Дата введения	01.02.2020
Добавлен в базу	01.01.2019
Актуализация	01.02.2020

25.09.1990	Утвержден	ГУВ СМ СССР по продовольствию и закупкам
Разработан	Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов

Заместитель начальника Главного Управления ветеринарии с Государственной ветеринарной инспекцией при Государственном комиссии СМ СССР по продо&етгьс'твию и закупкам

Государственная Комисссия СМ СССР по продовольствию и закупкам

1ОТ139,М₀сква,БЛ39,

по лабораторной диагностике стрептококкоза животных

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

IЛ. Стрептококков - инфекционная болезнь , вызываемая стрептококками различных серологических групп и поражающая животных всех видов и возрастов.

Стрептококки, патогенные для животных, вызывают у молодняка, как правило, острые инфекции со значительным охватом поголозья( мыт, цервикальный лимфаденит, менинго-энцефалит, артрозо-артрит и др.) Сом. Приложение I).

Тяжесть течения болезни и летальность зависят как от внешних факторов, так и от индивидуальных особенностей организма. У взрослых животных болезнь может протекать бессиптомно или проявляться в зиде абортов, метритов к маститов.

1.2. Возбудители болезни относятся к роду ypfcepitwet, который включает более 20 серологических групп стрептококков. Различающихся антигенными свойствами и обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита.

Кроме указанных в Приложении I, от животных выделяется стрептококки серогрупп A, (9,K,K,0,P,R,S, а также пневмококки.

1.3. Микроорганизма, относящиеся к роду Stz£pfv&ece-u$ ,- сферические или озоидкне клетки, располагающиеся парами или цепочками различной длины, как правило, неподвижны, спор не образуют,каталазоотрицательные, аэробы или факультативные анаэробы,по Граму окрашиваются всегда положительно, при ферментации глюкозы никогда не выделяют газа.

I.A. Кроме стрептококков от животных часто выделяют другие грам-положителькые кокки, первичную дифферениацию которых проводят в соответствии с Приложением 2.

1.5. Диагноз на стрептококкоз устанавливают по результатам лабораторных исследований с учетом эпизоотологических клинических данных.

1.6. Лабораторная диагностика стрептококкеза зключает микроскопию мазков-отпечатков, выделение культур стрептококков с последующей их идентификацией.

1.7. Материалом для лабораторного исследования служат головной и костнвй мозг, кровь сердца, селезенка, печень, суставная жидкость, со держимое абсцессов павших или вынужденно убитых животных, головной мозг и кровь сердца абортированного плода, сперма, молоко, при метрите - истечения из шейки матки.

Взятие и доставку материала осуществляют в соответствии с действующими правилами взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования.

Патологический материал должен быть взят и исследован в течение 6 часов, а при условии хранения его в охлажденном состоянии - 10-12 ч

2. ВЫДЕЛЕНИЕ КУЛЬТУРЫ СТРЕПТОКОККОВ

2.1. Высевы из патологического материала делают пастеровской пипет кой в кясо-пептонный бульон с 1% глюкозы и 10$ инактивированной нормал ной сыворотки лошади и на мясо-пептонный агар с 1$ глюкозы 5-10$ де-фибринированной крови барана или кролика. Посввы инкубируют з термоста те при 37-38°С в течение 18-24 часов.

2.2. На глюкозо-кровяном агаре стрептококки растут в виде мелких роеинчатых, прозрачных или слегка мутноватых колоний с ровными краями, окруженных, как правило, зоной гемолиза.

В препаратах из культуры с плотной питательной среды&стрептохокки располагаются парами, короткими цепочками, иногда образуют скопления.

3 мазках иа бульонных культур стрептококки располагаются в основном цепочками различной длины.

3. дЙФФЕРЕЩйАЦМ И иВЕаВагИТвлсиан ЙДЕИТМфИнАцуш СРВШТоЕОМОВ

3.1. Для предварительной дифференциации стрептококков от других кокков пользуются данными Приложения 2.

3.2. Для дифференциации стрептококков от стафилококков используют каталазную пробу.

Для постановки ааталазной пробы на предметное стекло накосят каплю свежеприготовленного 3$-ного раствора перекиси водорода, бактериологической петлей снимают одну или несколько колоний тестируемы микроорганизмов и растирают их в капле перекиси водорода. Стафилокск ки ,в отличие от стрептококков, образуют каталазу и вызывают пенообр .зование.

3.3. Для предварительной идентификации стрептококков,пневмококков и энтерококков С стрептококки группы Д) используют признаки указанные в таблице.

среде с 10$ желчи

Рост на среде с 6,5?

Характер роста в жидкой питательной среде

рментация ббр- мак= бита вита

Обозначения: "+" - рост (ферментация) имеется

- рост(ферментация) отсутствует ”+/- п - признак не постоянный

3.3.1. Гемолиз. По характеру гемолиза стрептококки делят на три группы:

X- гемолитические стрептококки - вызывают неполный гемолиз эритроцитов, характеризующийся образованием вокруг колоний зеленоватой зоны гемометаморфоза;

- гемолитические стрептококки - вызывают полный гемолиз эритроцитов, характеризующийся образованием вокруг колоний зоны полного просветления;

стрептококки - не вызывают гемолиза эритроцитов.

3.3.2. Рост на среде с 10% желчи.

3 2 пробирки с глюкозо-сывороточным бульономС в одну из которых добавлено 10$ желчи крупного рогатого скота, вторая - контрольная, без желчи) вносят по 0,5-0,7 см^ суточной бульонной культуры и виде):

живают при 37-38°С в течение одного часа.

В случае лизиса культуры содержимое опытной пробирки просве

3.3.3. Рост на среде с 40$ желчи. Чистую культуру стрептококков засевают в глюкозо-сывороточный бульон, содержащий 40% желчи крупного рогатого скота, и инкубируют при 37-38°С в течение 18-24 часов, после чего учитввают наличие или отсутствие роста.

3.3.4. Рост на среде с 6,5$ хлористого натрия. Чистую культуру стрептококков засевают в глюкозо-сывороточный бульон, содержащий 6,5$ хлористого натрия. Учет результатов проводят через 18-24 ч инкубирован при 37-38°С по наличию или отсутствию роста.

3.3.5. Ферментативные свойства. Для определения ферментативный свойств выделенных культур стрептококков используют: среда Гисса с раффинозой, сорбитом, маннитом. Посевы инкубируют при 37-38°С 18-24 ч, после чего проводят учет результатов.

3.4. При выделении культуры стрептококков серологической группы Д следует определить разновидность энтерококков, поскольку кроме пато-reHHBxjfe эту группу входит и являющийся облигатным

обитателем кишечника человека и животных. Для этого используют среду с теллуритом калия или энтерококковую дифференциально-диагностическую среду. Кудьтуры5^/ад##5 устойчивы к телдуриту калия(0,07$) и хорошо растут на плотной среде в его присутствии, образуя колонии черного цвета. Культурыiiifaz&utv на этой среде не растут.

На энтерококковой дифференциально-диагностической среде через 14-18 ч роста колонииобретают вишнево-красный цвет, а колонии Sib.faemt«остаются бесцветными или белыми.

4. СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТРЕПТОКОККОВ к Л. Для установления серогрупповой принадлежности стрептококков используют стрептококковые групповые преципитирующие сыворотки. ж

Данные таблицы 3, а также характеристика наиболее широко распространенных стрептококке зов ( Приложение 2) служат отправными точками при выборе необходимой сыворотки.

4.2. Серогрупповую принадлежность стрептококков определяют в реакции преципитации в капиллярах.

^Стрептококковые групповые преципитирующие сыворотки изготавливает и высылает по заявкам ЗГНКИ ветпрепаратов.

4.3. Приготовление антигена для постановки реакции преципитации.

4.3.1. Испытуемые культуры стрептококков выращивают в мясо-пептон-ком бульоне или бульоне Хоттингера с I% глюкозы при температуре 37-38°С в течение 18-20 часов.

4.3.2. Выращенные культуры в объеме 7-9 см переносят в стеклянные центрифужные пробирки вместимостью 12-15 см и центрифугируют при 3500-4000 об/мин в течение 25-30 минут.

4.3.3. После окончания центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 0,3-0,4 е** 0,2jf раствора соляной кислоты, тщательно взбалтывают и помещают эту суспензию в кипящую водяную баню на 10 минут.

4.3.4. После охлаждения пробирки под струей водопроводной воды к ее содержимому добавляют одну каплю 0,04^-ного спиртового раствора фенолфталеина Синдикатор) и нейтрализуют 0,2$. раствором едкого натра, добавляя этот раствор по одной капле и доводя окраску смеси до бледно-розовой.

4.3.5. Затем смесь вновь центрифугируют при 3500-4000 об/мин. в течение 25-30 мин до получения прозрачной надосадочной жидкости,которую используют в качестве антигена для постановки реакции преципитации

4.4. Постановка реакции преципитации.

4.4.2. Капилляр опускают во флакон с сывороткой и набирают в неге небольшое количество сыворотки (около 1,0-Г,5 см длины капилляра),закрывая отверстие капилляра указательным пальцем.

4.4.3. Удаляют затей излишки сыворотки с наружной стороны капилляра, погружают его в пробирку с антигеном и набирают в капилляр равное количество антигена, чтобы общее количество сыворотки и антигена занимало около 2_д0-3,0 см его длины.

4.4.4. Перевернув капилляр, достигают того, чтобы смесь сыворотки с антигеном оказалась в середине капилляра, после чего капилляр вставляют в пластилиновую пластинку,

4.4.5. Результаты реакции учитывают через пять минут на темном фоне ври ярком освещении.

Положительная реакция характеризуется образованием хлопьев или резким помутнением в середине столбика сыворотки и антигена.

При отрицательной реакции смесь сыворотки и антигена остается прозрачной.

4.4.1. Для постановки реакции преципитации используют стеклянные капилляры или тонко оттянутые кончики пастеровских пипеток диаметром О,5-1,0 мм.

4.4.6. При постановке реакции необходимо обратить внимание на еле дующие положения:

- антиген,сыворотка, растворы соляной кислоты и едкого натра долж ны быть абсолютно прорачными;

- растворы соляной кислоты и едкого натра готовят не реже одного раза в два месяца;

если в результате перетитровки едким натром окраска антигена стала малиновой, следует добавить 1-2 капли 0,25 раствора соляной кислоты;

- сыворотка и антиген в капилляре должны слиться. 3 случае, если между ними образовался пузырек воздуха, следует взять другой капилля и повторить реакцию.

5. Лабораторный диагноз на стрептококкез считают установленным в случае выделения из исследуемого материала культуры стрептококков соответствующей группы.

6. Одновременно с результатами идентификации стрептококков в хозя£ ство сообщают также данные о чувствительности выделенных культур к антибиотикам.

7. Все культуры, не идентифицирующиеся входящими з набор сыворотками, следует направлять зо Всесоюзный государственный научно-контрол ный институт ветеринарных препаратов по адресу: 123022,г.Москва, Звенигородское шоссе, 5.

С утверждением настоящих Методических указаний утрачивают силу Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных и лабораторным исследованиям на пневмококковую инфекцию животных, утвержденные Главным управлением ветеринарии соответственно 30 августа 1983 г. и 5 янзаря 1904 г.

Наиболее распространенные стрептококкозы и их возбудители

Артрозо-артрит поросят, полиартрит ягнят,мы® лошадей, стрептококкоз кур, пушных зверей, морских свинок

Знтерококковая инфекция телят, ягнят, поросят, стрептококкоз кур

Цервикальный лимфаденит свиней

Менинго-энцефалит поросят отъемного возраста

Менинго-знцефалит поросят подсосного возраста

Отличительные особенности родов семейства

Клетки делятся в одной плоскости. Глюкозу ферментируют до образования молочной кислоты без выделения углекислого газа.

Клетки делятся в одной плоскости. Глюко-зу ферментируют с образованием углекислого газа.

Клетки делятся в двух плоскостях, образуя тетрады. Глюкозу ферментируют до образования молочкой кислоты без выделения углекислого газа.

Клетки делятся в двух плоскостях, образуя тетрады. Глюкозу ферментируют до образования молочной кислоты без выделения углекислого газа.

Клетки делятся 'в одн'ой плоскости. раму окрашиваются негативно.

РЕЦЕПТЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

I. Глюкозо-сывороточный бульон.В свежеприготовленный мясо-пептанный бульон, содержащий 1% глюкозы (pH 7 Л-7,6),соблюдая правила стерильности, добавляют 10$ нормальной инактивированной сыворотки крови лошади и асептично разливают в стерильные пробирки по 5-7 см .

Сыворотку инактивируют прогреванием в течение 30 мин в -водяной бане при 56°С.

2. Глюкозо-кровяной агар. К расплавленному и стерильному 2$-ному мясо-пептонному агару, охлажденному до 45°С ( не выше), содержащему

I% глюкозы, прибавляют 5-10$ дефибринированной, стерильно взятой крови кролика или барана. Кровь добавляют в среду, соблюдая правила стерильности. Приготовленную среду разливают в стерильные чашки Петри (предварительно нагретые в термостате), дают застыть и подсушивают в термостате. Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет.

3. Желчный бульон. К мясо-пептонному бульону добавляют нативную желчь крупного рогатого скота и устанавливают pH среды 7,4-7,6. Для получения Ю$-нсго желчного бульона к 90см^ МПБ прибавляют 10 см^ желчи, для получения 40$

ного - к 60 см"* МПБ прибавляют 40 см^ желчи.

Приготовленный желчный бульон разливают в пробирки по 5-7 см^ и стерилизуют в автоклаве 20-30 мин при ПЗ-П5°С ( 0,6-0,7 атм).

4. Среда с 6,5$ хлорида натрия. В 100 см' 5 МПЕ в количестве 6,0

хлорида натрия, после его растворения разливает в пробирки по 5-7 см'* и стерилизуют в течение 20-30 мин при I атм.

5. бреда с тол у д.о- к.-. ;я. 2. мясо-пептонному агару, охлажденному до 45-50°С, добавляют из расчета на IG0G' ем^ - 50см инактивированной нормальной сыворотки крови лошади, 0,1 г налидиксовой кислоты ( неграм или невиграмон) к 0,7 г(35 ем'* 2$-ного водного раствора) теллурита калия. Среду перемешивают и разливают в чашки.

6. Знтерскохксвая дифференциально-диагностическая среда.

К мясо-пептонному агару, охлажденному до 45-50°С, перед употреблением

кроме глюкозы и 5$ дефибринированной крови добавляют из расчета на

IC00 см гТТХ(2,3,5—тркфенилтетразолий хлорид) 0,1 г , 0,01С-ный водный

раствор кристаллического фиолетового- 12,5 см^, налидиксовей кислоты-

-0Д г, стерильного обезжиренного молока - 200 см^:

ТТХ и налидикссвую кислоту предварительно растворяют в небольшом

Читайте также: