Хеликобактер пилори токсигенный штамм

Причины развития язвы желудка и двенадцатиперстной кишки долгое время оставались для ученых загадкой. Но в 1979 году был обнаружен основной подозреваемый — бактерия хеликобактер пилори, живущая в желудочно-кишечном тракте. Она может существовать там на протяжении долгого времени, не причиняя вреда здоровью, но при благоприятных — для бактерии — обстоятельствах она начинает активно размножаться и повреждать слизистые оболочки.

Бактерия хеликобактер пилори — опасный враг ЖКТ

Широко распространенный и опасный микроорганизм — бактерия хеликобактер пилори (Helicobacter pylori), которая в большинстве случаев становится причиной язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. Ей не страшна соляная кислота, содержащаяся в желудочном соке. Бактерия может годами жить в этой среде и разрушать слизистые оболочки, провоцируя развитие гастрита, гастродуоденита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. При запущенной язве не исключено и развитие онкологии.

По некоторым данным, число инфицированных достигает 60%, однако далеко не в каждом случае антибактериальная терапия действительно необходима. Чаще всего концентрация бактерии мала и не может нанести вреда здоровью. Наша иммунная система держит количество бактерий под контролем, однако иногда защита ослабевает — к этому могут привести физическое и нервное перенапряжение, инфекционные болезни, вредные привычки и неправильный образ жизни. Тогда хеликобактер пилори активизируется и начинает интенсивно размножаться. Это случается примерно в 15% всех случаев заражения хеликобактер пилори. Ослабить защиту может и нездоровое питание — кислая или острая еда, маринады и копчености, которые раздражают желудочную оболочку, открывая доступ бактериям. К такому же исходу может привести и нарушение режима питания — вопреки рекомендациям врачей, советующих есть часто и понемногу, большинство горожан питается, в лучшем случае, дважды в день или перебивается фаст-фудом: выпечкой, снеками и разной другой сухомяткой.

Как правило, на начальной стадии развивается гастрит, затем — язва, а без должного лечения нужно быть готовым к крайне тяжелым последствиям — прободению язвы, кровотечениям и возникновению онкологической патологии. Кроме того, в таком случае определенные структурные изменения возможны не только в ЖКТ, но и в печени и поджелудочной железе.

При гастрите, гастродуодените и язвенной болезни врач обязательно направит вас на анализы. Цель исследований — найти виновника, то есть бактерию хеликобактер пилори, а также оценить ущерб, причиненный инфекцией. Для этого делают общий и биохимический анализ крови, анализ желудочного сока, биопсию, а также высокоточный ПЦР-анализ, который позволяет найти ДНК хеликобактер пилори даже в том случае, если ее концентрация невелика.

За последние 30 лет было разработано несколько эффективных методик уничтожения хеликобактер пилори. В 2005 году в Нидерландах состоялся всемирный консенсус гастроэнтерологов, на котором были разработаны и утверждены протоколы лечения болезней, спровоцированных Helicobacter pylori. Эти схемы дают положительный эффект в 80% случаев, а частота возникновения побочных эффектов не превышает 15%.

Обычно лечение занимает 14 дней и основывается на лекарственных средствах. Однако чтобы терапия была эффективной, необходимо также изменить образ жизни и придерживаться определенной диеты.

Как уничтожить бактерию хеликобактер пилори? Лечение состоит из трех этапов. Первая линия препаратов для борьбы с этой бактерией зачастую приносит ожидаемый эффект, но если она оказывается недостаточно эффективной, врачи назначают вторую линию препаратов. Если же и вторая линия не справилась с бактерией, то используются средства третьей линии.

Эту схему лечения называют трехкомпонентной, поскольку в ней используется сочетание трех лекарств. Она состоит из антибиотиков кларитромицина и амоксициллина, убивающих бактерии, и ингибиторов протонной помпы (действующее вещество омепразол и т.д.) — препаратов, регулирующих кислотность. Благодаря применению ингибиторов протонной помпы пациент избавляется от многих проявлений гастрита и язвенной болезни, кроме того, он может придерживаться менее строгой диеты во время лечения — хотя, конечно, питание все равно должно быть здоровым и сбалансированным. В некоторых случаях препараты на основе амоксициллина меняют на другое антибактериальное средство — метронидазол или нифурател.

Иногда врач может добавить и четвертый компонент — препараты висмута, оказывающие гастропротекторное, противовоспалительное и вяжущее воздействие, однако обычно такие средства назначают на втором этапе. Тем не менее данные препараты оказывают положительное влияние на течение болезни: они образуют на внутренних стенках желудка своеобразную пленку, благодаря чему притупляется болевой синдром и снимается воспалительный процесс.

Для пациентов пожилого возраста используется более мягкая схема, которая включает в себя только один антибиотик (амоксициллин), препараты висмута и ингибиторы протонной помпы.

Стандартная продолжительность первого этапа — одна неделя. При недостаточной эффективности курс может быть продлен до 2 недель, но не более. Примерно для 90–95% пациентов такая терапия оказывается действенной и второй этап не требуется вообще. Однако если к окончанию первого этапа не все бактерии погибли, схема лечения требует преобразования.

Схему лечения второго этапа называют четырехкомпонентной. Она включает в себя один ингибитор протонной помпы, препарат висмута и два антибиотика, взаимно усиливающие действие друг друга. Как правило, используются средства с действующими веществами тетрациклин и метронидазол, если они не применялись на первом этапе. Обычно выбирают такие антибиотики, которые еще не использовались в лечении, поскольку если бактерия хеликобактер пилори пережила первое воздействие определенных антибактериальных средств, то очевидно, что данный штамм к ним нечувствителен.

Второй вариант этой терапии состоит из препаратов на основе амоксициллина, антибиотика из группы нитрофуранов, ингибитора протонной помпы и препарата висмута. На этом этапе их очень часто включают в схему лечения.

Средства с трикалия дицитратом висмута оказывают бактерицидное действие, стимулируют цитопротекторные механизмы, повышают устойчивость слизистой оболочки к вредным воздействиям. Препараты восстанавливают защитные функции желудка и могут предотвратить рецидивы болезни.

Чтобы не снижать эффективность действующего вещества, рекомендуется во время приема средств на основе висмута отказаться от употребления в пищу фруктов, соков и молока.

Продолжительность терапии составляет от 10 до 14 дней.

В очень редких случаях положительного эффекта не удается добиться и после применения препаратов второй линии. Тогда проводятся тесты, которые определяют чувствительность бактерий к различным типам антибиотиков, и в схему включаются самые эффективные антибактериальные препараты. В целом же этот этап мало отличается от второго — назначаются ингибиторы протонной помпы, препараты висмута и два антибиотика, показавшие во время лабораторных исследований наибольшую эффективность.

Лекарства на основе висмута на этом этапе также играют важную роль, поскольку они обеспечивают комплексное лечение. Препараты с действующим веществом трикалия дицитрат висмута не только эффективно снимают неприятные симптомы болезни (изжогу, боль, вздутие), но и оказывают местное бактерицидное действие в отношении Helicobacter pylori, помогают активизировать регенерацию поврежденных клеток стенок желудка. Поэтому роль таких средств в эффективном лечении и уничтожении бактерии Helicobacter pylori трудно переоценить.

Не стоит давать вредоносной бактерии шанс. Если вы не уверены, инфицированы ли вы, пройдите лабораторное исследование, например, ПЦР-тест на хеликобактер пилори. Даже если бактерия обнаружится, это еще не значит, что вам необходимо лечение. Хеликобактер не всегда является причиной гастрита, но присутствует в организме у каждого. Как было сказано выше, здоровая иммунная система может контролировать концентрацию этой бактерии. Для профилактики развития заболеваний, связанных с хеликобактер, нужно придерживаться здоровой диеты, исключающей все, что может раздражать слизистую желудка — маринады, специи и острые приправы, жареное, алкоголь, кофе и газированные напитки, кислые овощи и фрукты. Но если все-таки диагностирован гастрит, вне зависимости от причины его возникновения обязательно следует защищать желудок, и лучше всех с этим справляются препараты висмута, оказывающие гастропротекторное, противовоспалительное и вяжущее воздействие.

Диагностика хеликобактерной инфекции – сложный процесс, поскольку ни один из имеющихся тестов в отдельности не может послужить основанием для постановки окончательного диагноза. Человек на протяжении всей жизни может являться носителем Хеликобактер пилори, при этом проявление клинических симптомов не является обязательным.

Существуют экспериментальные данные о возможности спонтанной элиминации инфекции, однако, в большинстве случаев требуется подбор адекватных методов лечения под контролем врача.

Хеликобактер пилори: общие сведенья о микроорганизме

Helicobacter pylori (Хеликобактер пилори) условно-патогенная бактерия спиралевидной формы, по Граму окрашивается в красный цвет (грамнегативная). Преимущественное место обитания в организме человека – желудок и двенадцатиперстная кишка.

Роль Хеликобактер пилори в развитии заболеваний органов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) отрицалась на протяжении длительного времени. Лишь в 2005 году австралийскому патологу Р. Уоренну и врачу Б. Маршаллу удалось доказать медицинское значение бактерий, за что они были удостоены Нобелевской премии.

Особенность: у 90 % носителей Хеликобактер пилори является частью нормальной микрофлоры и не вызывает развития инфекционного заболевания. Однако существует мнение о том, что именно данный вид – причина многих патологий ЖКТ (язва, гастрит, рак, лимфома).

Отношений к условно-патогенным бактериям означает их способность провоцировать инфекционный процесс при наличии определённых условий (факторов). Например, длительный приём антибиотиков с последующим дисбактериозом, снижение иммунитета и наличие сопутствующих патологий. Однако при заражении штаммами с выраженными патогенными свойствами наличие вышеперечисленных факторов не обязательно.

Откуда берется и как передается Хеликобактер пилори?

Инфекция не передаётся воздушно-капельным путём, поскольку является строгим анаэробом (гибнет при контакте с кислородом). Заразиться можно при пренебрежении правилами личной гигиены (столовые приборы и посуда, личная косметика и индивидуальные гигиенические средства), а также при поцелуе.

Первичное инфицирование может произойти в детстве (от матери к ребёнку). Еще один путь заражения – вода и мясо, прошедшее недостаточную термическую обработку. Не исключено заражение через эндоскоп, который применяется при гастроэндоскопии.

Быстрое заселение слизистой органов ЖКТ обеспечивается за счёт высокой степени подвижности Хеликобактер пилори (при помощи жгутиков). Специфические белки и липополисахариды на поверхности мембраны помогают бактериям прикрепиться к поверхности клеток. Наличие чужеродных антигенов провоцирует развитие иммунного ответа (выделение специфических антител к Хеликобактер пилори) и инициирует воспаление слизистой оболочки.

Бактерии выделяют во внешнюю среду ферменты, растворяющие защитную слизь желудка. Выживание в кислой среде желудка обеспечивается за счёт фермента уреазы, разлагающей мочевину с выделением аммиака (нейтрализовывает соляную кислоту). Побочное действие аммиака – химическое раздражение клеток с последующей их гибелью. Наряду с этим бактерии выделяют токсины, усиливающие процесс деградации и гибели клеток.

Симптомы Хеликобактер пилори у взрослых

В большинстве случаев (до 70 %) носительство не проявляется в виде клинических симптомов и обнаруживается случайно при комплексном обследовании пациента. Однако патологии желудка и кишечного тракта, сопровождающиеся хеликобактерной инфекцией, имеют определённые признаки:

• ощущение боли в абдоминальной области (живот);
• частая изжога и отрыжка;
• необъяснимое снижение аппетита и веса;
• тошнота или рвота;
• обильный налет на языке;
• воспаления десен;
• гнилостный запах из ротовой полости (при исключении заболеваний зубов);
• ощущение тяжести после употребления пищи;
• повышенное газообразование.

Отмечено, что у детей степень выраженности клинических признаков выше, чем у взрослых. Особенно часто подобная ситуация наблюдается при наличии физического или эмоционального стресса, а также при изменении питания в худшую сторону (замена супов бутербродами или нерегулярное употребление пищи).

Пациенты задают вопрос – когда нужно сдать анализы на Хеликобактер пилори? Направление на лабораторную диагностику может выписать врач терапевт, педиатр, гастроэнтеролог или инфекционист. Показания к назначению анализа на Helicobacter pylori: подозрение или наличие заболевания ЖКТ, а также проявление вышеперечисленных симптомов.

Как сдать анализ на Хеликобактер пилори?

Методы выявления Хеликобактер пилори различны:

• дыхательный (уреазный) тест;
• реал-тайм ПЦР для обнаружения ДНК возбудителя;
• иммуноферментный анализ (ИФА) для определения уровня антител, вырабатываемых в ответ на инфицирование;
• одностадийный иммунохроматографический метод для обнаружения антигенов возбудителя в исследуемом материале;
• биопсия во время эзофагогастродуоденоскопии.

В зависимости от метода диагностики различается исследуемый биоматериал, стоимость и сроки исследования. Важно чтобы пациент соблюдал правила подготовки к анализу, от этого зависит точность и достоверность полученных результатов. Рассмотрим подробнее каждую методику.

Что такое уреазный тест на Хеликобактер пилори?

Выявление Хеликобактер пилори при помощи дыхательного анализа хелик-тест всё чаще используется в рутинной диагностической практике. Преимущества метода:

• короткие сроки получения результатов (до нескольких часов);
• низкая себестоимость;
• безболезненность;
• отсутствие противопоказаний;
• отсутствие необходимости в дорогостоящем оборудовании.

К недостаткам относят возможность получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Снижение достоверности исследования на фоне внутренних кровотечений.

В каких случаях дыхательный уреазный тест на Хеликобактер может показать ложный отрицательный результат? Помимо неправильной подготовки пациента к сдаче анализа и ошибок на этапе сбора биоматериала ложноотрицательный результат может быть получен при инфицировании штаммами, не выделяющих уреазу. Иными словами, даже если ЖКТ пациента бактерии заселяют, но не выделяют уреазу, результат теста будет отрицательным.

За 3 суток полностью исключается алкоголь и лекарственные препараты, растворителем в которых выступает спирт. За 6 часов ограничивается приём пищи, чистую несладкую воду пить разрешается. Минимальный интервал между последним приёмом антибиотиков и висмутсодержащих препаратов – 6 недель. За 2 недели желательно отказаться от приёма любых лекарств, по согласованию с врачом.

Забор биоматериала (выдыхаемый воздух) разрешается проводить через 24 часа после ФГДС (гастроскопия).

За 10 минут до сбора воздуха следует выпить сок (грейпфрутовый или апельсиновый) с целью замедления эвакуации из желудка. Затем пациент максимально выдыхает воздух в специальный пакет.

После чего необходимо выпить раствор меченной изотопом углерода мочевины (50 мл – взрослым, 25 мл – детям до 12 лет). Раствор не имеет специфического вкуса или запаха, готовиться непосредственно перед применением. Через 30 минут проводится контрольный сбор выдыхаемого воздуха.

Обе пробы анализируются на специальном приборе и определяют соотношение углекислого газа.

Антитела к Хеликобактер пилори

Заражение хеликобактерной инфекцией запускает защитные иммунные реакции. Первым вырабатываются иммуноглобулины М (IgM), а затем в большом количестве IgG и IgA. Кровь на антитела к Хеликобактер пилори позволяет установить факт заражения, поскольку IgG обнаруживаются в 90 – 100 %, а IgA – в 80 % случаев.

Следует отметить, что анализ крови на Хеликобактер пилори может являться альтернативой для инвазивных методов диагностики (при невозможности эндоскопии). Данное правило не распространяется для пожилых пациентов. Сила их иммунного ответа недостаточна, поэтому не исключено получение ложноотрицательных результатов.

Высокий титр IgG указывает на недавнее заражение и активный процесс распространения инфекции при условии, что пациент не принимал антибиотики. Концентрация IgG остаётся умеренно повышенной на протяжении длительного времени (до 1,5лет), поэтому данный тест не применяется для оценки эффективности выбранного лечения.

Величина IgA позволяет определить степень тяжести инфекционного заболевания. Малое содержание IgA сохраняется до нескольких лет, тем не менее, отсутствие положительной динамики по снижению его величины указывает на неэффективность лечения.

Как проходит сдача крови на Хеликобактер пилори (как берут анализ)? В качестве биоматериала выступает венозная кровь из периферической вены на локтевом сгибе. Особой подготовки к анализу не требуется. Желательно сдавать кровь на Хеликобактер пилори после 2-3 часов без еды, за полчаса запрещается курить.

Если в биоматериале обнаруживаются антитела к Helicobacter pylori IgG, то делается вывод о:

• активной инфекции – при наличии выраженной клинической картины;
• бактериальном носительстве.

Снижение титра IgG в анализе крови на хеликобактер на 25 % в течение полугода после завершения лечения свидетельствует о гибели бактерий.

Анализ кала на Хеликобактер пилори

Кал исследуется 2 методиками: иммунохроматографией (выявление антигенов) и ПЦР (наличие ДНК возбудителя). Оба метода характеризуются высокой чувствительностью и выступают в качестве взаимодополняющих.

Анализ кала на антиген Хеликобактер пилори – это качественный метод, точность которого достигает 95 %. Получение положительных результатов через 7 суток после приёма антибиотиков указывает на неэффективность лечения. Повторный тест проводится через 1,5 месяца терапии, при этом отсутствие антигенов в кале больного указывает на полное уничтожение бактерии.

Метод не позволяет установить вид бактерий: H. suis, H. Baculiformis или H. Pylori, поскольку весь их биоматериал является чужеродным (антигеном) для человека.

Чувствительность метода ПЦР кала на заражение Хеликобактер пилори достигает 95 %. Анализ позволяет устанавливать заражение некультивируемыми формами бактерий. К недостаткам можно отнести возможность получения ложноположительных результатов после успешного курса лечения, поскольку разрушенные клетки бактерий (и их ДНК) сохраняются в организме человека на протяжении длительного времени.

Исключена возможность получения ложноположительных результатов, поскольку специфичность метода достигает 100 %. Метод является альтернативой дыхательного теста или ФГДС для маленьких детей.

Специальной подготовки к сбору биоматериала для обоих исследований не требуется. Кал собирается естественным путём без применения слабительных препаратов, желательно до начала приёма антибиотиков.

Биопсия

Пациенты задают вопрос – что представляет собой биопсия и цитология как обследование на хеликобактер? Суть метода в прижизненном заборе клеток или участка ткани с целью последующего исследования. Процедуру осуществляют во время инвазивной диагностики методов ФГДС желудка и двенадцатиперстной кишки.

Собранный биоматериал анализируют на наличие уреазы и антигенов бактерии. После чего возможно последующее культивирование биоматериала с выделением Хеликобактер пилори.

Какой анализ на Хеликобактер пилори самый точный?

Несмотря на то, что ни одна из методик не защищена от диагностических ошибок, самый точный анализ на Хеликобактер – это биопсия.

При этом врач должен обладать достаточной компетенцией и не допускать ошибок. Например, при биопсии не исключена возможность ложноотрицательных результатов при неправильном выборе места сбора биоматериала. Именно поэтому диагностика хеликобактериоза предполагает одновременный комплекс лабораторных и инвазивных анализов.

Норма Хеликобактер пилори в крови в цифрах

Расшифровка анализа крови на Хеликобактер пилори, а также других полученных данных – работа врача и не допускает самостоятельную интерпретацию результатов пациентом. В таблице представлены нормальные значения для каждой диагностической методики.

Название метода	Норма	Приблизительная стоимость (для частной лаборатории), руб.	Срок получения результатов (без учёта дня взятия биоматериала)
Дыхательный тест	Менее 4 ‰	850	До 6 суток
ПЦР	Не обнаружено	500	До 2 суток
Антигены		750	1 сутки
Биопсия		600
Антитела	IgG 0-0,9 МЕ/мл	550
	IgA 0 — 13,5 МЕ/мл	650	До 8

Пациентов волнует вопрос — что означает Хеликобактер негативный? Получение подобного результата свидетельствует об отсутствии хеликобактерной инфекции или об успешной терапии с полным уничтожением бактерий.

Лечение хеликобактер пилори без антибиотиков

Методы, направленные на полное уничтожение Хеликобактер пилори носят название – эрадикации. В 1987 году была сформирована Европейская группа, цель которой – разработка наиболее эффективных, доступных и безопасных методов эрадикации. Их рекомендации, оформленные в виде трудов, именуются Маастрихтскими консенсусами.

Основной метод лечения – антибиотики. Однако не всегда удаётся достичь положительной динамики в виду высокого уровня устойчивости Хеликобактер пилори к большинству известных антибиотиков. Кроме того, в определённых зонах ЖКТ патогенные бактерии недосягаемы для антибактериальных веществ из-за большого количества слизи.

Самостоятельное применение методов нетрадиционной медицины не позволяет достичь полного уничтожения инфекции. Однако методика может применяться в качестве дополнения при медикаментозном лечении.

Снижению кислотности способствует лечение семенем льна, настойку которого принимают перед употреблением пищи. Консистенция отвара в виде слизи помогает дополнительно защищать желудок от разрушительного воздействия ферментов и токсинов бактерии.

Лечение картофельным соком предполагает его ежедневное употребление перед едой. Отмечено, что сок картофеля, как и других овощей, способствует снятию боли и снижению воспалительного процесса.

Допустимо применение настоек из различных трав, например, зверобой, ромашка и тысячелетник. Травы смешиваются в равных количествах, заливаются кипятком и настаиваются. До еды необходимо принять не более 2 столовых ложек настойки.

Лечение корнем аира болотного способствует увеличению уровня кислотности. Настойка принимается до еды по 50-70 мл до трёх раз.

Отзывы по лечению Хеликобактера пилори народными средствами различны. Многие люди связывают свое выздоровление исключительно с настойками и отварами, при полном исключении антибиотиков. Однако не следует забывать об известных случаях спонтанной элиминации бактерии из организма человека. Несмотря на отсутствии доказательной базы феномена, его исключение невозможно.

Максимальный терапевтический эффект достигается при строгом соблюдении диеты, применении антибиотиков и методов неофициальной медицины. Успешным считается лечение, в результате которого клинические симптомы стали менее выражены или полностью исчезли.

Дипломированный специалист, в 2014 году закончила с отличием ФГБОУ ВО Оренбургский госудаственный университет по специальности "микробиолог". Выпускник аспирантуры ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ.

В 2015г. в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН прошла повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе "Бактериология".

Лауреат всероссийского конкурса на лучшую научную работу в номинации "Биологические науки" 2017 года.

В статье представлены результаты бактериологического тестирования 48 штаммов Helicobacter pylori (H. pylori), выделенных от пациентов в Санкт-Петербурге. Антибиотикорезистентность штаммов H. pylori оценивали методом серийных разведений. Среди анализируемы

The article describes the results of bacteriologic testing of 48 Helicobacter pylori (H. pylori) strains taken from the patients in Saint-Petersburg. Antibiotic resistance of H. pylori strains was evaluated by serial breeding method. Among the analysed isolates, 42,5% were resistant to metronidazole, 27,1% — to levofloxacin, 25% — to clarithromycin, 6,3% — to amoxicillin. All the tested strains were sensitive to tetracycline.

Эрадикация H. pylori у инфицированных пациентов, страдающих хроническим гастритом, язвенной болезнью, функциональной диспепсией и другими H. pylori-ассоциированными заболеваниями, является основной стратегией предотвращения развития некардиального рака желудка [1]. В любой клинической ситуации, при которой врач сомневается в необходимости диагностировать инфекцию H. pylori и провести уничтожение микроорганизма, дополнительным и крайне актуальным аргументом в пользу этих мероприятий должен стать профилактический эффект эрадикации относительно возникновения рака желудка, особенно у пациентов с отягощенным наследственным анамнезом [2].

Целью данной работы было получение данных о состоянии первичной антибиотикорезистентности штаммов H. pylori, выделенных от пациентов в Санкт-Петербурге.

Исследование по протоколу SHELF проводилось в Санкт-Петербурге с мая 2013 по июнь 2014 года. Одобрение было получено в центральном и локальном научном этическом комитете в соответствии с принципами Хельсинкской декларации. В исследовании использовались гастробиоптаты пациентов, соответствующих следующим критериям.

Критерии исключения:

1) пациенты, ранее получавшие антимикробную терапию для эрадикации H. pylori;
2) пациенты, получавшие антибиотики из группы макролидов в течение одного года, предшествовавшего данному исследованию;
3) пациенты, участвующие в любых других клинических исследованиях;
4) пациенты, получавшие ингибиторы протонного насоса и препараты висмута в течение двух недель, предшествовавших данному исследованию;
5) больные, принимающие антибактериальную терапию на момент забора материала.

Критерии включения:

1) мужчины и женщины в возрасте от 18 до 65 лет;
2) пациенты с инфекцией H. pylori, подтвержденной быстрым уреазным тестом гастробиоптата, полученного при проведении эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС);
3) решение врача в рамках рутинной клинической практики и диагноза пациента провести ЭГДС с забором биоптата.

В качестве основы питательной среды для выделения и культивирования H. pylori использовался колумбийский агар. Каждый образец биопсии высевался параллельно на две чашки Петри с агаром, содержащим антибиотики в следующих концентрациях: ванкомицин в концентрации 6 мкг/мл, триметоприм, в концентрации 2 мкг/мл (растворяли в спирте) и амфотерицин В (или налидиксовую кислоту) в концентрации 2–10 мкг/мл.

Инкубация посевов осуществлялась в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода около 5%. Для этих целей использовались анаэростаты системы GasPac100 c газогенерирующими пакетами типа GasPak (BBL CampyPak Plus Microaerophilic System envelopes with Palladium Catalyst).

На кровяной питательной среде на 5–7 сутки H. pylori формировал мелкие, круглые, гладкие, прозрачные, влажные колонии диаметром около 1 мм. Колонии H. pylori, полученные в результате первичного посева биопсийного материала, использовали для приготовления мазков, окраски их по Граму и постановки уреазного теста.

Решение вопроса о принадлежности выделенной культуры к роду Helicobacter выносили на основании характерной морфологии выделенных колоний, а также набора тестов: морфологии культуры в мазке, окрашенном по Граму, и наличии характерных биохимических свойств (способности к продукции уреазы). Типичные клетки H. pylori при микроскопии имели вид тонких изогнутых нежно-розовых палочек.

Антибиотикорезистентность выделенных штаммов H. pylori изучали, используя метод серийных разведений, который основан на регистрации ингибиции роста микроорганизма на питательном агаре, содержащем определенные концентрации антибиотика. Определяли чувствительность штаммов H. pylori к кларитромицину, амоксициллину, левофлоксацину, метронидазолу и тетрациклину. Рабочие концентрации исследуемых антибактериальных препаратах в агаре были следующими:

• амоксициллин — 0,25; 0,12; 0,06 мкг/мл;
• кларитромицин — 1,0; 0,5; 0,25; 0,12 мкг/мл;
• левофлоксацин — 2,0; 1,0; 0,5 мкг/мл;
• метронидазол — 16; 8; 4 мкг/мл;
• тетрациклин — 2,0; 1,0; 0,5 мкг/мл.

Среды и растворы антибактериальных препаратов готовили непосредственно перед использованием.

На чашки Петри с ростом H. pylori добавляли по 1–2 мл стерильного физиологического раствора и снимали бактериальную массу. Инокулюм наносили бактериологической петлей на поверхность чашки Петри с селективной кровяной средой с определенной концентрацией антибиотика, равномерно распределяя по поверхности. Затем чашки Петри помещали в анаэростат и инкубировали при температуре 37 °С в течение 3–5 суток. После окончания инкубации отмечали чашку с концентрацией антибактериального препарата, вызывающей полное подавление роста микробов. Контроль чистоты роста культуры оценивали по посеву на чашку Петри с селективной кровяной средой без добавления антибиотиков.

Данный метод позволил подразделить штаммы H. pylori на чувствительные и устойчивые [9]. Критерии распределения штаммов по степени чувствительности приведены в табл. 1.

На каждого пациента, гастробиоптат которого использовался в исследовании, заполнялась индивидуальная регистрационная карта (ИРК), которая дублировалась в базе данных Microsoft Access Database и содержала демографические, анамнестические данные, результаты проведенных исследований.

Статистический анализ выполнялся с помощью программного пакета IBM® SPSS® Statistics, версия 21.0.

Демографические и анамнестические показатели анализировались с помощью методов описательной статистики. Для дихотомических показателей резистентности были представлены 95% доверительные интервалы для долей резистентности к тому или иному антибиотику. Подобный статистический анализ проводился в отношении выявления наличия H. pylori и выявления резистентности к антибиотикам.

В исследовании использовались гастробиоптаты 109 пациентов в возрасте от 18 до 64 лет. Возраст, пол и диагноз пациентов представлены в табл. 2.

У пациентов были диагностированы различные заболевания, ассоциированные с H. pylori. Наиболее частой нозологией являлся хронический гастрит — 78,9% (n = 86). Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (ДПК) диагностирована у 20,2% (n = 22), а язвенная болезнь желудка — у 0,9% (n = 1).

Инфицирование H. pylori было подтверждено у всех пациентов уреазным тестом. Бактериологическим методом микроорганизм выделен лишь у 56 пациентов, что составило 51,4% (95% ДИ: 42,0%, 60,8%). Такой процент отражает технические трудности, связанные с транспортировкой и культивированием микроаэрофильного микроорганизма.

Чувствительность H. pylori к антимикробным препаратам удалось определить у 48 выделенных штаммов. Из-за скудного роста культуры в 8 случаях оценить антибиотикограмму было невозможно.

Таким образом, в анализ резистентности были включены 48 штаммов хеликобактера, выделенных от 48 пациентов. Среди анализируемых изолятов H. pylori штаммов, 17 (42,5%) были резистентны к метронидазолу, 13 (27,1%) — к левофлоксацину, 12 (25%) — к кларитромицину. Кроме того, было выявлено 3 (6,3%) штамма, устойчивых к амоксициллину. Все тестируемые штаммы были чувствительны к тетрациклину. В случаях выявления резистентности к трем и более группам антимикробных препаратов, штамм хеликобактера относили к полирезистентным. В ходе исследования 5 (11,1%) микроорганизмов были полирезистентными (табл. 3).

Двойная резистентность к кларитромицину и метронидазолу обнаружена у 2 (4,4%) изолятов, метронидазолу и левофлоксацину — у 4 (8,3%) микроорганизмов. Все штаммы, резистентные к амоксициллину, были устойчивы к кларитромицину.

Частота встречаемости резистентных штаммов отличалась среди мужчин и женщин, однако данный факт сложно интерпретировать из-за малой выборки (табл. 4).

При анализе частоты резистентности к кларитромицину выявлены различия по нозологиям. Так, у 14 пациентов, страдающих язвенной болезнью, было 5 (35,7%) случаев выделения штаммов H. pylori, резистентных к кларитромицину. В то же время у 34 больных, у которых был диагностирован только хронический гастрит, частота выделения резистентных штаммов к кларитромицину была ниже — 7 (20,6%). Однако этот факт сложно интерпретировать из-за ограниченного числа наблюдений.

Согласно Маастрихтским рекомендациям IV пересмотра, уровень резистентности H. pylori к кларитромицину в популяции является определяющим фактором при выборе схемы эрадикации [10]. Подобно другим патогенам, хеликобактер имеет региональные особенности резистентности. Резистентность напрямую коррелирует с частотой назначения антимикробных препаратов и утвержденными протоколами выбора антибиотиков [11]. Невозможно экстраполировать данные о резистентности, выявленные в одной стране, на другую, в силу значительных региональных различий чувствительности микроорганизмов. Так, резистентность к кларитромицину в Нидерландах составляет всего 5,6%, тогда как резистентность H. pylori к данному антибиотику в Австрии достигает 35,4% [11]. Уровень устойчивости к метронидазолу в Пекине составил 63,9%, а на Юго-Восточном побережье Китая — 95,4% [16, 17]. Для анализа антибиотикорезистентности H. pylori в мире нами были отобраны наиболее масштабные исследования, проводимые с 2000 по 2013 год. Проанализировано 13 исследований, из которых 3 европейских, 5 азиатских, 2 африканских и 3 американских. Более подробно уровень резистентности к антибиотикам H. pylori в различных странах приведен в табл. 5.

При анализе результатов исследований по антибиотикорезистентности H. pylori на территории России обращает на себя внимание рост уровня резистентности H. pylori к кларитромицину. Так, в 1996 г. в г. Москве не было выявлено резистентных штаммов к кларитромицину. Уже в 1999 г. уровень резистентности H. pylori к кларитромицину составил 17,1%, в 2000 г. 16,6%, в 2001 г. 13,8%, а в 2005 г. уже 19,3% [24, 25]. При интерпретации показателей резистентности важно учитывать методику определения чувствительности. Так, при использовании только генотипического метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) возможны сложности в интерпретации результатов. Примером могут служить данные, полученные в Санкт-Петербурге — 39–40% резистентных штаммов по данным ПЦР [26, 27]. В то же время резистентность к кларитромицину при оценке дискодиффузионным методом, который тоже имеет определенные ограничения, составила всего 7,7% [28].

Наибольшую информативность представляют данные о резистентности, полученные методом серийных разведений. На основании тестирования 133 штаммов методом серийных разведений сделан вывод о низкой резистентности в Смоленске в 2010 г. [29]. В нашем исследовании, при использовании сходной технологии тестирования, резистентность составила 25%, что еще раз иллюстрирует межрегиональные различия чувствительности микроорганизмов.

Фенотипический метод определения чувствительности к антибиотикам рекомендован Институтом по клиническим и лабораторным стандартам (CLSI), EUCAST, а также Маастрихтским соглашением IV пересмотра в качестве основного метода определения чувствительности H. pylori к кларитромицину [38]. Культуральный метод является высокоспецифичным тестом, однако характеризуется низкой чувствительностью [39]. Определение чувствительности H. pylori к антибиотикам в нашей стране сопряжено с рядом трудностей. Успех бактериологического выделения H. pylori во многом связан с правильностью отбора биопсийных образцов и соблюдением условий транспортировки материала в лабораторию. Хеликобактер является труднокультивируемым микроорганизмом, что требует не только навыков работы с его чистой культурой, но и четкого соблюдения методики разведения рабочих концентраций исследуемых антибактериальных препаратов. Учитывая объективные сложности, описанные выше, становится понятным отсутствие широко представленных данных об истинном состоянии антибиотикорезистентности в различных регионах нашей страны. Большинство исследователей в своих суждениях об антибиотикорезистентности H. pylori опираются на метод ПЦР как единственную доступную альтернативу бактериологическому методу, который позволяет определить генетические мутации H. pylori и прогнозировать фенотипическую резистентность [7].

Такая стратегия была использована нами для лечения пациентов, гастробиоптаты которых использовались в данном исследовании. Применение стандартной тройной терапии с двойной дозой ингибиторов протонного насоса, усиленной препаратом висмута трикалия дицитрата, привело к уничтожению H. pylori у 93,2% пациентов, несмотря на выявленную высокую резистентность к кларитромицину [44].

На основании проведенного бактериологического исследования антибиотикорезистентности штаммов H. pylori можно сделать следующие выводы и рекомендации:

Полученные данные о резистентности H. pylori в Санкт-Петербурге делают актуальным использование всех возможностей для повышения эффективности стандартного подхода: двойные дозы ингибиторов протонного насоса, увеличение длительности с 7 до 10–14 дней, добавление препаратов висмута и пробиотиков, поиск новых стратегий эрадикации.

Литература

За остальным списком литературы ? обращайтесь в редакцию.

В. И. Симаненков* , 1 , доктор медицинских наук, профессор
Н. В. Захарова*, доктор медицинских наук, профессор
А. Б. Жебрун**, доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН
А. В. Сварваль**, кандидат медицинских наук
И. В. Савилова*
Р. С. Ферман**

* ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И. И. Мечникова, Санкт-Петербург
** НИИ ЭиМ им. Пастера, Санкт-Петербург