Ифа тест-системы на туляремию

Диагностические препараты, тест-системы, используемые при проведении лабораторной диагностики туляремии

Наименование препарата или тест-системы

Номер регистрационного удостоверения

Набор реагентов. Иммуноглобулины диагностические флюоресцирующие туляремийные сухие

Филиал "Медгамал" ФГБУ

"НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи"

123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18

Тел.: (499)193-30-50; 190-44-59

Набор реагентов. Альбумин бычий или бараний, меченный родамином, сухой

Филиал "Медгамал" ФГБУ "НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи" Минздравсоцразвития России

123098, г. Москва,

Тел.: (499)193-30-50; 190-44-59

Набор реагентов. Тест-система диагностическая для выявления возбудителя туляремии в иммуноферментном анализе (ИФА) "ИФА-Тул-СтавНИПЧИ"

355035, г. Ставрополь, ул. Советская, 13

Тел./факс: (6522) 26-03-12

Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии (ИХ-тест F. Tularensis)

142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск

Тел./факс: (4967) 36-00-10

Аллерген туляремийный жидкий (Тулярин), суспензия для накожного скарификационного нанесения

ФГУП "НПО "Микроген"

127473, г. Москва, 2-й Волконский пер., 10, тел. 495,790-77-73,

644080, Омск, пр. Мира, 7

Предприятие по производству бактерийных препаратов тел. (3812) 65-14-63

Диагностикум туляремийный жидкий для объемной и кровяно-капельной реакции агглютинации

ФГУП "НПО "Микроген" 127473, г. Москва, 2-й Волконский пер., 10,

644080, Омск, пр. Мира, 7

Предприятие по производству бактерийных препаратов тел. (3812) 65-14-63

Незарегистрированные и разрабатываемые препараты

(используются лабораториями территориального и регионального уровней только после регистрации)

Сыворотка диагностическая туляремийная сухая для РА, лиофилизат для микробиологических целей

664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78

Тел./факс: (3952) 22-01-40

Набор реагентов для определения возбудителя туляремии Francisella tularensis в реакции латекс-агглютинации

Прошел приемочно-технические испытания в аккредитованном Росздравнадзором испытательном центре

142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск

Тел./факс: (4967) 36-00-10

Набор реагентов. Тест-система иммуно-ферментная магноиммуносорбентная для выявления возбудителя туляремии моноклональная

Прошел приемочно-технические испытания в аккредитованном Росздравнадзором испытательном центре

142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск

Тел./факс: (4967) 36-00-10,

ФКУЗ СтавНИПЧИ 355035, г. Ставрополь, ул. Советская, 13-15

Тел./факс: (8652) 26-40-39

Иммуномагнитная латексная тест-система на туляремию

Прошла приемочно-технические испытания в аккредитованном Росздравнадзором испытательном центре

ФБУН ГНЦ ПМБ 142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск

Тел./факс: (4967) 36-00-10

Диагностикум туляремийный цветной сухой для РА и МРА

664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78

Тел./факс: (3952) 22-01-35

Диагностикум эритроцитарный туляремийный антигенный жидкий

ФКУЗ СтавНИПЧИ 355035, г. Ставрополь, ул. Советская, 13-15

Тел./факс: (8652) 26-40-39

Диагностикум эритроцитарный туляремийный иммуноглобулиновый жидкий

355035, г. Ставрополь, ул. Советская, 13-15

Тел./факс: (8652) 26-40-39

Тест-система для выявления ДНК Francisella tularensis методом полимеразной цепной реакции (ГенТул)

ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" 410005, г. Саратов, ул. Университетская, д. 46

Тел.: (8452) 26-21-31

Факс: (8452) 51-52-12

Набор реагентов для выявления ДНК Francisella tularensis методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени (Ген Francisella tularensis - РГФ)

ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб"

410005, г. Саратов, ул. Университетская, д. 46

Тел.: (8452) 26-21-31

Факс: (8452) 51-52-12

Набор реагентов для выявления ДНК Francisella tularensis методом полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Francisella tularensis - РЭФ)

ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб"

410005, г. Саратов, ул. Университетская, д. 46

Тел.: (8452) 26-21-31

Факс: (8452) 51-52-12

Тест-система для одновременной детекции ДНК возбудителей сибирской язвы, чумы, туляремии методом мультиплексной полимеразной цепной реакции

ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" 410005, г. Саратов, ул. Университетская, д. 46

Тел.: (8452) 26-21-31

Факс: (8452) 51-52-12

Тест-система для детекции и характеристики возбудителя туляремии методом мультиплексной полимеразной реакции

ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб"

410005, г. Саратов, ул. Университетская, д. 46

Тел.: (8452) 26-21-31

Факс: (8452) 51-52-12

>
Химические реактивы, используемые при проведении лабораторной диагностики туляремии

Содержание
Методические указания МУК 4.2.2939-11 "Порядок организации и проведения лабораторной диагностики туляремии для лабораторий.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Francisella tularensis IgM

Иммуноферментный тест-набор SERION ELISA classic Francisella tularensis IgG и IgM это качественные и количественные тесты для выявления антител человека к липополисахарину(LPS) туляремии в сыворотке или плазме. Тесты предназначены для диагностики туляремии, контроля успешности прививки, для определения статуса перед прививкой для избежания нанесения ущерба прививкой, а также для поддержания эпидемиологических разработок.

Туляремия– это передающийся человеку зооноз, вызванный бактерией Francisella tularensis, который проявляется в различных клинических картинах болезни. Поскольку картина жалоб у животных похожа на чуму и болезнь часто поражает зайцев и диких кроликов, её также называют заячьей чумой. Также в народе курсируют названия чума грызунов, лемминговая лихорадка или болезнь Паринода. Возбудителем Francisella tularensis(прежнее название также Pasteurella tularensis) является грамотрицательная плеоморфная бактерия. Три клинически существенные формы из всего четырёх подвидов серологически практически не различаются. Эпидемиологически, биохимически и генотипно можно различить два типа:
Francisella tularensis biovar tularensis(типA) высоковирулентен. Если не подвергать инфекцию лечению, она дает высокую смертность. Francisella tularensis biovar holarctica (типB) намного менее вирулентен, однако может давать также тяжелую клиническую картину. Естественным резервуаром возбудителя Francisella tularensis являются различные мелкие млекопитающие, как напр. зайцы, кролики, мыши, крысы или белки.
Возбудитель был также уже обнаружен и в пробах грунта и водоёмах и может там, в зависимости от климатических условий, долгое время сохраняться. Заражение человека может происходить через прямой контакт через кожу или слизистую инфицированных животных или их испражнения. Также передаточным звеном могут быть эктопаразиты. Ещё одним потенциальным путем заражения может быть употребление в пищу зараженного и не достаточно хорошо проваренного мяса и ингаляция инфицированной пыли. Передача заболевания от человека человеку маловероятна и пока такие случаи не известны.

Туляремия встречается во всем северном полушарии между30-м и 71-м северным градусом широты, особенно в скандинавских странах, России, Японии, Китае, США и Канаде. Заражаются чаще сельские жители. В Германии туляремия считается редким инфекционным заболеванием. Первые симптомы туляремии проявляются в основном на2-й– 5-й день после инфицирования. Инкубационный период в зависимости от дозы заражения, пути заражения и от вирулентности подвида возбудителя может колебаться от1 до21 дней. Наряду с классическими симптомами, такими как лихорадка, вялость, а также
мускульные боли и боли в конечностях клиническая картина туляремии может быть очень разнообразна. Клинически различают следующие формы:

• Язвенно-желёзная: кожные язвы с региональными увеличениями лимфатических узлов(LKS)
• Желёзная: региональные увеличения лимфатических узлов без кожных язв
• Глазно-желёзная: конъюктивит с увеличением лимфатических узлов в районе уха
• Рото-глоточная: стоматит, фарингит(воспаление глотки), тонзилит (воспаление миндалин), увеличение шейных лимфоузлов
• Кишечная: боли в животе, понос и рвота
• Лёгочная: первичное заболевание лёгких и плевры
• Тифоидная: первичное лихорадочное заболевание с сепсисом

Ингаляция возбудителя часто ведет к лёгочным проявлениям(напр. воспаление лёгких) или к септической, сходной с тифом картине заболевания. Инфицирование через пищеварительный тракт может привести к рвоте, болям в животе и поносу. Выявление культуры из периферической крови, мазков и биопсийного материала сложно и может длиться несколько недель. Поскольку речь идет об острозаразном
возбудителе, такую диагностику проводят только специализированные лаборатории. По этой причине идентификация происходит чаще всего непрямым способом через иммунологические и молекулярные методы. Серологическое подтверждение через увеличение специфических антител может быть проведено
при помощи теста ELISA.

Вовремя распознанное заболевание туляремии можно успешно лечить антибиотиками. Непролеченная инфекция возбудителем типа А ведет к отказу многих систем органов и поражению центральной нервной системы и в40% случаев к смерти; в случае применения лечения смертность составляет примерно1%.
Инфицирование возбудителем типа В протекает при всех путях заражения более мягко и с низким смертельным исходом. Из-за высокой заразности возбудителя а также многочисленных возможностей его
распространения, многие страны проводили опыты по использованию возбудителя
в качестве биологического оружия.

Тесты SERION ELISA classicFrancisella tularensis IgG или IgM позволяют количественное определение человеческихIgG- илиIgM-антител в сыворотке или плазме к липополисахарину(LPS) туляремии Francisella tularensis ssp. holarctica (вид LVS).

Francisella tularensis IgM

Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.

Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.
Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).
Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

Информативность ИФА делает этот анализ важным инструментом в работе многих медицинских центров. Но можно ли доверять такую диагностику государственным лабораториям или лучше самим выбрать, где провести такое исследование?

а) Наиболее распространенным и вместе с тем вполне точным методом серологической диагностики туляремии является реакция агглютинации (РА). Она служит для установления диагноза у больного или переболевшего (ретроспективный диагноз) и может быть использована при изучении иммунологического состояния привитых против туляремии. Обнаружение агглютининов у больного туляремией обычно отмечается через 10-15 дней, при этом агглютинационный титр сыворотки в этот период составляет 1:50-1:100, но далее быстро нарастает и на 4-6-й неделе болезни достигает 1:400-1:800, реже 1:1600 и выше.

По достижении максимальных показателей агглютинационный титр сыворотки затем медленно снижается и через 6-12 месяцев составляет 1:100-1:400, а позднее падает до 1:10-1:50 и на этом уровне может удерживаться в течение многих лет. Длительность сохранения агглютининов делает возможным использование РА для ретроспективного диагноза.

У привитых против туляремии агглютинины обнаруживаются через 2-3 нед., достигают через 4-6 нед. максимальных титров 1:160-1:320, реже выше, затем снижаются до 1:10-1:40 и обычно выявляются в течение 5-7 лет после вакцинации.

Антигеном для РА служит туляремийный диагностикум, представляющий собой убитую формалином взвесь туляремийных бактерий вакцинного штамма. В 1 мл препарата содержится 25 млрд, туляремийных бактерий. Для постановки РА туляремийный диагностикум предварительно разводят 0,9%-ным раствором хлорида натрия (pH 7,0-7,2) в 5 раз до концентрации 5 млрд, туляремийных бактерий в 1 мл.

Учет результатов РА производят через 18-24 ч невооруженным глазом. Оценку реакции осуществляют на основании степени прозрачности надосадочной жидкости в пробирках, количества и характера осадка микробной массы (агглютината).

Агглютинационный титр сыворотки учитывают по последнему разведению, которое дало вполне четкую реакцию (не менее трех плюсов).

При серологической диагностике туляремии у человека диагностическим считается титр 1:100 и выше, однако обязательно должно быть прослежено его нарастание. При отрицательной или сомнительной реакции, а также при положительной реакции в низких разведениях сыворотки у подозрительных на туляремию больных рекомендуют повторить исследование сыворотки через 7-10 дней. Нарастание титра сыворотки в 2-4 раза и выше свидетельствует о свежем случае туляремии и подтверждает диагноз.

Реакцию агглютинации можно ставить в микрообъемах, используя для этого сыворотку или плазму крови, взятую из пальца руки. Диагностикум для реакции микроагглютинации готовят из убитой культуры вакцинного штамма туляремийного микроба, которую окрашивают гематоксилином. Реакцию микроагглютинации ставят в полистироловых пластинах микротитратора Такачи. Для этого в ряд лунок полистироловой пластины микротитратора Такачи вносят 50 мкл физиологического раствора (pH 7,0-7,2).

Титры реакции микроаттлютинации, как правило, совпадают или на одно разведение ниже титров РА, выполненной макрометодом.

б) Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) является чувствительным методом серологической диагностики и используется как для ранней, так и ретроспективной диагностики, а также для определения иммунологического состояния привитых. У больных туляремией гемагглютинины обычно обнаруживаются в конце первой или на второй неделе заболевания. Через 1—1,5 мес. титры РНГА достигают максимальных показателей (1:10 000-1:20 000, реже выше), после чего снижаются и на уровне 1:100-1:200 сохраняются длительное время.

У привитых антитела также обнаруживаются постоянно, однако, в более низких титрах, не превышающих 1:2000-1:5000 через 1-1,5 мес. после вакцинации, и сохраняются в течение нескольких лет на низком уровне 1:20-1:80. Обычно гемагглютинационный титр сыворотки превышает таковой агглютинационный. Особенно это выражено у больных в острый период болезни или у привитых в короткие сроки после вакцинации. При ретроспективном обследовании переболевших и привитых в отдаленные сроки резких различий в титрах РА и РИГА не отмечается.

Антигеном для постановки РИГА служит туляремийный эритроцитарный диагностикум (антигенный). Препарат представляет собой формал и визированные эритроциты барана, сенсибилизированные туляремийным антигеном; выпускается в жидком и сухом виде. Жидкий препарат — 10% взвесь эритроцитов в 10%-ном растворе формалина. Сухой лиофилизированный препарат — высушенная в вакууме 10% взвесь эритроцитов без консерванта. Перед употреблением его разводят в соответствии с указаниями на этикетке. Для постановки реакции в полистироловых пластинах оба препарата применяют в 2,5%-ной концентрации, а при постановке реакции в микрообъемах — в 0,5%-ной концентрации. Гемагглютинационный титр сыворотки учитывают по последнему ее разведению, которое дало вполне четкую реакцию (не менее трех плюсов).

Диагностическим титром считается разведение 1:100 и выше, однако, так же как и в случае РА, необходимо проследить за его нарастанием.

РНГА при туляремии является достаточно специфичной и обнаруживает некоторые перекрестные реакции только с бруцеллезными сыворотками. Дифференциальная диагностика возможна по высоте титров в РНГА, которые значительно выше с гомологичным антигеном.

РНГА может быть выполнена в микрообъемах при помощи микротитратора типа Такачи, который позволяет осуществлять титрование материала в объемах 25 и 50 мкл. Техника постановки реакций, последовательность всех операций такая же, как и при исследовании в полистироловых пластинах. Следует, однако, иметь ввиду, что чувствительность микрометода обычно на одно разведение (т.е. в 2 раза) ниже, чем макрометода.

Специфичность положительного результата, полученного в РНГА, может быть проверена при помощи трехкомпонентной реакции — реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТНГА). Эту реакцию ставят для подтверждения специфичности положительного результата РНГА, когда он вызывает сомнение или представляет особый эпидемиологический интерес. Механизм реакции заключается в специфическом торможении гемагглютинации при добавлении к испытуемой сыворотке взвеси убитых туляремийных бактерий. В реакции взаимодействуют три компонента: испытуемая сыворотка, специфический туляремийный антиген и антигенный эритроцитарный диагностикум.

в) Иммуноферментный анализ на твердом носителе используют для диагностики туляремии у больных и переболевших людей, определения наличия иммунитета у вакцинированных против туляремии. У больных туляремией специфические антитела обнаруживаются в И ФА в промежутке между 6-10-м днями, достигают максимальных показателей к 4-7-й неделе, затем уровень их снижается, но они продолжают выявляться длительное время (более 10 лет после переболевания). ИФА обеспечивает более раннюю (по сравнению с РА и РИГА) и эффективную иммунологическую диагностику. Титры антител у больных и вакцинированных колеблются в значительных пределах от 1:400 до 1:40 000 и выше и, как правило, в 10-20 раз превышают таковые в РА и РНГА.

Для постановки ИФА используют диагностическую тест-систему иммуноферментную для определения туляремийных антител. Выявление туляремийных антител в сыворотках людей происходит за счет специфического взаимодействия антигена возбудителя туляремии, адсорбированного на планшете, с туляремийными антителами в исследуемой сыворотке. Образовавшийся комплекс антиген — антитело определяют при помощи антител против иммуноглобулинов человека, меченных иероксидазой.

В соответствии с назначением тест-система представляет собой набор ингредиентов для проведения иммуноферментного анализа на твердофазном носителе и включает в себя: туляремийный липонолисахарид; антитела против иммуноглобулинов человека, меченных иероксидазой; контрольную положительную сыворотку; контрольную отрицательную сыворотку; набор солей, необходимых для приготовления буферных растворов; субстрат — О-фенилендиамин (ОФД); твин-20; бычий сывороточный альбумин (БСА); планшеты для ИФА однократного применения.

Сыворотки рекомендуется первоначально исследовать параллельно в двух лунках в разведении 1:200 с последующей раститровкой положительных, сывороток, для определения титра антител, используя двукратные разведения. Диагностическим титром в ИФА считают разведение сыворотки 1:400 и выше.

В последние годы для диагностики туляремии разработаны и некоторые другие методы, в частности основанные на использовании синтетических носителей для сенсибилизации антигена, с успехом используемые в отдельных регионах и учреждениях.

г) Непрямой иммунофлуоресцентный метод. Для обнаружения туляремийных антител готовят мазки из 1-2-суточной агаровой культуры возбудителя (взвесь 1 млрд клеток/мл). При этом на одном предметном стекле делают 8 мазков, фиксируют их в этиловом спирте в течение 30 мин, не обжигая высушивают на воздухе и помещают во влажную камеру. Исследуемую сыворотку разводят двукратно до разведений от 1:10 до 1:640-1:1280 и наносят пастеровской пипеткой на мазки, начиная с большего разведения. Влажную камеру с препаратом помещают в термостат при 37°С на 30 мин. Мазок отмывают от несвязавшихся антител и после подсыхания его вновь помещают во влажную камеру, докрашивая антивидовой люминесцирующей сывороткой в рабочем разведении. После просмотра препарата устанавливают титр антител в исследуемой сыворотке.

Контролем служат препараты, в которых туляремийные бактерии обработаны туляремийной сывороткой (положительный контроль) и сывороткой, не содержащей антитела к возбудителю туляремии (отрицательный контроль). При исследовании сыворотки больного с подозрением на туляремию диагностическим считается титр не менее 1:40.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 30.1.2020

Читайте также: