Исследование крови на лептоспироз у животных

Лептоспироз (Leptospirosis) — антропозоонозное инфекционное заболевание характеризующееся желтухой, анемией, гемоглобинурией, лихорадкой, геморрагическим гастроэнтеритом, расстройствами нервной системы, у взрослых животных абортами и мертвородами.

Заболеванию подвержены все животные и человек. Наиболее часто болеют свиньи и крупный рогатый скот.

Этиология

Возбудитель болезни представитель рода Leptospira семейства Spirochaetaceae. Лептоспира условно разделена 19 серологических групп и 168 серовариантов. Так возбудитель у собак - L. jcterohaemorrhagiae, L.canicola, а вот L. Pomona может вызвать заболевание у свиней, крупного и мелкого рогатого скота.

Рассматривая возбудителя в тёмном поле можно видеть тонкие, нежные, спиральные нитки с загнутыми концами и пуговчатыми утолщениями. Длинна варьирует от 5 до 18 мкм, а ширина 0,2-0,3. Часто микроорганизмы бывают похожи на символы Х, С, S.

Возбудитель подвижен, его движения вращательно и волнообразно.

Для культивации используются специфические среды с рН 7,1-7,4, и проводят её в температурных пределах 25-30° С. Рост первичных посевов из патологических органов наблюдают на 20- 45-й день. При последующих пересевах рост появляется на 6-16-й день.

К факторам внешней среды лептоспира не устойчива. Солнечные лучи убивают в течение 0,5-2 часов, нагрев до 56° С губительно подействует через 30 минут. Минус 20° С убивает в течение 4-х часов.

В свежей моче лептоспира сохраняет жизнеспособность на протяжении 2-3 дней. В воде рек сохраняют вирулентность до 200 дней, навозе — сутки, сточных водах — до 12 дней, в сухой почве погибают за сутки.

Дезинфицирующие средства быстро уничтожают возбудителя. Достаточно 5-10 минут для 2% раствора соляной кислоты, 0,5% раствора едкого натра, 0,25% раствора формалина.

Источник заражения сельскохозяйственные животные и грызуны. Возбудитель выделяется с мочой, молоком, фекалиями, спермой. Заражённость животных в пределах фермы может достигать до 20% у КРС и МРС, и до 80% у свиней.

Лептоспироносительство может продолжаться у КРС — до 6 мес., МРС — до 9 мес., собак — до 3 лет, свиней — до 2 лет, кошек — до 5 мес., лис — 1,5 лет, грызунов — пожизненно.

Наиболее возможное заражение в заболоченных, влажных местах и пастбищах. Собаки захватывать могут лептоспиру с необеззараженным мясом больного животного.

Проявляется заболевание в основном в весенне-осенний период, но можно заразиться и зимой.

Попав в организм животного, возбудитель быстро проникает в кровь и органы, и вызывает повышение температуры.

Симптомы

Лептоспироз может проявиться в геморрагической и желтушной форме, протекать остро, подостро и хронически.

Геморрагическая форма проявляется слабостью конечностей, отказом от корма, угнетением, повышением температуры. Взрослые животные абортируют в любые сроки беременности. Рождённый молодняк проявляет диарею с первых часов жизни, он слабый и в скором времени погибает.

У коров молоко приобретает жёлтый цвет. При дальнейшем течении у животных обнаруживаются очаги некроза в области головы, вымени, ротовой полости, наружных половых органов.

У свиней аборты достигают 80%. Рождённые поросята не жизнеспособны.

У собак иногда возникает рвота, кровоизлияния на слизистых оболочках, кровяная диарея сменивается на запоры. Выделение мочи происходит не большими порциями. Содержание пигмента с примесью крови нередкие явления.

Желтушная формы присуща молодняку животных. До появления желтушности температура повышена, далее приходит в норму. Слизистые приобретают желтый оттенок от светлого, до насыщенно-оранжевого.

Наблюдается запор, чередующийся с поносом. В выделениях примесь крови. Моча оранжевого цвета.

Хроническое течение характеризуется прогрессирующим исхуданием, некрозами кожи.

Диагноз

Диагностика основывается на клинических проявлениях и лабораторных исследованиях. На ранних стадиях для исследований лучше подойдёт кровь, в более поздних — моча.

Для постановки диагноза титр антител в крови должен быть в пределах 1:400.

При дифференциальной диагностике у крупного рогатого скота следует отличать от злокачественной катаральной горячки, бруцеллеза, пироплазмидозов, кампилобактериоза (вибриоз), сальмонеллеза, трихомоноза, пневмоэнтеритов вирусной этиологии, листериоза. У свиней рассматривают бруцеллез, чуму, сальмонеллез, рожу, заболевания, возникающие при нарушении кормления и микотоксикозы. У лошадей нужно отличить от инфекционной анемии и энцефаломиелита. У собак исключают чуму плотоядных (по результатам лабораторных исследований).

Лечение

В терапевтических целях применима специфическая противолептоспирозная сыворотка. При подкожном введении в начальных стадиях болезни по 10-30 мл.

Для лечения можно воспользоваться стрептомицином и ввести его внутримышечно в дозе 10 тыс. ЕД на кг живого веса.

Для инактивации лептоспир в мочевых путях назначают уротропин, взрослым в дозе 5-20 г, молодняку 2-5 г.

Профилактика

Для иммунизации используют вакцины изготовленные из разных штаммов лептоспир. Применяют её в неблагополучных или угрожаемых по лептоспирозу хозяйствах.

В целях предотвращения ввоза в хозяйство лептоспирозных животных, формировать стадо следует только из благополучных хозяйств. Перед ввозом проводят исследование, и ввозят только тех животных, которые дали отрицательные серологические реакции по РА и РМА. После ввоза животных ставят на карантин до 30 дней.

В целях недопущения распространения лептоспироза среди собак, не допускается участие в выставках не вакцинированных животных.

В целях профилактики постоянно проводятся дератизационные мероприятия.

При установлении диагноза на хозяйство накладывается карантин. Запрещается ввоз и вывоз, перегруппировки. После каждого выделения больного животного проводят текущую дезинфекцию растворами хлора 2% концентрации или 5% креолином. Больных подвергают лечению, здоровых вакцинируют. Исследования проводят через каждые 10 дней до полной ликвидации болезни.

Все виды обследования, вакцинации и лечения Вашего питомца, в том числе экстренная помощь и госпитализацию Вашего питомца.

КРУГЛОСУТОЧНО:
+7 495 532 89 00
(многоканальный)
WatsApp / Viber
+7 925 584 75 71

Токсокароз - зоонозное заболевание, вызванное паразитированием круглых червей и характеризующееся…

Саркома - новообразование, которое характеризуется инфильтративным ростом клеток соединительной…

Фавус (парша) - заболевание грибковой природы, характеризующееся поражениями кожных покровов,…

Травмы головного мозга - патологическое состояние животного, проявившееся в результате механических…

Лишай - собирательное понятие заболеваний наружного покрова тела животного вызванного микроскопическими…

Тепловой удар и солнечный - острое расстройство функций центральной нервной системы в результате…

Тонзиллит - воспалительный процесс, проходящий в нёбных миндалинах, лимфоидных образованиях…

Туляремия - инфекционная болезнь бактериальной природы. Заболеванию подвержены сельскохозяйственные…

Хориоптоз - инвазионное заболевание вызываемое клещами-кожеедами рода Chorioptes. Заболеванию…

Чума крупного рогатого скота - вирусное, высоко контагиозное заболевание, имеющее острое течение…

Блефарит - заболевание воспалительного характера затрагивающее края век. Подвержены болезни…

Синовит - воспалительный процесс проходящий в синовиальной мембране выстилающей капсулу сустава.…

КРУГЛОСУТОЧНО:
+7 495 532 89 00
(многоканальный)
WatsApp / Viber
+7 925 584 75 71

Лептоспироз у собак характеризуется возникновением лихорадочных состояний, анемии, выраженной…

Диагноз на лептоспироз ставят путем проведения микроскопических, бактериологических, серологических и гистологических исследований с учетом эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных.

Материалом для прижизненной диагностики является кровь и моча, для посмертной — трупы мелких животных, от крупных животных ветспециалист отбирает в ветлабораторию следующий патматериал: сердце, кусочки паренхиматозных органов , почку, транссудат грудной и брюшной полостей, перикардиальную жидкость, мочевой пузырь с содержимым. Абортированный плод доставляют в лабораторию целиком или берут желудок с содержимым и паренхиматозные органы. В летнее время патологический материал должен быть взят и исследован в течение 6 часов, зимой при условии хранения его в охлажденном состоянии — в течение 10-12 часов. При обнаружении больных или подозрительных по заболеванию животных берут не менее 50 проб крови от животных каждого скотного двора, свинарника, гурта; спустя 7-10 дней у тех же животных ветспециалист берет кровь повторно. В хозяйстве рекомендуется провести микроскопию мочи не менее чем от 100 животных.

Бактериологическая диагностика состоит в обнаружении в исследуемом материале или в органах лабораторных животных, зараженных этим материалом, лептоспир путем микроскопии, а также в выделении и идентификации чистых культур.

Серологическая диагностика основана на обнаружении специфических антител в крови животных реакцией микроагглютинации (РМА) или реакцией макроагглютинации.

Диагноз на лептоспироз считается установленным и хозяйство признается неблагополучным по лептоспирозу, если при лабораторном исследовании материала обнаруживаются лептоспиры: при микроскопии; при выделении культур; выявлении возбудителя в гистологических срезах почек или печени; установлении нарастания титра антител при повторном исследовании в 5 раз и более или при обнаружении антител у ранее не реагировавших животных, если специфические антитела обнаружены в сыворотке крови при однократном исследовании по РМА в титре 1:100 и выше более чем у 25% обследованных животных или по РА 1-4креста более чем у 20% животных.

Дифференциальный диагноз. При установлении причины падежа животного специалистам необходимо учитывать, что животные –лептоспироносители, а также животные, имеющие в крови антитела к лептоспирозу, могут погибать от других инфекционных и незаразных болезней. При заболевании крупного и мелкого рогатого скота необходимо исключить гемоспоридиозные заболевания, злокачественную катаральную горячку, бруцеллез, кампилобактериоз (вибриоз), трихомоноз, листериоз, сальмонеллез, вирусные пневмоэнтериты, кормовые отравления. У свиней необходима исключить бруцеллез, сальмонеллез, чуму, рожу, дизентерию, микотоксикозы. У лошадей — инфекционную анемию, инфекционный энцефаломиелит. У собак и пушных зверей — чуму, инфекционный гепатит, сальмонеллез и вирусный энтерит.

Лечение. Заболевших лептоспирозом животных изолируют и подвергают лечению. Лечение может быть специфическим и симптоматическим. Из специфических средств хороший лечебный эффект оказывает поливалентная гипериммунная противолептоспирозная сыворотка, особенно если ее применить в самом начале болезни. Сыворотку вводят подкожно в разовых дозах: крупному рогатому скоту 50-120 мл; телятам 20-40 мл; свиньям, овцам, лисицам 5-30 мл. При тяжелом течении болезни введение сыворотки через 1-2 дня повторяют. Внутривенно сыворотка вводится в половинных дозах. Эффективно также применение антибиотиков: стрептомицин (по 10-12 тыс. ЕД на 1кг массы животного 2 раза в день 4-5дней подряд), дитетрациклин (свиньям по 30 тыс.ЕД на 1кг массы животного 2-3 раза с интервалом 2-3дня). Для симптоматического лечения используют глюкозу. При лептоспирозе в организме животных наблюдается гипогликемия. Использование глюкозы компенсирует недостачу сахара, пополняет энергетические ресурсы организма, 40% раствор глюкозы вводят внутривенно : крупному рогатому скоту и лошадям 500 мл; молодняку 50-200 мл; лисицам, песцам и собакам 5-10мл. Для устранения атонии желудочно-кишечного тракта используют слабительные (внутрь — глауберовую соль 25-500г). Для дезинфекции мочевых путей внутрь применяют уротропин с водой: крупным животным 5-10г, телятам 1-2г. Для поддержания сердечной деятельности подкожно инъекция кофеина: крупным животным 2-3г; мелкому рогатому скоту и свиньям 0,5-2г. При поражении ротовой полости ее промывают растворами марганцовокислого калия (1:1000). Некротические очаги кожи смазывают ихтиоловой мазью, борным вазелином и т.д. Больным животным создают наилучшие условия кормления и содержания. В рацион вводят рыбий жир, рыбную муку, микроэлементы, витамины. Телят и поросят облучают кварцевой лампой.

Больных животных необходимо предохранять от действия солнечных лучей, необходимо их чаще поить.

Иммунитет и иммунизация. Чрезвычайно широкое распространение лептоспир в природе дают частые возможности контакта всех видов животных с этими микроорганизмами. В то же время при вспышках лептоспироза в сельскохозяйственных предприятиях большинство животных не заболевает. Чаще болеют молодые животные, а это говорит о том, что естественная иммунизация животных против лептоспироза (иммунизирующая субинфекция) является бесспорным фактором.

В создании невосприимчивости к лептоспирозу в организме животного большую роль играют гуморальные и клеточные факторы. При попадании лептоспир в организм их обнаруживают в макрофагах различных органов, купферовских клетках печени; доказано, что фагоцитарная активность клеток крови (нейтрофилов) через несколько дней после заражения увеличивается в 4-6раз. То есть можно сказать, что в начальном периоде после заражения защитные функции выполняют клеточные факторы иммунитета, которые приобретают специфичность под влиянием появляющихся несколько позднее антител, агглютининов, лизинов, комплемент связывающих антител, преципитинов. Преципитины делают фагоцитоз не только завершенным, но и разрушают паразитов (лизис). Конечно, эффективность механизмов иммунитета зависит от состояния нервной системы организма, и в первую очередь от ее чувствительности, способной своевременно пускать в ход защитные механизмы.

Изучая иммуногенез, ученые заметили, что переболевшие лептоспирозом животные приобретают иммунитет к повторному заражению гомологичным серотипом, а кровь реконвалисцентов обладает лечебными и профилактическими свойствами. Эти факторы были учтены учеными при изыскании вакцин и сыворотки против лептоспироза.

Первая вакцина против лептоспироза в СССР была предложена С.Я. Любашенко в 1940г., а начиная с 1946 по 1958г., лептоспирозную вакцину готовили из трех серотипов (гриппотифоза, помона, иктерогеморрагия). В дальнейшем в соавторстве с А.Г. Малявиным для приготовления вакцины стали использовать еще два серотипа (каникола и тарасови).

Сейчас для активной иммунизации животных используют поливалентную депонированную вакцину ВГНКИ, выпускаемую в двух вариантах (различное сочетание серогрупп лептоспир).

Противолептоспирозные вакцины применяют как для профилактики, так и при проведении вынужденной вакцинации животным в возрасте от 1месяца и старше в неблагополучных, откормочных и угрожаемых по лептоспирозу хозяйствах, при выпасе животных в зоне природного очага болезни, при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует на лептоспироз по РМА или РА, и в районах с отгонным животноводством. Специалисты при проведении вакцинации должны учитывать то, что крупный рогатый скот, буйволов, коз, свиней и лошадей нельзя вакцинировать в последнею неделю беременности и в первую неделю после родов, а собак, лисиц и песцов — во вторую половину беременности. Иммунитет у привитых животных наступает через 14 дней и продолжается до года. Сыворотку крови от вакцинированных животных не исследуют на лептоспироз в течение 2-3 месяцев после вакцинации.

Для пассивной иммунизации применяют поливалентную сыворотку против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных. Владельцам животных необходимо помнить, что сыворотка, как и вакцина, не освобождает организм животных от лептоспироносительства; и не может профилактировать наступление абортов у зараженных животных.

Меры борьбы. Борьба с лептоспирозом проводится согласно ветеринарных правил ВП 13.3. 1310-96 утвержденных Начальником Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации — Главным государственным ветеринарным инспектором Российской Федерации В. М. Авиловым 18июня 1996г. и Санитарных правил СП 3.1. 091-96, утвержденных первым заместителем председателя Госкомсанэпиднадзора России — заместителя Главного государственного санитарного врача Российской Федерации. С.В. Семеновым 31 мая 1996г.

При установлении диагноза лептоспироз Постановлением Губернатора области выносится решение об объявлении хозяйства (отдельной его части), населенного пункта неблагополучным по лептоспирозу, вводятся ограничения и утверждается план оздоровления хозяйства.

В плане оздоровительных мероприятий предусматриваются необходимые диагностические исследования животных, ограничительные, ветеринарные, санитарные, организационно-хозяйственные мероприятия с указанием сроков проведения и ответственных лиц.

По условиям ограничений запрещается:

выводить (ввозить) животных для целей воспроизводства, продавать животных населению;
перегруппировывать животных без ведома ветеринарного специалиста, обслуживающего хозяйство;
допускать животных к воде открытых водоемов и использовать ее для поения и купания животных;
выпасать невакцинированных животных на пастбищах, где выпасались больные лептоспирозом животные, или на территории природного очага лептоспироза;
скармливать невакцинированным животным корма, в которых обнаружены инфицированные лептоспирами грызуны.

Молоко, полученное от больных лептоспирозом животных, нагревают до кипения и используют в корм. Молоко клинически здоровых коров, сыворотка крови которых дает положительную РМА без нарастания титра, используют без ограничений.

В неблагополучном по лептоспирозу хозяйстве (ферме, отделении, стаде, свинарнике, и т.д.) проводят клинический осмотр и измерение температуры тела у подозрительных по заболеванию животных.

Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют, лечат гипериммунной сывороткой и антибиотиками в дозах, указанных в наставлениях по их применению.

Клинически здоровых животных всех видов и возрастных групп, восприимчивых к лептоспирозу, вакцинируют. Животных, подвергнутых лечению, вакцинируют через 5-7дней после выздоровления.

Всех животных откормочных хозяйств, неблагополучных по лептоспирозу, и малоценных животных в племенных и пользовательных хозяйствах откармливают и сдают на убой.

Маточное поголовье, производителей и ремонтный молодняк, которые необходимо сохранить для воспроизводства, после вакцинации обрабатывают лептоспироцидными препаратами и переводят в продезинфицированное помещение.

Эффективность обработки проверяют через 10-15дней путем микроскопии мочи.

Молодняк, полученный после проведения мероприятий, выращивают отдельно, вакцинируют в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины против лептоспироза и, после снятия ограничений, реализуют на общих основаниях.

Вывод животных для откорма разрешается в пределах области (края, республики) через месяц после последнего случая выздоровления животного, проведения вакцинации и заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий.

У производителей (быки, хряки, жеребцы, бараны) инфицированных лептоспирами ( положительная реакция РМА, лептоспиры в моче), прекращают получать сперму и, исходя из хозяйственной целесообразности, направляют их на убой или обрабатывают стрептомицином и проводят дезинфекцию помещения. Все поголовье вакцинируют против лептоспироза. Через 10-15 дней эффективность лечения контролируют путем микроскопии мочи. При обнаружении лептоспир в моче повторяют курс лечения и проверку его эффективности. От быков, признанных здоровыми, продолжают брать сперму. Сперму, полученную от быков — лептоспироносителей, уничтожают.

Повторное исследование сыворотки крови в РМА и микроскопию мочи всех производителей на ранее неблагополучном по лептоспирозу предприятии (станции) проводят через 3 месяца и при получении отрицательных результатов далее каждые 6месяцев.

Производителей на предприятиях (станциях, пунктах) искусственного осеменения, расположенных в неблагополучной или угрожаемой по лептоспирозу зоне, вакцинируют против лептоспироза.

Ограничения в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах снимают в следующем порядке:

в откормочных хозяйствах-после сдачи поголовья на убой и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий;
в племенных и пользовательных хозяйствах — после установления их благополучия по лептоспирозу лабораторными методами исследований. Для этой цели через 1-2 месяца после проведения мероприятий исследуют в РМА не менее 50 проб сыворотки крови молодняка, предназначенного для продажи (не должно быть положительных реакций), и не менее 100 проб мочи от каждой 1000 взрослых животных или группы ремонта, среди которых не должно быть лептоспироносителей; РМА у взрослых животных может оставаться положительной;
повторные исследования на лептоспироз в ранее неблагополучных хозяйствах проводят через 6 месяцев после снятия ограничений;
хозяйство считается оздоровленным при получении отрицательных результатов исследований у всех обследованных животных.

В целях недопущения заболевания животных лептоспирозом собственники и владельцы скота, ветеринарные специалисты обязаны выполнять следующее:

осуществлять контроль за клиническим состоянием животных, учитывать количество абортов и при подозрении на лептоспироз отбирать патматериал для лабораторных исследований;
комплектование племенных хозяйств (ферм), предприятий, станций искусственного осеменения из благополучных по лептоспирозу хозяйств;
исследовать всех поступающих в хозяйство животных в период 30-дневного карантина на лептоспироз в РМА в разведении 1:25;
разрешается комплектовать откормочные хозяйства (отделения, фермы) клинически здоровыми животными без обследования на лептоспироз, но с обязательной вакцинацией их против лептоспироза в период карантинирования;
не допускать контакта животных со скотом неблаголучных по лептоспирозу хозяйств (ферм), населенных пунктов на пастбищах, в местах водопоя и т.д.;
не выпасать невакцинированных животных на территории природных очагов лептоспироза;
не устраивать летних лагерей для животных на берегах открытых водоемов;
систематически уничтожать грызунов в животноводческих помещениях, на территории ферм, местах хранения кормов и т.п.

4.1. Серологическая диагностика лептоспироза основана на обнаружении специфических антител в крови животных, реакцией микроагглютинации (РМА) или реакцией микроагглютинации (РА).

4.2. Сыворотку крови животных исследуют на лепто-спироз по РМА или РА для выяснения благополучия хозяйства по этому заболеванию и установления диагноза на лептоспироз у отдельных животных.

В последнем случае проводят 2-3-кратное исследование. Кровь берут для исследования на 5-7-й день болезни и повторно через 7-10 дней.

4.1. Порядок постановки и учета реакции микроагглютинации (РМА)

4.1.1. Для постановки реакции микроагглютинации необходимы:

- исследуемая сыворотка крови животных;

- антигены - культуры диагностических штаммов лептоспир;

- электролит - физиологический раствор;

- микроскоп, конденсор темного поля и осветитель те же, что для микроскопической диагностики;

- агглютинационные пластинки или пробирки Флоринского;

- градуированные пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл;

4.1.2. Исследуемая сыворотка. Для исследования пригодна сыворотка свежая, замороженная, высушенная на фильтровальной бумаге, консервированная фенолом или борной кислотой. Консервируют отстоявшуюся сыворотку, слитую в сухие стерильные пробирки.

Добавляют 5%-ный раствор фенола при постоянном помешивании 0,05 мл (1 капля) на каждый миллилитр сыворотки.

Борную кислоту вносят в сыворотку до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка кристаллов. Кристаллы кислоты не должны попадать в пипетку во время постановки реакции.

Высушивают сыворотку на квадратах (5X5 см)' белой фильтровальной бумаги по 3-5 капель (0,05 мл каждая) при комнатной температуре или в термостате при температуре 37 °С. Консервированные пробы сыворотки пригодны для исследования в течение месяца. Гемолизированные, загнившие, плесневелые и проросшие сыворотки не исследуют.

4.1.3. Антигены. В качестве антигенов в РМА используют живые культуры лептоспир различных серологических групп. Республиканские лаборатории ставят реакцию с лептоспирами 13 серологических групп: Icterohaemorrhagiae, Javanica, Canicola, Pyrogenes, Cynoptery, Autumnalis, Pomona, Grippotyphosa, Hebdomadis, Tarassovi, Bataviae, Australis, Ballum.

Краевые, областные, межрайонные лаборатории исследуют сыворотку домашних животных с антигенами 6 серогрупп: Grippotyphosa, Pomona, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi, Hebdomadis, Canicola.

Сыворотку крови диких животных исследуют с лептоспирами 13-15 серогрупп.

В РМА используют эталонные штаммы лептоспир или их аналоги, рекомендованные Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов МСХ СССР.

Диагностические штаммы лептоспир лаборатории получают во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов МСХ СССР, и поддерживают их периодическими пересевами через каждые 10 -15 дней.

Пригодность культуры для использования в реакции оценивают путем просмотра пробирок в проходящем свете и микроскопией.

При достаточном накоплении лептоспир после встряхивания пробирки с культурой в проходящем свете в среде хорошо заметны муаровые волны, а в спокойном состоянии легкая опалесценция. Наличие осадка, пленки, помутнения среды свидетельствует о прорастании культуры посторонней микрофлорой, полная прозрачность среды - об отсутствии лептоспир.

В реакции используют чистые культуры лептоспир в возрасте 5-15 дней без признаков агглютинации и лизиса (четкообразные, неподвижные клетки) с накоплением 70-100 микробных клеток в поле зрения микроскопа при увеличении 20X10X1,5 или 40X7-10. Культуры, содержащие 150-200 и более лептоспир в поле зрения микроскопа, разводят перед постановкой реакции питательной средой или физиологическим раствором до указанной концентрации.

Каждое разведение сыворотки разливают в отдельный ряд, состоящий из 5-13 лунок (пробирок) в зависимости от количества антигенов, используемых в реакции. Каждую культуру-антиген вносят по 0,1 мл в три лунки с разными разведениями сыворотки. После добавления антигенов пластины встряхивают и выдерживают в термостате при температуре 30 °С в течение часа.

Контролем служит смесь культуры лептоспир с физиологическим раствором по 0,1 мл. Лептоспиры в контроле должны оставаться подвижными, не иметь признаков лизиса и агглютинации.

4.1.8. Реакцию учитывают путем микроскопии капель из каждой лунки в темном поле микроскопа при увеличении 20X10 или 20X7X1,5. Капли из лунок выносят на предметное стекло бактериологической петлей от большего разведения к меньшему и просматривают их без покровного стекла. Капли можно наносить двумя способами: 1) бактериологической петлей диаметром 3 мм наносят на стекло сразу до 30 капель и затем просматривают их под микроскопом; 2) бактериологической петлей диаметром 1 мм наносят на предметное стекло в освещенный центр поля зрения одну каплю и просматривают ее, передвигают столик на 2-3 мм и рядом с первой наносят и учитывают вторую каплю. В этом случае на одном предметном стекле учитывают 60-80 капель.

После каждого антигена петлю прокаливают и охлаждают.

4.1.9. Результаты реакции оценивают в крестах по четырехбалльной системе:

+ + + +агглютинированы 100% лептоспир;

+ + + - агглютинированы 75% лептоспир;

+ + - - агглютинированы 50% лептоспир;

+ - - - агглютинированы 25% лептоспир;

- (знак минус) агглютинация отсутствует. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании паучков. Паучок включает от 3-5 до нескольких десятков и даже сотен лептоспир. Свободные концы лептоспир сохраняют подвижность.

В начальных разведениях сыворотки может наблюдаться лизис лептоопир, проявляющийся в набухании и обездвиживании, появлении зернистости и полного распада микробных клеток.

4.1.10. Положительной считают реакцию, оцененную не менее чем на два креста, при отсутствии агглютинации в 'контроле.

При повторном исследовании сыворотки крови реакцию ставят в тех же разведениях.

4.2. Порядок постановки и учета реакции макроагглютинации (РА)

Реакцию макроагглютинации ставят и учитывают в соответствии с Временным наставлением по применению антигенов для диагностики лептоспироза у животных реакцией макроагглютинации, утвержденным Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 12 мая 1974 года.

4.3. Оценка показаний РМА и РА

4.3.1. Животных с титром сыворотки в РМА 1: 100 или реагирующих по РА на 1-2 креста, кроме лошадей и крупного рогатого скота, реагирующих с лептоспирами группы Hebdomadis, считают подозреваемыми в заражении.

Крупный рогатый скот, реагирующий с лептоспирами группы Hebdomadis, и лошадей, реагирующих с лептоспирами любой серологической группы, считают подозреваемыми в заражении при титре антител в РМА 1: 500 или реагирующих в РА на 1-2 креста с неразведенной сывороткой.

Кровь от животных, подозреваемых в заражении, и от животных, не реагировавших при первом исследовании, повторно проверяют через 7-10 дней.

4.3.2. Выявление антител у животных, не реагировавших при первом исследовании, или нарастание титра у реагировавших в РМА в пять и более раз, или положительная РА на 3-4 креста свидетельствуют об активном инфекционном процессе у обследуемых животных.

4.3.3. Животных (кроме лошадей и реагирующего с лептоспирами группы Hebdomadis крупного рогатого скота) с титром сыворотки в РМА 1: 500 и более или в РА на 3-4 креста и крупный рогатый скот, реагирующий с лептоспирами группы Hebdomadis и лошадей, реагирующих с лептоспирами любой серогруппы при титре в РМА 1:2500 и более или в РА на 3-4 креста, рассматривают как возможных лептоспироносителей.

4.3.4. Возбудителями лептоспироза при серологической диагностике считают лептоспир той серологической группы, к которой обнаружены антитела в наиболее высоком титре.

Необходимо учитывать, что в сыворотке крови свиней, крупного рогатого и мелкого рогатого скота и лошадей при исследовании по РМА обнаруживают в 5 - 15% случаев (из числа положительно реагирующих) антитела в наиболее высоком титре к лептоспирам Australis, Autumnalis, Ballum, Pyrogenes, Cynoptery, Bataviae, которые не были выделены ни в одном случае от сельскохозяйственных животных.

Такие реакции следует рассматривать как межгрупповые, являющиеся следствием заражения животных лептоспирами Pomona, Tarassovi и другими, обычно выделяемыми от сельскохозяйственных животных.

Лептоспиры Australis, Bataviae, Autumnalis, Ballum, Pyrogenes, Cynoptery, Kazachstanica могут быть признаны возбудителями лептоспироза у сельскохозяйственных животных только после выделения этих лептоспир в чистой культуре или подтверждении их роли реакцией иммуноабсорбции.

4.4. Методика постановки реакции иммуноабсорбции при исследовании проб сыворотки

4.4.1. В реакции иммуноабсорбции изучают пробы сыворотки животных, агглютинирующие лептоспиры нескольких серологических групп в равно высоких титрах или имеющие наиболее высокий титр - по отношению к лептоспирам, ранее не известным в качестве возбудителя лептоспироза у сельскохозяйственных животных.

4.4.2. Для проведения абсорбции выращивают в 0,2 - 0,5 - литровых флаконах все штаммы лептоспир, с которыми данная проба сыворотки дала реакцию агглютинации. К 5-7-суточным культурам добавляют 0,3% формалина и выдерживают 10-12 часов. Затем лептоспиры осаждают центрифугированием при 10 000 об/мин в течение 30 минут. Сливают надосадочную жидкость, а осадок суспензируют в объеме 0,9 мл среды или физиологического раствора, 0,1 мл исследуемой сыворотки смешивают с 0,9 мл концентрированного антигена и выдерживают в течение 48 часов при температуре 1-5 °С. Абсорбированную сыворотку проверяют в РМА на наличие остаточных антител к штамму-абсорбенту, а затем исследуют с лептоспирами групп, с которыми реагировала сыворотка до абсорбции.

4.4.3. В процессе абсорбции лептоспиры, являющиеся возбудителем инфекции у данной особи, извлекают из сыворотки антитела к лептоспирам всех других серологических групп, в то время как антитела к штамму-возбудителю болезни не абсорбируются из сыворотки гетерологичными типами лептоспир.

Для сокращения объема работы сыворотку можно в начале абсорбировать лептоспирами, являющимися наиболее частыми возбудителями болезни у животных данного вида.

4.4.4. Оценка эпизоотической ситуации в хозяйстве по результатам лабораторных исследований приведена в Инструкции о мероприятиях по борьбе с лептоспирозом животных пп. 2.4., 2.5. и 2.6.

icterohaemorrhagiae copenhageni mankarso naa'm mwogolo dakota sarmin birkini smithi ndambari ndahambukuje budapest weaveri

RGA M-20 Mankarso Naam Mwogolo Grand River Sarmin Birkin Smith Ndambari Ndahambukuje PV-1 GZ-390-U

javanica poi sorex-jalna coxi sofia

Veldrat Batavia 46 Poi Sorex Jalna Cox Sofia 874

canicola bafani kamituga jonsis sumneri broomi bindjei schnueffneri benjamin malaya

Hond Utrecht IV Bafani Kamituga Jones Sumner Patane Bindjei Vleermuise 90-C Benjamin H-6

ballum castellonis arboreae

MUS-127 Castellon-3 Arboreae

pyrogenes Zanoni myocastoris abramis biggis hamptoni alexi robinsoni rnanilae

Salinem Zanoni LSU-1551 Abraham Biggs Hampton HS-616 Robinson LT-398

cynopteri canalzoniae butembo

3522-C Cz-188k Butembo

autumnalis rachmati fortbragg sumatrana bulgarica bangkinang erinaceiauriti mooris sentot louisiana Orleans djasiman gurungi

Akiyama A Rachmat Fort Bragg Sapulette Nikolaevo Bangkinang-1 Erinaceus auritus 670 Moores Sentot LSU-1945 LSU-2580 Djasiman Gurung

australis lora muenchen jalna bratislava fugis bangkok peruviana pina nicaragua

Ballico Lora Munchen C-90 Jalna Jez Bratislava Fudge Bangkok D-92 Lt-941 LT-932 Lt-990

pomona kennewieni monjakov mozdok tropika proechimys

Pomona Lt-1026 Monjakov 5621 CZ-299U LT-796

hebdomadis nona kambale kremastos worsfoldi jules maru borincana kabura mini

Nebdomadis Nona Kambale Kremastos Worsfold Jules CZ-285- В HS-622 Kabura Sari

szwajizak georgia perameles wolffi

hardjo recreo medanensis trinidad seiroe balcanica polonica nero haemolytica ricardi

Szwajizak LT-117 Bandicoot-343 3705 Hardjoprajitno LT-957 Hond-HC LT-1098 M-84 1627 Burgas 493-Poland Qamsulin March Richardson

paidjan djatzi kobbe balboa claytoni brasiliensis

Van Tienen Paidjan HS-26 CZ-320-K LT-761 LT-818 LT-996

tarassovi bakeri atlantae guidae kisuba bravo atchafalaya chagres rama gatuni

Perepelicin LT-79 LT-81 RP-29 Kisuba Bravo LSU-1013 LT-924 LT-955 LT-839

Читайте также: