Как правильно брать мазок на коклюш

Коклюш, паракоклюш, бронхисептикоз.

Коклюш - заболевание, продолжающееся минимум две недели, без явлений интоксикации и повышения температуры тела, протекающее с приступообразным кашлем, усиливающимся ночью и по утрам, сопровождающимся покраснением лица, шумными вдохами (репризами), заканчивающимся отхождением вязкой слизи или рвотой в конце приступа кашля.

Осложнения коклюша:

Специфические: эмфизема легких, эмфизема средостения и подкожной клетчатки, ателектазы, коклюшная пневмония, нарушения ритма дыхания (задержки дыхания - до 30 с; остановки - апноэ - более 30 с), нарушение мозгового кровообращения, кровотечения (из носа, заднеглоточного пространства, бронхов, наружного слухового прохода), кровоизлияния (в кожу и слизистые оболочки, склеру и сетчатку глаз, головной и спинной мозг), грыжи (пупочная, паховая), выпадение слизистой оболочки прямой кишки, разрывы барабанной перепонки и диафрагмы.

Неспецифические осложнения обусловлены наслоением вторичной бактериальной флоры (пневмония, бронхит, ангина, лимфаденит, отит и др.). Резидуальные явления: хронические бронхолегочные заболевания (хронический бронхит, бронхоэктатическая болезнь); задержка психомоторного развития, неврозы, судорожный синдром, различные речевые расстройства; энурез; редко - слепота, глухота, парезы, параличи.

Лабораторная диагностика

Лабораторные исследования проводят с диагностической целью и по эпидемическим показаниям:

1) с диагностической целью:

- детям, кашляющим в течение 7 дней и более, независимо от указаний на контакт с больным коклюшем;

- детям с подозрением на коклюш и коклюшеподобные заболевания по клиническим данным; - взрослым с подозрением на коклюш и коклюшеподобные заболевания, работающим в родильных домах, детских больницах, санаториях, детских образовательных учреждениях и школах, в т.ч. закрытого типа;

2) по эпидемическим показаниям (лицам, бывшим в контакте с больным):

- детям, посещающим детские образовательные учреждения, находящимся в детских больницах, санаториях, в которых были выявлены больные коклюшем/паракоклюшем, а также всем детям до 14 лет, общавшимся с больным коклюшем/паракоклюшем в домашних условиях;

- взрослым, работающим в указанных выше детских учреждениях, при выявлении в них больных коклюшем/паракоклюшем, а также при общении с больным коклюшем/паракоклюшем в домашних условиях.

Диагноз "коклюш, вызванный B. pertussis" ставится при подтверждении клинического диагноза "коклюш" хотя бы одним из указанных методов:

- выделение культуры B. pertussis; - обнаружение специфического фрагмента генома B. pertussis методом ПЦР; - у привитых детей и взрослых: выраженная сероконверсия, т.е. увеличение или уменьшение в 4 и более раз уровня специфических IgG и/или IgA (ИФА) или уровня агглютинирующих антител (РА) при исследовании парных сывороток, взятых с интервалом не менее 2 недель;

- у взрослых: допустимо однократное обнаружение специфических IgM (ИФА); - у непривитых детей: однократное обнаружение специфических IgM, и/или IgA, и/или IgG (ИФА) или антител в титре 1/80 и более (РА).

Диагноз "коклюш, вызванный B. parapertussis" ставится в случае: - выделения культуры B. parapertussis; - или при обнаружении фрагмента генома B. parapertussis методом ПЦР;

- или при обнаружении антител к B. parapertussis методом РА в титре не менее 1/80.

Диагноз "бронхисептикоз" ставится при выделении культуры B. bronchiseptica или при обнаружении специфического фрагмента генома B. bronchiseptica методом ПЦР.

Обследование методом ПЦР нередко оказывается эффективнее бактериологического метода в более поздние сроки заболевания и на фоне лечения антибиотиками.

Материал для исследования:

1.мазки со слизистой нижнего носового хода и задней стенки ротоглотки

2. культуры микроорганизмов.

Взятие мазков со слизистой нижнего носового хода

Мазки берут сухим стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на пластиковом аппликаторе. Если полость носа заполнена слизью, перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание. Зонд вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с тампоном) помещают до места слома в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков. Конец зонда отламывают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают и маркируют.

Взятие мазков из ротоглотки

Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами с вискозными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки.

После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с вискозным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков. Конец зонда отламывают, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают, маркируют.

Хранение

Допускается хранение клинического материала до проведения исследования в течение 3 суток при температуре от 2 до 8 °С или 1 неделю – при температуре не выше минус 16 °С.

Многие считают, что коклюш — детская инфекция, редко встречающаяся и легко протекающая. В действительности и коклюш, и паракоклюш становятся все более серьезной проблемой в мире из-за тяжелого течения и наличия атипичных, или стертых, форм. В этой статье мы расскажем, как вовремя распознать это непростое заболевание.

Коклюш — острое инфекционное заболевание, поражающее преимущественно детский организм и сопровождающееся спазматическим кашлем. Инфекция передается воздушно-капельным путем: при кашле, чихании и даже во время разговора.

Коклюш вызывает бактерия Bordetella pertussis, которая попадает в дыхательные пути и прикрепляется к клеткам эпителия. В результате микроскопические реснички, помогающие выводить мокроту и очищать бронхи, повреждаются. Бактерия начинает размножаться и выделять несколько видов токсинов, которые и приводят к появлению симптомов.

Первый симптом коклюша — ночной кашель. Постепенно он усиливается и появляется днем. Так может продолжаться до двух недель. Со временем состояние ухудшается, кашель становится спастическим, или спазматическим. Во время приступа человек с трудом может вдохнуть, напрягается, лицо становится красным или даже синеватым, появляется ощущение нехватки воздуха. Приступ такого мучительного кашля иногда заканчивается рвотой или выделением очень густой стекловидной мокроты.

Проблема своевременной диагностики заключается в том, что патология начинается с незначительных симптомов. Сухое покашливание ночью или перед сном напоминает кашель при ОРВИ. Температура тела больного может как незначительно повыситься на несколько дней, так и остаться нормальной. Общее самочувствие инфицированного почти не страдает. И только когда появляются более серьезные симптомы, врачи начинают задумываться о полноценной лабораторной диагностике коклюша.

Еще в начале прошлого столетия коклюш считался одной из самых опасных инфекций, он ежегодно становился причиной смерти тысяч детей. Но даже на современном уровне развития медицины коклюш может протекать очень тяжело.

Исследования, проведенные в 2000-е годы, указывают на значительное увеличение за последнее десятилетие доли тяжелых и среднетяжелых случаев коклюша. Если в 1990-х годах регистрировалось только 18,6% тяжелых форм болезни, то в 2000-е — уже 43,2%.

Токсины, которые выделяет возбудитель коклюша, поражают дыхательный центр в головном мозге. Из-за этого возникает нарушение дыхания, в крови становится меньше кислорода, увеличивается содержание углекислого газа. Возникает гипоксия — кислородное голодание. Поражаются сосуды, развивается повреждение головного мозга (энцефалопатия). В крови увеличивается количество лимфоцитов и лейкоцитов.

К осложнениям коклюшной инфекции относят ателектаз легкого (сближение и сжатие стенок легкого, сопровождающееся выходом воздуха с данного участка), кровоизлияния на коже и в конъюнктиву глаза, поражение сосудов, энцефалопатию, легочное сердце. Из-за снижения иммунитета часто присоединяется вторичная инфекция, развивается бронхит или пневмония.

Паракоклюш — острое инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Bordetella parapertussis. Она очень похожа по своему строению на возбудитель коклюша и поэтому вызывает практически такие же симптомы.

Раньше считалось, что паракоклюш — более легкое заболевание. Но последние исследования доказали, что он тоже может привести к тяжелому судорожному кашлю, рвоте и нарушению дыхания. Единственное клиническое отличие этого заболевания от коклюша — отсутствие повышения уровня лейкоцитов в крови.

Особо тяжелые последствия наблюдаются при заражении взрослых и подростков. По данным серологических исследований, проведенных в США, 12–21% взрослых с кашлем более 2 недель могут болеть коклюшем. В России ситуация примерно такая же. Согласно исследованиям ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, проведенным в очагах коклюша, после контакта с зараженным заболело 23,7% взрослых.

Существуют бактериологические, серологические и ПЦР-методы диагностики коклюша и паракоклюша. Биологический метод (посев материала из носоглотки и культивирование его на питательной среде) информативен на раннем этапе. В первые дни болезни он дает достоверный результат в 86–98% случаев. Но со временем показатели точности снижаются до 15–20%. Особенно если ребенок начинает принимать антибиотики.

Каждый из анализов на коклюш имеет свои особенности, показания, принципы интерпретации результатов. Давайте разберем их все.

Этот анализ проводят в катаральном периоде заболевания, то есть в первые дни появления кашля. Исследование назначают после контакта с больным коклюшем, особенно если у ребенка нет прививок или нет данных об их проведении.

Чувствительность теста колеблется в зависимости от качества и сроков исследования от 20 до 90%. При этом анализ выявляет и коклюш, и паракоклюш. В более поздний период заболевания и при приеме антибиотиков его результативность сильно снижается. Исследование проводится натощак, через 2–3 часа после питья или еды. Материал забирают в среднем на 5–7 день заболевания двукратно: два дня подряд или через день. Мазок берется с поверхности ротоглотки.

Биоматериал помещают в специальную емкость и направляют в лабораторию. Там проводится посев материала на питательную среду. Через несколько дней проводится микроскопическое исследование выросших колоний бактерий. Предварительный результат обычно можно получить на 3–5 день, окончательный — на 5–7 день.

Наличие Bordetella в организме говорит или о заболевании коклюшем (паракоклюшем), или о бессимптомном носительстве. Лечение необходимо в любом из этих случаев.

Исследование проводят при подозрении на инфекционное заболевание, при кашле, повышении температуры и практически при любых заболеваниях. Анализ может дать информацию о наличии воспаления в организме, но что послужило причиной, на его основании сказать нельзя.

Кровь забирают натощак и отвозят в лабораторию. Само исследование проводится или на специальном гемоанализаторе, или с помощью ручного подсчета клеток крови.

Результаты анализа крови при коклюше у детей нельзя анализировать без учета клинической картины и данных других методов исследования. При заражении коклюшной инфекцией значительно повышается количество лейкоцитов и лимфоцитов, при этом скорость оседания эритроцитов (СОЭ) остается в пределах нормы. При паракоклюше повышения лейкоцитов не наблюдается.

При проведении анализа на антитела к коклюшу выявляют три вида иммуноглобулинов — IgA, IgG и IgM.

ИФА назначают при подозрении на коклюш, часто на поздних стадиях болезни, когда бактериологическое исследование уже неэффективно. То есть начиная со 2-3 недели заболевания. Диагностическая чувствительность этого метода — 66,6%, специфичность — 100%.

Забор крови проводится натощак, не раньше чем через 4 часа после последнего приема пищи. После этого из крови выделяют сыворотку, которая и является материалом для исследования. Собранный материал отправляется в лабораторию, где проводится серологический анализ на коклюш методом ИФА.

Исследование можно проводить в течение первых 4-х недель заболевания. Чувствительность этого теста превосходит бактериологическое исследование во много раз. Специфичность метода —100%.

Мазок берется из носа или из ротоглотки. Забор материала желательно проводить натощак или через 2-3 часа после питья и еды. Предварительно полоскать рот не нужно.

В лаборатории в забранном материале определяются специфические участки ДНК бактерии, которая вызывает коклюш. Положительный результат говорит о заболевании коклюшем или о бактерионосительстве.

Не стоит самостоятельно выбирать тип анализа на коклюш, необходимо проконсультироваться со специалистом. И помните, на результат исследования влияет качество подготовки и проведения: техника взятия материала, условия транспортировки, состояние питательных сред.

В среднем определение каждого типа иммуноглобулинов обойдется в 700–850 рублей. Бактериологический анализ на коклюш будет стоить уже дороже — от 850 до 1400 рублей. Ценовая разница при ПЦР-тестировании составляет от 300 до 800 рублей.

При этом стоит учесть расходы на взятие анализа крови (100–150 рублей) или мазка (200–250 рублей). Дополнительно клинический анализ крови с определением СОЭ будет стоить примерно 400–460 рублей.

Заразные болезни с воздушно-капельным механизмом передачи широко распространены среди людей различных возрастов. Особое место занимают так называемые детские инфекции. Среди них есть и такие, которые создают серьезные риски для ребенка, например, коклюш. И крайне важно вовремя выявить патологию, в чем сильно помогают лабораторные методы исследования. Анализ на коклюш и паракоклюш становится определяющим в постановке правильного диагноза.

Общие сведения

Еще до недавнего времени коклюш считался очень опасной инфекцией. Но даже на современном уровне развития медицины он может протекать довольно тяжело. Болеют в основном дети, заражаясь от сверстников. Возбудитель инфекции – бактерия Bordetella pertussis, целью которой является поражение дыхательных путей. Основным симптомом коклюша считается сильный приступообразный кашель, принимающий характер спазматического. Он беспокоит чаще всего вечером и ночью, а при прогрессировании болезни – и днем. Во время кашля ребенку трудно вдохнуть, его лицо краснеет и даже синеет, отекает, расширяются сосуды конъюнктивы. Приступ обычно заканчивается отхождением стекловидной мокроты или рвотой.

Коварство инфекции заключается в том, что она начинается как обычная простуда. Незначительное покашливание зачастую даже не сопровождается повышением температуры, общее состояние детей не страдает. Но затем приступы становятся все тяжелее. Усугубляют ситуацию токсины, выделяемые бактерией в кровь. Они могут привести к поражению головного мозга (гипоксическая энцефалопатия). Осложнениями коклюша также становятся: легочное сердце и ателектаз, конъюнктивальные кровоизлияния, инсульт. Из-за сниженного иммунитета может присоединиться вторичная инфекция (пневмония).

Паракоклюш вызывается другой, но очень схожей бактерией (Bordetella parapertussis). Поэтому она вызывает практически те же симптомы. Болезнь протекает в более легкой форме, но также характеризуется приступами сухого кашля, иногда рвотой и затруднением дыхания. Поэтому у детей параллельно выполняют анализ и на паракоклюш.

Показания

Причиной для назначения лабораторных анализов является не только подозрение на коклюш или паракоклюш. Исследование также показано детям с приступообразным кашлем, болеющим на протяжении 7 дней, тем, у кого наблюдаются эпизоды апноэ (остановки дыхания) или одышки, при сохранении симптомов более двух недель. Взятие биоматериала производится и по эпидемическим показаниям у пациентов, контактировавших с больным ребенком.

Проведение

При подозрении на коклюш или паракоклюш диагноз не может быть поставлен лишь на основании клинических данных. Поэтому выполняют различные лабораторные исследования. К наиболее распространенным относятся:

• Общий анализ крови.
• Мазок из носоглотки (микроскопия, посев).
• Серологический анализ.
• Молекулярно-генетический метод.

Каждое исследование имеет определенные особенности, требующие отдельного рассмотрения. Какой анализ нужно сдавать пациенту, скажет врач. Специалист проведет клиническое обследование и делает предварительное заключение, на основании которого проводится дальнейшая диагностика. Он выдает направление на лабораторные тесты.

Целесообразность анализов и их объем определяется врачом. Диагностику необходимо пройти в кратчайшие сроки, поскольку от ее результатов всецело зависит лечение.

Для проведения общего анализа пациент приходит в лабораторию натощак. Другой подготовки не требуется. Кровь берется из пальца в тонкую стеклянную трубочку-капилляр. Затем медработник подсчитывает количество форменных элементов, гемоглобина, определяет СОЭ и цветной показатель. Срок выполнения составляет 1 сутки. Безусловно, это неспецифический анализ, который проводят при многих заболеваниях.

Важным анализом на коклюш у детей является мазок из носоглотки. Он позволяет оценить клеточный состав слизи и выявить в ней патогенные микробы. Перед взятием биоматериала не рекомендуют:

• Полоскать горло, чистить зубы.
• Принимать антибиотики, закапывать нос.
• Сильно высмаркиваться.
• За 2–3 часа принимать пищу и пить воду.

Исследование проводится на ранних сроках болезни (не позже 3 недель с момента начала), в противном случае результаты могут быть ложноотрицательными. Мазок берется стерильным тупфером – ватным тампоном на длинной палочке – отдельно из носа и горла. Ребенку следует широко приоткрыть рот и немного запрокинуть голову назад. Одним тупфером проводят по задней стенке глотки и миндалинам, а другой вводят в носовые ходы. Тампоны помещаются в пробирки со специальной транспортировочной средой, которая будет поддерживать жизнедеятельность бактерий.

Для цитологии материал наносится на предметное стекло, фиксируется и окрашивается по Грамму. Затем картина описывается под микроскопом. А вот бакпосев – это более длительный анализ. Возбудителю коклюша нужна специфическая питательная среда (кровяной агар). На нее засевается слизь из носоглотки, а затем все инкубируется в термостате. Появившиеся колонии микробов оценивают морфологически и функционально (ферментативная активность, скорость роста).

Серологическая диагностика коклюша основана на определении антител к возбудителю. Анализ крови на коклюш включает идентификацию в плазме различных классов иммуноглобулинов (A, M, G). Каждый из них показывает, насколько сильно идет защитная реакция со стороны организма. Антитела класса А являются секреторными, они обеспечивают местную защиту слизистых оболочек. Иммуноглобулин M начинает вырабатываться уже спустя 10–14 дней от момента инфицирования. А вот антитела класса G продуцируются значительно позже (через 3–4 недели). Кровь для анализа берется у ребенка из вены натощак.

Детекция антител производится методом иммуноферментного анализа (ИФА). В его основе лежит специфическая реакция между антигеном и антителом. Сыворотку, полученную от пациента, по капле помещают в ячейки иммунологического планшета, в которых уже есть стандартные антигены к Bordetella pertussis.

Серологический метод является очень распространенным исследованием, позволяющим определить антитела к инфекционным болезням.

Метод полимеразной цепной реакции – еще один анализ, проводимый при коклюше. Он основывается на определении генетического материала (ДНК) бактерии-возбудителя. Для этого анализа берется соскоб из ротоглотки: стерильным тупфером проводят по слизистой оболочке. В лаборатории к биоматериалу добавляются специальные вещества (праймеры, ферменты), которые позволяют многократно копировать фрагменты нуклеиновых кислот. Все это происходит в приборе под названием амплификатор. Он же оборудован и детектором для идентификации генетических цепей микроорганизмов. ПЦР диагностика коклюша – наиболее сложный, но в то же время и самый чувствительный метод, многократно повышающий достоверность анализов.

Результаты

После того как кровь на коклюш или мазки слизи сданы, придется подождать результатов. Время, необходимое для проведения каждого исследования, отличается. Например, если для общего анализа крови и микроскопии требуются всего сутки, то для других тестов нужно больше времени. При этом следует учитывать, что день, в который сдаются пробы, обычно не учитывается. Но в экстренных случаях все производится, конечно, быстрее.

Каждый анализ может показать, что в организме присутствует возбудитель коклюша и паракоклюша. Только одни более специфичны, а другие – менее. Результаты выдаются лабораторией на специальном бланке, где указаны фактические значения и референсные. Поэтому, сравнив их, можно сделать предположение о происхождении изменений в организме. Но следует учитывать, что расшифровка результатов производится только врачом.

Наименьшей специфичностью обладает клинический анализ крови при коклюше у детей. В нем отмечается уменьшение числа лейкоцитов (лейкопения), относительное повышение лимфоцитов. СОЭ не реагирует или немного падает. Такая картина характерна для катаральной стадии заболевания. Следует учитывать, что степень изменений пропорциональна тяжести состояния. У пациентов со стертыми формами болезни, привитых или в период выздоровления все может быть в пределах нормы.

Микроскопически Bordetella pertussis выглядит как грамотрицательная (розовая) палочка. Но чтобы сказать точно, нужно посмотреть на результаты посева. На питательной среде она растет в форме мелких круглых колоний с блестящей поверхностью, образуя зону гемолиза. Ферментативной активностью не обладает. Выявление роста говорит о позитивном анализе и подтверждает коклюш. Дополнительно оценивается чувствительность бактерии к наиболее распространенным антибиотикам.

Получение чистой культуры коклюшных палочек свидетельствует о болезни ребенка и требует соответствующего реагирования со стороны врача.

Поэтому, когда в анализе IgM превышают 0,8, а IgG уже 40, то результат положителен, а инфекция однозначно есть. В более общем виде диагностическими критериями коклюша при ИФА будут:

• У взрослых и привитых детей: увеличение в 4 и более раз IgG и IgA.
• У детей, не привитых от болезни: даже однократное обнаружение любых антител.

Следует понимать, что при выявлении иммуноглобулинов М коклюш находится в острой фазе (активная инфекции), но это же свидетельствует и о недавней вакцинации. Антитела класса G указывают на продолжительность текущей болезни, перенесенную в прошлом патологию или сформированную защиту после активной иммунизации. А секреторные IgA говорят о том, что ребенок на момент проведения анализа болен коклюшем. В сомнительных случаях необходимо сделать повторное исследование. Если он окажется отрицательным, то и повода для переживаний не будет.

Результат ПЦР-диагностики является наиболее чувствительным и специфичным. Он может быть либо положительным, либо отрицательным. В первом случае выявлен генетический материал Bordetella pertussis (parapertussis), что однозначно свидетельствует о заболевании. Но и во втором случае исключать такую вероятность нельзя, ведь в исследуемом биоматериале просто могло не оказаться бактерий или их ДНК было меньше, чем положено для выполнения анализа. Поэтому большую роль играет правильное взятие слизи.

Выбор лаборатории

Многих интересует вопрос, где сдать анализ на коклюш. Но выбор лаборатории может оказаться довольно непростым занятием. Как видим, каждое исследование имеет массу нюансов и для получения достоверного результата важно соблюдение различных условий: техники и времени взятия материала, правил его хранения и транспортировки, подготовки к анализу. В крупных и сетевых лабораториях (например, в Инвитро) эти процессы четко отлажены и контролируются. Поэтому следует внимательно отнестись к указанному вопросу, ведь от него может зависеть точность диагноза.

Несмотря на повсеместную вакцинацию, случаи коклюша не являются редкостью. Но выявить и подтвердить заболевание можно лишь лабораторными методами, которые прямо или косвенно укажут на присутствие возбудителя в организме ребенка. К проведению анализов следует отнестись со всей серьезностью, ведь их результаты однозначно повлияют на дальнейшее лечение.

Для диагностики коклюша в современное время доступно большое количество тестов и анализов, но как правильно выбрать необходимый и самый точный из них?

Итак, многие специалисты по всему миру рекомендуют:

Если кашель у подростков и взрослых длится менее двух недель, а у детей менее трёх недель то, целесообразно воспользоваться микробиологическими методами (посев) или методами амплификационной диагностики (полимеразно-цепная реакция, ПЦР) [1,2].

Если кашель у детей и взрослых длится более двух недель и в течение текущего года не проводилась вакцинация против коклюша то, целесообразно воспользоваться серологическими методами диагностики (например, иммуноферментным анализом, ИФА) [1,2].

Теперь немного подробнее о важных особенностях каждого метода.

1. Полимеразно-цепная реакция (ПЦР).

Необходимый материал для анализа — назофарингеальный мазок, но предпочтительнее использовать образец слизи из носоглотки [3].

ПЦР необходимо проводить в течение первых двух-трех недель от начала кашля, так как спустя четыре недели от начала заболевания количество бактерий B.pertussis в носоглоточном секрете стремительно снижается, также количество бактерий снижается, если проводилась антибактериальная терапия (более 5 дней [4]).

У младенцев и ранее не привитых детей ПЦР допустимо выполнять в течение первых четырёх недель от начала кашля [4,5].

Для большей точности ПЦР всегда рекомендуется проводить параллельно с посевом [1], следовательно, при заборе материала следует брать два образца одномоментно — один для ПЦР, другой для посева. Зачем? ПЦР может давать ложноположительные результаты, так как определяет только наличие или отсутствие ДНК возбудителя, а не наличие живых форм [6].

При заборе ПЦР рекомендуется пользоваться палочками из нейлона, рэйона и полиэстера. При использовании хлопковой ваты возбудитель гибнет [7].

При подозреваемом коклюше важно проводить дифференциальную диагностику с аденовирусной, бокавирусной инфекциями, гриппом, парагриппом, M.pneumoniae, Chlamydia trachomatis и Chlamydia pneumoniae [8].

ПЦР не рекомендуется проводить лицам, контактировавшим с больным коклюшем при отсутствии каких-либо симптомов [7].

2. Посев.

Посев на питательную среду — золотой стандарт диагностики коклюша [1—4].

Высокая вероятность получения наиболее точного результата отмечается у лиц, страдающих кашлем менее двух недель, если для лечения ещё не применялись антибактериальные препараты и, если вакцинация против коклюша проводилась более 12 месяцев назад [4].

Необходимый материал для проведения посева — отделяемое носоглотки.

Возбудитель коклюша — B.pertussis является очень чувствительным и привередливым микроорганизмом, поэтому рекомендуется, чтобы медперсонал строго следовал инструкции и соблюдал технику забора материала для анализа.

В среднем результат посева может быть готов через 4—10—14 дней [9,10], всё зависит от возможностей лаборатории. У ранее не болевших и не привитых против коклюша предварительный результат посева может быть готов уже через 72—96 часов [9,11].

Большим преимуществом посева является то, что можно определить чувствительность микроорганизма к антибиотикам и, следовательно, правильно подобрать препараты для последующего лечения. Кроме того, по данным посева, можно определить, какой конкретно штамм бактерии циркулирует на определённой территории и оценить эффективность применяемой вакцины [12].

3. Иммуноферментный анализ (ИФА).

В случае поздней диагностики, когда кашель длится более 3—4 недель и/или уже начата или проведена антибиотикотерапия, для лабораторного подтверждения коклюша можно воспользоваться серологическими методами диагностики, например, иммуноферментным анализом (ИФА).

При помощи ИФА можно определять антитела классов IgM, IgA и IgG к различным антигенам возбудителя: коклюшному токсину (PT), филаментозному гемагглютинину (FHA), пертактину (PRN). Наиболее специфичным антигеном является коклюшный токсин, так как это единственный антиген, который характерен только для B.рertussis [12]. Остальные антигены могут присутствовать и у других представителей Bordetella.

У 25% младенцев и 10% подростков антитела к коклюшному токсину могут отсутствовать [2,3].

Серологическое исследование для диагностики коклюша можно использовать с 3 до 12 недель с момента начала кашля [13,14]. Материалом для исследования является кровь.

Какой класс антител лучше определять?

1. Антитела класса IgM.

• Свидетельствуют об остром инфекционном процессе.
• Образуются не раньше второй недели от начала заболевания, следовательно, их определение раньше этого срока нецелесообразно [9,14].
• У некоторых детей и взрослых независимо от наличия вакцинации или перенесённого ранее заболевания антитела класса IgM могут вырабатываться в малом количестве и не определяться по данным анализа [9].
• Если определение IgM проводилось в первые две недели от начала заболевания и результат был отрицательным, то рекомендуется повторить анализ спустя 10—14 дней. Если отрицательный результат получен спустя 14 дней от начала заболевания, то смысла переделывать анализ нет, так как с течением времени количество IgM только уменьшается.

2. Антитела класса IgG.

• Обнаруживаются на третьей неделе от начала заболевания, достигают своего наибольшего значения на 6—8 неделе болезни, после чего их уровень постепенно снижается [9].

Определение специфических IgG является наиболее распространённым и стандартизированным методом при серологической диагностике коклюша [2,3]

• Для более точной диагностики при определении IgG рекомендуется использовать парные сыворотки, так как по данным одного анализа сложно сделать достоверный вывод, ведь неизвестно с чем связано присутствие IgG — с заболеванием или проведенной ранее вакцинацией.
• Рекомендуемый интервал между исследованиями составляет 10—14 дней. Результат считается положительным при нарастании титра в 2—4 и более раз [3,9,15].

Определение титра антител — оптимальный метод диагностики коклюша у ранее иммунизированных подростков и взрослых [1,9].

Определение IgG рекомендуется, если в течение текущего года (12 месяцев) не проводилась вакцинация против коклюша [1,9].

• При исследовании однократно взятой сыворотки (даже у ранее привитого более 12 месяцев назад взрослого или ребенка) результат по обнаружению антител класса IgG может быть расценен как положительный только в случае высокого титра (точное значение необходимо уточнять в лаборатории, так как данные разнятся в зависимости от техники анализа и используемых реагентов) [14].

4. Клинический анализ крови.

В общем анализе крови при коклюше характерно увеличение количества лейкоцитов и лимфоцитов [1—4]. Количество лимфоцитов увеличивается под действием токсина коклюшной палочки. [2], однако отсутствие повышения лейкоцитов не исключает коклюш. Клинический анализ крови является только дополнительным методом диагностики [5].

Имеются данные, что если по результатам клинического анализа крови у ребёнка определяется более 10 000 лейкоцитов в 1 мкл и более чем 50% из них составляют лимфоциты, то диагноз коклюша можно рассматривать как вероятный (конечно, при наличии характерной клинической картины) [16]. Если в повторном анализе — через 24 часа — отмечается повышение лейкоцитов более 20 000 в 1 мкл и из них более чем 50% лимфоцитов, то это свидетельствует о том, что вероятность коклюша крайне высока [16].

При оценке клинического (общего) анализа крови у маленьких детей также следует помнить, что если в течение беременности мама младенца прививалась от коклюша, то повышения лейкоцитов может и не быть [16].

5. Дополнительные обследования.

В связи с большим риском развития осложнений у детей первого года жизни в случае госпитализации рекомендуется выполнять рентгенографию органов грудной клетки (из-за риска пневмонии) и эхокардиограмму (из-за риска легочной гипертензии). Остальные исследования — по показаниям.

Подробнее о симптомах коклюша и его лечении можно прочитать в наших статьях по тегу #коклюш.