Лабораторная диагностика актиномикоза животных

ДИАГНОСТИКА АКТИНОМИКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Из всех гнойных процессов в скотоводстве в среднем на долю актиномикоза приходится до 10%. Данное заболевание хорошо известно с 19 века и распространено повсеместно.

Возбудитель заболевания лучистый гриб Actinomyces bovis. Обитает как во внешней среде, так и на кариозных зубах здоровый животных. Заражение происходит при нарушении целостности слизистых оболочек и кожи, что чаще всего связанно со скармливанием животным грубых кормов без предварительной обработки. Инкубационный период составляет от нескольких дней до нескольких месяцев. Внедрившись в ткань, возбудитель актиномикоза вызывает воспалительный процесс с образованием гранулемы, в центре которой располагаются друзы гриба, окруженные лейкоцитами и измененными эпителиоцитами. Процесс медленно распространяется во всех направлениях, пораженная ткань разрушается, на месте поражения образуется рубец.

Основным клиническим признаком является медленное образование плотной опухоли–актиномикомы, чаще всего шаровидной формы, различных размеров, с очагами размягчения. Температура тела, как правило, поднимается только в случае наличия гнилостной микрофлоры. Наиболее распространенной является челюстно–лицевая форма. При поражение кости и ткани нижней челюсти происходит распад костного вещества, могут начать шататься и выпадать зубы, снижается подвижность языка, возникает болезненность при захвате и пережевывание корма. Животное быстро теряет живую массу, становится угнетенным, снижается продуктивность. Без лечения больные выздоравливают редко.

В большинстве случаев диагноз легко поставить по клиническим признаком. Для его подтверждения прибегают к лабораторной диагностике, которая включает в себя исследование окрашенных и неокрашенных препаратов на наличие друз, выделение чистой культуры, в редких случаях реакцию связывания комплимента и кожно-аллергическая реакция с актинолизатом. Биопроба получается не всегда, поэтому диагностического значения не имеет.

По своей природе Actinomyces bovis. Является факультативным анаэробом. Оптимальная температура для культивирования 37°С, рН от 4,4 до 9,0. Нуждаются в дополнительном снабжении СО₂. При сбраживании углеводов образуют кислоту. Ферментируют глюкозу с образованием кислоты, обладают слабой протеолитической активность, синтезируют физиологически-активные вещества, антибиотики, пигменты, пахучие соединения. Спор и капсул не образуют, неподвижны.

Патологический материал (гной из свищей, мокрота, моча, спинномозговая жидкость, пунктат из размягчающихся инфильтратов, биопсированные ткани и аутопсированные кусочки из органов трупов), как правило, загрязнен посторонней микрофлорой. Для избавления от нее материал центрифугируют в растворе пенициллина и стрептомицина, затем отмывают от антибиотиков 0,85% раствором NaCl. Для освобождения от сопутствующей флоры можно внести в пробирку 50% раствор глицерина и выдержать 2-3 суток при 37 °С. Обработанный таким способом материал высевают на среду Сабура, кровяной или сывороточный агар. Посевы инкубируют при 37°С. На 15-30-е сутки после посева обнаруживают небольшие белые или желтоватые колонии в толще агара. Колонии могут быть гладкими или шероховатыми, пушистыми или мучнистыми. Колонии с трудом снимаются с питательных сред. На жидких средах МПБ, в молоке, сахарном бульоне, среде Чапека, Китта-Тароцци грибок растет в виде зернышек, пушинок или морщинистых пленок. При культивировании в анаэробных условиях на мясном, декстрозном 1% агаре, глицериновом агаре при t 37 °C через 1-2 недели появляются белые, а затем светло-коричневые колонии. На полужидкой среде колонии имеют желтовато-белый цвет, округлую форму. В отличие от грибов конидий не образуют.

Из серологических реакций наиболее четкие результаты дает положительная реакция связывания комплемента, где в качестве антигена берется поливалентный актинолизат. Реакция агглютинации ставится с сывороткой больного животного и спорами лучистого гриба. Положительные реакции непостоянны, отрицательные получаются иногда с сыворотками крови заведомо больных актиномикозом. Диагностическое значение реакции преципитации еще не выяснено, практического применения в животноводстве не получила.

Для выявления кожно-аллергическая на внутренней поверхности предплечья ближе к локтевому суставу справа и слева внутрикожно вводят 0,3 мл диагностического актинолизата. Для контроля, отступив 8–10 см от места первой инъекции, вводят такую же дозу стерильного мясопептонного бульона. Результат реакции оценивают через 24 часа: При положительной реакции на месте инъекции наблюдается эритема красного или ярко-красного цвета, сопровождающаяся отеком кожи. При пальпации отмечается болезненность, в центре эритемы может быть папула.

Специальной вакцины против актиномикоза не разработано, иммунитет не вырабатывается. Поэтому, хоть данное заболевание и не несет больших экономических потерь, рекомендуется прибегать к следующим мерам профилактики: организация прочной кормовой базы и, в частности, улучшение пастбищного содержания животных; заготовка высококачественного кормов и правильное их хранение; обработка кормов перед непосредственным вскармливанием; диспансеризация животных в неблагополучных хозяйствах; изолирование больных животных с целью уменьшения риска попадания грибка в окружающие среду и заражения других особей; отказ от выпаса на загрязненных и засоренных пастбищах.

Кисленко В.Н. Ветеринарная микробиология и иммунология. Часть 3. Частная микробиология/ Колычев Н.М., Суворина О. С.– М.: КолосС, 2007. – 215с.

Саркисов А.И. Методические рекомендации по лабораторной диагностики актиномикоза животных./ Иванова Л.П., Глотова Т.И. – М., - 1988. – 18с.

Смирнова А.В., Зуева О. И. Актиномикоз крупного рогатого скота (Классификация, патоморфология, микробиология) // Ветеринария. -1992. - №2.

Актиномикоз крупного рогатого скота (Actinomycosis bovum) – хроническое инфекционное заболевание животных и человека, вызываемое лучистым грибком и характеризующаяся образованием гранулематозных очагов в различных органах и тканях и формированием абсцессов и свищей.

При отсутствии лечения и пониженной резистентности организма возможно развитие генерализованной формы актиномикоза с поражением почек, печени, легких, мозга и т.д.

Этиология. Основным возбудителем актиномикоза является лучистый грибок Actinomyces bovis. В отдельных случаях выделяют и другие виды актиномицетов. В гранулематозных тканях и экссудатах Actinomyces bovis обнаруживается в виде мелких серых зерен, называемых друзами, размеры которых, в зависимости возраста колоний, варьирует от 20 до 320µ; средний размер друз 60 — 80µ. Друзы имеют серый или желтоватый цвет. В мазках и средах из поражений А.bovis имеет вид плотных масс, состоящих из скоплений спутанных и ветвящихся волокон или мицеальных грамположительных нитей, колбовидно утолщенных на периферии. Друзы при актиномикозных поражениях наблюдаются не всегда. При исследовании гноя из не вскрывшихся актиномиком выделяют также пиогенную бактериальную флору (протей, стафило- и стрептококки, сенную палочку). Многие исследователи относят актиномикоз к полимикробным заболеваниям, которые вызываются ассоциацией грибов – актиномицетов с пиогенной микрофлорой. А.bovis хорошо растет на мясных средах с добавлением 1% сыворотки крови и на агаре Сабуро при 37°С в аэробных и анаэробных условиях. Оптимальная рН среды 7,3 -7,6. Актиномицеты во внешней среде сохраняют жизнеспособность 1-2 года, устойчивы к высушиванию и низким температурам. Нагревание до 75°С убивают актиномицеты в течение 5 минут, 3%-ный раствор формалина – через 5-7 минут.

Эпизоотологические данные. При актиномикозе преобладает экзогенный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через травмы ротовой полости, повреждения кожи, кастрационные раны или каналы сосков вымени, верхние дыхательные пути, нижний отдел кишечника. Возможно заражение эндогенным путем патогенными актиномицетами, населяющими ротовую полость и пищеварительный тракт здоровых животных. Однако в обоих случаях непременное условие заражения – наличие у животных травмы, служащей воротами инфекции. Заболевание регистрируется в течение всего года, однако в стойловый период количество больных животных увеличивается. Отмечены случаи массовых вспышек актиномикоза в виде энзоотий при введении в рацион крупного рогатого скота сухих грубых кормов, обсемененных грибковой микрофлорой, а также осенью при выпасах на стерне, когда может быть повреждена слизистая оболочка ротовой полости. В отдельных стадах актиномикозом может быть поражено от 2 до 105 поголовья.

Актиномикозом болеют крупный рогатый скот, яки, свиньи, лошади, реже кролики, собаки, кошки, олени, медведи, слоны во всех странах мира.

Источник заражения — разные объекты внешней среды, корм, вода, загрязненные патогенными актиномицетами. Из первичного очага поражения они распространяются по подкожной и соединительной ткани; возможно и гематогенное рассеивание возбудителя.

Клинические признаки. Актиномикоз — хроническое заболевание. Длительность инкубационного периода от нескольких недель до года. Клиническая картина актиномикоза у крупного рогатого скота определяется местом локализации процесса, степенью вирулентности возбудителя и резистентностью организма животного.

Общий клинический признак актиномикоза для всех животных – образование актиномикомы, представляющей из себя медленно увеличивающуюся плотную безболезненную холодную опухоль. Актиномикозные поражения у крупного рогатого скота локализуются в области головы, поражается нижняя (чаще) и верхняя челюсти, межчелюстное пространство, подчелюстные лимфатические узлы и костная ткань.

При актиномикозе кожи головы, шеи и межчелюстного пространства у животного появляются увеличивающиеся плотные, прочно сросшиеся с кожей опухоли, которые вскрываются как наружу через кожу, так и в полость глотки. Из образовавшихся свищей выделяется сливкообразный желтоватый гной, содержащий желтовато – серые, величиной с просяное зерно крупинки – друзы грибка. В последствие гной становится кровянисто-слизистым с примесью отторгающихся тканей. Отверстие свища периодически затягивается и вновь вскрывается. При визуальном осмотре в отверстие раны выступает кровоточащая грануляционная ткань, имеющая вид цветной капусты. Актиномикомы в области глотки и гортани вызывают у пораженного животного нарушение акта глотания и дыхания. В результате затруднения захватывания, пережевывания и проглатывания корма больные животные начинают худать. Температура тела у больного животного обычно нормальная и может повышаться при вторичной инфекции или генерализации актиномикозного процесса. Актиномикоз челюстных костей сопровождается изменением конфигурации головы. При поражении носовых костей, небо становится выпуклым, у животного затрудняется жевание. На верхней и нижней челюстях образуются неподвижные болезненные утолщения, пораженные части челюстей увеличиваются в 2-3раза. Актиномикозный процесс может распространиться на окружающие мягкие ткани, образуя при этом фистулы на деснах, небе, из которых вытекает фунгозная масса желтовато – красного цвета. У больных животных начинают расшатываться и выпадать зубы. При поражении лимфатических узлов образуются инкапсулированные абсцессы. У отдельных животных образовавшиеся актиномикозные опухоли начинают постепенно уменьшаться, и больное животное выздоравливает, в то же время нередко под влиянием факторов ослабляющих резистентность организма, на том же месте вновь развивается актиномикома.

При поражение вымени, актиномикозный процесс развивается в паренхиме, чаще задних долей вымени, и сопровождается некрозом кожи. Сначала в молочной железе обнаруживаются бугорки, в центре которых находятся абсцессы, которые в дальнейшем вскрываются с образованием незаживающих свищей.

Диагноз на актиномикоз ветспециалисты ставят на основании клинических признаков болезни (хроническая инфекция с кожными свищами) и данных лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика состоит из микроскопии патологического материала (гноя, гранулематозной ткани). Выделение А.Bovis в гное, гранулематозной ткани является решающим в диагностике актиномикоза. Иногда проводят гистологическое исследование. Для микроскопического исследования из патологического материала берут подозрительные комочки, промывают их физиологическим раствором или водой, помещают в 10%-ный раствор щелочи, переносят на предметное стекло в каплю 50%-ного водного раствора глицерина, покрывают покровным стеклом и исследуют. Выделение чистых культур А.bovis весьма затруднительно.

Из –за отсутствия строгой специфичности серологические и аллергические методы исследования не нашли должного применения в ветеринарной практике.

Дифференциальный диагноз. Актиномикоз следует отличать от актинобациллеза, поскольку обе болезни в общих чертах протекают сходно. Однако при актиномикозе чаще поражаются кости (возбудитель А. bovis), а при актинобациллезе – мягкие ткани (Pr. lignieresi). Актиномикозный гной- зернистый, содержит друзы, различимые макроскопически. А. bovis — грамположительный, в средах имеет вид кокковых или нитчатых форм. Pr. Lignieresi – грамотрицательный, в срезах — короткие палочки.

При поражении языка актиномикоз необходимо дифференцировать от ящура по эпизоотологическим данным.

Актиномикоз межчелюстного пространства и лимфатических узлов напоминает по клинике туберкулез лимфатических узлов. Но при туберкулезе не происходит самопроизвольного абсцедирования; больные туберкулезом положительно реагируют при проведении туберкулинизации.

Иммунитет. У больных актиномикозом образуются специфические антитела, выявляемые в серологических реакциях, и развивается гиперчувствительность, определяемая кожными пробами. Однако возможность формирования иммунитета против актиномикоза не установлена.

Лечение. В начальной стадии болезни хорошие результаты получают при использовании йодистых соединений внутрь и для инъекций в актиномикомы. Однако у выздоровевших животных возможны рецидивы болезни. Эффективны внутривенные вливания водных растворов йода с йодистым калием (йода 1,0, йодистого калия 2,0, дистиллированной воды 500,0).

При лечении актиномикоза широко применяется антибиотикотерапия. Рекомендуется ежедневно в течение 4-6 дней вводить в актиномикому окситетрациклин в дозе 200тыс. ЕД телятам в возрасте до года и 400тыс. ЕД животным старше года. Для обкалывания актиномиком используют также полимиксин (900 ЕД антибиотика растворяют в 20 мл 0,5%-ного раствора новокаина), один раз в 10 дней.

Одновременно с лечением антибиотиками внутривенно инъецируют йодистый калий (100мл 10%-ного раствора на введение). Имеются сообщения о лечение актиномикоза ультразвуком. Наиболее эффективны хирургические методы лечение – иссечение актиномикомы вместе с капсулой. Для повышения эффективности хирургического лечения актиномикозных гранулем у крупного рогатого скота необходимо предварительно провести интенсивный курс антибиотикотерапии, состоящей из местного обкалывания антибиотиками и внутриартериального их введения.

При ветеринарно – санитарной экспертизе пораженные лимфатические узлы головы удаляют, а голову используют без ограничений. В случае поражения костей и мышц голову утилизируют. При генерализованном процессе в техническую утилизацию направляют тушу с внутренними органами.

Для дезинфекции животноводческих помещений применяют 2-3%-ные растворы едкой щелочи или свежегашеной извести.

Профилактика. В районах, стационарно неблагополучных по актиномикозу не следует выпасать животных на низких, заболоченных, сырых пастбищах. По возможности необходимо сменить пастбище, улучшить условия кормления и содержания. Грубые корма (сено, солому, мякину) перед скармливанием необходимо запаривать. Больных актиномикозом животных необходимо изолировать.

Таблица 64 - Дифференциальные признаки видов коринебактерий

Таблица 63 - Дифференциация С. renale, C. pilosum, C. cystitidis

Таблица 62 - Дифференциация коринебактерий и Rhodococcus equi

Биопроба. При заражении мышей культурами С. pseudotuberculosis выявляется вариа­бельность их вирулентности. При внутривенном заражении погибает 90,7% животных, при подкожном — около 21,2%. В результате внутрибрюшинного заражения морских свинок (самцы) можно вызвать орхит.

Питательные среды. Среда Тинсдаля. К 1000 мл расплавленного и охлажденного до 50° С 2%-ного МПА добавляют 120 мл 1%-ного раствора L-цистина на 0,1 N хлористоводородной кислоте, 120 мл 0,1 N раствора гидроокиси на­трия, 18 мл 2%-ного раствора теллурита калия, 18 мл 2,5%-ного ра­створа гипосульфата натрия и 200 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота.

Приготовление раствора теллурита калия. В 100 мл дистиллирован­ной воды растворяют 2 г теллурита калия. Раствор стерилизуют в кипя­щей водяной бане 30 минут и хранят при комнатной температуре. В слу­чае выпадения осадка раствор вновь прогревают в водяной бане.

Таблица 61 - Дифференциальные признаки грамположительных,
не образующих спор, неправильной формы палочек

Признаки	Cory neb ас -terium	Agromyces	Cellulomonas	Oerskovia	Rothia	Actinomyces	Arc anob ас terium	Propiono-bac terium	Arachnia	Cardnerella
Морфология клетки	Палочки булавовид­ной формы	Ветвящиеся, нитевидные формы	Неправильные палочки, кок­ковые формы	Ветвящиеся гифы, па­лочковид­ной формы	Неправильные палоч­ки, нити, кокковид-ные формы	Палочки, нити, ветвящиеся струк­туры	Короткие непра­вильные палоч­ки, могут доми­нировать кокко-видные формы	Неправильные палочки, вет­вящиеся и кок-ковидные фор­мы	Палочки, нити, вет­вящиеся структуры	Неправильные палочки
Окраска по Граму +	+	+ '	+	+	+	+	+	+	-
Отношение к кислороду:	Строгий аэроб Р	X	-	-	-	-	-	-	-	-
Факультативный анаэроб или мик-роаэрофил Р	X	+	+	+	+	+	Р	+	+
Строгий анаэроб	-	-	-	-	-	-	-	Р	-	-
Подвижность	-	_	Р	X	-	-	-	-	-	-
Каталаза	+	-	+	+	+	+ 4	-	-
Место обитания и па­тогенные свойства	Человек, животные и др. ис­точники. Есть виды, патогенные для живот­ных и че­ловека	Почва	Почва, гнию­щие растения	Почва, гниющие растения, другие ис­точники	Ротовая полость; оппортунистический патоген человека	Млеко питающие; большинство па­тогенны для жи­вотных и человека	Животные, чело­век; патогенны для человека и животных	Продукты, ко­жа человека, клинический материал. Есть патогенные для человека	Ротовая полость и др. мате­риалы от человека. Может быть пато­генней для человека	Генитальный и мочеполовой тракты
1 - Возможно быстрое обесцвечивание; 2 - Возможно появление грамотрицательных клеток, но более типична вариабельность; некоторые штаммы дают положительную реакцию; 4 которые штаммы дают негативную реакцию; штаммов имеют положительный признак; признак различен в рангах (вида, рода, семейства).

Признаки	C.bovis	C.kurtscheri	С.pseudo­tuberculosis	C.renaie группа	R.equi
β-гемолиз	-	V	-	-	-
Гидролиз эскулина	-	+	-	-	-
Редукция нит­ратов	-	+	V"	V	+
Уреаза	-	+	+ (>18ч)	+ ( 18ч)
Разжижение желатина	-	-	-	V	-
Глюкоза	+	+	+	+	-
Мальтоза	-	+	+	-	-
Сахароза	-	+	-	-	-

+ положительная реакция; - отрицательная реакция; v - варьирующий признак;

v"- штаммы, выделенные от лошадей позитивные, от овец - негативные.

Признаки	C.renaie	C.pilosum	C.cystitidis
Цвет колоний	Желтый	Желтый	Беловатый
Срок появления макроскопически видимых колоний при 37° С	24 ч	48 ч
Образование кислоты из:
ксилозы	-	-	+
крахмала	-	+	+
Редукция нитратов	-	+	-
Разжижение казеина	+	-	-
Гидролиз твина-80	-	-	+
Рост в бульоне с рН 5,4	+	-	-

Признаки	C.diphteriae	C.pseudotuberculosis	C.xerosis	C.pseudodiphteriticum	C.kurtscheri	C.minutissi mum	C.striatum	C.renale	C.cysticus
Гидролиз	эскулина	-	-	-	-	-	нд	-	-	-
гиппурата	-	-	+	+	+	+	+	+	+
желатина	X	-	-	-	-	х 2	-	-
Уреаза	+	-	+	+	-	-	+	+
Фосфатаза	-	-	-	-	-	+	+	-	-
Расщепление тирозина	-	-	-	-	-	нд	+	-	-
Метилрот	+	+	-	-	-	-	+	-	-
Расщепление казеина	-	-	-	-	-	-	-	+	-
Редукция нитратов	+ 3	X	+	+	+	-	-	-	-
Образование кислоты из:	глюкозы	+	+	+	-	-	+	+	+	+
арабинозы	+	X	-	-	-	нд	-	-	-
ксилозы	-	-	-	-	-	-	-	-	+
рамнозы	+	-	-	-	-	НД	-	-	-
фруктозы	+	+	+	-	+	+	+	+	+
галактозы	+	+	+	-	-	нд	4 X	-	-
маннозы	+	+	4 X	-	+	X	+	+	-
лактозы	-	-	-	-	-	-	X	-	-
мальтозы	+	+	-	+	+	+	X	+
сахарозы	X	+	-	+	+ 4	-	-
трегалозы	-	X	-	X	X	+
раффинозы	X	-	-	-	-	-	-	-	-
салицина	+	-	+	-	+	нд	-	-	-
декстрина	+	X	-	-	+	нд	+	+	+
крахмала	X	-	-	-	+	-	+	-	+

Признаки	C.pulosum	C.mucetoides	C.matruchotii	C.flavescens	C.vitarumen	C.glucamicum	C.callunac	C.bovis	C.paurometobolum
Гидролиз	эскулина	-	-	+	нд	+	-	-	-	+
гиппурата	+	нд	+	-	-	+	+	+	-
желатина	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Уреаза	+	-	х 2	-	+	+	+	-	-
Фосфатаза	-	+	-	-	-	нд	нд	+	+
Расщепление тирозина	-	нд	нд	нд	нд	нд	нд	-	-
Метилрот	-	-	-	+	+	+	+	-	-
Расщепление казеина	-	нд	НД	нд	нд	-	-	-	-
Редукция нитратов	+	-	+	-	+	+	-	-	-
Образование кислоты из:	глюкозы	+	+	+	+	+	+	+	+	-
арабинозы	-	-	-	-	нд	-	-	X	-
ксилозы	-	-	-	-	нд	-	-	-	-
рамнозы	-	нд	-	-	нд	-	-	-	-
фруктозы	+	нд	+	+	+	+	+	+	-
галактозы	-	-	-	+	+	-	-	+	-
маннозы	+	-	+	+	+	+	+	-	-
лактозы	-	-	-	-	-	-	-	X	-
мальтозы +	-	+	-	+	+	+	+	-
сахарозы -	нд	+	-	+	+	+	-	-
трегалозы	+	X	-	-	+	+	+	X	-
раффинозы -	-	5 X	-	нд	-	-	-	-
салицина -	нд	+	-	+	-	+	-	-
декстрина	+	-	+	-	нд	-	-	X	-
крахмала	+	нд	-	-	-	-	-	-

' Исключение — тип ulcerans; 2 около 50% штаммов положительны; 3 тип ulcerans может быть отрицательным; 4 некоторые штаммы отрицательные; 5 некоторые штаммы положительные; нд — нет данных; х — 11-89% штам­мов положительные.

Приготовление раствора гипосульфита натрия. Раствор готовят на стерильной дистиллированной воде. После добавления каждого ком­понента среду тщательно перемешивают и, не стерилизуя, разливают по чашкам Петри. До использования среду можно хранить при 10° С не более 3-4 суток.

Среда предназначена для дифференциации возбудителя дифтерии и дифтероидов. Коринебактерии дифтерии образуют колонии черного цвета, т.к. способны продуцировать сероводород из цистина, взаимодействующий с солью теллурита. С. diphtheriae var. gravis на этой среде образует мелкие, выпуклые, блестящие, черные колонии. Среда обладает селективными свой­ствами, посторонняя микрофлора растет слабо.

Кровяной теллуровый агар. К 100 мл рас­плавленного и охлажденного до 45-50° С питательного агара (рН 7,6-7,8) добавляют 10 мл дефибринированной крови лошади или крупного ро­гатого скота, 2 мл 2%-ного раствора теллурита калия (К,ТеО₃). Получен­ную среду перемешивают и разливают в чашки Петри. Колонии дифтерийных бактерий на этой среде имеют черный цвет или черный центр колонии, дифтероидов — более выпуклые, влажные, серого цвета, с коричневым центром, ложнодифтерийных бактерий — мелкие се­рые, с коричневым центром, непрозрачные.

Среда Пергола. Используют как среду обогащения для выделения коринебактерии дифтерии. Из куриного яйца стерильно извлекают желток, переносят его в колбу с бусами и добавляют 100 мл стерильной сыворотки крови лошади или круп­ного рогатого скота, 1 мл 2%-ного раствора теллурита калия; тщательно перемешивают. Полученую смесь разливают по 2-3 мл в стерильные про­бирки и прогревают 1 ч в водяной бане при 56° С. Затем для контроля сте­рильности выдерживают 48 ч в термостате при 37° С. На этой среде дифте­рийные бактерии формируют через 12-
15 ч инкубирования светло- или темно-серые влажные колонии.

Ацетатно-теллуритовый бульон для дифтерийных микробов. В колбе смешивают 200 мл МПБ (рН 7,4), 2 мл глицерина, 18 мл 50%-ного раствора пептона Витте и 0,63 мл 50%-ного раствора ацетата натрия. Среду стерилизуют текучим паром в течение 1 ч, охлаждают до 48° С и добавляют 10 мл 1%-ного раствора теллурита калия и 21 мл дефибриниро­ванной крови барана.

Желточно-молочно-агаровая среда. К 1000 мл 4%-ного агара на мартеновском бульоне или МПБ (рН 7,6-7,8) добавляют 10 куриных желтков, эмульгируют и вносят 800 мл обезжирен­ного, стерильного молока. Компоненты перемешивают, готовую среду раз­ливают по стерильным пробиркам, скашивают и дважды по 1 ч прогревают в аппарате Коха при 80° С.

Среда Пай. В колбе смешивают 1000 мл содержимого куриных яиц и 500 мл дистиллированной воды, взбивают, фильтруют через двойной слой марли, добавляют 120 мл глицерина, 5 г декстрозы, перемешивают, разли­вают по стерильным пробиркам, скашивают и стерилизуют как свернутую сыворотку (см. среда Леффлера).

Индикаторная среда III для дифтерийных бактерий. К 420 мл 3%-ного питательного агара добавляют 12,5 мл 1%-ного ра­створа цистина, 1,5 мл 50%-ного раствора ацетата натрия, 880 мл 1%-ного раствора теллурита калия. Устанавливают рН 8,0 и вносят 60 мл 2%-ного раствора индикатора водного голубого. В нагретую до 50-55° С среду добавляют смесь следующего состава: 280 мл дистиллиро­ванной воды, 21 мл глицериновой смеси (см.среда Клауберга II), 15 г глюкозы, 140 мл дефибринированной крови (рН смеси 7,0). После пере­мешивания среду разливают в чашки Петри.

Сывороточная среда Леффлера. Рекомендуется для выращивания пато­генных нейссерий, коринебактерии. Смешивают 750 мл сыворотки крови овцы, 250 мл МПБ (рН 7,0), 2,5 г декстрозы, 1,25 г натрия хлорида. Среду разливают в пробирки и свертывают в скошенном положении при 80° С 3 дня по 2ч в аппарате Коха или в сушильном шкафу при 70° С 3 дня по 1 ч.