Методические рекомендации 3 1 2 0072-13 диагностика коклюша и паракоклюша
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
Диагностика коклюша и паракоклюша
Методические рекомендации
МР 3.1.2.0072—13
Д44 Диагностика коклюша и паракоклюша: Методические рекомендации.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013.—56 с.
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 24 мая 2013 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
ББК 51.9
Редакторы Н. В. Кожока, Н. Е. Акопова
Технический редактор Е. В. Ломанова
Подписано в печать 25.06.13
Формат 60х88/16 Печ. л. 3,5
Тираж 200 экз. Заказ 27
Федеральная служба по надзору
в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5, 7
Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован
отделом издательского обеспечения
Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора
117105, Москва, Варшавское ш., 19а
Отделение реализации, тел./факс 8(495)952-50-89
Содержание
Термины и сокращения. 4
1. Область применения. 5
3. Характеристика рода Bordetella, биологические свойства возбудителей коклюша и паракоклюша 7
4. Показания к обследованию.. 11
4.1. Показания к обследованию на коклюш в предсудорожном периоде. 12
4.2. Показания к обследованию на коклюш в периоде судорожного кашля. 13
4.3. Особенности диагностики коклюша у пациентов разного возраста, с разным вакцинальным статусом 15
5. Лабораторная диагностика. 16
5.1. Критерии лабораторного подтверждения диагноза. 17
5.2. Сроки обследования. 17
5.3. Оформление направления материала на исследование. 18
6. Бактериологическое исследование. 19
6.1. Взятие материала. 19
6.2. Доставка материала. 21
6.3. Ход исследования. 21
6.4. Материалы и оборудование. 27
7. Полимеразная цепная реакция. 28
7.1. Взятие материала. 29
7.2. Доставка и хранение материала. 31
7.3. Проведение исследования. 31
7.4. Материалы и оборудование. 33
8. Серологические методы исследования. 36
8.1. Взятие материала. 37
8.2. Доставка и хранение материала. 38
8.3. Реакция агглютинации. 38
8.4. Иммуноферментный анализ. 39
8.5. Иммуноблот. 40
9. Нормативно-методические ссылки. 41
Приложение 1. Алгоритм выбора метода лабораторной диагностики. 43
Приложение 2. Приготовление и стерилизация тампонов. 44
Приложение 3. Приготовление питательных сред с добавками. 45
Приложение 4. Определение содержания аминного азота. 47
Приложение 5. Проверка качества казеиново-угольного агара. 49
Приложение 6. Приготовление сред и реактивов для биохимической идентификации бордетелл 51
Приложение 7. Хранение культур бордетелл. 52
Приложение 8. Журнал по бактериологической диагностике коклюша. 54
Приложение 9. Методика проведения смывов с целью контроля контаминации лаборатории продуктами ПЦР 55
Термины и сокращения
АКДС – адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина
ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения
ГОСТ – Государственный стандарт
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА – иммуноферментный анализ
КУА – казеиново-угольный агар
МЕ – международные единицы
МУ – методические указания
ОРВИ – острая респираторная вирусная инфекция
ПСК – период судорожного кашля
ПЦР – полимеразная цепная реакция
РА – реакция агглютинации
РИФ – реакция иммунофлуоресценции
РНК – рибонуклеиновая кислота
СанПиН – санитарно-эпидемиологические правила и нормы
СОЭ – скорость оседания эритроцитов
СП – санитарно-эпидемиологические правила
ТЕ – буфер Трис-ЭДТА
ТУ – технические условия
ФС – фармакопейная статья
цАМФ – циклический аденозинмонофосфат
ELISA – enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)
FHA – filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)
NASBA – nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)
PT – pertussis toxin (коклюшный токсин)
RS-инфекция – инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Дата введения: с момента утверждения
3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
Диагностика коклюша и паракоклюша
Методические рекомендации
МР 3.1.2.0072—13
1. Область применения
В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств B. pertussis, B. parapertussis и B. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики: ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций – унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.
Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.
В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. – 16 млн заболевших, 195 тыс. смертей).
Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95 %) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2—5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности, несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7—14 лет – до 50,0 %, дети 3—6 лет – до 25,0 %, наименьшую долю – дети в возрасте 1—2 лет – 11,0 % и дети до 1 года – 14,0 %. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2—3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65,0 % составляют привитые.
Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.
Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10—20 %. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).
Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.
3. Характеристика рода Bordetella, биологические свойства
возбудителей коклюша и паракоклюша
Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: B. ansorpii, B. avium, B. bronchiseptica, B. hinzii, B. holmesii, B. parapertussis, B. pertussis, B. petrii, B. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана B. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. B. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. B. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), B. bronchiseptica вызывала длительный кашель. B. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: B. hinzii и B. holmesii. B. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. B. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена B. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана B. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена B. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).
3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
Диагностика коклюша и паракоклюша
Дата введения: с момента утверждения
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Н.А.Кошкина); Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" (Г.Я.Ценева, Н.Н.Курова); Федеральным бюджетным учреждением науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.Б.Яцышина, Т.С.Селезнева, М.Н.Прадед); Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства" (Ю.В.Лобзин, И.В.Бабаченко).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 мая 2013 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Термины и сокращения
Термины и сокращения
АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина
ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения
ГОСТ - Государственный стандарт
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА - иммуноферментный анализ
КУА - казеиново-угольный агар
ME - международные единицы
МУ - методические указания
ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция
ПСК - период судорожного кашля
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РА - реакция агглютинации
РИФ - реакция иммунофлуоресценции
РНК - рибонуклеиновая кислота
СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормы
СОЭ - скорость оседания эритроцитов
СП - санитарно-эпидемиологические правила
ТЕ - буфер Трис-ЭДТА
ТУ - технические условия
ФС - фармакопейная статья
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)
Ig - иммуноглобулин
IL - интерлейкин
FHA - filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)
NASBA - nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)
PT - pertussis toxin (коклюшный токсин)
RS-инфекция - инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом
1. Область применения
В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств В. pertussis, В. parapertussis и В. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций - унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.
Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.
2. Введение
В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. - 16 млн заболевших, 195 тыс. смертей).
Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95%) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2-5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности, несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7-14 лет - до 50,0%, дети 3-6 лет - до 25,0%, наименьшую долю - дети в возрасте 1-2 лет - 11,0% и дети до 1 года - 14,0%. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2-3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65% составляют привитые.
Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.
Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10-20%. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).
Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.
3. Характеристика рода Bordetella, биологические свойства возбудителей коклюша и паракоклюша
________________
* Слово "Bordetella" в наименовании раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.
Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: В. ansorpii, В. avium, В. bronchiseptica, В. hinzii, В. holmesii, В. parapertussis, В. pertussis, В. petrii, В. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана В. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. В. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. В. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), В. bronchiseptica вызывала длительный кашель. В. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: В. hinzii и В. holmesii. В. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. В. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена В. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана В. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена В. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).
Морфологические и культуральные свойства
Бактерии рода Bordetellae - мелкие (0,2-0,5 мкм 0,5-2,0 мкм) грамотрицательные коккобациллы. В мазках - часто биполярно окрашенные, одиночные или в парах, реже в цепочках, имеют нежную капсулу. Все, за исключением В. petrii, - строгие аэробы. Температура выращивания бордетелл +35-37 °С (оптимально +35 °С). Бордетеллы требовательны к условиям роста: 130-150 мг %аминного азота, кровь, дрожжевой экстракт, никотиновая кислота, аминокислоты (цистин, пролин, метионин, серин, глютамин и др.); наиболее требователен возбудитель коклюша, он растет только на специальных средах, в то время как остальные представители рода растут на кровяном агаре. Классической средой для первичного выделения В. pertussis является среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар), позднее были предложены синтетические и полусинтетические среды, в частности, казеиново-угольный агар (КУА). На указанных средах бордетеллы вырастают в виде характерных колоний: на среде Борде-Жангу - выпуклые, гладкие, блестящие, серебряного цвета, напоминающие капли ртути, окруженные зоной гемолиза; на КУА - выпуклые, гладкие, серого цвета с жемчужным, желтоватым или беловатым оттенком. Колонии маслянистые, легко снимаются петлей. В. parapertussis и В. holmesii за счет образования пигмента вызывают потемнение сред с кровью, образуют бурую подложку.
Ростовые характеристики основных видов бордетелл
| Утверждаю |
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
24 мая 2013 года
Дата введения:
с момента утверждения
3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
ДИАГНОСТИКА КОКЛЮША И ПАРАКОКЛЮША
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
МР 3.1.2.0072-13
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера"; Федеральным бюджетным учреждением науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства".
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 мая 2013 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Термины и сокращения
АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина
ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения
ГОСТ - Государственный стандарт
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА - иммуноферментный анализ
КУА - казеиново-угольный агар
МЕ - международные единицы
МУ - методические указания
ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция
ПСК - период судорожного кашля
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РА - реакция агглютинации
РИФ - реакция иммунофлуоресценции
РНК - рибонуклеиновая кислота
СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормы
СОЭ - скорость оседания эритроцитов
СП - санитарно-эпидемиологические правила
ТЕ - буфер Трис-ЭДТА
ТУ - технические условия
ФС - фармакопейная статья
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)
FHA - filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)
NASBA - nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)
PT - pertussis toxin (коклюшный токсин)
RS-инфекция - инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом
1. Область применения
В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств B. pertussis, B. parapertussis и B. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики: ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций - унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.
Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.
2. Введение
В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. - 16 млн. заболевших, 195 тыс. смертей).
Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95%) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2 - 5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7 - 14 лет - до 50,0%, дети 3 - 6 лет - до 25,0%, наименьшую долю - дети в возрасте 1 - 2 лет - 11,0% и дети до 1 года - 14,0%. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2 - 3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65,0% составляют привитые.
Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.
Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10 - 20%. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).
Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.
3. Характеристика рода Bordetella, биологические
свойства возбудителей коклюша и паракоклюша
Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: B. ansorpii, B. avium, B. bronchiseptica, B. hinzii, B. holmesii, B. parapertussis, B. pertussis, B. petrii, B. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана B. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. B. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. B. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), B. bronchiseptica вызывала длительный кашель. B. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: B. hinzii и B. holmesii. B. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. B. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена B. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана B. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена B. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).
Морфологические и культуральные свойства
Бактерии рода Bordetellae - мелкие (0,2 - 0,5 мкм x 0,5 - 2,0 мкм) грамотрицательные коккобациллы. В мазках - часто биполярно окрашенные, одиночные или в парах, реже в цепочках, имеют нежную капсулу. Все, за исключением B. petrii, - строгие аэробы. Температура выращивания бордетелл 35 - 37 °C (оптимально 35 °C). Бордетеллы требовательны к условиям роста: 130 - 150 мг% аминного азота, кровь, дрожжевой экстракт, никотиновая кислота, аминокислоты (цистин, пролин, метионин, серин, глютамин и др.); наиболее требователен возбудитель коклюша, он растет только на специальных средах, в то время как остальные представители рода растут на кровяном агаре. Классической средой для первичного выделения B. pertussis является среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар), позднее были предложены синтетические и полусинтетические среды, в частности казеиново-угольный агар (КУА). На указанных средах бордетеллы вырастают в виде характерных колоний: на среде Борде-Жангу - выпуклые, гладкие, блестящие, серебряного цвета, напоминающие капли ртути, окруженные зоной гемолиза; на КУА - выпуклые, гладкие, серого цвета, с жемчужным, желтоватым или беловатым оттенком. Колонии маслянистые, легко снимаются петлей. B. parapertussis и B. holmesii за счет образования пигмента вызывают потемнение сред с кровью, образуют бурую подложку.
Таблица 1
РОСТОВЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ОСНОВНЫХ ВИДОВ БОРДЕТЕЛЛ
┌─────────────────────────┬────────────┬────────────────┬─────────────────┐
│ │B. pertussis│B. parapertussis│B. bronchiseptica│
│Время, необходимое для │ │ │ │
│появления колоний (сут.):│ │ │ │
│- на КУА (бордетелагар) │2 - 3 │1 - 2 │18 - 24 ч │
│- на среде Борде-Жангу │3 - 6 │2 - 3 │1 - 2 │
│Размер колоний на КУА │1 - 2 мм │2 - 3 мм │4 мм │
│Рост на простом агаре │- │+ │+ │
└─────────────────────────┴────────────┴────────────────┴─────────────────┘
Устойчивость: возбудители коклюша и паракоклюша - облигатные паразиты, нестойкие. Погибают при прогревании до 50 °C за 30 мин. при обработке дезинфицирующими растворами. Во внешней среде не сохраняются. Устойчивы ко многим антибиотикам.
Основные биохимические свойства бордетелл, которые используются в практической работе при изучении выделенных культур, представлены в табл. 2.
Таблица 2
ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ПРИЗНАКИ ВИДОВ РОДА BORDETELLA
Рост на
кровяном
агаре
Окси-
даза
Уреаза
Тиро-
зиназа
Восста-
новление
нитратов
Утили-
зация
цитратов
Подвиж-
ность
B. pertussis
-
+
-
-
-
-
-
B. parapertussis
+
-
+
+
-
-
-
B. bronchiseptica
+
+
+
-
+
+
+
B. avium
+
+
-
-
-
+
+
B. hinzii
+
+
+/-
-
-
+
+
B. holmesii
+
-
-
+
-
-
-
B. trematum
+
-
-
-
+/-
-
+
B. petrii
+
+
-
-
-
+
-
B. ansorpii
+
-
-
-
-
+
+
Через 4 часа.
B. pertussis наименее активна ферментативно (положительный тест на оксидазу). B. parapertussis вырабатывает ферменты тирозиназу и уреазу и не образует оксидазы. Тирозиназа катализирует продукцию пигментов из тирозина, содержащегося в питательных средах, что вызывает их потемнение. Наиболее активна B. bronchiseptica: вырабатывает уреазу, оксидазу, утилизирует цитраты, восстанавливает нитраты до нитритов.
Антигенное строение и серологическая характеристика
Читайте также: